专利名称：中药材枳壳组织培养繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材枳壳组织培养繁育方法。
背景技术：
枳壳为芸香科植物酸橙及其栽培变种的干燥未成熟果实，主要分布于江 西、湖南和四川。枳壳是一种常用中药，性微苦，味苦、酸，具有理气宽中、 行滞消胀、化痰等功效，主治胸腹满闷胀痛、食积不化、痰饮内停、胃下垂、 脱肛、子宫脱垂等症。目前，枳壳的繁殖多采用播种和嫁接的方法，而种子繁 殖后代易出现变异，不能很好地保持母树的优良特性；嫁接繁殖虽能保持良种 的特性，但嫁接费工费时，且技术性强，短时间内不能达到良种枳壳快速繁殖 的目的。贺红(1998)曾报道过枳壳(枸橘尸o/7"'7Y^ ^^'/o/j'WeRaf.)的组 织培养和植株再生研究，但是以实生苗上胚轴为材料进行的离体培养，并不能 很好地保证优良品种的遗传稳定性。
发明内容
本发明的目的就是提供一种生长繁殖快、遗传稳定性好、成活率高的中药 材枳壳组织培养繁育方法。
本发明的中药材枳壳组织培养繁育方法，包括以下步骤
1、 无菌系的建立以枳壳新生健壮幼嫩茎段为外植体，用洗洁精清洗外
植体表面，并用流水冲洗l-2h，然后在超净工作台上分别用O. l%HgCUB75% 酒精进行灭菌处理，将其切成1-2 cm长的茎段，接种在已灭菌的诱导培养基 MS+6-BA 0.5-2.0 mg/L+IAA 0. 1-1.5 mg/L+CH 400上，7-12天后，获得无菌 系，培养温度(25±1) °C，光照时间为10-12 h*d—'，光照强度为30 40 ti mol nf2 s、
2、 增殖培养待诱导培养的腋芽长至2-3cm时，将其切下转入增殖培养 基MS+6-BA 0. 1-1.0 mg/L +IAA 0. 1-1.0 mg/L + CH 400进行增殖培养，增殖 培养周期为15-25天，长出密集丛生的不定芽，培养温度(25±1) °C，光照 时间为10-12 h d—、光照强度为30 40 u mol m—2 s—';
3、 生根培养待增殖培养的不定芽长至2 3 cm时，将其切下转接到生 根培养基1/2MS+NAA 0. 5-2. 0 mg/L +IBA 1. 0-2. 0 mg/L + CH 400」，进行不定根的诱导，20-30天后，幼苗基部平均有3 4条白色粗壮的根出现，生根率 可达80%，培养温度(25±1) °C，光照时间为10-12 h d—'，光照强度为30 40 y mol m-2 s—、
4、组培苗移栽待生根组培苗长到3 4cm时，掀去封口膜，炼苗3天， 取出组培苗并洗净根部培养基，移栽入灭菌的营养土中，按紧苗木基部，使土 壤与苗木根系紧密接触，覆盖塑料薄膜，早晚喷水各l次，15天后，组培苗成 活。
本发明的中药材枳壳组织培养繁育方法，以枳壳新生枝条为材料快速繁殖 大量无菌组培苗，可周年生产枳壳良种苗木， 一年四季均可移栽，且成活率高 达80%以上，通过组织培养生产出的枳壳种苗具有生长繁殖快、遗传稳定性好 等优点。
具体实施例方式
一种中药材枳壳组织培养繁育方法，包括以下步骤
1、 无菌系的建立以枳壳新生健壮幼嫩茎段为外植体，用洗洁精清洗外
植体表面，并用流水冲洗1-2 h，然后在超净工作台上分别用0. P/。HgC]2和75% 酒精进行灭菌处理，将其切成1-2 cm长的茎段，接种在己灭菌的诱导培养基 MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L+CH 400上，10-15天后，获得无菌系，培养 温度(25士1)。C，光照时间为10-12 h d—'，光照强度为30 40 u mol m—2 s—';
2、 增殖培养待诱导培养的腋芽长至2-3cm时，将其切下转入增殖培养 基MS+6-BA 0. 5 mg/L +IAA 0. 25 mg/L + CH 400进行增殖培养，增殖培养周 期为20-25天，生长出不定芽，培养温度(25士irC，光照时间为10-12h d-'， 光照强度为30 40 P mol m—2 s—';
3、 生根培养待增殖培养的不定芽长至2 3 cm时，将其切下转接到生 根培养基1/2MS+NAA 1.0 mg/L +IBA2. 0 mg/L + CH 400上，进行不定根的诱 导，25-30天后，幼苗基部平均有3 4条白色粗壮的根出现，生根率可达80%， 培养温度(25±1) °C，光照时间为10-12 h'd—、光照强度为30 40 ti mol m—2 s—、
4、 组培苗移栽待生根组培苗长到3 4cm时，掀去封口膜，炼苗3天， 取出组培苗并洗净根部培养基，移栽入灭菌的营养土中，按紧苗木基部，使土 壤与苗木根系紧密接触，覆盖塑料薄膜，早晚喷水各l次，15天后，组培苗成 活。
权利要求
1、一种中药材枳壳组织培养繁育方法，其特征在于它包括以下步骤(1)、无菌系的建立以枳壳新生健壮幼嫩茎段为外植体，用洗洁精清洗外植体表面，并用流水冲洗1-2h，然后在超净工作台上分别用0.1％HgCl2和75％酒精进行灭菌处理，将其切成1-2cm长的茎段，接种在已灭菌的诱导培养基MS+6-BA 0.5-2.0mg/L+IAA 0.1-1.5mg/L+CH 400上，7-12天后，获得无菌系，培养温度(25±1)℃，光照时间为10-12h·d-1，光照强度为30～40μmol·m-2·s-1；(2)、增殖培养待诱导培养的腋芽长至2-3cm时，将其切下转入增殖培养基MS+6-BA 0.1-1.0mg/L+IAA 0.1-1.0mg/L+CH 400进行增殖培养，增殖培养周期为15-25天，生长出不定芽，培养温度(25±1)℃，光照时间为10-12h·d-1，光照强度为30～40μmol·m-2·s-1；(3)、生根培养待增殖培养的不定芽长至2～3cm时，将其切下转接到生根培养基1/2MS+NAA 0.5-2.0mg/L+IBA 1.0-2.0mg/L+CH 400上，进行不定根的诱导20-30天，培养温度(25±1)℃，光照时间为10-12h·d-1，光照强度为30～40μmol·m-2·s-1；(4)、组培苗移栽待生根组培苗长到3～4cm时，掀去封口膜，炼苗3天，取出组培苗并洗净根部培养基，移栽入灭菌的营养土中，按紧苗木基部，使土壤与苗木根系紧密接触，覆盖塑料薄膜，早晚喷水各1次，15天后即可。
全文摘要
一种中药材枳壳组织培养繁育方法，包括以下步骤无菌系的建立、增殖培养、生根培养及组培苗移栽，它采用枳壳茎段为外植体进行组培繁育，克服了枳壳以往种子繁育和嫁接繁育方法的缺陷。本发明的中药材枳壳组织培养繁育方法，以枳壳新生枝条为材料快速繁殖大量无菌组培苗，可周年生产枳壳良种苗木，一年四季均可移栽，且成活率高达80％以上，通过组织培养生产出的枳壳种苗具有生长繁殖快、遗传稳定性好等优点。
文档编号A01H4/00GK101300959SQ20081010698
公开日2008年11月12日 申请日期2008年7月8日 优先权日2008年7月8日
发明者朱培林, 杨春霞, 黄小春 申请人:江西省林业科学院