专利名称：一种耐酸、耐高温酵母菌株的筛选方法
技术领域：
本发明涉及耐酸、耐高温酵母菌株的筛选方法，尤其是采用固定 化细胞原理筛选耐酸、耐高温酵母菌株的方法。
背景技术：
常规的筛选通常是将菌种用物理方法或化学诱变剂处理后在琼脂 平板上培养，然后挑选生长旺盛的菌落扩培后进行小型发酵实验来加以验证， 工作量大，周期长。
通过对国内外专利和文献的检索，还未见有此项技术的相关报道。 发明内容本发明目的是提供一种耐酸、耐高温酵母菌株的筛选方法。
本发明包括下列步骤
a) 、聚乙烯醇复合凝胶的合成方法，将100份的水加热到85。C 95X:，将 10 15份聚乙烯醇缓慢溶解到水中，边加边搅拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加 入3 5份的丙三醇，搅拌均匀后，然后在不断搅拌的同时加入己溶解好的0. 5 2份的硼砂，边加边搅拌，进行凝胶化处理，交联时间为2 15分钟，优选凝胶 化反应时间为2 5分钟；然后缓慢地加入0. 5 2份的顺丁烯二酸酐，不断搅 拌，直至凝胶溶液中无絮状凝固物为止，然后与20mL、 5%的海藻酸钠溶液混 合，搅拌均匀，所得透明、略带乳白色的粘稠溶胶，即为聚乙烯醇复合凝胶；
b) 、混合将10mL10。/。的酵母菌悬浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸钠复合 凝胶溶液中，搅拌均匀后倒入培养皿中铺成平板；
c) 、冷冻、切块 在-2(TC下冷冻处理48h，成型后取出切成块状，外形 尺寸为12腿X10mmX12mm;
d) 、培养 在硫酸含量为2 10%、 12波美度的玉米糖液中培养，培养温 度为30°C 45°C;如此反复培养数批，则固定化载体内的酵母细胞即为耐酸、 耐高温酵母。
固定化酵母在玉米糖液培养基中的优选培养温度为32 34°C。 本发明利用细胞固定化原理，将细胞酵母固定化后在极端环境下经过反复 使用，可筛选出如耐酸和耐高温酵母菌株，使其更适合于粗放的工业生产。而 且操作简单、快速。所筛选的固定化酵母具有化学稳定性好、耐酸、耐高温特 点，具有抗杂菌能力强，发酵效率高等优势。
具体实施例方式
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方 式限制本发明。 实施例h
将100克的水加热到85°C 95°C，将10 15克聚乙烯醇缓慢溶解到水中， 边加边搅拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加入3 5克的丙三醇，搅拌均匀后，然 后在不断搅拌的同时加入已溶解好的0.5 2克的硼砂，边加边搅拌，进行凝胶 化处理，交联时间为2 15分钟，优选凝胶化反应时间为2 5分钟；然后缓慢 地加入0.5 2克的顺丁烯二酸酐，不断搅拌，直至凝胶溶液中无絮状凝固物为 止，然后与20mL、 5%的海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀，所得透明、略带乳白 色的粘稠溶胶，即为聚乙烯醇复合凝胶；
然后将10mL10。/。的酵母菌悬浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸钠复合凝胶溶 液中，搅拌均匀后倒入培养皿中铺成平板；然后在-2(TC下冷冻处理48h，成型 后取出切成块状，外形尺寸为12mmX10mmX12mm;然后在硫酸含量为2%、 12 波美度的玉米糖液中培养，培养温度为30°C 45°C;如此反复培养数批和静止 后，则固定化载体内的存活酵母细胞经分离即为耐高温酵母。 实施例2:
重复实施例l，有以下不同点将酵母载体置于玉米糖液中连续培养，温度 为38°C 45°C。如此反复培养数批和静止后，则固定化载体内的存活酵母细胞 经分离即为耐高温酵母。 实施例3:
重复实施例l，有以下不同点将酵母载体置于硫酸含量为10%、 12波美度
(。Be')的玉米糖液中连续培养，温度为38'C 45'C。如此反复培养数批和静止 后，则固定化载体内的存活酵母细胞再经分离即为耐酸、耐高温酵母。 实施例4:
重复实施例l，有以下不同点将酵母载体置于硫酸含量为5%、 12波美度 (。Be')的玉米糖液中连续培养，温度为32 34°C。如此反复培养数批和静止后， 则固定化载体内的存活酵母细胞再经分离即为耐酸、耐高温酵母。
权利要求
1. 一种耐酸、耐高温酵母菌株的筛选方法，其特征在于它包括下列步骤a)、聚乙烯醇复合凝胶的合成方法，将100份的水加热到85℃～95℃，将10～15份聚乙烯醇缓慢溶解到水中，边加边搅拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加入3～5份的丙三醇，搅拌均匀后，然后在不断搅拌的同时加入已溶解好的0.5～2份的硼砂，边加边搅拌，进行凝胶化处理，交联时间为2～15分钟，优选凝胶化反应时间为2～5分钟；然后缓慢地加入0.5～2份的顺丁烯二酸酐，不断搅拌，直至凝胶溶液中无絮状凝固物为止，然后与20mL、5％的海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀，所得透明、略带乳白色的粘稠溶胶，即为聚乙烯醇复合凝胶；b)、混合 将10mL10％的酵母菌悬浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸钠复合凝胶溶液中，搅拌均匀后倒入培养皿中铺成平板；c)、冷冻、切块 在-20℃下冷冻处理48h，成型后取出切成块状，外形尺寸为12mm×10mm×12mm；d)、培养 在硫酸含量为2～10％、12波美度的玉米糖液中培养，培养温度为30℃～45℃；如此反复培养数批，则固定化载体内的酵母细胞即为耐酸、耐高温酵母。
2. 按照权利要求1所述的耐酸、耐高温酵母菌株的筛选方法，其特征在于其中固定化酵母在玉米糖液培养基中的培养温度为32℃ 34℃。
全文摘要
本发明公开了一种耐酸、耐高温酵母菌株的筛选方法。它包括下列步骤a)聚乙烯醇复合凝胶的合成方法；b)混合，将10mL10％的酵母菌悬浮液加入到90mL聚乙烯醇海藻酸钠复合凝胶溶液中，搅拌均匀后倒入培养皿中铺成平板；c)冷冻、切块，在-20℃下冷冻处理48h，成型后取出切成块状，外形尺寸为12mm×10mm×12mm；d)培养，在硫酸含量为2～10％、12波美度的玉米糖液中培养，培养温度为30℃～45℃；如此反复培养数批，则固定化载体内的酵母细胞即为耐酸、耐高温酵母。本发明操作简单、快速。所筛选的固定化酵母具有化学稳定性好、耐酸、耐高温特点，具有抗杂菌能力强，发酵效率高等优势。
文档编号C12N1/16GK101205522SQ200710109338
公开日2008年6月25日 申请日期2007年5月23日 优先权日2006年12月19日
发明者周剑平, 晖 杨, 王治业, 魏甲乾 申请人:周剑平