株，并调查花期的具体时间。结果发现南方红豆杉雄花的始花期比曼地亚红豆杉的早10天以上，雌花的始花期基本一致;两种红豆杉雌花单花的吐水期2天，整株雌花吐水期持续2周左右。2月下旬采集曼地亚红豆杉的雄株的花粉，自然干燥，剔除杂质后置于EP管4°C冷藏备用，并保持干燥。
[0017](2)授粉:3月I号起，观察南方红豆杉和曼地亚红豆杉雌株上雌花吐水情况，自发现有雌花进入吐水期开始第二天取出储存的花粉，室温放置一小时使其恢复常温;按照花粉:超纯水=1:1000的比例配置成花粉液，将曼地亚红豆杉花粉授粉南方红豆杉雌株，喷施雌株，每隔四天使用喷壶喷施一次，共授粉3次;单株处理可采用灭菌棉签沾花粉涂抹吐水期雌花进行授粉;授粉后所有授粉植株进行分株隔离以防止外来花粉的干扰。
[0018](3)施肥:授粉后，施肥，按照氮、磷、钾比例为1:3:1，喷施3次叶面肥；
(4)挂果:挂果后喷施营养液，营养液成分为:N200mg/L、P33mg/L、K66mg/L，磷肥以NH4H2PO4形式加入，钾肥以KNO3形式加入，氮肥除以NH4H2P04和KNO3的形式加入外，不足部分(NH4)2SO4 补充。
[0019]保证植株养分供给;待种子成熟后，采集杂交种子；
5)沙藏:将采集的种子冷水浸种5天，每天换水一次，浸种后将种子表面水分晾干，低温沙藏，按沙子:种子为3:1的重量比进行；
(6)播种:春季，将沙藏的种子灭菌后，用280mg/LGA3+20mg/L 6-BA +25mg/L KT+8mg/L ABT浸泡种子24小时，后播种，获得无菌试管苗；
(7)移栽:将无菌试管苗炼苗10?15天，然后将其取出，洗净根部的培养基，将其根部浸泡在促进剂中30min，促进南方红豆杉植株新根的生长；
所述促进剂包括以下重量配比的原料:假丝酵母菌发酵液:地衣芽孢杆菌发酵液:产黄纤维单胞菌发酵液:粪产碱杆菌发酵液:赤霉素:活性炭:磷酸氢二钾= 5:3:2:3:1:2:1;
所述假丝酵母菌为假丝酵母菌(Candida utilis)ATCC N0.22023;
所述地衣芽抱杆菌为地衣芽抱杆菌(BacillusIicheniformis)CGMCC N0.2276;(参见CN101215537A);
所述产黄纤维单胞菌为产黄纤维单胞菌(cellulomonas flavigena)ATCC N0.482;
所述奚产喊杆菌为奚产喊杆菌(Alcaligenes faecalis)ATCC 31555；
所述促进剂的制备方法为:首先将假丝酵母菌、地衣芽孢杆菌、产黄纤维单胞菌、粪产碱杆菌分别按照常规方式活化，然后培养至菌液中活菌数达到18个/克获得发酵液，将上述发酵液按照质量比例5: 3: 2: 3混合，按照重量配比添加活性炭、赤霉素和磷酸氢二钾即得。
[0020]移栽30天后成活率达到97.1%，且所有成活植株均冬季耐寒；
经本发明方法获得的南方红豆杉植株，长势强健，抗病，能够安全过冬，有效解决了红豆杉市场资源的空缺，具有广阔的应用前景。
[0021]按照本发明方法栽培的红豆杉，生长周期快，在二年左右即可以采收枝叶用于提取紫杉醇。
[0022]
实施例2
促进剂用于曼地亚红豆杉的遗传育种方法，包括如下步骤:
(I)花粉采集:确定南方红豆杉(Taxus wallichiana var.mairei)和曼地亚红豆杉(Taxus X media)的雌雄株，并调查花期的具体时间。结果发现南方红豆杉雄花的始花期比曼地亚红豆杉的早10天以上，雌花的始花期基本一致;两种红豆杉雌花单花的吐水期2天，整株雌花吐水期持续2周左右。2月中旬采集南方红豆杉雄株的花粉，2月下旬采集曼地亚红豆杉的雄株的花粉，自然干燥，剔除杂质后置于EP管4°C冷藏备用，并保持干燥。
[0023](2)授粉:3月I号起，观察南方红豆杉和曼地亚红豆杉雌株上雌花吐水情况，自发现有雌花进入吐水期开始第二天取出储存的花粉，室温放置一小时使其恢复常温;按照花粉:超纯水=1:1000的比例配置成花粉液，将南方红豆杉花粉授粉曼地亚雌株，喷施雌株，每隔四天使用喷壶喷施一次，共授粉3次;单株处理可采用灭菌棉签沾花粉涂抹吐水期雌花进行授粉;授粉后所有授粉植株进行分株隔离以防止外来花粉的干扰。
[0024](3)施肥:授粉后，施肥，按照氮、磷、钾比例为1:3:1，喷施3次叶面肥；
(4)挂果:挂果后喷施营养液，营养液成分为:N200mg/L、P33mg/L、K66mg/L，磷肥以NH4H2PO4形式加入，钾肥以KNO3形式加入，氮肥除以NH4H2P04和KNO3的形式加入外，不足部分
(NH4)2SO4 补充。
[0025]保证植株养分供给;待种子成熟后，采集杂交种子；
(5)沙藏:将采集的种子冷水浸种5天，每天换水一次，浸种后将种子表面水分晾干，低温沙藏，按沙子:种子为3:1的重量比进行；
(6)播种:春季，将沙藏的种子灭菌后，用280mg/LGA3+20mg/L 6-BA +25mg/L KT+8mg/L ABT浸泡种子24小时，后播种，获得无菌试管苗；
(7)移栽:将无菌试管苗炼苗10?15天，然后将其取出，洗净根部的培养基，将其根部浸泡在促进剂中30min，促进南方红豆杉植株新根的生长。
[0026]所述促进剂包括以下重量配比的原料:假丝酵母菌发酵液:地衣芽孢杆菌发酵液:产黄纤维单胞菌发酵液:粪产碱杆菌发酵液:赤霉素:活性炭:磷酸氢二钾= 5:3:2:3:1:2:1;
所述假丝酵母菌为假丝酵母菌(Candida utilis)ATCC N0.22023;
所述地衣芽抱杆菌为地衣芽抱杆菌(BacillusIicheniformis)CGMCC N0.2276；
所述产黄纤维单胞菌为产黄纤维单胞菌(cellulomonas flavigena)ATCC N0.482；
所述奚产喊杆菌为奚产喊杆菌(Alcaligenes faecalis)ATCC 31555；
所述促进剂的制备方法为:首先将假丝酵母菌、地衣芽孢杆菌、产黄纤维单胞菌、粪产碱杆菌分别按照常规方式活化，然后培养至菌液中活菌数达到18个/克获得发酵液，将上述发酵液按照质量比例5: 3: 2: 3混合，按照重量配比添加活性炭、赤霉素和磷酸氢二钾即得。
[0027]移栽30天后成活率达到96.5%，且所有成活植株均冬季耐寒；
经本发明方法获得的红豆杉植株，长势强健，抗病，能够安全过冬，有效解决了红豆杉市场资源的空缺，具有广阔的应用前景。
[0028]按照本发明方法栽培的红豆杉，生长周期快，在二年左右即可以采收枝叶用于提取紫杉醇。
[0029]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，或在实施案例之外的树种实施本方法，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改，改进或范围的扩大，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.一种用于红豆杉根部生长的促进剂，其特征在于，所述促进剂包括假丝酵母菌发酵液、地衣芽孢杆菌发酵液、产黄纤维单胞菌发酵液、粪产碱杆菌发酵液。2.根据权利要求1所述的促进剂，其特征在于，所述促进剂包括以下重量配比的原料:假丝酵母菌发酵液:地衣芽孢杆菌发酵液:产黄纤维单胞菌发酵液:粪产碱杆菌发酵液:赤霉素:活性炭:磷酸氢二钾= 5:3:2:3:1:2:1; 所述假丝酵母菌为假丝酵母菌(Candida utilis)ATCC N0.22023; 所述地衣芽抱杆菌为地衣芽抱杆菌(BacillusIicheniformis)CGMCC N0.2276； 所述产黄纤维单胞菌为产黄纤维单胞菌(Cellulomonas flavigena)ATCC N0.482； 所述奚产喊杆菌为奚产喊杆菌(Alcaligenes faecalis)ATCC 31555。3.根据权利要求1-2所述的促进剂，其特征在于，所述促进剂的制备方法为:首先将假丝酵母菌、地衣芽孢杆菌、产黄纤维单胞菌、粪产碱杆菌分别按照常规方式活化，然后培养至菌液中活菌数达到18个/克获得发酵液，将上述发酵液与活性炭、赤霉素和磷酸氢二钾混合即得。4.权利要求1-3所述的促进剂用于杂交育种的方法。
【专利摘要】本发明公开了一种用于红豆杉根部生长的促进剂及其用于杂交育种的方法，所述促进剂包括假丝酵母菌发酵液、地衣芽孢杆菌发酵液、产黄纤维单胞菌发酵液、粪产碱杆菌发酵液、赤霉素、活性炭、磷酸氢二钾。本发明促进剂能够促进红豆杉组培苗快速生根，增加存活率，该发明对于红豆杉属植物资源的深度开发和广泛应用具有重要而深远的意义，应用前景广阔。
【IPC分类】A01N63/04, A01P1/00, A01N43/12, A01H1/02, C05G3/00, A01P21/00, A01N63/02, A01P3/00
【公开号】CN105660709
【申请号】CN201610094131
【发明人】潘雯丽
【申请人】杭州富阳飞博科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月22日