专利名称：一种鱼腥草注射液的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种注射液的质量检测方法，特别涉及一种鱼腥草注射液的质量检测方法。
背景技术：
鱼腥草为三白草科多年生草本植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的带根全草，又名侧耳根、紫蕺、猪鼻孔、九节莲等，其新鲜植株破碎后有刺鼻的腥臭味，广泛分布于我国中部、东南及西南各省区，尤以湖南、湖北、四川、江苏等省居多。鱼腥草具有清热解毒、 消痈排脓、利尿通淋的功效，临床用于肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢、热淋、痈肿疮毒等病症。研究表明，鱼腥草中含有的挥发性成分有黄酮类、有机酸、留醇类、生物碱类等成分。鱼腥草注射液是经过水汽蒸馏后加入辅料灭菌制备而得，主要成分为其挥发性成分。鱼腥草注射液是鲜鱼腥草经水蒸气蒸馏制成的灭菌水溶液。法定质量标准源于部颁标准《中药成方制剂》第十七册WS3-B-3^4-98，及国家药品标准修订批件2001ZB0086， 法定质量标准中含量测定项仅测定甲基正壬酮一种成分，且仅规定了较低的下限值，标准未收载中药指纹图谱的控制项、未进行挥发油量的控制、鉴别项仅收载了两项专属性不强的化学反应鉴别及一个单一成分的薄层鉴别试验，现行法定质量未能有效对产品的理化性质及有效性进行有效控制。
发明内容
本发明目的在于公开一种鱼腥草注射液的质量检测方法。本发明目的是通过如下方案实现的本发明鱼腥草注射液的质量检测方法，包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法A.鱼腥草注射液中4种成份同时检测的含量测定方法为色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱为色谱柱；初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID，检测器温度为^0°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为5 15 1，进样为Iy 1，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含1 ^ig的溶液；对照品溶液配制，分别取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含8 12mg、4 6mg、6 10mg、l ^ig的对照品储备液，分别精密量取各对照品储备液，加正己烷制成每Iml约含lmg、0. 5mg、0. SmgUmg的混合溶液，作为混合对照品储备液，取混合对照品储备液0. 5ml，置2ml量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；供试品溶液配制，取鱼腥草注射液50ml，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加入正己烷0. 5ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟， 冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得；每Iml含α -松油醇(C8H18O)应为2. 0 10. 0 μ g，甲基正壬酮(C11H22O)应为6. 0 20. 0 μ g，4-萜品醇(C8H18O)应不低于5. 0 μ g，乙酸龙脑酯(C12H2tlO2)应不低于0. 8 μ g ；B.鱼腥草药材中4种成份同时检测的含量测定方法为色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱作为色谱柱，初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID，检测器温度为^0°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为5 15 1，进样为Iy 1，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含1 ^ig的溶液；对照品溶液配制，取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含0. 5 1. 5mg、0. 2 lmg、6 10mg、8 12mg的对照品储备液，分别精密移取各对照品储备液^iil、 ImlUmUml于IOml量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得； 供试品溶液配制，取鱼腥草药材，剪碎，取45 55g，精密称定，置250ml圆底烧瓶中，加水 150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸4小时，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 3 0. 5g，振摇，正己烷液移至IOml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得海Ig含α-松油醇(C8H18O)应不低于1.5yg，含甲基正壬酮(C11H22O)应不低于120 μ g，含4-萜品醇(C8H18O)应不低于3. O μ g，含乙酸龙脑酯(C12H2tlO2)应不低于 12. Oyg;C.鱼腥草注射液指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图；积分参数设置为切除前4分钟溶剂峰，去除内标峰，斜率(Slope Sensitivity)为5， 峰宽(Peak Width)为 0.1，最小峰面积(Area reject)为 4，最小峰高(Height reject) 为0. 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2009版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 85 ；指纹图谱共有11个特征峰，以甲基正壬酮RT =17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰0. 465士0. 080，2号峰0. 486士0. 049， 3 号峰 0. 557士0. 056,4 号峰 0. 673士0. 067,5 号峰 0. 712士0. 071,6 号峰 0. 741 士0. 074， 7 号峰 0. 810士0. 081,8 号峰 0. 828士0. 082,9 号峰 0. 991 士0. 099，S 峰 1. 000士0. 000， 10 号峰 1. 5 士0. 156 ；相对峰面积为 1 号峰 0. 062士0. 006,2 号峰 0. 041 士0. 004,3 号峰 0. 072 士 0. 007，4 号峰 0. 066 士 0. 007，5 号峰 0. 031 士 0. 003，6 号峰 0. 024 士 0. 002，7 号峰 1. 541 士0. 154，8 号峰 0. 463士0. 046，9 号峰 0. 185士0. 019，S 峰 1. 000士0. 000，10 号峰 0. 021 士 0. 002 ；D.鱼腥草药材指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图； 积分参数设置为切除前4分钟溶剂峰，去除内标峰，Slope Sensitivity为5，Peak Width 为0. 1，Area reject为4，Height reject为0. 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2009版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 90 ；指纹图谱有22个特征峰，以甲基正壬酮RT = 17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰 0. 383 士 0. 038，2 号峰 0. 397 士 0. 040，3 号峰 0. 418 士 0. 042，4 号峰 0. 457 士 0. 046，5 号
8峰 0. 466 士 0. 047，6 号峰 0. 486 士 0. 049，7 号峰 0. 533 士 0. 053，8 号峰 0. 556 士 0. 056，9 号峰 0. 566士0. 057，10 号峰 0. 587士0. 059，11 号峰 0. 607士0. 061，12 号峰 0. 661 士0. 066，13 号峰 0. 668士0. 067，14 号峰 0. 807士0. 081，15 号峰 0. 826士0. 083，16 号峰 0. 989士0. 099， S 峰 1. 000士0. 000，17 号峰 1. 088士0. 101，18 号峰 1. 134士0. 113，19 号峰 1. 230士0. 123， 20号峰1. 346士0. 135，21号峰1. 567士 157 ；相对峰面积为1号峰0. 009士0. 001,2号峰 0. 606士0. 060,3 号峰 0. 090士0. 009,4 号峰 0. 444士0. 044,5 号峰 1. 113士0. 111,6 号峰 0. 493士0. 049,7 号峰 0. 023士0. 002,8 号峰 0. 354士0. 035,9 号峰 0. 022士0. 002，10 号峰 0. 005士0. 001，11 号峰 0. 036士0. 004，12 号峰 0. 021 士0. 002，13 号峰 0. 012士0. 001，14 号峰 0. 078士0. 008，15 号峰 0. 011 士0. 001，16 号峰 0. 136士0. 014，S 峰 1. 000士0. 000，17 号峰 0.017士0. 002，18 号峰 0. 061 士0. 006，19 号峰 0. 035士0. 004,20 号峰 0. 134士0. 013，21 号峰 0. 029士0. 003 ；E.鱼腥草注射液中聚山梨酯80限量检查的检测方法为精密移取鱼腥草注射液 Iml置锥形瓶中；取硝酸钴5 8g，硫氰酸铵35 45g，加水溶解并稀释至200ml，摇勻，制成铵钴硫氰酸盐溶液，将铵钴硫氰酸盐溶液10 20ml置锥形瓶中，精密加入二氯甲烷8 12ml，称定重量，用振荡器振荡15分钟，取出，用二氯甲烷补足减失的重量，移至分液漏斗中，静置15分钟，分取二氯甲烷层溶液，作为供试品溶液；另取聚山梨酯80对照品至IOml 量瓶中，精密称定，加二次蒸馏水制成每Iml含2. 5mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液及对照品溶液，放入紫外分光光度计，在623nm波长下测定吸收度，计算，即得；含聚山梨酯80不得过0. 27% ；F.鱼腥草药材薄层色谱的鉴别方法为取鱼腥草药材125g，剪碎，置250ml圆底烧瓶中，加水150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，并保持微沸4小时，放置半小时，取正己烷层，至2ml量瓶中， 加正己烷稀释至刻度，作为供试品溶液；另取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品和甲基正壬酮对照品，分别加正己烷制成每Iml含0. 8 1. 5mg、0. 3 0. 8mg、l. 0 3. Omg的溶液， 作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液5μ 1、对照品溶液2μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯比例为15 21 3为展开齐IJ，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；G.鱼腥草注射液或其中间产品薄层色谱的鉴别方法为取鱼腥草注射液50ml， 置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加入正己烷0. 5ml, 连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，作为供试品溶液；另取甲基正壬酮、 α -松油醇对照品和4-萜品醇对照品对照品，分别加正己烷制成每Iml含0. 8 1. 5mg、 0. 3 0. 8mg、1. 0 3. Omg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液5 μ 1、对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯的比例为15 21 3为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；H.鱼腥草药材中挥发油含量的检测方法为取鱼腥草药材500g，精密称定，置2000ml圆底烧瓶中，加水IOOOml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，保持微沸5小时，冷却至室温，计算本品含挥发油的总量；含挥发油不得少于0.03% (ml/g)；I.鱼腥草注射液或其中间产品中挥发油含量的检测方法为取鱼腥草注射液或其中间产品500ml，置2000ml圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，保持微沸35 45分钟，冷却至室温，计算本品含挥发油的总量。本发明鱼腥草注射液的质量检测方法，优选如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法A.鱼腥草注射液中4种成份同时检测的含量测定方法为色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱为色谱柱；初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID，检测器温度为^0°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为10 1，进样为1 μ 1，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含2mg的溶液；对照品溶液配制，分别取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、 乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含10mg、5mg、 8mg、2mg的对照品储备液，分别精密量取各对照品储备液，加正己烷制成每Iml约含lmg、 0. 5mg、0. 8mg、lmg的混合溶液，作为混合对照品储备液，取混合对照品储备液0. 5ml，置^iil 量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；供试品溶液配制，取鱼腥草注射液50ml，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分， 加入正己烷0. 5ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得；每Iml含α -松油醇 (C8H18O)应为 2. O 10. Oyg,甲基正壬酮(C11H22O)应为 6. O 20. Oy g，4-萜品醇(C8H18O) 应不低于5. O μ g，乙酸龙脑酯(C12H2tlO2)应不低于0. 8 μ g ；B.鱼腥草药材中4种成份同时检测的含量测定方法为色谱条件与系统适用性试验，30mX 0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱作为色谱柱，初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至 140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID，检测器温度为^0°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为10 1，进样为1 μ 1，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含2mg的溶液；对照品溶液配制，取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含lmg、0. 5mg、8mg、10mg 的对照品储备液，分别精密移取各对照品储备液anl、lml、ImUml于IOml量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；供试品溶液配制，取鱼腥草药材，剪碎， 取50g，精密称定，置250ml圆底烧瓶中，加水150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸4小时，冷却至室温， 分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至IOml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各ι μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得；每Ig含 α-松油醇(C8H18O)应不低于1.5 μ g，含甲基正壬酮(C11H22O)应不低于120 μ g，含4_萜品醇(C8H18O)应不低于3.0 μ g，含乙酸龙脑酯(C12H20O2)应不低于12. Oyg；C.鱼腥草注射液指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图；积分参数设置为切除前6分钟溶剂峰，去除内标峰，斜率(Slope Sensitivity)为5， 峰宽(Peak Width)为 0.1，最小峰面积(Area reject)为 4，最小峰高(Height reject) 为0. 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2009版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 85 ；指纹图谱共有11个特征峰，以甲基正壬酮RT = 17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰0. 465，2号峰0. 486，3号峰0. 557，4号峰 0. 673，5 号峰 0. 712，6 号峰 0. 741，7 号峰 0. 810，8 号峰 0. 828，9 号峰 0. 991，S 峰 1. 000，10 号峰1. 554 ；相对峰面积为1号峰0. 062,2号峰0. 041,3号峰0. 072，4号峰0. 066,5号峰 0. 031，6 号峰 0. 024，7 号峰 1. 541，8 号峰 0. 463，9 号峰 0. 185，S 峰 1. 000，10 号峰 0. 021 (具体数值见表1、附
图1)；表1鱼腥草注射液指纹图谱各峰相对保留时间及相对峰面积
权利要求
1. 一种鱼腥草注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和 /或指纹图谱检测方法A.鱼腥草注射液中4种成份同时检测的含量测定方法为气相色谱法，色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱为色谱柱；初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为 FID，检测器温度为280°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为5 15 1，进样为Iy 1，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含1 ^ig的溶液；对照品溶液配制，分别取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含8 12mg、4 6mg、6 10mg、l ^ig的对照品储备液，分别精密量取各对照品储备液，加正己烷制成每Iml约含lmg、0. 5mg、0. SmgUmg的混合溶液，作为混合对照品储备液，取混合对照品储备液0. 5ml，置2ml量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；供试品溶液配制，取鱼腥草注射液50ml，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加入正己烷0. 5ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml 量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得；每Iml鱼腥草注射液中含α-松油醇(C8H18O)应为2. O 10. O μ g，甲基正壬酮(C11H22O)应为6. O 20. O μ g，4-萜品醇(C8H18O)应不低于5. O μ g,乙酸龙脑酯 (C12H20O2)应不低于 0.8yg;B.鱼腥草药材中4种成份同时检测的含量测定方法为气相色谱法，色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱作为色谱柱，初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID， 检测器温度为^0°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为5 15 1，进样为Ιμ ， 理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定， 加正己烷制成每Iml含1 ^ig的溶液；对照品溶液配制，取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含 0. 5 1. 5mg、0. 2 lmg、6 10mg、8 12mg的对照品储备液，分别精密移取各对照品储备液anl、lml、lml、^il于IOml量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻， 即得；供试品溶液配制，取鱼腥草药材，剪碎，取45 55g，精密称定，置250ml圆底烧瓶中， 加水150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸4小时，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 3 0. 5g，振摇，正己烷液移至IOml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 μ ，注入气相色谱仪，测定，即得；每Ig鱼腥草药材含α-松油醇(C8H18O) 应不低于1. 5 μ g，含甲基正壬酮(C11H22O)应不低于120 μ g，含4-萜品醇(C8H18O)应不低于 3. O μ g，含乙酸龙脑酯(C12H2tlO2)应不低于12. Oyg;C.鱼腥草注射液指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图； 积分参数设置为切除前4分钟溶剂峰，去除内标峰，斜率(Slope Sensitivity)为5，峰宽(Peak Width)为 0.1，最小峰面积(Area reject)为 4，最小峰高(Height reject)为 0. 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2009版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 85 ；指纹图谱共有11个特征峰，以甲基正壬酮RT = 17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰0. 465士0. 080，2号峰0. 486士0. 049， 3 号峰 0. 557士0. 056,4 号峰 0. 673士0. 067,5 号峰 0. 712士0. 071,6 号峰 0. 741 士0. 074， 7 号峰 0. 810士0. 081,8 号峰 0. 828士0. 082,9 号峰 0. 991 士0. 099，S 峰 1. 000士0. 000， 10 号峰 1. 5 士 0. 156 ；相对峰面积为 1 号峰 0. 062 士 0. 006,2 号峰 0. 041 士 0. 004,3 号峰 0. 072 士 0. 007，4 号峰 0. 066 士 0. 007，5 号峰 0. 031 士 0. 003，6 号峰 0. 024 士 0. 002，7 号峰 1. 541 士0. 154，8 号峰 0. 463士0. 046，9 号峰 0. 185士0. 019，S 峰 1. 000士0. 000，10 号峰 0. 021 士 0. 002 ；D.鱼腥草药材指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图；积分参数设置为切除前4分钟溶剂峰，去除内标峰，Slope Sensitivity为5，Peak Width为 0. 1，Area reject为4，Height reject为0. 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2009版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 90 ；指纹图谱有22个特征峰，以甲基正壬酮RT = 17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰 0. 383 士 0. 038，2 号峰 0. 397 士 0. 040，3 号峰 0. 418 士 0. 042，4 号峰 0. 457 士 0. 046，5 号峰 0. 466 士 0. 047，6 号峰 0. 486 士 0. 049，7 号峰 0. 533 士 0. 053，8 号峰 0. 556 士 0. 056，9 号峰 0. 566士0. 057，10 号峰 0. 587士0. 059，11 号峰 0. 607士0. 061，12 号峰 0. 661 士0. 066，13 号峰 0. 668士0. 067，14 号峰 0. 807士0. 081，15 号峰 0. 826士0. 083，16 号峰 0. 989士0. 099， S 峰 1. 000士0. 000，17 号峰 1. 088士0. 101，18 号峰 1. 134士0. 113，19 号峰 1. 230士0. 123， 20号峰1. 346士0. 135,21号峰1. 567士 157 ；相对峰面积为1号峰0. 009士0. 001,2号峰 0. 606士0. 060,3 号峰 0. 090士0. 009,4 号峰 0. 444士0. 044,5 号峰 1. 113士0. 111,6 号峰 0. 493士0. 049,7 号峰 0. 023士0. 002,8 号峰 0. 354士0. 035,9 号峰 0. 022士0. 002，10 号峰 0. 005士0. 001，11 号峰 0. 036士0. 004，12 号峰 0. 021 士0. 002，13 号峰 0. 012士0. 001，14 号峰 0. 078士0. 008，15 号峰 0. 011 士0. 001，16 号峰 0. 136士0. 014，S 峰 1. 000士0. 000，17 号峰 0.017士0. 002，18 号峰 0. 061 士0. 006，19 号峰 0. 035士0. 004,20 号峰 0. 134士0. 013，21 号峰 0. 029士0. 003 ；E.鱼腥草注射液中聚山梨酯80限量检查的检测方法为精密移取鱼腥草注射液Iml 置锥形瓶中；取硝酸钴5 8g，硫氰酸铵35 45g，加水溶解并稀释至200ml，摇勻，制成铵钴硫氰酸盐溶液，将铵钴硫氰酸盐溶液10 20ml置锥形瓶中，精密加入二氯甲烷8 12ml，称定重量，用振荡器振荡15分钟，取出，用二氯甲烷补足减失的重量，移至分液漏斗中，静置15分钟，分取二氯甲烷层溶液，作为供试品溶液；另取聚山梨酯80对照品至IOml 量瓶中，精密称定，加二次蒸馏水制成每Iml含2. 5mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液及对照品溶液，放入紫外分光光度计，在623nm波长下测定吸收度，计算，即得；含聚山梨酯80不得过0. 27% ；F.鱼腥草药材薄层色谱的鉴别方法为取鱼腥草药材125g，剪碎，置250ml圆底烧瓶中，加水150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，并保持微沸4小时，放置半小时，取正己烷层，至2ml量瓶中，加正己烷稀释至刻度，作为供试品溶液；另取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品和甲基正壬酮对照品，分别加正己烷制成每Iml含0. 8 1. 5mg、0. 3 0. 8mg、l. 0 3. Omg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯比例为15 21 3为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；G.鱼腥草注射液或其中间产品薄层色谱的鉴别方法为取鱼腥草注射液或其中间产品50ml，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加入正己烷0. 5ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，作为供试品溶液；另取甲基正壬酮、α -松油醇对照品和4-萜品醇对照品对照品，分别加正己烷制成每Iml含0. 8 1. 5mg、0. 3 0. 8mg、l. 0 3. Omg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液5 μ 1、对照品溶液2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯的比例为15 21 3 为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；H.鱼腥草药材中挥发油含量的检测方法为取鱼腥草药材500g，精密称定，置2000ml 圆底烧瓶中，加水IOOOml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，保持微沸5小时，冷却至室温，计算本品含挥发油的总量；含挥发油不得少于0. 03% ml/g ；I.鱼腥草注射液或其中间产品中挥发油含量的检测方法为取鱼腥草注射液或其中间产品500ml，置2000ml圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，保持微沸35 45分钟，冷却至室温，计算本品含挥发油的总量。
2.如权利要求1所述的鱼腥草注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法A.鱼腥草注射液中4种成份同时检测的含量测定方法为气相色谱法，色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱为色谱柱；初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID， 检测器温度为280°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为10 1，进样为Iy 1，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含2mg的溶液；对照品溶液配制，分别取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含10mg、 5mg、8mg、2mg的对照品储备液，分别精密量取各对照品储备液，加正己烷制成每Iml约含 lmg、0. 5mg、0. SmgUmg的混合溶液，作为混合对照品储备液，取混合对照品储备液0. 5ml, 置2ml量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；供试品溶液配制，取鱼腥草注射液50ml，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加入正己烷0. 5ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得；每Imi鱼腥草注射液含α -松油醇(C8H18O)应为2. 0 10. 0 μ g，甲基正壬酮(C11H22O)应为6. 0 20. 0 μ g，4-萜品醇(C8H18O)应不低于5. 0 μ g，乙酸龙脑酯(C12H2tlO2)应不低于0. 8 μ g ；B.鱼腥草药材中4种成份同时检测的含量测定方法为气相色谱法，色谱条件与系统适用性试验，30mX0. 25mm, 0. 25 μ mDB-1毛细管柱作为色谱柱，初始70°C保持5分钟，每分钟5°C升至140°C，保持5分钟，每分钟20°C升至250°C，进样口温度为230°C，检测器为FID， 检测器温度为280°C，载气为N2，载气流速为l.Oml/min，分流比为10 1，进样为Ιμ ，理论板数按甲基正壬酮峰计算应不低于10000 ；内标溶液配制，取正十一碳烯，精密称定，加正己烷制成每Iml含aiig的溶液；对照品溶液配制，取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品、 乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮对照品，精密称定，分别加正己烷制成每Iml含lmg、0. 5mg、 SmgUOmg的对照品储备液，分别精密移取各对照品储备液^il、lml、lml、^il于IOml量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；供试品溶液配制，取鱼腥草药材，剪碎，取50g，精密称定，置250ml圆底烧瓶中，加水150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸4小时， 冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至IOml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入Iml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，摇勻，即得；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 μ 1，注入气相色谱仪，测定，即得；每Ig鱼腥草药材含α-松油醇(C8H18O)应不低于1.5 μ g，含甲基正壬酮(C11H22O)应不低于120 μ g，含4-萜品醇(C8H18O)应不低于3. O μ g，含乙酸龙脑酯(C12H2tlO2)应不低于 12. Oyg；C.鱼腥草注射液指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图；积分参数设置为切除前4分钟溶剂峰，去除内标峰，斜率(Slopeknsitivity)为5，峰宽(Peak Width)为0. 1，最小峰面积(Area reject)为4，最小峰高(Height reject)为0· 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2009版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 85 ；指纹图谱共有11个特征峰，以甲基正壬酮RT = 17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰0. 465，2号峰0. 486，3号峰0. 557，4号峰0. 673，5号峰 0. 712，6 号峰 0. 741，7 号峰 0. 810，8 号峰 0. 828，9 号峰 0. 991，S 峰 1. 000，10 号峰 1. 554 ； 相对峰面积为1号峰0. 062，2号峰0. 041，3号峰0. 072，4号峰0. 066，5号峰0. 031，6号峰 0. 024，7 号峰 1. 541，8 号峰 0. 463，9 号峰 0. 185，S 峰 1. 000，10 号峰 0. 021 ；D.鱼腥草药材指纹图谱检测方法按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图；积分参数设置为切除前4分钟溶剂峰，去除内标峰，Slope Sensitivity为5，Peak Width为0. 1， Area reject为4，Height reject为0. 1，以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2009 版)》计算相似度，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0. 90 ；指纹图谱有22 个特征峰，以甲基正壬酮RT = 17. 20min为参照峰，各峰相对保留时间为1号峰0. 383，2号峰0. 397，3 号峰 0. 418，4 号峰0. 457，5 号峰 0. 466，6 号峰0. 486，7 号峰 0. 533，8 号峰0. 556， 9 号峰 0. 566，10 号峰 0. 587，11 号峰 0. 607，12 号峰 0. 661，13 号峰 0. 668，14 号峰 0. 807， 15 号峰 0. 826，16 号峰 0. 989，S 峰 1. 000，17 号峰 1. 088，18 号峰 1. 134，19 号峰 1. 230，20 号峰1. 346，21号峰1. 567 ；相对峰面积为1号峰0. 009，2号峰0. 606，3号峰0. 090，4号峰 0. 444，5 号峰 1. 113，6 号峰 0. 493，7 号峰 0. 023，8 号峰 0. 354，9 号峰 0. 022，10 号峰 0. 005，·11 号峰 0. 036，12 号峰 0. 021，13 号峰 0. 012，14 号峰 0. 078，15 号峰 0. 011，16 号峰 0. 136， S 峰 1. 000，17 号峰 0. 017，18 号峰 0. 061，19 号峰 0. 035，20 号峰 0. 134，21 号峰 0. 029 ；E.鱼腥草注射液中聚山梨酯80限量检查的检测方法为精密移取鱼腥草注射液Iml 置锥形瓶中；取硝酸钴6g，硫氰酸铵40g，加水溶解并稀释至200ml，摇勻，制成铵钴硫氰酸盐溶液，将铵钴硫氰酸盐溶液15ml置锥形瓶中，精密加入二氯甲烷10ml，称定重量，用振荡器振荡15分钟，取出，用二氯甲烷补足减失的重量，移至分液漏斗中，静置15分钟，分取二氯甲烷层溶液，作为供试品溶液；另取聚山梨酯80对照品至IOml量瓶中，精密称定，加二次蒸馏水制成每Iml含2. 5mg的溶液，作为对照品溶液；分别取供试品溶液及对照品溶液，放入紫外分光光度计，在623nm波长下测定吸收度，计算，即得；含聚山梨酯80不得过 0. 27% ；F.鱼腥草药材薄层色谱的鉴别方法为取鱼腥草药材125g，剪碎，置250ml圆底烧瓶中，加水150ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1ml，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，并保持微沸4小时，放置半小时，取正己烷层，至2ml量瓶中，加正己烷稀释至刻度，作为供试品溶液；另取4-萜品醇对照品、α -松油醇对照品和甲基正壬酮对照品，分别加正己烷制成每Iml含1. 0mg、0. 5mg、2. Omg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯比例为17 3为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；G.鱼腥草注射液或其中间产品薄层色谱的鉴别方法为取鱼腥草注射液或其中间产品50ml，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，加入正己烷 0. 5ml，连接回流冷凝管，加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，分取正己烷层，加无水硫酸钠约0. 4g，振摇，正己烷液移至2ml量瓶中，并用正己烷洗涤无水硫酸钠，洗液并入同一量瓶中，精密加入0. 2ml内标溶液，加正己烷稀释至刻度，作为供试品溶液；另取甲基正壬酮、α-松油醇对照品和4-萜品醇对照品对照品，分别加正己烷制成每Iml含l.Omg、 0. 5mg、2. Omg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯的比例为17 3为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%香草醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；H.鱼腥草药材中挥发油含量的检测方法为取鱼腥草药材500g，精密称定，置2000ml 圆底烧瓶中，加水IOOOml与玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，保持微沸5小时，冷却至室温，计算本品含挥发油的总量；含挥发油不得少于0. 03% ml/g ；I.鱼腥草注射液或其中间产品中挥发油含量的检测方法为取鱼腥草注射液或其中间产品500ml，置2000ml圆底烧瓶中，加玻璃珠数粒，连接挥发油测定器，自测定器上端加水充满刻度部分，连接回流冷凝管，缓缓加热至沸，保持微沸40分钟，冷却至室温，计算本品含挥发油的总量。
全文摘要
本发明公开一种鱼腥草注射液的质量检测方法，该方法包括含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法。该方法照气相色谱法；取4-萜品醇对照品、α-松油醇对照品、乙酸龙脑酯对照品、甲基正壬酮分别加正己烷制成对照品溶液；取鱼腥草注射液加入正己烷，加无水硫酸钠制成供试品溶液；分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定；按含量测定项下方法进行检测，记录色谱图，供试品指纹图谱与对照指纹图谱相似度应不得低于0.85。本发明还提供了鱼腥草注射液中聚山梨酯80限量检查的检测方法、鱼腥草药材或注射液中薄层色谱的鉴别方法及挥发油含量的检测方法。本发明质量检测方法专属性好，线性关系良好，仪器精密度良好，重复性良好。
文档编号G01N30/02GK102323345SQ20111020880
公开日2012年1月18日 申请日期2011年7月25日 优先权日2011年7月25日
发明者仇萍, 吴建国, 吴飞驰, 朱雅宁, 李清, 李苏翠, 毕开顺, 潘红炬 申请人:湖南正清制药集团股份有限公司, 雅安三九药业有限公司