的轮枝镰孢菌接种玉米技术，并可解决玉米对茎腐病抗性的早期鉴定问题。
【附图说明】
[0042]图1是实施例3中轮枝镰孢菌与待接种玉米品种种子共培养5?7天图；其中，图1A:混合共培养，图1B:CK为无镰孢菌。
[0043]图2是实施例3中带有玉米幼芽的种子在小花盆中生长15天的状况图；其中，图2A:接种后的糯玉米种质材料kj61的生长状况图；图2B:未接种的糯玉米种质材料kj61 (对照)的生长状况图。
[0044]图3是实施例3中带有玉米幼芽的种子播种后生长20天后考察植株抗病性的情况图；其中，图3左是接种后的植株；图3右是对照CK的植株。
【具体实施方式】
[0045]下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0046]实施例1
[0047]本发明提供一种致病轮枝镰孢菌室内接种鲜食玉米的方法，能够对品种和种质材料进行抗性鉴定。本发明包括茎腐病病原轮枝镰孢菌的分离与扩繁、致病轮枝镰孢菌与玉米种子共培养接种和玉米植株抗性鉴定。
[0048]鲜食甜玉米自交系茎腐病的接种方法详细过程如下:
[0049](I)感病材料处理:从大田自然条件下发生茎腐病的玉米植株上采取病害茎杆，剖开，取被害部位茎髓组织，切成0.3?0.5cm小块，无菌条件下用0.1 %升汞溶液浸泡Imin左右，无菌水漂洗I次，取出组织块用75% (v/v)酒精消毒5mins，无菌水漂洗3次，取出材料，接种于固体PDA培养基上，26?28°C恒温箱暗培养分离病原菌；
[0050](2)病原轮枝镰孢菌株的分尚:上述感病组织在培养基上培养2?3d，在生长有菌丝的培养皿里挑取单个菌丝转接于新的固体PDA培养基上置于恒温箱中26?28°C进行培养，直到白色菌丝布满整个培养基；
[0051](3)致病轮枝镰孢菌的纯化鉴定:挑取步骤(2)中单个菌丝置于载玻片上滴I滴蒸馏水置于1X光学显微镜下观察病原菌孢子形态，确认为近年广州地区发生玉米茎腐病的致病轮枝镰孢菌(Fusarium verticill1ides)；
[0052](4)轮枝镰孢菌的扩繁:将预先准备好的玉米粒(一般玉米粒，仅作为病原菌培养用基质)用自来水泡涨，装入瓶中封口后121°C高压灭菌15mins，冷却后做为扩繁培养基，即玉米粒扩繁培养基。挑取若干轮枝镰孢菌菌丝置于玉米粒扩繁培养基上进行扩繁，26?28°C恒温箱暗培养3?5d，以明显看到白色菌丝布满玉米粒为宜；
[0053](5)待接种玉米品种准备:挑选无损、无霉烂、无虫口、无病斑的健康甜玉米自交系XWY种子(购自广东省农业科学院作物研宄所)，用75% (v/v)酒精消毒5mins后，再用5% (v/v)次氯酸钠溶液处理20mins，用无菌水冲洗3次，备用；
[0054](6)轮枝镰孢菌与玉米种子共培养接种:取步骤(4)中扩繁的镰孢菌玉米粒与步骤(5)待接种玉米按种子量1:1混合后，放在垫有灭菌滤纸的培养皿中，置于26?28°C恒温光照培养箱共培养5?7天，直到发芽后可见幼芽3cm左右，得到接种后带有幼芽的玉米种子。同时设置未接种的甜玉米自交系XWY种子作为对照；
[0055](7)将步骤(6)获得的带有幼芽的玉米种子播种在小花盆:挑出带有幼芽的玉米种子播种在含有土壤或基质的普通花盆中，视种子量多少选择不同规格花盆或苗盘，播种30株以上；
[0056](8)玉米植株抗病性鉴定:步骤(7)播种后定期浇适量水保湿，置于室温(26?280C )，经过20天后考察玉米植株的抗病性。
[0057]玉米苗期茎腐病调查分级标准:
[0058]O级(高抗)，整株生长正常，无病。
[0059]I级(抗病)，地上地下部生长基本正常，根部可见少量病斑，病斑面积占根表总面积1/4以下，根群颜色白中有褐。
[0060]2级(中抗)，地上地下生长明显受阻，叶色变淡，株高仅及对照的3/4，侧根少、细而短，无须根，病斑连片，病斑面积占根表总面积的1/4?1/2，根群颜色白、褐相当。
[0061]3级(中感)，地上地下部生长极不正常，地上部可见青枯一黄枯状，株高仅及对照的1/2，侧根极小，病斑面积占根总面积的1/2?3/4，根群颜色褐中带白。
[0062]4级(高感)，种子发芽，但不出苗，几乎窒息而死，病斑面积占根表总面积的3/4以上，根为棕褐色。
[0063]步骤(I)和⑵中所述的固体PDA培养基，组成为:马铃薯淀粉200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉20g/L，蒸饱水定容lOOOmL，121 °C高压灭菌15min后倒平板。
[0064]依据上述玉米苗期茎腐病调查分级标准，甜玉米自交系XWY苗期对茎腐病抗性鉴定结果为3级，中感。
[0065]实施例2
[0066]鲜食甜玉米品种茎腐病的接种方法详细过程如下:
[0067](I)感病材料处理:从大田自然条件下发生茎腐病的玉米植株上采取病害茎杆，剖开，取被害部位茎髓组织，切成0.3?0.5cm小块，无菌条件下用0.1 %升汞溶液浸泡Imin左右，无菌水漂洗I次，取出组织块用75% (v/v)酒精消毒5mins，无菌水漂洗3次，取出材料，接种于固体PDA培养基上，26?28°C恒温箱暗培养分离病原菌；
[0068](2)病原轮枝镰孢菌株的分尚:上述感病组织在培养基上培养2?3d，在生长有菌丝的培养皿里挑取单个菌丝转接于新的固体PDA培养基上置于恒温箱中26?28°C进行培养，直到白色菌丝布满整个培养基；
[0069](3)致病轮枝镰孢菌的纯化鉴定:挑取步骤(2)中单个菌丝置于载玻片上滴I滴蒸馏水置于1X光学显微镜下观察病原菌孢子形态，确认为近年广州地区发生玉米茎腐病的致病轮枝镰孢菌(Fusarium verticill1ides)；
[0070](4)轮枝镰孢菌的扩繁:将预先准备好的玉米粒(一般玉米粒，仅作为病原菌培养用基质)用自来水泡涨，装入瓶中封口后121°C高压灭菌15mins，冷却后做为扩繁培养基，即玉米粒扩繁培养基。挑取若干轮枝镰孢菌菌丝置于玉米粒扩繁培养基上进行扩繁，26?28°C恒温箱暗培养3?5d，以明显看到白色菌丝布满玉米粒为宜；
[0071](5)待接种玉米品种准备:挑选无损、无霉烂、无虫口、无病斑的健康甜玉米品种粵甜13号种子(购自广东省农业科学院作物研宄所)，用75% (v/v)酒精消毒5mins后，再用5% (v/v)次氯酸钠溶液处理20mins，用无菌水冲洗3次，备用；
[0072](6)轮枝镰孢菌与玉米种子共培养接种:取步骤(4)中扩繁的镰孢菌玉米粒与步骤(5)待接种玉米按种子量1:1混合后，放在垫有灭菌滤纸的培养皿中，置于26?28°C恒温光照培养箱共培养5?7天，直到发芽后可见幼芽3cm左右，得到接种后带有幼芽的玉米种子。同时设置未接种的甜玉米品种粵甜13号种子作为对照；
[0073](7)将步骤(6)获得的带有幼芽的玉米种子播种在小花盆:挑出带有幼芽的玉米种子播种在含有土壤或基质的普通花盆中，视种子量多少选择不同规格花盆或苗盘，播种30株以上；
[0074](8)玉米植株抗病性鉴定:步骤(7)播种后定期浇适量水保湿，置于室温(26?280C )，经过20天后考察玉米植株的抗病性。
[0075]玉米苗期茎腐病调查分级标准:
[0076]O级(高抗)，整株生长正常，无病。
[0077]I级(抗病)，地上地下部生长基本正常，根部可见少量病斑，病斑面积占根表总面积1/4以下，根群颜色白中有褐。
[0078]2级(中抗)，地上地下生长明显受阻，叶色变淡，株高仅及对照的3/4，侧根少、细而短，无须根，病斑连片，病斑面积占根表总面积的1/4?1/2，根群颜色白、褐相当。
[0079]3级(中感)，地上地下部生长极不正常，地上部可见青枯一黄枯状，株高仅及对照的1/2，侧根极小，病斑面积占根总面积的1/2?3/4，根群颜色褐中带白。
[0080]4级(高感)，种子发芽，但不出苗，几乎窒息而死，病斑面积占根表总面积的3/4以上，根为棕褐色。
[0081]步骤(I)和(2)中所述的固体PDA培养基，组成为:马铃薯淀粉200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉20g/L，蒸饱水定容lOOOmL，121 °C高压灭菌15