专利名称：：消除环境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种环境消毒剂产品及其制备方法，尤其是一种可以有效消除空气、土壤等环境中禽流感病毒，防止人禽交叉感染的消除环境中禽流感病毒竹醋液提取物及其制备方法。
背景技术：
：禽流感是A型禽流感病毒所引起的一种禽类急性高度致死性传染病。鸡、火鸡、鸭和鹌鸫等家禽及野鸟、水禽、海鸟等均可感染，但以鸡和火鸡为主。猪、猫、猴等多种动物和人类也可感染。禽流感最早于1878年发生在意大利，历史上曾被称为鸡瘟或真性鸡瘟。一百多年来，禽流感不断地侵袭着整个世界的养禽业，并直接威胁人类的健康和生命。1997年和2003年，东南亚地区两次爆发H5N1型禽流感，造成数千万只家禽染病死亡，及20余人感染禽流感病毒而死亡。病毒是寄生于宿主活细胞内的微生物，凡对病毒有抑制或杀灭作用的药物，对宿主细胞也有一定毒性，这给抗病毒药物的研制带来很大困难。在禽流感的防治中，至今还没有很理想的化疗药物。竹子提取物(竹醋液)是竹材干馏产物.，含有200多种化学成份，主要用于驱虫、除臭、杀菌、保健及农业土壤改良等方面。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种使用方便、天然环保、可以有效杀灭环境中禽流感病毒的竹醋液提取物及其制备方法。本发明解决上述问题所采用的技术方案是该制备方法包括以下步骤，将竹材粉碎，自然干燥或烘干至含水率1015%;置于干馏釜中加热至150200°C，干馏57小时，收集竹醋液；将收集到的竹醋液自然沉淀749天，过滤，再减压蒸馏25小时，收集馏出液；在收集到的馏出液中，添加乙醇，在15018(TC，1.11.4个大气压条件下，反应釜中反应24小时，分层，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加稳定剂，得到最终产品。本发明所添加的稳定剂按重量百分比，为0.31.5%的碳酸氢钠，0.52%的碳酸钠，0.21%的吐温80中的一种或几种。本发明按重量比，以馏出液乙醇=4:1的比例添加乙醇。本发明在温度60±2°C、真空度300士50pa的条件下进行减压蒸馏。本发明所述的竹材为竹块或竹屑。本发明与现有技术相比，具有以下有益效果该竹醋液提取物采用竹材为原料，材料天然环保，其制备方法简单、加工方便，且产品具有良好的杀菌效果。以下为该竹醋液提取物功效的实验验证1、材料与方法(1)受试产品本竹醋液提取物消毒剂，黄褐色液体，有机酸含量58%。(2)禽流感病毒毒株为A/Goose/GuangDong/l/96(H5Nl)，由国家禽流感参考实验室保存。(3)鸡胚10日龄SPF鸡胚，由中国农科院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供。(4)预备试验A、病毒EIDso的测定将H5亚型禽流感病毒10倍稀释，接种10日龄SPF鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(O.lml/胚)，测定病毒的半数感染剂量(EID50)。B、竹醋液提取物消毒剂对鸡胚的毒性试验将原液、1:5、1:10、1:50、1:100、1:500倍稀释的竹醋液提取物消毒剂分别接种10R龄SPF鸡胚，每个稀释度接种5枚鸡胚(O.lml/胚)，将接种的鸡胚置37。C温箱中培养96小时。24小时以内死亡的鸡胚去掉，记录鸡胚死亡情况。(5)竹醋液提取物消毒剂对病毒的杀灭率试验采用Kkin-Defors悬浮方法进行竹醋液提取物消毒剂对禽流感病毒的杀灭试验，以灭菌生理盐水稀释的不同稀释度的竹醋液提取物消毒剂与病毒作用一定时间，然后不同稀释度作用混合液进行10倍系列稀释，接种检测感染鸡胚情况。分别取1065ELD5。/0.lmlH5亚型禽流感病毒悬液与1:50、1:100、1:500、1:600、1:700、1:900、1:1000倍稀释的竹醋液提取物消毒剂按1:9混合，在20土1'C条件下作用10分钟后，快速再用灭菌生理盐水做10倍递进稀释，做8个稀释度，每个稀释度接种5枚鸡胚(0.1ml/胚)。阴性对照组用灭菌生理盐水代替竹醋液提取物消毒剂，同法自理；稀释液接种种10日龄SPF鸡胚，每个稀释度接种5枚鸡胚(O.lml/胚)。将接种鸡胚置37'C恒温箱中培养，记录鸡胚死亡情况。24小时以内死亡的鸡胚去掉，24小时以后的死胚及时取出，至96小时全部取出，逐个取尿囊液做血凝(HA)试验，血凝阳性者判为鸡胚感染。按照鸡胚感染的结果，按下列方程式计算试验组和对照组鸡胚感染的阳性率、样本含ELDso与杀灭率。阳性率=血凝阳性鸡胚/接种鸡胚；样本含ELD5o量的对数^L—d(S—0.5)(L为最低稀释倍数的对数；d为稀释度间对数的差；S为各稀释列阳性率之和。)病毒杀灭率=(对照样本含ELD5o量一试验样本含ELD5o量)/对照样本含ELD5o量X100。/q2、结果(1)病毒ELDso的测定由附表1可知，将H5亚型禽流感病毒10倍系列稀释，接种10日鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(O.lml/胚)，试验结果显示病毒的半数感染剂量ELDso为1065ELD50/0.1ml。附表1:H5亚型禽流感病毒ELD5G的测定<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>其中分子为有血凝活性胚数，分母为接胚数(2)竹醋液提取物消毒剂对鸡胚的最大无毒剂量由附表2可知，将原液、1:5、1:10、1:50、1:100、1:500倍稀释的竹醋液提取物消毒剂分别接种10日龄鸡胚，每个稀释度5枚鸡胚(O.lml服)，试验结果显示竹醋液提取物消毒剂对鸡胚的最大无毒剂量为1:50倍稀释的竹醋液提取物消毒剂。附表2:竹醋液提取物消毒剂对鸡胚的最大无毒剂量<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>其中分子为死亡胚数，分母为接胚数(3)竹醋液提取物消毒剂对禽流感病毒的杀灭作用将l:50、1:100、1:500、1:600、1:700、h900、1:1000倍稀释的竹醋液提取物消毒剂，分别与1065EID5Q/0.1ml的H5亚型禽流感病毒悬液(9:1)作用IO分钟，不同稀释浓度的竹醋液提取物消毒剂杀灭病毒率结果见附表3。附表3:竹醋液提取物消毒剂对H5N1亚型禽流感病毒的杀灭率<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、结论采用Klein-Defors悬浮杀灭与感染实验方法，将竹醋液提取物消毒剂在不同稀释度下，分别与H5N1亚型禽流感病毒(9:l)体外直接作用，以此检测竹醋液提取物消毒剂在体外对禽流感病毒的杀灭效果。结果表明，与禽流感病毒作用IO分钟后，1:50至1:600倍浓度范围内竹醋液提取物消毒剂对病毒的杀灭率为100%，有完全的杀灭病毒作用。图1为本发明实施例的具体流程图。具体实施方式参见图1，制备方法如下(1)取l吨竹块或竹屑，粉碎，烘干至含水率15%;(2)置于干馏釜中加热至18(TC，干馏6小时，收集干馏液；(3)将收集到的干馏液自然沉淀15天，过滤，再于6(TC、300pa真空度下减压蒸镏3小时，收集馏出液；(4)在收集到的馏出液中，按重量比，以馏出液乙醇=4:1的比例添加乙醇，在160。C，1.2个大气压条件下，反应釜中反应3小时，分层，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加重量百分比为1.0%的碳酸氢钠作为稳定剂，得到最终产品，灌装为成品。所添加的稳定剂也可为0.31.5%的碳酸氢钠，0.52%的碳酸钠，0.21%的吐温80中的一种或几种。所得到的竹醋液提取物按重量百分比主要包括以下成分-乙酸苯甲酸苯酚2—甲氧基苯酚4一甲氧基苯酚4一乙基苯酚2.08.0%0.50,8%2.54.0%3.07.0%1.52.0%2.53.0%2，6—二甲氧基苯酚2.04.0%乙基愈创木酚其它酚类物质酮类化合物醛类化合物余量为水。0.53.0%。0.23.0%0.11.0%0.11.0%权利要求1、一种消除环境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将竹材粉碎，自然干燥或烘干至含水率10～15％；(2)置于干馏釜中加热至150～200℃，干馏5～7小时，收集竹醋液；(3)将收集到的竹醋液自然沉淀7～49天，过滤，再减压蒸馏2～5小时，收集馏出液；(4)在收集到的馏出液中，添加乙醇，在150～180℃，1.1～1.4个大气压条件下，反应釜中反应2～4小时，分层，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加稳定剂，得到最终产品。2、根据权利要求1所述的消除环境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制备方法，其特征在于所添加的稳定剂按重量百分比，为0.31.5%碳酸氢钠，0.52%碳酸钠，0.21%吐温80中的一种或几种。3、根据权利要求1所述的消除环境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制备方法，其特征在于按重量比，以馏出液乙醇=4:i的比例添加乙醇。4、根据权利要求1所述的消除环境中禽流感病毒的竹醋液提取物的制备方法，其特征在于在温度60±2"、真空度300土50pa的条件下进行减压蒸馏。5、根据权利要求1所述的消除环境中禽流感病毒的竹子提取物的制备方法，其特征在于所述的竹材为竹块或竹屑。全文摘要本发明涉及一种可以有效消除空气、土壤等环境中禽流感病毒，防止人禽交叉感染的消除环境中禽流感病毒竹醋液提取物及其制备方法。其包括以下步骤将竹材粉碎，自然干燥或烘干至含水率10～15％；置于干馏釜中加热至150～200℃，干馏5～7小时，收集竹醋液；将收集到的竹醋液自然沉淀7～49天，过滤，再减压蒸馏2～5小时，收集馏出液；在收集到的馏出液中，添加乙醇，在150～180℃，1.1～1.4个大气压条件下，反应釜中反应2～4小时，分层，除去生成的乙酸乙酯，得到精制竹醋液，添加稳定剂，得到最终产品。本发明具有使用方便、天然环保、可以有效杀灭环境中禽流感病毒的优点。文档编号A01P1/00GK101126028SQ20071007041公开日2008年2月20日申请日期2007年8月3日优先权日2007年8月3日发明者王衍彬,童晓青,华钱申请人:浙江省林业科学研究院