专利名称：一种胰蛋白酶水解鱿鱼皮提取胶原蛋白肽的方法
技术领域：
本发明生物技术中蛋白质材料领域，具体涉及胰蛋白酶水解鱿鱼皮提取胶原蛋白肽的方法。
背景技术：
胶原蛋白在医药、保健、食品及美容等领域已获得了广泛的应用(PhanatKitfphattanabawon,Soottawat Benjakul. Characterisation of acid-soluble collagenfrom skin and bone of bigeye snapper(Priacanthus tayenus)[J]. Food Chemistry,2005,89 :363-372.)。目前所利用的胶原蛋白主要是从陆生动物的结缔组织中提取。近年来疯牛病、疯羊病、口蹄疫、禽感感等疾病不断出现，陆生动物来源的胶原蛋白在应用方面
受至丨J了极大限制(Phanat Kitfphattanabawon, Soottawat Benjakul. Characterisation ofacid-soluble collagen from skin and bone of bigeye snapper(Priacanthus tayenus)[Jl.Food Chemistry, 2005,89 :363-372.)。因此，水产动物胶原蛋白的开发和应用已引起了广泛重视。生物活性肽的保健功能和药理作用是目前研究的热点。通过蛋白酶定向水解得到的胶原蛋白活性肽，具有特殊的生理功效，主要体现在免疫调节、抗氧化、抑菌、活化细胞及促进皮肤和胶原蛋白合成等方面(Nokos K,A lexis J A. Chondroitin proteoglycansfrom squid skin-1solation, characterization and immunological studies[J]. EurJBiochem，1990，192 :33-38.)。鱿鱼为软体动物门、头足纲、枪乌贼科海产动物，分布广泛。随着我国海洋鱿钓业的迅速发展，鱿鱼已成为我国主要的水产加工原料(曾庆祝，许庆陵，等.鱿鱼皮胶原蛋白的功能特性[J].水产学报.2009，33 (I) :139-144.)。鱿鱼年加工量约为30 40万吨，在加工过程中会产生包括头、足、内脏及表皮等废弃物，其中鱿鱼皮占加工量的8% -13%，但大部分被制成低附加值的鱼粉或者直接丢弃。本实验鉴于鱿鱼皮中胶原蛋白含量丰富(约为其干重的70% -80% )和资源利用率低这一现状，开展胶原蛋白肽的制备工艺研究，为进一步开发以鱼皮胶原蛋白活性肽为基料医用食品、化妆品和保健品提供技术支撑，并提高企业的经济效益。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种胰蛋白酶水解鱿鱼皮提取胶原蛋白肽的方法，对提取工艺进行优化，具有提取工艺简单、酶解效果好的特点。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种胰蛋白酶水解鱿鱼皮提取胶原蛋白肽的方法，其特征在于包括以下步骤I)原料预处理把鱿鱼皮用水洗净捞出，切碎，放入稀碱水中浸泡以去除鱿鱼皮上的杂蛋白，然后将处理好的鱿鱼皮放入HAc水溶液中溶解去除鱿鱼皮上的脂肪及溶胶；2)将预处理好的脱脂鱿鱼皮按鱿鱼皮湿重的2 4倍加水，调节pH值在7. 5 8. 5，按原料中鱿鱼皮重量的4 6%加入胰蛋白酶，在45 55°C下恒温酶解7 9h ;3)酶解完毕后，灭酶、过滤，取上清液浓缩，真空干燥得鱿鱼皮胶原蛋白肽产品。
作为优选，所述步骤I)的稀碱水采用质量浓度为0. 8 1. 2%0 NaOH水溶液，鱿鱼皮在NaOH水溶液中浸泡时间20 28h，并且至少连续重复三次。优选，所述步骤I)的HAc水溶液的质量浓度为0. 8 1. 2%。,温度为40 50°C。再优选，所述步骤2)的pH值为8，胰蛋白酶的加入量为原料中鱿鱼皮重量的5%，在50°C下恒温酶解8h。最后，所述步骤3)的灭酶是在95 105°C下处理8 12min。与现有技术相比，本发明的优点在于以鱿鱼加工后的废弃鱿鱼皮作为原料采用酶法提取胶原蛋白肽，不仅资源丰富、成本低，还可以减少对环境的污染，提高水产品加工利用水平；同时提取工艺简单、酶解效果好，鱿鱼皮胶原蛋白肽水解度可达26. 1%，清除羟自由基率为79.8%，制得的鱿鱼皮胶原蛋白肽可作为基料应用于医用食品、化妆品和保健品等领域。
图1是pH对水解度和清除羟自由基率的影响；图2是温度对水解度和清除羟自由基率的影响；图3是加酶量对水解度和清除羟自由基率的影响；图4是时间对水解度和清除羟自由基率的影响。
具体实施例方式以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。1.材料与方法1.1 原料秘鲁鱿鱼皮(Dosidicus eschrichitii Steenstru),由浙江兴业集团有限公司提供，清洗后于-18°C冻藏。1. 2 试剂指示剂甲基红、溴甲酚绿。酶制剂木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，购自亚太恒信生物科技(北京)有限公司；胰蛋白酶，购自无锡市雪梅酶制剂科技有限公司。试剂盐酸、硫酸、氢氧化钠、柠檬酸、硼酸、硫酸钾、硫酸铜、甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、邻二氮菲、硫酸亚铁、乙醇、过氧化氢，以上试剂均为分析纯。1. 3仪器设备DHG-9140A型电热鼓风干燥箱上海一-〖亘科学仪器有限公司；UV-752PC型紫外分光光度计上海光谱仪器有限公司；CF16RX II型高速冷冻离心机日本日立公司；PHD200B型便携式酸度计上海之信仪器有限公司。1. 4 方法1. 4.1原料预处理把鱿鱼皮用水洗净捞出，切碎，放入1%。NaOH水溶液中，浸泡24h，至少连续三次，以去除鱿鱼皮上的杂蛋白。将上述处理好的鱿鱼皮放入装有1%。撤(水溶液中，40-501下，至少连续三次，以去除鱼皮上的脂肪并溶胶(丛日山，中国海洋大学，一种用鱼皮生产胶原蛋白肽的工艺中国，200410024145.1 [P]. 2005-02-23.)。1.4. 2鱼皮胶原蛋白肽制备将预处理好的脱脂鱿鱼皮按鱼皮湿重的3倍加水，调节到一定温度，并调节pH值，按原料中鱿鱼皮重量的5%加蛋白酶，恒温酶解7h，酶解完毕后，100°C灭酶lOmin，过滤，取上清液浓缩，真空干燥得鱼皮胶原蛋白肽产品。1. 4. 3基本成分分析水分含量测定按照GB/T5009. 3-2003 (GB/T5009. 3-2003.食品中水分的测定)；灰分含量测定按照GB/T5009. 4-2003 (GB/T5009. 4-2003.食品中灰分的测定)；蛋白质含量测定按照GB/T5009. 5-2003 (GB/T5009. 5-2003食品中蛋白质的测定)；脂肪含量测定按照GB/T5009. 6-2003 (GB/T5009. 6-2003.食品中脂肪的测定)。1.4. 4水解度测定(I)总氮测定采用微量凯氏定氮法(2)氨基态氮的测定采用甲醛滴定法(赵新淮，冯志彪蛋白质水解物水解度的测定[J].食品科学，1994，11 :65-67.)取水解蛋白液5. OOmL于小烧杯中，加入60mL去CO2水中，磁力搅拌并用精密pH指示其pH。先用0. lmol/L标准NaOH滴定至pH8. 2,加入已中和好的甲醒溶液20mL,记录滴至PH9. 2时所消耗的0. 05mol/L溶液的体积，计算其含氮量。(3)水解度的计算水解度的计算下式进行。
权利要求
1.一种胰蛋白酶水解鱿鱼皮提取胶原蛋白肽的方法，其特征在于包括以下步骤 1)原料预处理把鱿鱼皮用水洗净捞出，切碎，放入稀碱水中浸泡以去除鱿鱼皮上的杂蛋白，然后将处理好的鱿鱼皮放入HAc水溶液中溶解去除鱿鱼皮上的脂肪及溶胶； 2)将预处理好的脱脂鱿鱼皮按鱿鱼皮湿重的2 4倍加水，调节pH值在7.5 8. 5，按原料中鱿鱼皮重量的4 6%加入胰蛋白酶，在45 55°C下恒温酶解7 9h ; 3)酶解完毕后，灭酶、过滤，取上清液浓缩，真空干燥得鱿鱼皮胶原蛋白肽产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤I)的稀碱水采用质量浓度为0.8 1. 2% NaOH水溶液，鱿鱼皮在NaOH水溶液中浸泡时间20 28h，并且至少连续重复三次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤I)的HAc水溶液的质量浓度为0.8 1. 2%。，温度为 40 50°C。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2)的pH值为8，胰蛋白酶的加入量为原料中鱿鱼皮重量的5%，在50°C下恒温酶解8h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤3)的灭酶是在95 105°C下处理 8 12min。
全文摘要
本发明涉及一种胰蛋白酶水解鱿鱼皮提取胶原蛋白肽的方法，其特征在于步骤1)原料预处理把鱿鱼皮用水洗净捞出，切碎，放入稀碱水中浸泡以去除鱼皮上的杂蛋白，然后将处理好的鱿鱼皮放入HAc水溶液中以溶解去除鱼皮上的脂肪及溶胶；2)将预处理好的脱脂鱿鱼皮按鱿鱼皮湿重的2～4倍加水，调节pH值在7.5～8.5，按原料中鱿鱼皮重量的4～6％加入胰蛋白酶，在45～55℃下恒温酶解7～9h；3)酶解完毕后，灭酶、过滤，取上清液浓缩，真空干燥得鱼皮胶原蛋白肽产品。以鱿鱼加工后的废弃鱿鱼皮作为原料采用酶法提取胶原蛋白肽，不仅资源丰富、成本低，还可以减少对环境的污染，提高水产品加工利用水平，制得的鱿鱼皮胶原蛋白肽可作为基料应用于医用食品、化妆品和保健品等领域。
文档编号C12P21/06GK102994597SQ20111028051
公开日2013年3月27日 申请日期2011年9月15日 优先权日2011年9月15日
发明者杨会成, 郑斌, 许丹, 廖妙飞, 周宇芳, 钟明杰, 付万冬, 傅光明 申请人:浙江省海洋开发研究院