专利名称：含有异黄酮合成酶-细胞色素p450还原酶融合基因的乳酸菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及重组菌及其应用，特别涉及含有异黄酮合成酶-细胞色素P450还原酶融合基因的乳酸菌及其应用。
背景技术：
异黄酮是主要存在于大豆等豆科植物中的一类重要的植物类雌激素活性物质，包括大豆苷(daidzin)类、染料木苷(genistin)类和黄豆黄素苷(glycitin)类等，其功能成分是糖苷配基部分，主要为大豆苷元(daidzein)和染料木黄酮(genistein)。染料木素的化学名称为4，5，7-三羟基异黄酮，分子式为C15HltlO5,分子量为270. 24, CAS号为446-72-0， 结构式为式1 ；大豆苷元的化学名称为7-羟基-3-(4-羟苯基)-4-苯并吡喃酮，分子式 C15HltlO4,分子量254. 24，CAS 号:486_66_8，结构式为式 2。
权利要求
1.一种重组菌，为将IFS-CPR的编码基因导入宿主菌得到的重组菌，所述IFS-CPR为下述1)或2)的蛋白质1)序列表中的序列1所示的蛋白质；2)将序列表中的序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由1)衍生的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于所述IFS-CPR的编码基因为如下1)或 2)或3)中任一所述的DNA分子1)序列表中的序列2所示的DNA分子；2)在严格条件下与1)的DNA分子杂交且具有相同功能的DNA分子；3)与1)或2)的DNA分子具有90%以上同源性且具有相同功能的DNA分子。
3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于所述宿主菌为乳酸菌，所述乳酸菌优选为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。
4.根据权利要求1-3中任一所述的重组菌，其特征在于所述IFS-CPR的编码基因是通过重组表达载体导入宿主菌的。
5.根据权利要求1-4中任一所述的重组菌，其特征在于所述重组表达载体为将 IFS-CPR的编码基因插入表达载体pMG36e的)(baI和BioI酶切位点之间得到的。
6.根据权利要求1-5中任一所述的重组菌，其特征在于所述重组菌为乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp. cremoris)MG1363_IC，其保藏号为 CGMCCNo. 4016。
7.权利要求1-6中任一所述的重组菌在合成异黄酮中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述异黄酮为染料木素和/或大豆苷元； 染料木素的化学名称为4，5，7-三羟基异黄酮，结构式为式1所示；大豆苷元的化学名称为 7-羟基-3-(4-羟苯基)-4-苯并吡喃酮，结构式为式2所示。
9.一种融合蛋白，为下述1)或2)的蛋白质1)序列表中的序列1所示的蛋白质；2)将序列表中的序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由1)衍生的蛋白质。
10.权利要求9所述的融合蛋白的编码基因，为如下1)或2)或3)中任一所述的DNA 分子1)序列表中的序列2所示的DNA分子；2)在严格条件下与1)的DNA分子杂交且具有相同功能的DNA分子；3)与1)或2)的DNA分子具有90%以上同源性且具有相同功能的DNA分子。
全文摘要
本发明公开了含有异黄酮合成酶-细胞色素P450还原酶融合基因的乳酸菌及其应用。本发明所提供的重组菌为将IFS-CPR的编码基因导入宿主菌得到的重组菌，所述IFS-CPR为下述1)或2)的蛋白质1)序列表中的序列1所示的蛋白质；2)将序列表中的序列1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由1)衍生的蛋白质。本发明所得到的重组乳酸菌菌株可用于生产异黄酮，在食品业具有巨大的潜在市场、经济效益和社会效益。
文档编号C12N15/62GK102382788SQ20101027024
公开日2012年3月21日 申请日期2010年9月1日 优先权日2010年9月1日
发明者卢晓明, 左芳雷, 李平兰, 赵建云, 郑超, 郝彦玲, 陈尚武, 马会勤 申请人:中国农业大学