专利名称：一种蛹虫草中多糖的提取纯化方法
技术领域：
本发明提供了一种蛹虫草中多糖的提取纯化方法，属于农产品深加工技术领域。
背景技术：
蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北冬虫夏草，与我国名贵中药材冬虫夏草(Cordyeeps sinensis)为同属异种，虫草多糖(CMPS)是蛹虫草中的重要的活性物质,虫草多糖的单糖组分为半乳糖甘露糖=6 :5，它以￠(1 — 2)连接的甘露糖为主干，支链由较大量的P (I — 6)半乳糖和较大量的0(1 — 2)呋喃半乳糖构成，分别连接在主干的0-4和
0-6上，是含少量蛋白有高度分支结构的杂多糖。虫草多糖已被证实具有抗肿瘤、降血糖、抗肝纤维化作用及对单核巨嗜细胞系统的增强作用，还能提高免疫功能及治疗肝的病毒性感 染等，具有广阔的开发前景。超滤膜是根据不同的分子量大小来截留分离不同物质的技术的是近年来国内外新发展的分离技术，其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、分级、纯化、浓缩目的的一种新型膜分离技术，并在医药领域(特别是天然药物精制)中广为应用，适合工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从蛹虫草中提取虫草多糖的方法。本发明包括以下步骤
1)蛹虫草中多糖的提取将粉碎后的蛹虫草原料和水以1:5 8的重量比连续回流提取2h后抽滤；将抽滤后的滤渣和水以1:3 5的重量比连续回流提取2h后抽滤，合并抽滤液；
2)蛹虫草中粗多糖的制备将合并后的抽滤液用蒸馏水分散至蛹虫草生药量为0.3
0.5g/ml的虫草水分散溶液；将虫草水分散液以氢氧化钠调pH值至9 10后循环上样于装柱后的大孔树脂，收集流出液；
3)虫草多糖精制纯化将收集的流出液pH值调至中性，以IOKDa的超滤膜透过，收集透过液，再以200KDa的超滤膜过滤所述透过液，取得虫草多糖溶液，再将浓缩虫草多糖溶液，取得虫草多糖。本发明采用大孔树脂和超滤膜联用分离蛹虫草多糖的技术，具有高效、温和、工艺简单的特点，适合规模化推广应用。本发明可以将蛹虫草原料中的多糖低温提取，最大限度地保持了多糖的生物活性；利用大孔树脂分离及超滤膜纯化后可去除提取物中的多糖和蛋白成分，使提取物中的多糖含量达到68%，精多糖得率为6. 7%。产品蛹虫草中多糖缩物杂质少，活性高，采用该技术具有工艺简单，效率高，条件温和，且无污染等优点，能有效降低分离成本。产品蛹虫草中多糖活性高，既可以作为生产虫草多糖单体的原料，也可以直接作为保健品和功能食品的添加剂。本发明的主要优点和积极效果具体说明如下
I、本发明采用水热回流提法提取多糖，最大限度地保持了多糖的生物活性，粗多糖提取率达到88%。 2、利用大孔树脂和超滤膜联用分离纯化多糖，可根据活性多糖的分子量大小，进行针对性分离，利用大孔树脂有效去除提取物中的大部分多糖和蛋白成分，利用超滤膜能针对多糖分子量大小，针对性收集活性多糖，获得产品的生物活性、纯度较高。3、另外，本发明采用超滤方法具有超滤过程是在常温下进行，条件温和无成分破坏；滤过程不发生相变化，无需加热，能耗低，无需添加化学试剂，无污染，是一种节能环保的分离技术；超滤技术分离效率高，对稀溶液中的微量成分的回收、低浓度溶液的浓缩均非常有效；分离装置简单、流程短、操作简便、易于控制和维护。另外，本发明所述步骤2)中虫草水分散溶液与大孔树脂的重量比为1:1. 5 2，以保证虫草水分散液中多糖被完全吸附。所述步骤2)中流出液的流出速度为30 50ml/min，此速度流出可保证多糖不被流出液流出力的影响而解吸附。
图I为多糖测定标准曲线图。
具体实施例方式一、提取工艺
I、虫草多糖的提取
蛹虫草子实体3kg，粉碎(粗粉为宜)，投入多功能提取罐中，加入15 24 kg的水连续回流提取2h,抽滤。取抽滤后的滤渣继续用加3至5倍重量的水回流提取，连续回流提取2h，抽滤。合并两滤液。2、蛹虫草中粗多糖的制备
(I)将合并后的抽滤液用蒸馏水分散至蛹虫草生药量为0. 3 0. 5g/ml的虫草水分散溶液6L，用氢氧化钠溶液调节溶液pH到9 10，备用。(2)大孔树脂的初步纯化
取HPD-D大孔树脂(沧州宝恩化工有限公司生产)3kg装入0 800 mm X 1000 mm不锈钢层析柱，处理后待用(先用3%的盐酸洗脱两个柱体积，然后用自来水洗至中性，然后用3%的氢氧化钠洗脱两个柱体积，再用自来水洗至中性，最后用蒸馏水洗脱两个柱体积后备用)。说明将本发明方法所用树脂为沧州宝恩化工有限公司生产，型号为HPD-D。将调好pH值的的虫草水分散溶液上HPD-D大孔树脂，循环上样，控制流出液速度约为30 50ml/min，收集流出液，洗脱完后再用较高浓度的乙醇洗脱处理大孔树脂柱(洗脱液可回收高浓度的乙醇继续使用)，醇洗后用自来水洗脱至无醇味，用水洗脱两个柱体积后即可进行下次上样)。(3)精制纯化收集流出液并用硫酸溶液调pH至中性，以IOKDa的超滤膜透过，去除小分子杂质后，收集透过液再以200KDa的超滤膜过滤，得虫草多糖溶液，减压真空浓缩，获的虫草多糖200g，得率为6. 7%，纯度为66%。二、产品分析
测定方法利用硫酸蒽酮法进行多糖含量的测定，测定方法如下
1、实验材料
电热恒温水浴锅(北京市医疗设备厂生产)，布氏抽滤漏斗，95%乙醇，丙酮，浓硫酸均为分析醇；岛津UV-2501PC紫外分光光度计；1200SM岛津电子分析天平。2、实验方法 2.I测定波长的选择
取含量测定用D-无水葡萄糖(中国药品生物制品鉴定所，批号110833-200302)于105°C干燥至恒重，精密称取干燥后的D-无水葡萄糖适量加水溶解制成每Iml含0. 2mg的溶液作为对照品溶液。在500-700nm范围内做光谱扫描，确定其最大吸收在624nm处
2.2标准曲线
精密称取105%干燥至恒重的无水D-无水葡萄糖对照品10mg，置50ml容量瓶中，力口蒸馏水稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述对照品各0. 5、I、I. 5、2和2. 5,3ml于IOml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。再分别精密吸取Iml于IOml纳氏比色管中，加入蒽酮试液0. 5ml和浓硫酸3ml,放冷至室温后，于624nm处测定吸收度值。以水同法加入试剂显色作为空白对照。分别以浓度为横坐标，吸收度值为纵坐标做标准曲线，结果如图I所示。2. 3测定方法
精密称取多糖Ig用水定容于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，再精密吸取2ml置于IOml容量瓶中用蒸馏水定容，摇匀，再精密吸取Iml于纳氏比色管中，加入蒽酮试液0. 5ml和浓硫酸3ml，放冷至室温后，于624nm处测定吸收度值，计算即得多糖含量。
权利要求
1.ー种蛹虫草中多糖提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤 .1)蛹虫草中多糖的提取将粉碎后的蛹虫草原料和水以1:5 8的重量比连续回流提取2h后抽滤；将抽滤后的滤渣和水以1:3 5的重量比连续回流提取2h后抽滤，合并抽滤液； .2)蛹虫草中粗多糖的制备将合并后的抽滤液用蒸馏水分散至蛹虫草生药量为O.3 .O.5g/ml的虫草水分散溶液；将虫草水分散液以氢氧化钠调pH值至9 10后循环上样于装柱后的大孔树脂，收集流出液； .3)虫草多糖精制纯化将收集的流出液pH值调至中性，以IOKDa的超滤膜透过，收集透过液，再以200KDa的超滤膜过滤所述透过液，取得虫草多糖溶液，再将浓缩虫草多糖溶液，取得虫草多糖。
2.权利要求I所述ー种蛹虫草中多糖提取纯化方法，其特征在于所述步骤2)中虫草水分散溶液与大孔树脂的重量比为1:1. 5 2。
3.权利要求I或2所述ー种蛹虫草中多糖提取纯化方法，其特征在于所述步骤2)中流出液的流出速度为30 50ml/min。
全文摘要
一种蛹虫草中多糖的提取纯化方法，属于农产品深加工技术领域，包括蛹虫草中多糖的提取、蛹虫草中粗多糖的制备和虫草多糖精制纯化三大步骤，具有高效、温和、工艺简单的特点，适合规模化推广应用。本发明可以将蛹虫草原料中的多糖低温提取，最大限度地保持了多糖的生物活性；利用大孔树脂分离及超滤膜纯化后可去除提取物中的多糖和蛋白成分，使提取物中的多糖含量达到68%，精多糖得率为6.7%。采用该技术具有工艺简单，效率高，条件温和，且无污染等优点，能有效降低分离成本。产品蛹虫草中多糖活性高，既可以作为生产虫草多糖单体的原料，也可以直接作为保健品和功能食品的添加剂。
文档编号A23L1/09GK102633900SQ20121013419
公开日2012年8月15日 申请日期2012年5月3日 优先权日2012年5月3日
发明者刘红锦, 周余庆, 彭国平, 蒋宁 申请人:江苏省农业科学院, 海安县泓寿生物技术有限责任公司