专利名称：一种利用胰蛋白酶定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体是指一种利用胰蛋白酶定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法。
背景技术：
鹌鹑蛋是我国传统的营养滋补类食品，其因营养丰富、味道鲜美而深受人们喜爱， 而且无论是蛋白质含量还是氨基酸结构都远优于鸡蛋。鹌鹑蛋蛋清中含人体所必须的8种必需氨基酸，尤其是含硫氨基酸较多，经动物实验证明蛋清蛋白是一种比奶酪更好的蛋白质。过去的科学研究认为，蛋白质经消化道酶促水解后，主要以氨基酸的形式被吸收。 近两年的科学研究认为，人体吸收蛋白质的主要形式不是以氨基酸，而是以多肽的形式吸收的，这是人体吸收蛋白质机制研究的重大突破。将蛋白质以多肽形式供应人体后具有不需消化、直接吸收、吸收快速并且百分之百被人体吸收的优点。因此采用酶解工艺将鹌鹑蛋清蛋白定向水解为可溶性肽更加有利于人体的吸收。申请号为200810197415的专利申请文件公开了一种蛋清蛋白多肽制备工艺，该工艺步骤为
1)取若干克蛋清蛋白，加入足够的蒸馏水，混合搅拌并研磨成均勻的蛋清蛋白浆液；
2)将上述步骤1中蛋清蛋白浆液的温度升高至40 60°C、将蛋清蛋白浆液的PH值调节至7. 0 9. 0的范围；再将其温度升高至60 80°C、pH值维持在7. 0 9. 0的范围，加入所取蛋清蛋白重量6 8%的植物蛋白水解专用酶进行第一次酶解，在此过程中维持其温度在40 60°C、pH值在7. 0 9. 0的范围，持续5 7小时，得到第一次酶解液；
3)将上述步骤2中酶解液的温度升高至70 90°C的范围，并保持10 30分钟，使其中的植物蛋白水解专用酶灭活，将经过酶灭活处理的第一次酶解液的温度降低至40 60°C、pH值维持在7. 0 9. 0的范围，加入所取蛋清蛋白重量2 4%的B-环糊精，在此过程中维持其温度在40 60°C、pH值在7. 0 9. 0的范围，持续2 4小时，得到第二次己去除苦味的蛋清蛋白溶液；
4)将上述步骤3中得到的第二次己去除苦味的蛋清蛋白溶液的温度降低至50°C以下进行过滤处理，再静置3 5小时得到蛋清蛋白上清液，在所得的上层清液中加入占其体积 1 3%的活性岌粉末，持续搅拌并加热升温至微沸，保持20 40分钟，然后再次进行过滤处理，得到已除去异味成份的蛋清蛋白多肽滤液；
5)将上述步骤4中得到的蛋清蛋白多肽滤液再经过真空浓缩和干燥后，制得无苦味的的蛋清蛋白多肽粉。上述步骤通过步骤1、步骤2即可得到多肽液，步骤3、4、5是对多肽液品质的进一步提升及再加工，包括脱苦、去异味、生产多肽粉。但是该方法步骤2中提出蛋清蛋白浆液的温度范围值60-80°C属于蛋白质的可逆变性范畴，不能将蛋清蛋白或其他蛋白进行非可逆变性，同时蛋清中的干扰蛋清蛋白降解的抑制性酶类也不能得以破坏，降低了蛋清蛋白寡肽的酶解效率；同时该申请文件中指出对蛋清蛋白浆液进行酶解选用植物蛋白水解专用酶，我们知道对不同蛋白质进行水解，酶种类的选择非常重要，选用不同的酶对蛋白质进行酶解效率及最终产品品质都有较大区别，根据该申请文件不能得知何种酶可以达到最佳酶解效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种效率高、产品品质好的定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法，以克服目前蛋清蛋白多肽制备工艺中效率低、步骤繁琐的技术问题。本发明采用的技术方案为一种利用胰蛋白酶定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法，该方法包括下列步骤
A、取鹌鹑蛋蛋清，加入其重量1-5倍的水勻浆Ι-lOmin，得到鹌鹑蛋清勻浆液；
B、将步骤A得到的鹌鹑蛋清勻浆液煮沸3 5min，使其彻底变性，得鹌鹑蛋清变性液；
C、将步骤B得到的蛋清变性液离心分离，参数100(T5000r/min、时间3 15min，弃去上清液，保留沉淀溶液得鹌鹑蛋清蛋白沉淀液；
D、在步骤C得到的鹌鹑蛋清蛋白沉淀液中加入其重量3-5倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量100-400 u/g底物，pH调至8-10，温度为40-60°C，时间为4-6 h，得鹌鹑蛋清可溶性肽溶液。上述步骤在步骤D之后还包括将可溶性肽溶液喷雾干燥得到寡肽干粉。本发明的有益效果为步骤B通过加热煮沸变性可使蛋清蛋白达到不可逆变性， 进而可以通过离心与可溶性物质达到分离；同时通过步骤B的变性及步骤C的离心分离可以使得蛋清中的干扰蛋清蛋白降解的抑制性酶类得以破坏，可以显著提高鹌鹑蛋蛋清蛋白寡肽的酶解效率。本方法通过对多种蛋白酶的酶解效果进行比较，采用胰蛋白酶不仅具有酶解效率高，同时酶解液不具有较重的苦味、腥味或异味，可以将酶解后的产物经喷雾干燥或直接勾兑制成寡肽产品，不需要额外的去苦、去异味工序，进而降低生产成本的目的。
附图为7种酶进行酶解的水解度对比图。
具体实施例方式实施例1
人工剥离鹌鹑蛋蛋皮，分离蛋清及蛋黄，将剥开的蛋黄称重，然后装置于样品袋内，放置于4°C冰箱保存；将剥开的蛋清加入其重量3倍的水勻浆5min，得鹌鹑蛋清勻浆液；将鹌鹑蛋清勻浆液煮沸变性細^，使其彻底变性，得鹌鹑蛋清变性液；将蛋清变性液离心分离，参数3000r/min、时间lOmin，弃去上清液，保留沉淀溶液得鹌鹑蛋清蛋白沉淀液，鹌鹑蛋清蛋白沉淀液若需保存放入4°C冰箱保存；鹌鹑蛋清蛋白沉淀液中加入其重量4倍的水， 加入胰蛋白酶，加酶量188 u/g底物，pH调至8，温度为52°C，时间为5 h，得鹌鹑蛋清可溶性肽溶液。利用i^olin-酚法测定水解度，将会得到水解度为91%的可溶性肽溶液，无异味， 口感较佳、性状良好。实施例2
人工剥离鹌鹑蛋蛋皮，分离蛋清及蛋黄，将剥开的蛋黄称重，然后装置于样品袋内，放置于4°C冰箱保存；将剥开的蛋清加5倍体积的水勻浆IOmin得鹌鹑蛋清勻浆液；将鹌鹑蛋清勻浆液煮沸变性&iiin，使其彻底变性，得鹌鹑蛋清变性液；将蛋清变性液离心分离，参数5000r/min、时间15min，弃去上清液，保留沉淀溶液得鹌鹑蛋清蛋白沉淀液，鹌鹑蛋清蛋白沉淀液若需保存放入4°C冰箱保存；鹌鹑蛋清蛋白沉淀液中加入其重量3倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量400 u/g底物，pH调至10，温度为60°C，时间为6 h，得鹌鹑蛋清可溶性肽溶液。利用i^olin-酚法测定水解度，将会得到水解度为91%的可溶性肽溶液，将可溶性肽溶液喷雾干燥得到寡肽干粉，提高了产品的可溶性，可应用于功能性饮料及保健品等方面， 扩大了活性肽的应用领域。实施例3
人工剥离鹌鹑蛋蛋皮，分离蛋清及蛋黄，将剥开的蛋黄称重，然后装置于样品袋内，放置于4°C冰箱保存；将剥开的蛋清加入其重量1倍的水勻浆lmin，得鹌鹑蛋清勻浆液；将鹌鹑蛋清勻浆液煮沸变性:3min，使其彻底变性，得鹌鹑蛋清变性液；将蛋清变性液离心分离，参数lOOOr/min、时间3min，弃去上清液，保留沉淀溶液得鹌鹑蛋清蛋白沉淀液，鹌鹑蛋清蛋白沉淀液若需保存放入4°C冰箱保存；鹌鹑蛋清蛋白沉淀液中加入其重量5倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量100 u/g底物，pH调至9，温度为40°C，时间为4 h，得鹌鹑蛋清可溶性肽溶液。利用i^olin-酚法测定水解度，将会得到水解度为91%的可溶性肽溶液。上述实施例得到可溶性肽溶液经检测酶解液中的氨基酸组成及百分含量的比值如下表
表1酶解液中的氨基酸组成及百分含量分析结果
权利要求
1.一种利用胰蛋白酶定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法，该方法包括下列步骤A、取鹌鹑蛋蛋清，加入其重量1-5倍的水勻浆Ι-lOmin，得到鹌鹑蛋清勻浆液；B、将步骤A得到的鹌鹑蛋清勻浆液煮沸3 5min，使其彻底变性，得鹌鹑蛋清变性液；C、将步骤B得到的蛋清变性液离心分离，参数100(T5000r/min、时间3 15min，弃去上清液，保留沉淀溶液得鹌鹑蛋清蛋白沉淀液；D、在步骤C得到的鹌鹑蛋清蛋白沉淀液中加入其重量3-5倍的水，加入胰蛋白酶，加酶量100-400 u/g底物，pH调至8-10，温度为40-60°C，时间为4-6 h，得鹌鹑蛋清可溶性肽溶液。
2.根据权利要求1所述的一种利用胰蛋白酶定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法， 其特征在于所述步骤D之后还包括将可溶性肽溶液喷雾干燥得到寡肽干粉。
全文摘要
本发明属于生物技术领域。为克服目前蛋清蛋白多肽制备工艺中效率低、步骤繁琐的技术问题，本发明提供一种利用胰蛋白酶定向水解鹌鹑蛋清制备可溶性肽的方法，该方法包括将鹌鹑蛋清匀浆、煮沸变性、离心分离、胰蛋白酶酶解，得鹌鹑蛋清可溶性肽溶液。本方法采用胰蛋白酶不仅具有酶解效率高，同时酶解液不具有较重的苦味、腥味或异味，可以将酶解后的产物经喷雾干燥或直接勾兑制成寡肽产品，不需要额外的去苦、去异味工序，进而降低生产成本的目的。
文档编号C12P21/06GK102286583SQ201110175839
公开日2011年12月21日 申请日期2011年6月28日 优先权日2011年6月28日
发明者李晓琳, 李桂玲, 李泽瑶, 王鹏, 胡增淼 申请人:泰祥集团技术开发有限公司