一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法与流程

文档序号:12299273阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)扇蕨无菌幼孢子囊群外植体的获得

选择带有扇蕨幼孢子囊群的扇蕨叶片,用软的毛刷蘸1%体积分数的洗洁精水对扇蕨幼孢子囊群表面进行清洗,除去扇蕨幼孢子囊群表面的小鳞片和杂物,直至可见黄绿色的扇蕨幼孢子囊,然后用手术刀片将扇蕨幼孢子囊群从叶片上剥离,放置于烧杯中,流动水冲洗1~1.5小时,再在无菌条件,将扇蕨幼孢子囊群用5%体积分数的次氯酸钠溶液消毒12~15分钟,无菌水冲洗5~6次,每次冲洗5分钟,即得扇蕨无菌幼孢子囊群外植体;所述扇蕨幼孢子囊为黄绿色,且孢子囊壁完整,孢子囊外壁覆盖有棕褐色鳞片的扇蕨孢子囊;

(2)扇蕨绿色球状体的诱导

将步骤(1)中获得的扇蕨无菌幼孢子囊群切成小块,接种于绿色球状体诱导培养基上,20℃~25℃暗培养48小时,然后转入光照培养,培养时间为40~48天,得到扇蕨绿色球状体,光照培养条件为:20℃~25℃,每天的光照时间为12小时,光照强度为2000lx;所述绿色球状体诱导培养基为:1/4MS~1/2MS+TDZ 0.5~1.0mg/L+NAA 0.1~0.3mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L,pH为5.80;

(3)扇蕨绿色球状体的增殖

将步骤(2)诱导获得的扇蕨绿色球状体切割成块,接种于绿色球状体增殖培养基上,培养时间为30天,得到增殖的扇蕨绿色球状体,培养条件与步骤(2)中所述的光照培养条件相同;所述绿色球状体增殖培养基为:1/2MS~MS+6-BA 0.3~0.5mg/L+NAA 0.1~0.3mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L,pH为5.80;

(4)扇蕨绿色球状体的分化

将步骤(3)增殖得到的扇蕨绿色球状体切割成块,接种于绿色球状体分化培养基上,培养时间为30天,得到分化幼苗,培养条件与步骤(2)中所述的光照培养条件相同,所述绿色球状体分化培养基为:1/4MS~1/2MS+KT0.1~0.2mg/L+水解酪蛋白100~180mg/L+活性炭1~2g/L+蔗糖20g/L+琼脂7.0g/L,pH为5.80;

(5)扇蕨组培苗的培养和生根

将步骤(4)得到的分化幼苗接种于组培苗培养和生根培养基上,培养时间为60天,每30天更换一次组培苗培养和生根培养基,得到植株高度为1.5cm以上的生根组培苗,培养条件与步骤(2)中所述的光照培养条件相同,所述组培苗培养和生根培养基为:1/2MS~MS+NAA 0.2~0.3mg/L+活性炭1~2g/L+蔗糖20g/L+琼脂7.0g/L,pH为5.80。

2.根据权利要求1所述的一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法,其特征在于:

步骤(2)中所述的将步骤(1)中获得的无菌扇蕨幼孢子囊群切成小块的大小为1mm~2mm×1mm~2mm×1mm~2mm;步骤(3)中所述的将步骤(2)诱导获得的扇蕨绿色球状体切割成块的大小为1~3mm×1~3mm×1~3mm;步骤(4)中所述的将步骤(3)增殖得到的扇蕨绿色球状体切割成块大小为1~3mm×1~3mm×1~3mm。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1