专利名称：Nk－3受体体内分析的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种评价NK3受体拮抗剂的体内药效的方法。
背景技术：
速激肽是一类小肽，如P物质、神经激肽A和神经激肽B，其特征在于它们具有共同的C末端酰胺化序列Phe-Xaa-Gly-Leu-Met-NH2(SEQ.ID.NO1)。它们的生物学作用分别是通过三种截然不同的受体，如神经激肽1(NK1)、神经激肽2(NK2)和神经激肽3(NK3)介导的。在过去的几年中，速激肽和其受体成为了人们深入研究的焦点。最近，选择性NK3-受体(NK3-R)拮抗剂SR142801(奥沙奈坦)在精神分裂症病人的双盲安慰剂对照的临床试验中被证明是有效的(Meltzer H.Y.，ArvanitisL.，Bauer D.，Rein W.用于治疗精神分裂症和分裂情感性障碍的四种新化合物的安慰剂对照的评价.Am J Psych 161957-84，2004)。但是，NK3受体的药理学和功能在大脑和行为以及动物模型中的研究较少。这就需要精确的手段来评价NK3-R在体内的作用。
发明内容
因此，本发明提供了评价NK3受体拮抗剂的体内药效的方法，包括a)用被关注的NK3-R拮抗剂治疗非人类动物，b)用NK3-R激动剂治疗非人类动物，c)测定被治疗的非人类动物的运动行为和，d)将被关注的拮抗剂对被治疗的非人类动物运动行为的作用与拮抗剂的体内药效相关联。
在本说明书中使用的术语“体内药效”是指化合物在非人类动物上产生预期的作用的能力，所述化合物在本文中是指NK3-R拮抗剂，从而预期的作用即为削弱NK3或NK3-R激动剂对NK3-R的作用。
在本说明书中使用的术语“NK3-R拮抗剂”或“拮抗剂”是指能够削弱NK3或NK3-R激动剂对NK3-R的作用的化合物。
在本说明书中使用的术语“NK3-R激动剂”或“激动剂”是指能够兴奋神经激肽3受体的化合物。
NK3拮抗剂可以通过已知的肠道或非肠道途径对非人类动物给药，包括但不局限于口服给药(如口服灌胃、舌下给药或直肠给药)，直接注射到血流中(如静脉内或动脉内给药)，或多种非肠道途径(如腹膜内和皮下途径如肌肉内)，通过气雾剂基于呼吸给药，皮肤给药(如透皮、经皮)，以及被关注的配方化合物的局部给药。优选的拮抗剂给药形式是口服(PO)给药或腹膜内(IP)给药。优选地，拮抗剂以单剂量给药。
拮抗剂一般在对非人类动物的活动进行测定之前的一段时间给药。时间的长短取决于化合物吸收和通过血脑屏障所需的时间。优选地，在测定之前15-240分钟给非人类动物使用拮抗剂。
NK3受体激动剂可以是任何神经激肽3受体激动剂，优选的激动剂是N-(3-羧基-1-氧代丙基)-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-N-甲基-L-苯丙氨酰甘氨酰-L-亮氨酰-L-蛋氨酰胺(Senktide)。激动剂可以通过注射到动物大脑内对非人类动物给药。更优选地，将激动剂注射到一个或多个室内。更优选地，将激动剂注射到非人类动物的第三(前侧)脑室内。激动剂一般在对非人类动物的活动进行测定之前的短时间内以单剂量给药。对于将NK3受体激动剂在大脑内的注射，非人类动物经常是被麻醉的。优选在非人类动物醒来之后(在给药NK3受体激动剂1-4分钟后)立刻开始测定。
非人类动物的运动行为包括但不局限于走、跑、游泳或反复性活动如梳理、舔或用后腿站立。优选地，通过测定非人类动物通过的距离测定运动行为。
非人类动物可以是除人类之外的任何动物。优选地，非人类动物是啮齿动物，更优选是沙土鼠或小鼠。最优选的非人类动物是蒙古沙土鼠(蒙古长爪沙鼠)。非人类动物也可以是人NK3受体或沙土鼠NK3受体转基因的非人类动物。
现在已一般性地描述了本发明，通过参考具体实施例并结合以下附图可以对本发明有更深入的理解，除非另有说明，在本说明书中包含具体实施例的目的仅仅是说明而是不用来限制。
图1表示N-(3-羧基-1-氧代丙基)-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-N-甲基-L-苯丙氨酰甘氨酰-L-亮氨酰-L-蛋氨酰胺(Senktide)剂量增加诱导的运动行为的图示。
***＝p＜0.001(顿纳特多重比较检验)相对赋形剂。
图2表示N-[1-[3-[(3R)-1-苯甲酰基-3-(3，4-二氯苯基)-3-哌啶基]丙基]-4-苯基-4-哌啶基]-N-甲基-乙酰胺(10或30mg/kg，腹膜内给药)和3-羟基-2-苯基-N-[(1S)-1-苯基丙基]-4-喹啉酰胺(10或30mg/kg，腹膜内给药)对于N-(3-羧基-1-氧代丙基)-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-N-甲基-L-苯丙氨酰甘氨酰-L-亮氨酰-L-蛋氨酰胺诱导的运动行为的作用的图示。
#＝p＜0.05，###＝p＜0.001(非配对T检验)相对Senktide。
实施例除非另有说明，实施例中涉及的商购试剂均按照生产厂商的说明书使用。
材料和方法动物和饲养应用体重40-70g的雄性和雌性蒙古沙土鼠(生物研究实验室，4414Füllinsdorf，瑞士)。沙土鼠在移至实验室后每笼四只饲养大约4-7天。沙土鼠在其笼中可自由进食自来水和实验室饲料。将动物饲养笼保持在12∶12小时明暗循环下，光照在早晨6点开始，同时控制温度(21-23℃)和湿度(55-65％)。所有的测定均在明暗循环的光照期进行。本说明书中描述的所有过程基于遵守联邦和地方的规定，事先得到了巴塞尔城州立动物保护委员会的批准。本实验在Hoffmann-La Roche Ltd兽医人员管理的动物聚居地进行。
化合物激动剂·N-(3-羧基-1-氧代丙基)-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-N-甲基-L-苯丙氨酰甘氨酰-L-亮氨酰-L-蛋氨酰胺(Senktide)拮抗剂·N-[1-[3-[(3R)-1-苯甲酰基-3-(3，4-二氯苯基)-3-哌啶基]丙基]-4-苯基-4-哌啶基]-N-甲基-乙酰胺(SR 142801)·3-甲基-2-苯基-N-[(1S)-1-苯基丙基]-4-喹啉酰胺(SB 222200)·3-羟基-2-苯基-N-[(1S)-1-苯基丙基]-4-喹啉酰胺(他奈坦)药物的制备过程拮抗剂在制备后立即使用(赋形剂0.3％吐温-80/盐水)。拮抗物质在测定前30-240分钟通过腹膜内或口服给药。Senktide溶解于含0.1％牛血清白蛋白的蒸馏水中并以测定用量冷冻(-20℃)直至使用，并在使用时直接向脑室内注射(i.c.v.，ICV)。
Senktide诱导的沙土鼠运动行为的抑制沙土鼠通过吸入异氟烷/氧气混合物进行麻醉，暴露头皮，通过垂直插入前囟点下4.5mm深处的带套管的25G针将Senktide(0.01-0.1nmol/5μL)给药至第三(前侧)脑室内(脑室内注射)。切口用缝合夹使其闭合，将沙土鼠放入有机玻璃盒中以恢复其翻正反射，然后将其放入运动行为盒(Accuscan instruments，USA)中。然后自动测定行为90分钟。
统计分析数据应用单因素方差分析进行分析，随后在适当时进行顿纳特多重比较检验或t检验(单侧)(Statistica，Statsoft)。
结果Senktide(0.01、0.03或0.1nM/5μL，脑室内注射)在剂量为0.1nM/5μL(脑室内注射；图1)时诱导了前进总距离的显著增加。
SR142801(10或30mg/kg腹膜内给药，30分钟预处理时间)在剂量为30mg/kg时显著减少了Senktide(0.1nM/5μL，脑室内注射)诱导的运动行为(图2)。
他奈坦(10或30mg/kg腹膜内给药，30分钟预处理时间)在剂量为30mg/kg时显著减少了Senktide(0.1nM/5μL，脑室内注射)诱导的运动行为(图2)。
SB222200(10或30mg/kg腹膜内给药，30分钟预处理时间)在剂量为30mg/kg时显著减少了Senktide(0.1nM/5μL，脑室内注射)诱导的运动行为(图2)。
Senktide在脑室内注射后诱导了运动行为的显著增加，该运动行为通过90分钟内的前进总距离进行测定。此作用被选择性NK3受体拮抗剂如SR142801，他奈坦和SB222200抑制。这些数据表明Senktide诱导的运动行为是一种选择性NK3受体介导的作用并且可以用来评价NK3受体拮抗剂的体内药效。
序列表<110>弗·哈夫曼-拉罗切有限公司<120>NK-3受体体内分析<130>23222<160>1<170>PatentIn Version 3.3<210>1<211>5<212>PRT<213>未知<220>
<223>人工序列的描述共有序列<220>
<221>不确定<222>(2)..(2)<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸<400>1Phe Xaa Gly Leu Met1权利要求
1.评价NK3受体拮抗剂的体内药效的方法，包括a)用被关注的NK3受体拮抗剂治疗非人类动物，b)用NK3受体激动剂治疗非人类动物，c)测定被治疗的非人类动物的运动行为和，d)将被关注的拮抗剂对被治疗的非人类动物运动行为的作用与拮抗剂的体内药效相关联。
2.根据权利要求1的方法，其中NK3受体激动剂是N-(3-羧基-1-氧代丙基)-L-α-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-N-甲基-L-苯丙氨酰甘氨酰-L-亮氨酰-L-蛋氨酰胺。
3.根据权利要求1或2的方法，其中激动剂被注射到非人类动物的大脑内。
4.根据权利要求1或2的方法，其中激动剂被注射到一个或多个脑室内。
5.根据权利要求1或2的方法，其中激动剂被注射到第三(前侧)脑室内。
6.根据权利要求1-5中任意一项的方法，其中的非人类动物是啮齿动物。
7.根据权利要求1-5中任意一项的方法，其中的非人类动物是沙土鼠或小鼠。
全文摘要
本发明涉及评价NK3受体拮抗剂的体内药效的方法，包括a)用被关注的NK3受体拮抗剂治疗非人类动物；b)用NK3受体激动剂治疗非人类动物；c)测定被治疗的非人类动物的行为；和d)将被关注的拮抗剂对被治疗的非人类动物行为的作用与拮抗剂的体内药效相关联。
文档编号A61D99/00GK1927385SQ20061012658
公开日2007年3月14日 申请日期2006年8月29日 优先权日2005年8月29日
发明者W·斯布伦 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司