很高的成活率，此时可以将小苗(栽培苗)移栽到盆中培养，盆中只含有火灰。
[0031]实施例3:实验地点:阳春市鹅凰嶂自然保护区内
[0032]本实施例的阳春秋海棠组织培养繁育的方法，其具体步骤如下:
[0033]a、外植体及其处理:从广东省阳春市鹅凰嶂自然保护区内的溪水边采集到一株阳春秋海棠植株，取阳春秋海棠叶片，经自来水清洗干净后，先以体积分数75 %酒精水溶液表面擦洗消毒10秒钟，无菌水洗脱2次，之后在质量分数0.1%升汞水溶液中浸泡8分钟，并以无菌水洗涤3次，最后将叶片切成0.6cm2大小，得到消毒处理后的外植体。
[0034]b、不定芽的诱导:将消毒处理后的外植体接种到诱导培养基上，培养条件为:26 0C，黑暗培养，培养60天，然后转到光照强度100 μ mo I m^V1，光照时间14小时/天，培养30天，得到不定芽；所述的诱导培养基每升含有6-苄腺嘌呤(BA)0.lmg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，pH6.0 ；
[0035]c、继代繁殖:将不定芽转入繁殖培养基中培养，培养条件为:26°C，光照强度50 μ mo I πΓΥ1，光照时间14小时/天；所述的繁殖培养基每升含有6-节腺嘌呤(BA)0.5mg、α -萘乙酸(NAA)0.05mg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，ρΗ6.0 ;丛芽在繁殖培养基上培养每个月可增殖4.3倍；
[0036]d、生根培养:将步骤c继代繁殖得到的不定芽转入至生根培养基中培养，培养条件为26°C，光强为50 μπιο? HT2s'光照时间14小时/天，使其生根，长成试管苗；所述的生根培养基每升含有α -萘乙酸(NAA)0.05mg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为1/2MS培养基，pH6.00
[0037]e、试管苗的移栽:将试管苗移植到蛭石和沙石按体积比为1:1的基质中，置于湿润、遮荫的环境下培养，浇水，施肥以满足试管苗生长所需的水分和营养需要，经常规培养后获得栽培苗；
[0038]试管苗移植一个月后就可在基质中长到4?5cm高，期间每星期施1:1000复合肥(N:P:K = 1:1:1)，室外温度介于20-30°C，移栽成活率达到95%以上，能够保证很高的成活率，此时可以将小苗(栽培苗)移栽到盆中培养，盆中只含有火灰。
[0039]实施例4:实验地点:阳春市鹅凰嶂自然保护区内
[0040]本实施例的阳春秋海棠组织培养繁育的方法，其具体步骤如下:
[0041]a、外植体及其处理:从广东省阳春市鹅凰嶂自然保护区内的溪水边采集到一株阳春秋海棠植株，取阳春秋海棠叶片，经自来水清洗干净后，先以体积分数75 %酒精水溶液表面擦洗消毒10秒钟，无菌水洗脱2次，之后在质量分数0.1%升汞水溶液中浸泡8分钟，并以无菌水洗涤3次，最后将叶片切成0.6cm2大小，得到消毒处理后的外植体。
[0042]b、不定芽的诱导:将消毒处理后的外植体接种到诱导培养基上，培养条件为:25°C，光照强度10 μπιο? πΓΥ1以下，光照时间14小时/天，培养60天，然后转到光照强度80 μ mo I n^s—1，光照时间14小时/天，培养30天，得到不定芽；所述的诱导培养基每升含有6-苄腺嘌呤(BA) 2.0mg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，pH6.0 ；
[0043]c、继代繁殖:将不定芽转入繁殖培养基中培养，培养条件为:25°C，光照强度80 μ mo I πΓΥ1，光照时间14小时/天；所述的繁殖培养基每升含有6-节腺嘌呤(BA) lmg、α -萘乙酸(NAA)0.08mg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，ρΗ6.0 ;丛芽在繁殖培养基上培养每个月可增殖8倍；
[0044]d、生根培养:将步骤c继代繁殖得到的不定芽转入至生根培养基中培养，培养条件为25°C，光强为80 μπιο? HT2s'光照时间10小时/天，使其生根，长成试管苗；所述的生根培养基每升含有α-萘乙酸(NAA)0.2mg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为1/2MS培养基，pH6.00
[0045]e、试管苗的移栽:将试管苗移植到蛭石和沙石按体积比为1:1的基质中，置于湿润、遮荫的环境下培养，浇水，施肥以满足试管苗生长所需的水分和营养需要，经常规培养后获得栽培苗；
[0046]试管苗移植一个月后就可在基质中长到4?5cm高，期间每星期施1:1000复合肥(N:P:K = 1:1:1)，室外温度介于20-30°C，移栽成活率达到95%以上，能够保证很高的成活率，此时可以将小苗(栽培苗)移栽到盆中培养，盆中只含有火灰。
[0047]实施例5:
[0048]本实施例与实施例4基本相同，只是其诱导培养基为每升含有N-苯基-K -1,2,3-噻二唑-5-脲(TDZ)0.lmg、和蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，pH6.0。丛芽在繁殖培养基上培养每个月可增殖3.5倍；
[0049]试管苗移植一个月后就可在基质中长到4?5cm高，期间每星期施1:1000复合肥(N:P:K = 1:1:1)，室外温度介于20-30°C，移栽成活率达到95%以上，能够保证很高的成活率，此时可以将小苗(栽培苗)移栽到盆中培养，盆中只含有火灰。
[0050]实施例6:
[0051]本实施例与实施例4基本相同，只是其诱导培养基为每升含有N-苯基-N' -1,2,3-噻二唑-5-脲(TDZ) lmg、和蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，pH6.0。诱导的体细胞胚和不定芽在该繁殖培养基上培养每个月仅增殖2.5倍；
[0052]试管苗移植一个月后就可在基质中长到4?5cm高，期间每星期施1:1000复合肥(N:P:K = 1:1:1)，室外温度介于20-30°C，移栽成活率仅达到45%左右，此时可以将小苗(栽培苗)移栽到盆中培养，盆中只含有火灰。
【主权项】
1.一种阳春秋海棠组织培养繁育的方法，其特征在于，包括以下步骤 a、外植体及其处理:以阳春秋海棠(Begoniacoptidifolia)的叶片作为外植体，将外植体进行消毒处理； b、不定芽的诱导:将消毒处理后的外植体接种到诱导培养基上，培养条件为:22?28°C，黑暗培养或光照强度20 μ mo I IrT2S4以下，光照时间14小时/天，培养60天，然后转到光照强度40?100 μ mo I πΓΥ1，光照时间6?14小时/天，培养30天，得到不定芽；所述的诱导培养基每升含有激动素0.1?2.0mg或6-苄腺嘌呤0.1?2.0mg或N-苯基-K -1，2，3-噻二唑-5-脲0.1?2.0mg、蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，pH6.0 ； c、继代繁殖:将不定芽转入繁殖培养基中培养，培养条件为:22?28°C，光照强度20?100 μ mo I πΓΥ1，光照时间14小时/天，所述的繁殖培养基每升含有6-节腺嘌呤0.1?1.5mg、α -萘乙酸0.01?0.lmg、鹿糖30g、琼脂6g，其余成分为MS培养基，pH6.0 ； d、生根培养:将步骤c继代繁殖得到的不定芽转入至生根培养基中培养，培养条件为22?28 0C，光强为50?80 μ mo I m^V1，光照时间6?14小时/天，使其生根，长成试管苗，所述的生根培养基每升含有吲哚-3- 丁酸0.05?0.2mg或α -萘乙酸0.05?0.2mg，以及还含有蔗糖30g、琼脂6g，其余成分为1/2MS培养基，pH6.0 ； e、试管苗的移栽:将试管苗移植到基质中，置于湿润、遮荫的环境下培养，浇水，施肥以满足试管苗生长所需的水分和营养需要，经常规培养后获得栽培苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的将外植体进行消毒处理是将阳春秋海棠叶片经自来水清洗干净后，先以体积分数75%酒精水溶液表面擦洗消毒10秒钟，无菌水洗脱2次，之后在质量分数0.1 %升汞水溶液中浸泡8分钟，并以无菌水洗涤3次，最后将叶片切成0.6cm2大小，接种至诱导培养基上。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基质为蛭石和沙石按体积比为1:1混合的基质。
【专利摘要】本发明公开了一种阳春秋海棠组织培养繁育方法。本发明通过调整培养基内植物生长调节剂组分，能够有目的地诱导阳春秋海棠不定芽的形成。此外也可诱导根的发育，最终使试管苗能够发育成为完整的植株。移栽成活率达到95％以上，能够使阳春秋海棠这种濒危植物得以保存和发展，为今后更进一步利用该物种奠定良好的基础。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN104904603
【申请号】CN201510391062
【发明人】马国华, 任海, 张倩媚, 陈雨路, 罗建
【申请人】中国科学院华南植物园
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年7月2日