专利名称：用于鉴别水稻籼亚种生态型的引物组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于鉴别水稻籼亚种生态型的引物组合物及其应用。
背景技术：
水稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的粮食作物之一。中国作为亚洲栽培稻的起源地之一(Oka 1988)，拥有丰富的稻种资源。目前，国家种质资源库收集保存栽培稻7 万余份，其中籼稻种质资源占67% (ICGR CAAS 1996)。我国籼稻种植面积占水稻总面积的 70%，而且，籼稻是实现杂交化程度最高的水稻，杂交籼稻种植面积已占中国籼稻面积的近 80%。因此，籼稻在我国水稻研究和生产实践中具有重要的地位。栽培稻的分类一直受到各国科学家的高度重视，国内外学者相继提出了多种分类体系。籼、粳是亚洲栽培稻遗传分化的主流，已有了比较一致的认识。每个亚种内的遗传分化及分类却一直没有一致的意见。进入20世纪80年代以来，我国杂交稻产量徘徊不前，其中最主要的原因是亲本的遗传基础狭窄，而拓宽杂交稻亲本间的遗传差异，可以在一定程度上提高组合的优势强度。 然而，根据不同地区的生态条件所划分的生态类型无法有效反映亲本间的遗传差异，对杂种优势的预测效果不理想。另外，水稻中籼、粳亚种间杂种优势的利用已得到广泛的关注， 但是，由于存在Fl代半不育等诸多问题，亚种间杂种优势一直难以直接利用，亚种内不同生态类型间的杂种优势利用已成为育种家的共识。但是，有关合理、可行的亚种内生态型的划分研究较少。亚种内不同生态型间杂种优势的利用已成为杂交稻进入更高发展阶段，开展超高产育种的一个主要方向。要进行籼稻亚种内不同生态型间杂种优势的超高产育种，首先要正确判别能够反映品种间遗传差异的生态型。然而，大量育成品种由于广泛杂交而具有复杂的血缘，对这些品种的分类是栽培稻分类的新任务。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于鉴别水稻籼亚种生态型的引物组合物及其应用。本发明提供的辅助鉴别水稻籼亚种生态型的引物组合物，由rm216引物对、rm225 引物对、rm235引物对、rm25引物对、rm23引物对、rm244引物对、rm253引物对、rm267引物对、η 96引物对、rm223引物对和rm258引物对组成；所述rm216引物对为序列表的序列1所示DNA(上游引物)和序列表的序列2所示DNA(下游引物)组成的引物对；所述rm225引物对为序列表的序列3所示DNA(上游引物)和序列表的序列4所示DNA(下游引物)组成的引物对；所述rm235引物对为序列表的序列5所示DNA(上游引物)和序列表的序列6所示DNA(下游引物)组成的引物对；所述rm25引物对为序列表的序列7所示DNA (上游引物)和序列表的序列8所示DNA (下游引物)组成的引物对；所述rm23引物对为序列表的序列9所示DNA (上游引物)和序列表的序列10所示DNA (下游引物)组成的引物对；所述rm244引物对为序列表的序列11所示DNA(上游引物)和序列表的序列12所示DNA(下游引物)组成的引物对；所述rm253弓丨物对为序列表的序列13所示DNA (上游引物)和序列表的序列14所示DNA (下游引物)组成的引物对；所述rm267引物对为序列表的序列15所示DNA (上游引物)和序列表的序列16 所示DNA(下游引物)组成的引物对；所述η 96引物对为序列表的序列17所示DNA(上游引物)和序列表的序列18所示DNA (下游引物)组成的引物对；所述rm223引物对为序列表的序列19所示DNA (上游引物)和序列表的序列20所示DNA (下游引物)组成的引物对；所述rm258引物对为序列表的序列21所示DNA(上游引物)和序列表的序列22所示 DNA(下游引物)组成的引物对。所述水稻籼亚种生态型可为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。所述引物组合物中的每条引物在合成时，可以引入各种标记，如荧光标记。所述引物组合物可用于辅助鉴别水稻籼亚种生态型。所述水稻籼亚种生态型可为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。所述的引物组合物可用于制备辅助鉴别水稻籼亚种生态型的试剂盒。所述水稻籼亚种生态型可为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。本发明还保护一种辅助鉴别水稻籼亚种生态型的试剂盒，含有所述引物组合物。 所述水稻籼亚种生态型可为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。所述试剂盒中，还可包括用于提取基因组DNA的试剂和/或用于PCR扩增的试剂。所述试剂盒中的各个组分可为液体，也可为冻干粉。本发明还保护一种应用所述引物组合物辅助鉴别水稻籼亚种生态型的方法，所述水稻籼亚种生态型可为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型，所述方法包括如下步骤(1)以待测水稻的基因组DNA为模板，分别用所述rm216引物对、所述rm225弓丨物对、所述rm235引物对、所述rm25引物对、所述rm23引物对、所述rm244弓丨物对、所述rm253 引物对、所述rm267引物对、所述η 96引物对、所述rm223引物对和所述rm258引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；(2)检测采用各个所述引物对得到的所述PCR扩增产物，按照如下标准进行赋值采用所述RM216引物对，如果得到130bp的PCR扩增产物、rm216_130 = 1，如果没有得到130bp的PCR扩增产物、rm216_130 = 0 ；采用所述rm225引物对，如果得到146bp的PCR扩增产物、rm225_146 = 1，如果没有得至Ij 146bp的PCR扩增产物、rm225_146 = 0 ；采用所述rm235引物对，如果得到IMbp的PCR扩增产物、rm235_lM = 1，如果没有得至Ij 124bp的PCR扩增产物、rm235_124 = 0 ；采用所述rm25引物对，如果得到148bp的PCR扩增产物、rm25_148 = 1，如果没有得到148bp的PCR扩增产物、rm25_148 = 0 ；采用所述rm223引物对，如果得到147bp的PCR扩增产物、rm223_147 = 1，如果没有得至Ij 147bp的PCR扩增产物、rm223_147 = 0 ；采用所述rm23引物对，如果得到134bp的PCR扩增产物、rm23_134 = 1，如果没有得到134bp的PCR扩增产物、rm23_134 = 0 ；采用所述rm244引物对，如果得到152bp的PCR扩增产物、η 44_152 = 1，如果没有得到的PCR扩增产物、ηι 44_152 = 0 ；采用所述rm258引物对，如果得到122bp的PCR扩增产物、rm258_122 = 1，如果没有得到122bp的PCR扩增产物、rm258_122 = 0 ；采用所述rm244引物对，如果得到151bp的PCR扩增产物、η 44_151 = 1，如果没有得到151bp的PCR扩增产物、ηι 44_151 = 0 ；采用所述rm253引物对，如果得到140bp的PCR扩增产物、rm253_140 = 1，如果没有得至Ij 140p的PCR扩增产物、rm253_140 = 0 ；采用所述rm267引物对，如果得到156bp的PCR扩增产物、η 67_156 = 1，如果没有得至Ij 156ρ的PCR扩增产物、rm267_156 = 0 ；采用所述rm296引物对，如果得到118bp的PCR扩增产物、η 96_118 = 1，如果没有得到118ρ的PCR扩增产物、ηι 96_118 = 0 ；采用所述rm23引物对，如果得到144bp的PCR扩增产物、rm23_144 = 1，如果没有得到144p的PCR扩增产物、rm23_144 = 0 ；(3)将步骤⑵得到的各个赋值代入如下判别式a = (0. 6*rm216_130+0. 59*rm225_146+0. 91*rm235_124+0.74*rm25_148)/ (0. 6+0. 59+0. 91+0. 74)；b = (l*rm223_147 + 0. 67*rm23_134+0. 51*rm244_152 + l*rm258_122) / (1+0. 67+0. 51+1)；c = (0. 6*rm244_151+0. 64*rm253_140+0. 7*rm267_156+0. 61*rm296_118+0. 67*r m23_144)/(0. 6+0. 64+0. 7+0. 61+0. 67)。对于该水稻品种，如果a > b且a > c，待测水稻为候选的早籼稻生态型；对于该水稻品种，如果b > a且b > C，待测水稻为候选的中间型生态型；对于该水稻品种，如果c > a且c > b，待测水稻为候选的晚籼稻生态型。采用所述rm216引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为48°C。采用所述 rm225引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为48°C。采用所述rm235引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为50°C。采用所述rm25引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为50°C。采用所述rm23引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为48°C。采用所述rm244引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为48°C。采用所述rm253引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为48°C。采用所述η 67引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为50°C。采用所述η 96引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为46°C。采用所述rm223引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为50°C。采用所述 rm258引物对进行所述PCR扩增的退火温度具体可为48°C。采用所述各个引物对进行所述PCR扩增的反应体系均可为如下15μ 1体系 所述基因组 DNAQOng/μ 1)2. 5 μ 1，Taq polymerase (5u/ μ 1) 0. 18 μ 1,10 X Buffer 1· 5μ 1，MgCl2 (15mM/μ 1)1. 5 μ 1，所述上游引物(66ng/μ 1) 0. 7 μ 1，所述下游引物(66ng/ μ 1)0. 7 μ 1, dNTP(10mM/y 1)0. 18 μ 1, H2O 7. 74μ1。实施例中采用的是 15ul PCR 反应体系，本领域技术人员可以将反应体系扩大或缩小，也可以将引物含量增多或减少。采用所述各个引物对进行所述PCR扩增的反应程序均可如下95°C预变性5分钟； 95°C变性30秒，采用所述退火温度退火1分钟，72 °C延伸1分钟30秒，30个循环；72°C延
7伸10分钟。检测采用各个所述引物对得到的所述PCR扩增产物方法可为所述方法中可采用变性胶聚丙烯酰胺凝胶电泳。所述电泳中，优选采用银染法染色。检测采用各个所述引物对得到的所述PCR扩增产物的方法具体可为将所述PCR扩增产物进行8%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳(优选采用70W恒功率进行电泳)，然后进行银染染色。检测采用各个所述引物对得到的所述PCR扩增产物的方法具体可为将所述PCR 扩增产物进行测序。所述方法中，可采用CTAB法提取待测水稻的基因组DNA。所述方法中，用于提取所述基因组DNA的水稻材料可为新鲜的，也可为干品。本发明基于水稻籼亚种内的3种生态型的DNA序列差异，提供了引物组合物，可用于水稻籼亚种中三种生态型的鉴定。基于所述引物组合物，本发明的发明人还提出了籼稻 3种主要生态型的典型特征等位变异及判别关系式。本发明采用4 个水稻样本对本发明的引物组合物和方法进行了验证。所选用的材料有很好的代表性，为用SSR标记进行品种鉴别研究提供了很好的平台。与传统利用表型的鉴别方法相比，本发明提供的方法极大的缩短了鉴别时间；仅用籼稻各生态型特征等位变异，在苗期就可以完成鉴别，无需田间大面积种植，无鉴别时间限制和环境影响，省时省力，是一种简单、快速、稳定的鉴别水稻籼亚种内各生态型的方法。本发明具有快捷高效、灵敏度高、分辨力好、结果准确可靠等优点，适用于水稻品种的鉴定、水稻育种以及植物进化研究等方面的应用。本发明利用分子标记系统分析稻种质资源的遗传结构、演化，通过对籼稻种质资源的SSR分析，提出了籼稻亚种内的分类体系，为研究籼亚种内的生态型的鉴别方法奠定了基础，具有重要的理论意义和实践价值，对水稻分类及杂种优势的利用具有重要意义。
具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1、引物组合物的制备各条引物的核苷酸序列如下rm216引物对(退火温度为48°C )上游引物5，-gcatggccgatggtaaag-3'(序列表的序列1)；下游引物5，-tgtataaaaccacacggcca-3，(序列表的序列2)；rm225引物对(退火温度为48°C )上游引物5，-tgcccatatggtctggatg-3，(序列表的序列3)；下游引物5，-gaaagtggatcaggaaggc-3，(序列表的序列4)；rm235引物对(退火温度为50°C )上游引物5，-agaagctagggctaacgaac-3，(序列表的序列5)；下游引物5’-tcacctggtcagcctctttc-3’(序列表的序列 6)；rm25引物对(退火温度为50°C )
上游引物5，-ggaaagaatgatcttttcatgg-3‘(序列表的序列7)；下游弓丨物5，-ctaccatcaaaaccaatgttc-3，(序列表的序列 8)；rm23引物对(退火温度为48°C )上游引物:5，-cattggagtggaggctgg-3，(序列表的序列9)；下游引物:5，-gtcaggcttctgccattctc-3，(序列表的序列10)；rm244引物对(退火温度为48°C )上游引物5，-ccgactgttcgtccttatca-3，(序列表的序列11)；下游引物5’-ctgctctcgggtgaacgt-3，(序列表的序列 12)；rm253引物对(退火温度为48°C )上游引物5，-tccttcaagagtgcaaaacc-3，(序列表的序列13)；下游引物:5，-gcattgtcatgtcgaagcc-3，(序列表的序列14)；rm267引物对(退火温度为50°C )上游引物5，-tgcagacatagagaaggaagtg-3，(序列表的序列15)；下游引物5，-agcaacagcacaacttgatg-3，(序列表的序列16)；rm296引物对(退火温度为46°C )上游引物5，-cacatggcaccaacctcc-3‘(序列表的序列1了)；下游引物5，-gccaagtcattcactact-3，(序列表的序列18)；rm223引物对(退火温度为50°C )上游引物5，-gagtgagcttgggctgaaac-3‘(序列表的序列I9)；下游引物5，-gaaggcaagtcttggcactg-3‘(序列表的序列2O)；rm258引物对(退火温度为48°C )上游引物5，-tgctgtatgtagctcgcacc-3，(序列表的序列21)；下游引物:5，-tggccttaaagctgtcgc-3，(序列表的序列22)；分别合成以上各条引物，以上各条引物组成引物组合物，各条引物单独包装。实施例2、引物组合物的应用428份水稻材料均属于籼稻亚种，均获自于中国国家作物种质资源库，表2中所列统一编号为每份材料在中国国家作物种质资源库的统一编号(参见http://iCgr. caas. net. cn/) 0张冬玲等Q009)利用SSR标记和中国稻种资源初级核心种质分析遗传结构和地理演化，将籼亚种分为早籼生态型、晚籼生态型和中间型生态型三个生态型(^iang Dongling, Zhang Hongliang, Wang Meixing, Sun Junli, Qi Yongwen, Wang Fengmei, Wei Xinghua,Han Longzhi,Wang Xiangkun,Li Zichao. The Hierarchical Genetic Structure and Differentiation of Oryza sativa L. in China Revealed by MicrosatelIites. Theor Appl Genet 2009116(6) :1105-1117)。依照文献的划分标准，4 份水稻材料中，早籼生态型品种157份、中间型生态型品种99份、晚籼生态型品种172份。应用实施例1制备的引物组合物分别鉴定4 份水稻材料，步骤如下一、CTAB法提取水稻的基因组DNA(1)称取0. 4g-0. 5g的新鲜叶片，在研钵中加入液氮迅速研磨粉碎，然后转入 1. 5ml的无菌离心管中。
(2)每管加入预热65°C的CTAB提取缓冲液(pH8. 0) 700 μ 1 (配方见表1)，65°C水浴30分钟，每隔5分钟取出摇勻一次。(3)加入400 μ 1氯仿/异戊醇04 1)轻柔混摇10分钟，然后12000转/分钟离心10分钟。(4)取上清液转入另一 1.5ml的无菌离心管中，加入300 μ 1氯仿/异戊醇 (24 1)轻柔混摇10分钟，然后以12000转/分钟离心10分钟；(5)将上清液再次转入新的1. 5ml的无菌离心管中，加入等体积的预冷的(_20°C ) 异丙醇和1/10体积的预冷的(_20°C)乙酸钠(pH = 5. 2)，将离心管上下颠倒数次，置于-20°C冰箱30分钟以上。(6)将离心管以12000转/分钟离心10分钟，取沉淀。(7) 70%乙醇漂洗沉淀两次，无水乙醇漂洗一次，离心后，小心去掉乙醇。(8)晾干或风干后加入灭菌水溶解，使终浓度达到20ng/y 1，备用。表1提取缓冲液的配方(1000ml) pH = 8.0
权利要求
1.辅助鉴别水稻籼亚种生态型的引物组合物，由rm216引物对、rm225引物对、rm235 引物对、rm25引物对、rm23引物对、rm244引物对、rm253引物对、η 67引物对、rm296引物对、rm223引物对和rm258引物对组成；所述rm216引物对为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述rm225引物对为序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对；所述rm235引物对为序列表的序列5所示DNA和序列表的序列6所示DNA组成的引物对；所述rm25引物对为序列表的序列7所示DNA和序列表的序列8所示DNA组成的引物对；所述rm23引物对为序列表的序列9所示DNA和序列表的序列10所示DNA组成的引物对；所述rm244引物对为序列表的序列11所示DNA和序列表的序列12所示DNA组成的引物对；所述rm253引物对为序列表的序列13所示DNA和序列表的序列14所示DNA组成的引物对；所述rm267引物对为序列表的序列15所示DNA和序列表的序列16所示DNA组成的引物对；所述η 96引物对为序列表的序列17所示DNA和序列表的序列18所示DNA组成的引物对；所述rm223引物对为序列表的序列19所示DNA和序列表的序列20所示DNA 组成的引物对；所述rm258引物对为序列表的序列21所示DNA和序列表的序列22所示DNA 组成的引物对。
2.如权利要求1所述引物组合物，其特征在于所述水稻籼亚种生态型为早籼生态型、 中间型生态型或晚籼生态型。
3.权利要求1所述引物组合物在辅助鉴别水稻籼亚种生态型中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述水稻籼亚种生态型为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。
5.权利要求1所述的引物组合物在制备辅助鉴别水稻籼亚种生态型的试剂盒中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述水稻籼亚种生态型为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。
7.一种辅助鉴别水稻籼亚种生态型的试剂盒，含有权利要求1所述的引物组合物。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述水稻籼亚种生态型为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。
9.一种应用权利要求1所述引物组合物辅助鉴别水稻籼亚种生态型的方法，包括如下步骤(1)以待测水稻的基因组DNA为模板，分别用所述rm216引物对、所述rm225引物对、 所述rm235引物对、所述rm25引物对、所述rm23引物对、所述η 44引物对、所述rm253引物对、所述rm267引物对、所述η 96引物对、所述rm223引物对和所述rm258引物对进行 PCR扩增，得到PCR扩增产物；(2)检测采用各个所述引物对得到的所述PCR扩增产物，按照如下标准进行赋值采用所述RM216引物对，如果得到130bp的PCR扩增产物、rm216_130 = 1，如果没有得到 130bp 的 PCR 扩增产物、rm216_130 = 0 ；采用所述rm225引物对，如果得到146bp的PCR扩增产物、rm225_146 = 1，如果没有得到 146bp 的 PCR 扩增产物、rm225_146 = 0 ；采用所述rm235引物对，如果得到IMbp的PCR扩增产物、rm235_124 = 1，如果没有得到 124bp 的 PCR 扩增产物、rm235_124 = 0 ；采用所述rm25引物对，如果得到148bp的PCR扩增产物、rm25_148 = 1，如果没有得到 148bp 的 PCR 扩增产物、rm25_148 = 0 ；采用所述rm223引物对，如果得到147bp的PCR扩增产物、rm223_147 = 1，如果没有得到 147bp 的 PCR 扩增产物、rm223_147 = 0 ；采用所述rm23引物对，如果得到134bp的PCR扩增产物、rm23_134 = 1，如果没有得到 134bp 的 PCR 扩增产物、rm23_134 = 0 ；采用所述rm244引物对，如果得到152bp的PCR扩增产物、η 44_152 = 1，如果没有得到 152bp 的 PCR 扩增产物、ηι 44_152 = 0 ；采用所述rm258引物对，如果得到122bp的PCR扩增产物、rm258_122 = 1，如果没有得到 122bp 的 PCR 扩增产物、rm258_122 = 0 ；采用所述rm244引物对，如果得到151bp的PCR扩增产物、η 44_151 = 1，如果没有得到 151bp 的 PCR 扩增产物、ηι 44_151 = 0 ；采用所述rm253引物对，如果得到140bp的PCR扩增产物、rm253_140 = 1，如果没有得到 140p 的 PCR 扩增产物、rm253_140 = 0 ；采用所述rm267引物对，如果得到156bp的PCR扩增产物、η 67_156 = 1，如果没有得到 156ρ 的 PCR 扩增产物、rm267_156 = 0 ；采用所述rm296引物对，如果得到118bp的PCR扩增产物、η 96_118 = 1，如果没有得到 118ρ 的 PCR 扩增产物、ηι 96_118 = 0 ；采用所述rm23引物对，如果得到144bp的PCR扩增产物、rm23_144 = 1，如果没有得到 144p 的 PCR 扩增产物、rm23_144 = 0 ；(3)将步骤( 得到的各个赋值代入如下判别式a = (0.6*rm216_130+0. 59*rm225_146+0. 91*rm235_124+0. 74*rm25_148)/ (0. 6+0. 59+0. 91+0. 74)；b = (l*rm223_147+0.67*rm23_l34+0.51*rm244_152+1*rm258_122)/ (1+0. 67+0. 51+1)；c = (0.6*rm244_151+0. 64*rm253_140+0. 7*rm267_156+0. 61*rm296_l18+0. 67打 m23_144)/(0. 6+0. 64+0. 7+0. 61+0. 67)。对于该水稻品种，如果a > b且a > c，待测水稻为候选的早籼稻生态型； 对于该水稻品种，如果b > 3且13 > c，待测水稻为候选的中间型生态型； 对于该水稻品种，如果c > a且c > b，待测水稻为候选的晚籼稻生态型； 所述水稻籼亚种生态型为早籼生态型、中间型生态型或晚籼生态型。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于采用所述rm216引物对进行所述PCR扩增的退火温度为48°C ；采用所述rm225引物对进行所述PCR扩增的退火温度为48°C ；采用所述rm235引物对进行所述PCR扩增的退火温度为50°C;采用所述rm25引物对进行所述PCR 扩增的退火温度为50°C;采用所述rm23引物对进行所述PCR扩增的退火温度为48°C;采用所述rm244引物对进行所述PCR扩增的退火温度为48°C ；采用所述rm253引物对进行所述 PCR扩增的退火温度为48°C;采用所述rm267引物对进行所述PCR扩增的退火温度为50°C; 采用所述η 96引物对进行所述PCR扩增的退火温度为46°C ；采用所述rm223引物对进行所述PCR扩增的退火温度为50°C ；采用所述rm258引物对进行所述PCR扩增的退火温度为 48 "C。
全文摘要
本发明公开了一种用于鉴别水稻籼亚种生态型的引物组合物及其应用。所述引物组合物由如下引物对组成序列1和2所示DNA组成rm216引物对、序列3和4所示DNA组成rm225引物对、序列5和6所示DNA组成rm235引物对、序列7和8所示DNA组成rm25引物对、序列9和10所示DNA组成rm23引物对、序列11和12所示DNA组成rm244引物对、序列13和14所示DNA组成rm253引物对、序列15和16所示DNA组成rm267引物对、序列17和18所示DNA组成rm296引物对、序列19和20所示DNA组成rm223引物对、序列21和22所示DNA组成rm258引物对。该引物组合物可用于水稻籼亚种生态型鉴定，具有快捷高效、灵敏度高、分辨力好、结果准确可靠等优点。
文档编号C12Q1/68GK102296123SQ20111027184
公开日2011年12月28日 申请日期2011年9月14日 优先权日2011年9月14日
发明者宋立莹, 张冬玲, 张洪亮, 李自超, 王凤梅, 王美兴, 马占峰 申请人:中国农业大学