and水培液时将所述玻璃杯I的底部锥形橡胶塞9取出，使水培液经换液口 8流出，待Hogland水培液全部流出后重新使用所述锥形橡胶塞9密封换液口，打开上部封口膜4，沿所述玻璃杯I的内侧壁加入新的Hogland水培液，每次更换新Hogland水培液的液面高度逐渐降低，最终液面高度低于所述培养基质3的表面高度30?50mm ;
[0059](d)、经无菌水培15天，苜蓿幼苗长出较多侧根，取2种苜蓿根瘤菌(苜蓿中华根瘤菌17576和17581)保存液0.1mL分别接种于1mL液体YEB培养基中，在摇床中200r/min，28°C振荡培养10?20小时，根瘤菌培养至浓度达到0D6。。= 0.5?0.8时备用，分别取
0.2mL刚摇好的根瘤菌菌液加入苜蓿幼苗根部，将Hogland水培液更换为无氮MS水培液，每6?10天更换一次水培液，经根瘤菌接菌水培30天的苜蓿苗用于结瘤效果的观察评价，取出苜蓿根，记录根瘤数量、大小和颜色，评价不同根瘤菌株的结瘤效果。图7为苜蓿中华根瘤菌17576和17581的结瘤效果比较图。结果表明中华根瘤菌17576结瘤数量多、体积大、颜色浅红；苜蓿中华根瘤菌17581结瘤较少、体积较小。因此表明在水培条件下苜蓿中华根瘤菌17576比苜蓿中华根瘤菌17581结瘤效果要好。
[0060]以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1.一种植物无菌水培装置，其特征在于:包括玻璃杯(I)和固定在其内部的底部的至少一个滤网(2)，在所述滤网(2)内设置有培养基质(3)，所述玻璃杯(I)的顶部开口采用封口膜(4)封口，在所述玻璃杯(I)内设置有水培液(5)，所述水培液(5)的液面高度低于所述培养基质(3)的上表面。2.根据权利要求1所述的植物无菌水培装置，其特征在于:所述玻璃杯(I)的内部的底部中心位置设置有固定柱￠)，所述滤网(2)的底部设置有与所述固定柱(6)相匹配的固定孔(7)，所述固定孔(7)穿过所述固定柱￠)固定在所述玻璃杯(I)的底部，所述滤网(2)为不锈钢筒状滤网，所述滤网(2)的顶部直径大于底部直径。3.根据权利要求2所述的植物无菌水培装置，其特征在于:所述滤网(2)采用厚度为.0.5mm、孔密度为10目的不锈钢滤网制作而成，所述滤网(2)的底部外径为40mm，顶部外径为43mm，高度为50mm ;所述固定孔(6)的直径为1mm04.根据权利要求2所述的植物无菌水培装置，其特征在于:所述滤网(2)为一个或多个，当所述滤网(2)为多个时，多个所述滤网(2)上下叠加到设计高度，最底部的所述滤网(2)固定在所述玻璃杯(I)的底部，在最上端的所述滤网(2)中设置有所述培养基质(3)，相邻两个所述滤网(2)之间的叠加部分的高度为30_。5.根据权利要求1所述的植物无菌水培装置，其特征在于:所述玻璃杯(I)的侧壁的下部设置有换液口(8)，所述换液口(8)采用锥形橡胶塞(9)密封；所述换液口(8)为圆柱形管体，长度为5_，内径为8_、外径为10_，其一端与所述玻璃杯(I)的下部相连，另一端采用所述锥形橡胶塞(8)密封，所述锥形橡胶塞(8)的长度为10mm，一端直径为5mm，另一端直径为10_ ;所述培养基质(3)为粒径3?5_的石英砂。6.根据权利要求2所述的植物无菌水培装置，其特征在于:所述玻璃杯(I)为圆桶形，侧壁和底部的厚度为3_，内径为94_，外径为100mm，高度为200?300_，所述固定柱(6)为圆柱形玻璃柱，直径为8mm，高度为30mm。7.使用权利要求1?6中任意一项权利要求所述的植物无菌水培装置进行根瘤菌结瘤效果评价的方法，其特征在于:包括如下步骤: (A)、准备工作:将装有培养基质的滤网与玻璃杯组合，用封口膜将玻璃杯上口密封，使用锥形橡胶塞将底部换液口密封，形成植物无菌水培装置，将其在121°C下湿热灭菌30min后放入超净台备用；配制水培液，121°C下湿热灭菌30min放入超净台备用； (B)、播种:筛选籽粒饱满的苜蓿种子，使用75%酒精消毒15min，然后用灭菌蒸馏水冲洗三遍，每遍lmin，将灭菌苜蓿种子分别在不同根瘤菌株液中浸泡2?5小时，打开所述植物无菌水培装置的封口膜，将I?2粒接菌后的苜蓿种子放入滤网中的培养基质表面，沿所述玻璃杯的内侧壁加入经高温灭菌的所述水培液，液面高度低于培养基质的表面高度2?5mm，然后用封口膜将所述玻璃杯上口密封，播种操作均在超净工作台内完成；将播种后的植物无菌水培装置置于人工气候箱中培养； (C)、更换水培液:每6?10天更换一次所述水培液，更换所述水培液时将玻璃杯的底部锥形橡胶塞取出使所述水培液经换液口流出，待所述水培液全部流出后重新使用所述锥形橡胶塞密封换液口，打开所述封口膜后沿内侧壁加入新的所述水培液，每更换一次所述水培液，其液面高度比前一次更换时的水培液的高度降低5?10_ ;最终液面低于水培液液面30?50mm ； (D)、观察评价:将水培30天以上的苜蓿幼苗取出，并观察评价不同根瘤菌的结瘤效果; 其中，所述水培液为无氮MS水培液。8.使用权利要求1?6中任意一项权利要求所述的植物无菌水培装置进行根瘤菌结瘤效果评价的方法，其特征在于:包括如下步骤: (a)、准备工作:将装有培养基质的滤网与玻璃杯组合，配制Hogland水培液和无氮MS水培液；将所述Hogland水培液沿所述玻璃杯的内侧壁加入到所述玻璃杯内，液面高度低于培养基质表面高度2?5mm，用封口膜将所述玻璃杯的上口密封，形成植物无菌水培装置，在121°C下湿热灭菌30min后放入超净台备用； (b)、打开所述植物无菌水培装置的所述封口膜，选取发芽5天生长健壮的无菌苜蓿幼苗，将无菌苜蓿幼苗放入所述滤网中的培养基质表面，然后用所述封口膜将所述玻璃杯口密封，上述操作均在超净工作台内完成；将移栽无菌苗的所述植物无菌水培装置置于人工气候箱中培养； (c)、每6?10天更换一次水培液，更换Hogland水培液时将所述玻璃杯的底部锥形橡胶塞取出，使水培液经换液口流出，待Hogland水培液全部流出后重新使用所述锥形橡胶塞密封换液口，打开上部封口膜，沿所述玻璃杯的内侧壁加入新的Hogland水培液，每次更换新Hogland水培液的液面高度逐渐降低，最终液面高度低于所述培养基质3的表面高度.30 ?50mm ; (d)、经无菌水培15天，苜蓿幼苗长出较多侧根，取2种苜蓿根瘤菌保存液0.1mL分别接种于1mL液体YEB培养基中，在摇床中200r/min，28°C振荡培养10?20小时，根瘤菌培养至浓度达到0D600= 0.5?0.8时备用，分别取0.2mL刚摇好的根瘤菌菌液加入苜蓿幼苗根部，将Hogland水培液更换为无氮MS水培液，每6?10天更换一次水培液，经根瘤菌接菌水培30天的苜蓿苗用于结瘤效果的观察评价，取出苜蓿根，记录根瘤数量、大小和颜色，评价不同根瘤菌株的结瘤效果。
【专利摘要】本发明公开了一种植物无菌水培装置，包括玻璃杯(1)和固定在其内部的底部的至少一个滤网(2)，在所述滤网(2)内设置有培养基质(3)，所述玻璃杯(1)的顶部开口采用封口膜(4)封口，在所述玻璃杯(1)内设置有水培液(5)，所述水培液(5)的液面高度低于所述培养基质(3)的上表面。本发明植物无菌水培装置可以通过高温灭菌处理后对多种植物进行快速高效的无菌水培。本发明还公开了采用该装置进行水培苜蓿的根瘤菌接菌及结瘤效果的评价方法，所述方法具有操作简便、苜蓿生长速度快、水培液更换容易、根瘤菌接菌后结瘤效果观察方便等优点。
【IPC分类】A01G31/00, C12N1/20, A01G31/02
【公开号】CN105210837
【申请号】CN201510684650
【发明人】龙瑞才, 李明娜, 张铁军, 杨青川, 康俊梅, 高燕丽, 崔会婷, 李霄
【申请人】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月20日