专利名称：一种酵母来源活性多肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及生物制品领域，具体涉及一种酵母来源活性多肽的制备方法。
背景技术：
健康是人类全面发展的基础，随着科学技术的发展和生活水平的提高，健康已经成为二十一世纪人类追求的最终目标，以疾病预防和养身健体为目的的功能食品也因此被越来越多的人所青睐，功能食品产业必将成为食品行业发展的主动脉，并带动相关产业经济的发展。作为一种重要的功能食品——生物活性多肽，因其具有显著的生理及药理活性而被广泛应用于医药、保健、食品、化妆品等行业。多肽类产品从上世纪90年代以来，已迅速成为国际市场畅销药物或功能食品的原料“新宠”。迄今为止，科学家已发现的天然多肽类生理物质已有数万种之多，涉及到激素、神经、细胞生长、生殖、肿瘤病变、神经激素传递质及免疫调节等领域。多肽药物和多肽功能食品的开发研究是目前生物医药和功能食品领域中最活跃、进展最快的部分，也将是二十一世纪最有前途的产业之一。酵母菌体具有较高的营养价值，蛋白质含量高达50%左右，且人体必需氨基酸(如赖氨酸)的含量较高等特点。国内酵母蛋白质的应用还主要停留在利用酵母内源酶系水解蛋白质等物质生产酵母提取物作为调味料，附加值低，市场竞争力差。因此，开发以酵母为原料的生物活性多肽，对提高酵母附加值，提升产业链结构有着深远影响。目前，利用酵母为原料制备生物活性多肽已有研究，其主要的制备方法为酶解法制备具有各种生理活性的活性多肽。这些制备方法采用酵母蛋白提取与酶解分步进行，所用的酶为菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶等单一酶；酵母蛋白中核蛋白含量较高，已有制备方法没有有效除去核酸类杂质，而人体摄入过量的核酸后会在体内积累核酸代谢产物尿酸，容易引起痛风和尿结石等疾病。
发明内容
本发明的目的在于提供一种酵母来源的活性多肽的制备工艺，以干酵母为原料， 采用混合酶酶解、过滤(或离心)、除杂和膜分离，获得具有多种生理活性的多肽组分。本发明采用混合酶实现酵母蛋白提取和酶解一体化，提高制备效率，并且采用乙醇沉淀法有效除去核酸和多糖类杂质，并通过膜分离获得具有降血糖、降血压及抗氧化活性的多肽组分。本发明的目的可以通过以下技术方案实现
将酵母粉和水以一定比例混合，加入以内切酶、外切酶、风味酶组成的混合酶，酶解后固液分离。采用乙醇沉淀法除去液相组分中的多糖及核酸类杂质，上清液经超滤膜过滤分离，滤过液经减压浓缩和真空冷冻干燥后获得活性多肽。该发明的具体操作步骤如下
一种酵母来源的活性多肽制备方法，包括以下步骤
(1)将干酵母粉和水按固液比1: 5^1: 15 g/mL混合后加入酶进行酶解，所述酶为内切
3酶、外切酶及风味酶的混合物，三种酶所占比例依次为l(T30%Wt、l(T30%Wt和4(T80%wt，酶解温度为2(T45°C，酶解时间为2 4h ；
(2)步骤(1)得到的酶解液在9(Tll(TC灭酶后，过滤或离心分离得到液相组分；再除去液相组分中的多糖及核酸类杂质；
(3)然后通过超滤膜分离，滤过液经减压浓缩和真空冷冻干燥后获得活性多肽。所述酶的加入量为干酵母粉质量的0. 59Γ2. 5%。步骤(2)所述除去液相组分中的多糖及核酸类杂质是采用乙醇沉淀法，乙醇的加入量为过滤或离心所得液相组分的体积的2飞倍。所述超滤膜分离选用截留分子量为5kDiTl0kDa的超滤膜。所述内切酶、外切酶及风味酶可以在技术领域常用酶范围内任意选择。本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果
1、本发明采用混合酶酶解法获得酵母多肽，将提取和酶解两个工艺过程合并，有效地提高了活性多肽的生产效率，缩短了工艺流程。采用乙醇沉淀法除去多肽中的核酸和多糖类杂质，提高了活性多肽的纯度。2、本发明采用超滤膜分离获得分子量低于IOkDa的多肽组分，其生物活性更加明显，经体外活性测定，该多肽组分具有降血压、降血糖、抗氧化的活性。在多肽浓度为0. 5mg/ mL时，对血管紧张素转移酶的抑制率为42. 4%，对α -葡萄糖苷酶抑制率为32. 42%，超氧阴离子的清除率为54. 8%。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。实施例1
(1)酵母蛋白的提取和酶解将干酵母粉和水按固液比1: 5 g/mL混合，选用含中性肽链内切酶10% wt、亮氨酸氨肽酶10% wt及风味蛋白酶80% wt的混合酶酶解。加酶量为干酵母粉的1% wt，酶解温度为45°C，酶解时间为池。(2)酶解液的分离与除杂酶解液在90°C下灭酶后过滤，取液相组分加入4倍(V/ V)的乙醇，去除其中的多糖和核酸类杂质。(3)活性多肽的超滤膜分离利用截留分子量为5kDa的超滤膜过滤分离，滤过液减压浓缩及真空冷冻干燥后得到活性多肽。(4)活性肽生理功能鉴定利用HPLC检测该活性多肽对ACE酶的抑制作用。结果表明，在多肽浓度为0. 5mg/mL时，对血管紧张素转移酶的抑制率为42. 4%
实施例2
(1)酵母蛋白的提取和酶解将干酵母粉和水按固液比1: 10 g/mL混合，选用含糜蛋白酶20% wt、亮氨酸氨肽酶20% wt及风味蛋白酶60% wt的混合酶酶解。加酶量为干酵母粉的0. 5%wt，酶解温度为35°C，酶解时间为池。(2)酶解液的分离与除杂酶解液在100°C下灭酶后离心，取液相组分加入2倍(V/ V)的乙醇，去除其中的多糖和核酸类杂质。(3)活性多肽的超滤膜分离利用截留分子量为SkDa的超滤膜过滤分离，滤过液减压浓缩及真空冷冻干燥后得到活性多肽。
(4)活性肽生理功能鉴定采用邻苯三酚自氧化法测定该组分超氧阴离子清除活性。结果表明，在多肽浓度为0. 5mg/mL时，超氧阴离子的清除率为54. 8%。实施例3
(1)酵母蛋白的提取和酶解将干酵母粉和水按固液比1: 15 g/mL混合，选用含中性肽链内切酶30% wt、羧肽酶30% wt及风味蛋白酶40% wt的混合酶酶解。加酶量为干酵母粉质量的2. 5% wt，酶解温度为20°C，酶解时间为4h。(2)酶解液的分离与除杂酶解液在110°C下灭酶后离心，取液相组分加入6倍(V/ V)的乙醇，去除其中的多糖和核酸类杂质。(3)活性多肽的超滤膜分离利用截留分子量为IOkDa的超滤膜过滤分离，滤过液减压浓缩及真空冷冻干燥后得到活性多肽。(4)活性肽生理功能鉴定通过体外实验，检测活性多肽对α -葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明，在多肽浓度为0. 5mg/mL时，对α -葡萄糖苷酶抑制率为32. 42%。
权利要求
1.一种酵母来源的活性多肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将干酵母粉和水按固液比1:5^1: 15 g/mL混合后加入酶进行酶解，所述酶为内切酶、外切酶及风味酶的混合物，三种酶所占比例依次为l(T30%Wt、l(T30%Wt和4(T80%wt，酶解温度为2(T45°C，酶解时间为2 4h ；(2)步骤(1)得到的酶解液在9(Tll(TC灭酶后，过滤或离心分离得到液相组分；再除去液相组分中的多糖及核酸类杂质；(3)然后通过超滤膜分离，滤过液经减压浓缩和真空冷冻干燥后获得活性多肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶的加入量为干酵母粉质量的 0. 5% 2. 5%ο
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述除去液相组分中的多糖及核酸类杂质是采用乙醇沉淀法，乙醇的加入量为过滤或离心所得液相组分的体积的2飞倍。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述超滤膜分离选用截留分子量为 5kDa IOkDa的超滤膜。
全文摘要
本发明公开了一种酵母来源活性多肽的制备方法。将酵母粉和水混合，加入以内切酶、外切酶、风味酶组成的混合酶，酶解后固液分离。采用乙醇沉淀法除去液相组分中的多糖及核酸类杂质。上清液经截留分子量为5kDa~10kDa的超滤膜过滤分离，滤过液经减压浓缩和真空冷冻干燥后获得活性多肽。经过体外活性测定，该酵母来源活性多肽具有降血压、抗氧化及降血糖活性。
文档编号C12P21/06GK102286591SQ20111027228
公开日2011年12月21日 申请日期2011年9月15日 优先权日2011年9月15日
发明者倪贺, 叶就, 张才军, 李琳, 胡松青, 郭莎莎 申请人:华南理工大学, 广东五洲药业有限公司