一种液态复合生物多控杀虫剂及其制备方法_2

文档序号:8228966阅读:来源:国知局
种培养:取PDA液体培养基,接入一级斜面菌种,于30?40°C下培 养48?72小时,转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用 种子罐进行种子的放大培养;
[0040] C、微生物菌液的发酵生产:取PDA液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于 pH7. 2?8. 5、温度30?40°C发酵3?5天,即得,发酵液经检验,每一种有效菌的数量不得 少于2亿/毫升后,符合国家标准GB-20287-2006,可作为生产菌液备用;
[0041] 按重量份配比,将上述B步骤生产的各种菌液混合,制成复合菌剂;
[0042] C、液态复合生物多控杀虫剂的制备:
[0043] 按所述各原料组分的重量份配比,将水经121°C灭菌20分钟后,与上述药用植物 提取物及复合菌剂,混合均匀,经检验,使含总有效活菌数达2. 0亿/毫升以上,符合国家标 准 GB-20287-2006,即得;
[0044] 其中各原料组分的重量份配比同上所述。
[0045] 本发明使用的微生物菌种具有的杀虫作用如下:
[0046] 蜡状芽孢杆菌是一种能防治线虫病的细菌。
[0047] 球形芽孢杆菌是一种能产生对害虫具有专一杀虫活性蛋白的细菌,尤其防治土壤 线虫。
[0048] 短芽孢杆菌可以利用植物本身根系和叶围正常存在的微生物进行外源抗虫害基 因的转化,可使外源基因产物持续作用于植物表面,赋予植物抗虫害的能力,它与水稻有良 好的亲和性,是一种能防治线虫病的细菌。
[0049] 苏云金芽孢杆菌是一种细菌生物杀虫剂,可使昆虫在中肠上皮细胞形成微孔,使 细胞肿胀破裂、肠道溃烂,昆虫死亡。
[0050] 淡紫拟青霉菌是一种真菌杀虫剂,对稻褐飞虱、白背飞虱、菜青虫皆有较强的致病 能力,并有刺激作物生长作用。
[0051] 金龟子绿僵菌是一种真菌杀虫剂,对稻褐飞虱、电光叶蝉、稻绿蝽、玉米螟等主要 害虫有较好效果。
[0052] 球孢白僵菌是一种真菌杀虫剂,防治白粉虱、蚜虫、玉米螟、松毛虫等害虫。
[0053] 本发明的液态复合生物多控杀虫剂是将各种菌液按所述比例混配制备,能很好地 保持复合菌剂中的各菌群数量比例相对稳定。复合菌剂与依靠自然环境进行分解的微生物 菌群及与未经单独培养而混配的菌群相比,采用单独培养后,再混配在一起的菌群,由于可 以根据实际需要选择合理的匹配比例,能充分地发挥菌剂中各菌群自身的生物特性与相互 协同作用,所以,用其进行生物处理的适用范围非常广泛。
[0054] 本发明的液态复合生物多控杀虫剂是一种高效、低毒、对环境友好,不易产生抗性 的生物多控杀虫剂。用于水稻、玉米及小麦的田间对比试验,对水稻潜叶蝇、稻纵卷叶螟、水 稻二化螟、稻飞虱、中华蝗虫、玉米螟虫具有较好杀灭作用,用于果树及蔬菜,也取得明显效 果。
【具体实施方式】
[0055] 以下各实施例仅用于对本发明进行解释说明,并不构成对权利要求范围的限定, 本领域技术人员根据说明书内容可以想到的其它替代手段,均应在本发明权利要求的保护 范围之内。
[0056] 本发明实施例采用的微生物菌种,选择中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC 1997年版的菌种目录中公开的菌种。
[0057] 其编号和菌株名是:CGMCC1. 932的赌状芽抱杆菌(Bacillus cereus Frankland et Frankland),菌种编号为 CGMCCL 931 的短芽抱杆菌(Bacillus brevis Migula),菌 种编号为 CGMCCL 1673 的球形芽抱杆菌(Bacillus sphaericus Meyer et Neide),菌 种编号为CGMCCL 785的苏云金芽抱杆菌(Bacillus thuringiensis Berliner),菌种 编号为CGMCC3. 4035的淡紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus Samson),菌种编号为 CGMCC3. 4273 的球孢白僵菌(Beauveria bassiana Vuillemin),菌种编号为 CGMCC3. 3675 的金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae) 〇
[0058] 实施例的制备方法为如下步骤:
[0059] A、药用植物提取物的制备:
[0060] a、取药用植物苦参、艾蒿或藜芦中的一种,称取20公斤,加入60%乙醇88升,回流 提取2小时,滤过,将残渣重复提取2次,第1次加入60%乙醇42升,第2次加入60%乙醇 32升,合并滤液,减压回收乙醇,滤液浓缩至10升,加1 %盐酸,调pH3?4,滤过,滤液中加 10%氢氧化钠,调PHlO?11,用氯仿萃取4次,每次15升,合并氯仿层,用水10升洗涤,分 出氯仿层,水浴蒸干,残渣加无水乙醇溶解,至10公斤,摇匀,121°C灭菌20分钟,制得;
[0061] b、称取菊苣和甜叶菊各5公斤,加入90升无水乙醇,浸泡24小时,超声波提取20 分钟,将浸提液滤出,将残渣加入45升无水乙醇,再提取1次,合并滤液,浓缩至10公斤,经 121 °C灭菌20分钟,制得;
[0062] B、复合菌剂的制备:
[0063] 制备所述蜡状芽孢杆菌液、球形芽孢杆菌液、短芽孢杆菌液或苏云金芽孢杆菌液 的发酵方法:
[0064] a、斜面菌种活化培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一种上述微生物的斜面 培养物,32?33°C条件下在摇床上振荡培养30小时,转速为80?100转/分,然后转接到 相同的培养基中培养,照此方法连续转接4次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培 养基上,32?33°C条件下培养2天,转速为80?100转/分,待长出菌落后,挑取大菌落在 同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保 存备用;
[0065] b、二级摇瓶菌种培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一级斜面菌种,于32? 33°C下培养30小时,转速为80?100转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采 用种子罐进行种子的放大培养;
[0066] c、微生物菌液的发酵生产:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入上述制备的发酵种 子液,于PH7. 5?7. 8、温度33?35°C,发酵2天,即得,经检验,每一种有效菌的数量不得 少于2亿/毫升后,符合国家标准GB-20287-2006,可作为生产菌液备用;
[0067] 制备所述淡紫拟青霉菌液、金龟子绿僵菌液或球孢白僵菌液的发酵方法:
[0068] a、斜面菌种活化培养:取PDA液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物, 25?28°C条件下在摇床上振荡培养60小时,转速为80?100转/分,然后转接到相同的 培养基中培养,照此方法连续转接4次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上, 25?28°C条件下培养4天,待长出粗壮菌丝后,挑取粗壮菌丝在同样的固体平板培养基上 划线,挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;
[0069] b、二级摇瓶菌种培养:取PDA液体培养基,接入一级斜面菌种,于25?28°C下培 养60小时,转速为80?100转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐 进行种子的放大培养;
[0070] c、微生物菌液的发酵生产:取PDA液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于 pH7. 0?7. 2、温度25?28°C发酵3天,即得,发酵液经检验,每一种有效菌的数量不得少于 2亿/毫升后,符合国家标准GB-20287-2006,可作为生产菌液备用;
[0071] 按重量份配比,将上述B步骤生产的各种菌液混合,制成复合菌剂;
[0072] C、液态复合生物多控杀虫剂的制备:
[0073] 按所述各原料组分的重量份配比,将水经121°C灭菌20分钟后,与上述药用植物 提取物及复合菌剂,混合均匀,经检验,使含总有效活菌数达2. 0亿/毫升以上,符合国家标 准 GB-20287-2006,即得;
[0074] 其中各原料组分的重量份配比同如下实施例所述。
[0075] 实施例1 :由如下重量份配比的原料组分制成:
[0076] 药用植物:菊苣5份、甜叶菊5份、苦参20份,
[0077] 复合菌剂:蜡状芽孢杆菌液2. 5份、球形芽孢杆菌液2. 5份、短芽孢杆菌液3份、苏 云金芽孢杆菌液11份、淡紫拟青霉菌液2. 5份、金龟子绿僵菌液2. 5份、球孢白僵菌液2. 5 份,水53份。
[0078] 实施例2 :由如下重量份配比的原料组分制成:
[0079] 菊苣4份、甜叶菊5份、苦参25份、蜡状芽孢杆菌液3份、球形芽孢杆菌液3份、短 芽孢杆菌液3份、苏云金芽孢杆菌液11份、淡紫拟青霉菌液4份、金龟子绿僵菌液3份、球 孢白僵菌液3份及水47份。
[0080] 实施例3 :由如下重量份配比的原料组分制成:
[0081] 菊苣5份、甜叶菊6份、艾蒿18份、蜡状芽孢杆菌液2份、球形芽孢杆菌液2份、短 芽孢杆菌液2份、苏云金芽孢杆菌液13份、淡紫拟青霉菌液2份、金龟子绿僵菌液2份、球 孢白僵菌液2份及水59份。
[0082] 实施例4 :由如下重量份配比的原料组分制成:
[0083] 菊苣4份、甜叶菊6份、藜芦22份、蜡状芽孢杆菌液3份、球形芽孢杆菌液2. 5份、 短芽孢杆菌液3份、苏云金芽孢杆菌液8份、淡紫拟青霉菌液4份、金龟子绿僵菌液2份、球 孢白僵菌液3份及水55份。
[0084] 本发明实施例的液态复合生物多控杀虫剂使用方法:
[008
当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1