一种诱导动物c反应蛋白高水平表达的饲料及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料及应用。所述的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料，按总质量分数100％计，包括：猪板油10～20％和胆固醇1～2％，余量为生长期基础饲料。本发明利用诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料膳食诱导食蟹猴CRP高表达研究具有相关重要的研究意义和应用价值。对于炎症相关疾病和炎症相关疾病如动脉粥样硬化，心血管病，甚至糖尿病及关节炎等的炎症机制研究、前期预警方面的研究及药物干预后的药效评价也有很重要的实际意义。并且本发明的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料的原料成本低，来源广泛，易获得，稳定性好，制备方法简单，易于运输和保存，具有较好的应用推广前景。
【专利说明】一种诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料及应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及诱导特殊炎症因子高表达的实验动物模型领域，具体涉及一种诱导动 物C反应蛋白高水平表达的饲料及应用。
【背景技术】：
[0002] 长期以来，C反应蛋白（C-reactive protein, CRP)被视为炎症、感染和组织损 伤急性期反应的非特异性产物，最近十多年来研宄，人们发现CRP水平与动脉粥样硬化 (atherosclerosis，AS)及心血管疾病关系甚密，因而再度引起人们对CRP的强烈兴趣。
[0003] 越来越多的证据表明，炎症过程在AS及其并发症的发生过程中起着关键性的作 用。AS是心血管病的病理基础，是一种炎症性自身免疫性疾病，炎症反应参与了其整个发生 发展过程。研宄表明与心血管病密切联系的AS，高脂血症和胰岛素抵抗都与慢性和亚临床 炎症相关，表现为血液循环中致炎蛋白水平的升高。在众多炎症标志物中，CRP研宄的相对 较多，有研宄表明它可能在AS斑块形成的过程中起着直接的促进作用。
[0004] 猕猴属动物（包括食蟹猴和恒河猴）与人类的遗传同源性达到92. 5-95. 0%，且在 身体结构、心血管功能、AS病变的性质和部位、受体与非受体转运途径的比例、临床症状以 及各种药品的疗效关系等，都与人体的非常相似。特别是对于药物研宄中的生物类药物如 基因、抗体与多肽类药物等，通常在小动物模型中疗效很好，但一旦用于人体，则效果不好， 或完全没效，所以在临床前通常会在非人灵长类动物模型上进行药效研宄进行考察。但实 际应用中恒河猴价格更为昂贵，体型较大，性格较为暴烈，在实验过程中不易操作，且在实 验过程中用药量也相对较大，当前许多研宄工作越来越倾向于采用体型较小，性格相对温 和的食蟹猴作为疾病动物模型。
【发明内容】
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[0005] 本发明的第一个目的是提供一种诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料。
[0006] 本发明的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料，其特征在于，按总质量分数 100%计，包括：猪板油10?20%和胆固醇1?2%，余量为生长期基础饲料。
[0007] 所述的动物为食蟹猴，所述的生长期基础饲料，按总质量分数100%计，包括玉米 50 %，豆柏16 %、麸皮10. 5 %，鱼粉5 %，膨化大豆粉7. 5 %，椰子油粉1 %，钙粉1. 3 %，磷酸 氢钙粉1.5%，面粉5%，灵长多维0. 1 %、灵长多矿0. 1 %、维生素 c 0.2%、赖氨酸1 %和蛋 氨酸0.8% ;
[0008] 所述的灵长多维每千克中含有：维生素 A，15000000IU ;维生素 D3,2200000IU ;维 生素 E，65000IU ;维生素 K，IOOOmg ;维生素 BI，16000mg ;维生素 B2,16000mg ;维生素 B6， 13000mg ;烟酰胺，60000mg ;D-泛酸钙，42000mg ;D-生物素，400mg ;维生素 B12,50mg ;叶酸 20001^;质量分数65%的氯化胆，230011^，以统糠为饲料载体。
[0009] 所述的灵长多矿每千克的保证值为：镁150g、钾80g、铁8g、锰6g、铜I. 6g、锌10g、 碘0. 8g和硒0. Olg，以沸石粉为载体。
[0010] 本发明的第二个目的是提供诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料饲喂诱导高 水平表达C反应蛋白的非人灵长类动物中的应用。
[0011] 所述的非人灵长类动物为食蟹猴。
[0012] 目前针对膳食诱导食蟹猴CRP高表达的研宄还鲜有报道，本发明利用诱导动物C 反应蛋白高水平表达的饲料膳食诱导食蟹猴CRP高表达研宄具有相关重要的研宄意义和 应用价值。对于炎症相关疾病和炎症相关疾病如AS，心血管病，甚至糖尿病及关节炎等的炎 症机制研宄、前期预警方面的研宄及药物干预后的药效评价也有很重要的实际意义。并且 本发明的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料的原料成本低，来源广泛，易获得，稳定性 好，制备方法简单，易于运输和保存，具有较好的应用推广前景。本发明的诱导动物C反应 蛋白高水平表达的饲料各组分百分比组合比例适宜，不易引起动物厌食，能满足其生长期 各种营养需求；且能顺利将饲料制备成型，为汤圆型粒料状，易为多种动物取食，大小也较 适合灵长类动物抓取食用。
[0013] 因此本发明可应用在以下几方面，如可以从抑制其表达的信号通路方面加以研宄 利用，另外，可以从研宄抑制炎症效果的药物药效学研宄来充分利用，对研宄炎症疾病及心 血管疾病的发病机制也有很重要的意义。因此研宄诱导体内CRP高水平表达的动物模型就 具有广泛的研宄意义和实际中的应用价值。
【专利附图】
【附图说明】：
[0014] 图1是膳食诱导后食蟹猴C反应蛋白值的变化，HF代表诱导组（诱导动物C反应 蛋白高水平表达的饲料诱导），Control表示对照组，*表示与对照组相比有显著性差异（P < 0· 05)，林表示有极显著差异（P < 0· 01);
[0015] 图2是膳食诱导后食蟹猴总胆固醇值的变化，HF代表诱导组（诱导动物C反应 蛋白高水平表达的饲料诱导），Control表示对照组，*表示与对照组相比有显著性差异（P < 0· 05)，林表示有极显著差异（P < 0· 01);
[0016] 图3是膳食诱导后食蟹猴低密度脂蛋白胆固醇的变化，HF代表诱导组（诱导动物 C反应蛋白高水平表达的饲料诱导），Control表示对照组，*表示与对照组相比有显著性差 异（P < 0· 05)，**表示有极显著差异（P < 0· 01)。
【具体实施方式】：
[0017] 以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0018] 实施例1 :运用本发明制备的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料通过膳食饲 喂诱导制备非人灵长类动物食蟹猴C反应蛋白高表达模型。
[0019] 诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料的制备：
[0020] 食蟹猴生长期基础饲料，按总质量分数100%计，由玉米50%，豆柏16%、麸皮 10. 5%，鱼粉5%，膨化大豆粉7. 5%，椰子油粉1%，钙粉1.3%，磷酸氢钙粉1.5%，面粉 5%，灵长多维0. 1 %、灵长多矿0. 1 %、维生素 c 0.2%、赖氨酸1 %和蛋氨酸0.8% ;
[0021] 所述的灵长多维每千克中含有：维生素 A，15000000IU ;维生素 D3,2200000IU ;维 生素 E，65000IU ;维生素 K，IOOOmg ;维生素 BI，16000mg ;维生素 B2,16000mg ;维生素 B6， 13000mg ;烟酰胺，60000mg ;D-泛酸钙，42000mg ;D-生物素，400mg ;维生素 B12,50mg ;叶酸 2000mg ;质量分数65%的氯化胆，2300mg，以统糠为载体；
[0022] 所述的灵长多矿每千克的保证值为：镁150g、钾80g、铁8g、锰6g、铜I. 6g、锌10g、 碘0. 8g和硒0. Olg，以沸石粉为载体。
[0023] 按食蟹猴生长期基础饲料的组分及其含量配比称取玉米，豆柏、麸皮，鱼粉，膨化 大豆粉，椰子油粉，钙粉，磷酸氢钙粉，面粉，灵长多维、灵长多矿、维生素 c与氨基酸在双轴 桨叶式混合机上进行混合均匀配制成食蟹猴生长期基础饲料成品。灵长多维、灵长多矿、维 生素 c与氨基酸含量较少，要先进行预混合，然后均匀散在其它饲料中搅拌，才能保证混合 均匀。
[0024] 诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料，按总质量分数100%计，包括食蟹猴生长 期基础饲料83. 5%，猪板油15%与胆固醇1. 5%。按诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲 料的组分及其含量配比，将食蟹猴生长期基础饲料和胆固醇在V型混合机上混合均匀，然 后再与猪板油在开口式混合机上混合直至成汤圆型，分装即得诱导动物C反应蛋白高水平 表达的饲料。
[0025] 1材料和方法
[0026] I. 1动物选择
[0027] 筛选15只8-9岁健康雄性食蟹猴，动物来源于广东蓝岛生物技术有限公司，使用 许可证编号为SYXK (粵）2013-0088,生产许可证编号为SCXK (粵）20014-0010。采用单笼 (规格：70〇1^70〇1^80〇11)饲养，每笼1只，饲养室内温度18?26°〇，相对湿度60%? 80%。10只饲喂根据本发明制备的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料，5只食蟹猴饲 喂生长期基础饲料作为对照组，且均辅以时令水果等青饲料，人工每日定时喂养，所有食蟹 猴均自由取水饮用。
[0028] 1. 2实验材料
[0029] 饲料置于低温冷库保存，保质期2周。生长期基础饲料的各种组分和猪板油在市 场上均可以买到，另外胆固醇来自于广州市齐云生物技术有限公司，纯度3 95%。实验中麻 醉用药盐酸氯胺酮由沈阳兽药厂生产。
[0030] 1. 2实验方法
[0031] 1. 2. 1正常食蟹猴血样的采集
[0032] 采血前需隔夜禁食，用盐酸氯胺酮（0.05mg/kg)轻度麻醉食蟹猴，待麻醉10? 20min后，测定体重和坐高，米后肢静脉全血，室温静置30min，低温4°C，4000rpm离心 (Ependorf5810r)，取上层血清，低温状态下送检。检测的主要血生化指标包括CRP，免疫比 池法测定；其它有总胆固醇（total cholesterol，TC)，胆固醇氧化酶法测定与低密度脂蛋 白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)，直接法测定，均由广州金域医 学检验中心检测获得，所用仪器为罗氏P800,且均为罗氏配套试剂与试剂盒。采血时间为 1. 5个月左右一次，膳食诱导前采集3次，随即开始根据本发明制备的诱导动物C反应蛋白 高水平表达的饲料饲喂食蟹猴，诱导后第1次检测在2个月后，再连续收集8次血清并送 检。
[0033] L 2. 2膳食诱导
[0034] 采用本发明的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料进行饲喂诱导，单笼喂养筛 选出的15只健康雄性食蟹猴，分膳食诱导组与空白对照组2组。实验过程中观察记录食蟹 猴外观、行为、及日常饮食情况。
[0035] 1. 2. 3数据处理方法
[0036] 文中所有数据采用Excel软件进行统计学分析，统计分析采用Studen's t test， 实验中测得所有数据以v±s的形式表示，P〈0. 01表示有极显著差异，P〈0. 05表示有显著差 异。
[0037] 2 结果
[0038] 血清由广州金域医学检验中心检测，实验选择中年雄性食蟹猴利用本发明制备的 诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料进行膳食饲喂诱导，膳食诱导前和诱导后定期检测 对照组的TC、LDL-C与CRP，检测结果见图1，图2,图3。
[0039] CRP作为炎症因子，也是AS和心血管的生物标志物，因此本研宄在考察CRP是否升 高过程中，也考察了是否同时也伴随AS与心血管的常规检测指标胆固醇和低密度脂蛋白 胆固醇的升高。考察CRP水平升高的可靠性，及本发明的诱导动物C反应蛋白高水平表达 的饲料是否有更广泛的应用价值。
[0040] 2. 1膳食诱导食蟹猴血清CRP值的变化
[0041] 从图1能看到在诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料膳食诱导后的第2次血清 检测（也即图上第5次血清检测）时CRP水平与对照组相比显著提高，随后阶段与对照组 相比总体也维持在显著升高水平。
[0042] 2. 2膳食诱导过程中食蟹猴血清TC值的变化
[0043] 图2显示诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料膳食诱导初期食蟹猴的TC水平 明显升高，与对照组有明显差异，且一直持续到后期。前期的急剧上升可能因为尚未启动体 内的调节机制，经一段时间的新饲料诱导的适应期，后期进入稳定阶段并保持在一定的高 值水平。
[0044] 通过与图1比较，TC水平的明显升高稍早于CRP水平的升高，能提示高TC水平能 促进CRP水平的升高。
[0045] 2. 3膳食诱导过程中食蟹猴血清LDL-C值的变化
[0046] 有研宄显示，CRP伴随LDL-C对诊断动脉粥样硬化的临床价值较为显著，为临床AS 的诊断和治疗提供了重要信息，本发明诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料膳食诱导应 用研宄中，如图3所示，发现伴随CRP的升高，LDL-C在整个诱导过程中也表现显著升高。且 LDL-C也稍早于CRP的显著升高而显著升高。
[0047] 结合图1，图2,图3的结果，与喂食正常饲料组（生长期基础饲料）相比较，本发 明饲料组经诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料诱导后的TC水平，LDL-C水平及C-反应 蛋白水平均有显著提高。血脂在诱导前期的急剧上升可能因为尚未启动体内的调节机制， 经一段时间的饲料喂养的适应期，后期进入稳定阶段并保持在一定的高值水平。这可以说 明，本发明的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料可有效的诱导出动物体内C反应蛋白 的高水平表达，同时检测的胆固醇和低密度脂蛋白与对照组比较也维持在高值。三组指标 检测结果显示CRP水平的显著升高稍滞后于血脂水平的显著升高，表明本研宄中的CRP的 显著升高的确与血清中的血脂水平有关，也表明在以后的检测中如果能单独检测到CRP水 平升高，则血清中的血脂水平也很可能高于正常，所以CRP的确可以作为心血管病的独立 危险因素加以检测应用，且准确性应高于血脂指标。综上所述，本发明的诱导动物C反应蛋 白高水平表达的饲料可应用于以CRP炎症因子升高有为特征的炎症疾病的研宄中，也可以 应用于高脂血症、动脉粥样硬化等心血管病的研宄当中，且有一定的研宄意义和应用价值。
[0048] 实施例2 :
[0049] 本实施例与实施例1基本相同，只是诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料的配 方不同，其按总质量分数100%计，包括：猪板油10%和胆固醇2%，余量为生长期基础饲 料。
[0050] 按照实施例1的动物试验证明本实施例的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料 可有效的诱导出动物体内C反应蛋白的高水平表达。
[0051] 实施例3:
[0052] 本实施例与实施例1基本相同，只是诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料的配 方不同，其按总质量分数100%计，包括：猪板油20%和胆固醇1%，余量为生长期基础饲 料。
[0053] 按照实施例1的动物试验证明本实施例的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料 可有效的诱导出动物体内C反应蛋白的高水平表达。
[0054] 以上研宄内容是结合具体的优选实施方式对本发明在具体应用上所作的进一步 详细说明与解释，但并不能认定本发明的具体实施只限于这些说明，也可应用于其它动物 或食物配方稍作变动或比例稍有变化用于其它多种动物进行诱导实施。
【权利要求】
1. 一种诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料，其特征在于，按总质量分数100%计， 包括：猪板油10?20%和胆固醇1?2%，余量为生长期基础饲料。
2. 根据权利要求1所述的饲料，其特征在于，所述的动物为食蟹猴，所述的生长期基础 饲料，按总质量分数100%计，包括玉米50%，豆柏16%、麸皮10. 5%，鱼粉5%，膨化大豆 粉7. 5%，椰子油粉1%，钙粉1.3%，磷酸氢钙粉1.5%，面粉5%，灵长多维0. 1%、灵长多 矿0. 1 %、维生素 c 0.2%、赖氨酸1 %和蛋氨酸0.8% ; 所述的灵长多维每千克中含有：维生素 A，15000000IU ;维生素 D3,2200000IU ;维生 素 E，65000IU ;维生素 K，lOOOmg ;维生素 Bl，16000mg ;维生素 B2,16000mg ;维生素 B6， 13000mg ;烟酰胺，60000mg ;D-泛酸钙，42000mg ;D-生物素，400mg ;维生素 B12,50mg ;叶酸 2000mg ;质量分数65%的氯化胆，2300mg，以统糠为饲料载体；所述的灵长多矿每千克的保 证值为：镁150g、钾80g、铁8g、猛6g、铜1. 6g、锌10g、碘0. 8g和硒0. Olg，以沸石粉为载体。
3. 权利要求1所述的诱导动物C反应蛋白高水平表达的饲料在饲喂诱导非人灵长类动 物高水平表达C反应蛋白中的应用。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的非人灵长类动物为食蟹猴。
【文档编号】A23K1/14GK104489383SQ201410799390
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月18日 优先权日:2014年12月18日
【发明者】孙云霄, 张礼标, 季芳, 徐强, 沈琪琦, 刘奇 申请人:广东省昆虫研究所