专利名称：抗hiv基因工程重组病毒及其制备方法及抗hiv基因工程药物的制作方法
技术领域：
本发明属于生物制药技术领域，涉及抗HIV基因工程病毒，更具体地，涉及抗HIV基因工程重组病毒及其制备方法及抗HIV基因工程药物。
背景技术：
在HIV病毒的感染过程中，首先是HIV病毒包被膜与靶细胞的细胞膜发生融合。该融合过程主要由包被糖蛋白gpl20和跨膜亚基gp41介导。gpl20与靶细胞上的⑶4分子和辅助受体(趋化因子受体CCR5或CXCR4等)先后结合，导致gp41的构型发生改变，形成6股α 2螺旋束核心结构，将病毒包被膜与靶细胞的细胞膜拉近并发生融合，完成HIV病毒进入宿主细胞的感染过程。上述过程中可看出，HIV病毒造成感染的特点是其对CD4分子具有高度的亲嗜性，可选择性地与⑶4分子結合。目前已经出现的ー些抗HIV抗体也主要是通过构建类似⑶4分子的结合位点优先与HIV病毒結合，从而降低HIV病毒与靶细胞结合的可能性。但是单一结合位点与HIV病毒的特异性结合作用有限，对HIV病毒的防治效果不明显。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术中的抗HIV抗体与HIV病毒的特异性结合作用有限、对HIV病毒感染的防治效果不明显的缺陷，提供一种可与HIV病毒特异性结合、有效预防和治疗HIV感染的抗HIV基因工程重组病毒及其制备方法及抗HIV基因エ程药物。本发明要解决的技术问题通过以下技术方案得以实现提供ー种抗HIV基因工程重组病毒，所述重组病毒包括人抗体的恒定区，其中，所述重组病毒还包括与所述人抗体的恒定区连接的⑶4和CCR5。在上述抗HIV基因工程重组病毒中，所述人抗体的恒定区为人抗体的重链恒定区和/或人抗体的轻链恒定区。 在上述抗HIV基因工程重组病毒中，所述人抗体的重链恒定区还包括激活人体免疫功能的抗体Fe片段。在上述抗HIV基因工程重组病毒中，所述⑶4和所述CCR5通过柔性连接肽与所述人抗体的重链恒定区柔性连接，所述柔性连接肽具有序列表中的氨基酸序列。在上述抗HIV基因工程重组病毒中，所述人抗体的恒定区为IgG抗体的重链恒定区、IgA抗体的恒定区或IgM抗体的恒定区。根据本发明的另一方面，提供ー种上述抗HIV基因工程重组病毒的制备方法，其中，所述方法包括以下步骤Α:分别获取人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因；
B:采用病毒载体构建包括所述人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因的病毒载体的穿梭质粒；C :选用病毒辅质粒，使所述病毒辅质粒与步骤B的穿梭质粒共转化产生重组病毒质粒;D :将步骤C中形成的重组病毒质粒转染至细胞株中进行培养，得到重组病毒；E :离心收集上清或细胞进行纯化后得到所述重组病毒。在上述抗HIV基因工程重组病毒的制备方法中，在步骤A中，所述人抗体的恒定区基因为人抗体的轻链恒定区基因与IgG抗体的重链恒定区基因、IgA抗体的重链恒定区基 因或IgM抗体的重链恒定区基因。在上述抗HIV基因工程重组病毒的制备方法中，在步骤B中，所述真核表达载体包括 pShuttle、pAdTrack、pAdTrack-CMV、pdc316、pShuttle-CMV、pLenti、pGC-FU、pLVTHM 或p RRL o在上述抗HIV基因工程重组病毒的制备方法中，在步骤C中，所述病毒辅质粒为病毒骨架质粒PAdEasy-I ;在所述步骤D中，所述表达细胞株为293细胞、AD-293细胞或中国仓鼠卵巢细胞。根据本发明的另一方面，提供ー种抗HIV基因工程药物，所述抗HIV基因工程药物含有上述抗HIV基因工程重组病毒。实施本发明的技术方案，可以获得以下技术效果本发明的重组病毒同时具有可与HIV病毒上的⑶4位点和CCR5位点特异性结合的⑶4和CCR5，特异性结合作用显著增强，可以实现双重阻止HIV病毒感染宿主细胞的作用；本发明的制备方法エ艺简单、切实可行；具有本发明的重组病毒的抗HIV基因工程药物可有效作用于HIV病毒，从而有效预防和治疗HIV病毒感染。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一歩详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用干限定本发明。本发明的抗HIV基因工程重组病毒为人抗体的恒定区与⑶4和CCR5连接形成的重组病毒。其中⑶4和CCR5主要是替换了人抗体的可变区并与恒定区连接。这样构建的重组病毒不仅具有阻止HIV病毒感染宿主细胞的双重作用，而且由于该类抗体的主要部分为人抗体的恒定区，因此减少了异源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。另ー方面，本发明的抗HIV基因工程重组病毒的人抗体的重链恒定区还具有抗体Fe片段，其可执行病毒清除功能，进ー步完善该重组病毒对HIV病毒造成的感染的预防和治疗功效。本发明的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法包括以下步骤:A :分别获取人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因；B :采用重组病毒载体构建包括人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因的重组病毒载体的穿梭质粒；C :选用病毒辅质粒，使病毒辅质粒与步骤B的穿梭质粒共转化产生重组病毒质粒；D :将步骤C中形成的重组病毒质粒转染至细胞株中进行培养，得到重组病毒；E :离心收集上清或细胞进行纯化后得到重组病毒。通过细胞株表达可获得同时具有CD4和CCR5的重组病毒，该方法操作简便、便于实现上述重组病毒的扩大化生产。进ー步地，上述步骤A具体包括以下步骤Al :人抗体的重链恒定区基因的钓取设计合适的引物，从人血细胞cDNA中钓取人抗体的重链恒定区基因。由于恒定区基因非常保守，人抗体的重链恒定区基因的钓取比较容易。在美国国立生物信息中心(NCBI)、欧洲生物信息中心(EBI)、法国免疫球蛋白基因序列数据库(MGT)等数据库中，很容易找到人抗体的恒定区基因序列以及引物。在选择人抗体的重链恒定区基因时，本发明优选使用IgG抗体的重链恒定区基因、IgA抗体的重链恒定区基因或IgM抗体的重链恒定区基因(这样最后制备得到的重组病毒分别优选具有IgG抗体的重链恒定区、IgA抗体的重链恒定区和IgM抗体的重链恒定区)。以下则通过IgG抗体的重链恒定区基因展开详细 叙述。优选采用IgGl抗体，特别优选地，使用IgGl抗体的亚类K型，以有效发挥其生物学功能并延长其在人体内的半衰期。IgGl抗体的重链恒定区基因的钓取在美国国立生物信息中心(NCBI)、欧洲生物信息中心(EBI)、法国免疫球蛋白基因序列数据库(IMGT)等数据库中查找人IgGl重链恒定区基因序列，设计上游和下游引物，分别为上游引物的引物序列I :5，-GGC ACC TGG GM TGT TCC GM TGT TCC GTC TCC TCAGCC TCC ACC AAG-3，，下游引物的引物序列2 :5’ -CGA AGA TCT TTT ACC CGG AGA CAG GGA GAG-3’，上游引物中引入⑶4基因序列，下游引物中引入Bgl II酶切位点.A2 :人抗体轻链恒定区基因L的钓取 从人血细胞cDNA中钓取人抗体的轻链恒定区基因。在美国国立生物信息中心(NCBI)、欧洲生物信息中心(EBI)、法国免疫球蛋白基因序列数据库(MGT)等数据库中，查找到人抗体的轻链恒定区基因序列以及引物。设计引物如下上游引物的引物序列3 :5’-GTG GGC TTG GM TGT TCC ACT GTG GCT GCA CCA TCTGTC-3，，下游引物的引物序列4 :5’ -CGA AGA TCT ACA CTC TCC CCT TTT GAA GCT-3，，上游引物中引入CCR5基因序列，下游引物中引入Bgl II酶切位点。A3:CD4基因的钓取在美国国立生物信息中心(NCBI)、欧洲生物信息中心(EBI)、法国免疫球蛋白基因序列数据库(MGT)等数据库中查找CD4基因序列(人CD4基因序列)，截取其表达在胞外的部分功能序列，并设计含有酶切位点的上下游引物，其中下游引物中引入柔性连接序列11，所述上游和下游引物具体为上游引物的引物序列5 :5’ -CTT GTC GAC ATG CAG GGA AAG AAA GTG GTG-3，，下游引物的引物序列6 :5’ -GGA ACA TTC CCA GGT GCC ACT ATC CTG-3’，上游引物中引入Sal I酶切位点，下游引物中引入IGG基因序列。A4 :CCR5基因的钓取在美国国立生物信息中心(NCBI)、欧洲生物信息中心(EBI)、法国免疫球蛋白基因序列数据库aMGT)等数据库中查找CCR5基因序列(人CCR5基因序列)，选择其表达在胞外的最后ー个环状区域及后面部分的功能蛋白序列，并设计含有酶切位点的上游和下游引物，其中下游引物中引入柔性连接序列11，所述上游和下游引物分别为上游引物的引物序列7 :5’ -CTT GTC GAC ATG ACG CAC TGC TGC ATC-3，，下游引物的引物序列8:5’-ACA CTC TCC CCT TTT TGA GGA ACA TTC CAA GCC CACAGA TAT TTC-3’，上游引物中引入Sal I酶切位点，下游引物中引入人抗体轻链恒定区基因L基因序列。A5 =IgGl抗体的重链恒定区基因、⑶4基因、CCR5基因及人抗体轻链恒定区基因L的PCR扩增从人新鲜血样中提取RNA，反转录成人cDNA，以人cDNA为模板，以IgGl抗体的重 链恒定区基因、CD4基因、CCR5基因及人抗体轻链恒定区基因L各自的上游和下游引物分别扩增，各自得到约1000bp、500bp、200bp和300bp大小的基因片段。同时设计引物扩增IRES用于连接⑶4-IgGl与CCR5-L，构建双蛋白表达载体。引物设计如下上游引物的引物序列9:5，-TCC CTG TCT CCG GGT MA GCC CCT CTC CCT CCC CCCCCC-3，，下游引物的引物序列10 :5’ -GAT GCA GCA GTG CGT CAT TGT GGC CAT ATT ATCATC GTG-3’，上游引物中引入IgGl基因序列，下游引物中引入CCR5基因序列。随后，将扩增得到的基因片段分别装入T载体，经基因测序分析证实各基因片段为所需要的目的基因。
进ー步地，上述步骤B具体包括如下步骤将IgGl抗体的重链恒定区基因和人抗体轻链恒定区基因L与CD4基因和CCR5基因以PCR的方法拼接成CD4_IgGl、CCR5_IgGl和CCR5-L基因，其中CD4-IgGl和CCR5_IgGl中间含有柔性连接序列11，同时将CD4_IgGl与CCR5-L中间用IRES基因以PCR方法连接成CD4_IgGl-IRES-CCR5_L基因，并且基因两端引入相应的酶切位点，经酶切后装入同样酶切的病毒载体PShuttle中，构建成含有IgGl抗体的重链恒定区基因、⑶4基因和CCR5基因的穿梭质粒pShuttle-⑶4-IgG、pShuttle-CCR5-IgGl、pShuttle-CCR5_L 和 pShuttle-CD4-IgGl-IRES-CCR5_L。为便于多方面考察本发明的重组病毒的可行性和实际应用方面的可靠性，除了上述pShuttle病毒载体外，还米用其他病毒载体(例如pAdTrack、pAdTrack-CMV、pdc316e、pShuttle-CMV、pLenti、pGC-FU、pLVTHM和pRRL等)，这样构建出多种类型的重组病毒。上述步骤C中，穿梭质粒构建完成后，将穿梭质粒及病毒辅质粒共转化于细菌中，培养并提取重组病毒质粒，该重组病毒质粒用Pac I单酶切线性化。上述步骤D中，将重组病毒质粒转染至细胞株中进行培养，收集细胞并提纯重组病毒。由于基因工程重组病毒的表达水平主要取决于表达载体的宿主细胞(表达细胞株)，因此，适用于本发明的表达细胞株的选取也比较重要。对于本研究的重组病毒，哺乳动物细胞表达系统是最佳的选择。哺乳动物细胞内有抗体折叠形成正确空间结构所必需的分子伴侣和折叠酶，其内质网为抗体分子正确折叠和链内及链间ニ硫键的形成提供了有利的氧化还原环境。此外，哺乳动物细胞表达系统还拥有完整的转录和转录后、翻译和翻译后修饰、信号肽的剪切以及糖基化等优势，使表达的抗体空间结构近似于天然，有利于发挥其生物学功能，并延长其在体内的半衰期。本发明可选用293细胞、293T细胞或中国仓鼠卵巢细胞，并优选使用293细胞作为表达载体的宿主细胞，来建立起CD4-CCR5- ニ价类抗体稳定表达的293细胞。考虑到表达的稳定，染色体整合式表达系统将被采用。上述步骤E中，对步骤D中得到的重组病毒进行纯化包括通过离心收集上清或细胞，然后通过G蛋白柱层析分离出IgGl抗体，最后通过CD4或CCR5的亲和层析分离出CD4-CCR5-重组病毒。以及将结合具体实施例详细说明如何制备本发明的抗HIV基因工程重组病毒。实施例I :PCR扩增及拼接从人新鮮血样中提取总RNA，反转录成人cDNA，以人cDNA为模板，分别以上述引物I和2、3和4、5和6以及7和8扩增出IgGl抗体的重链恒定区基因、人抗体轻链恒定区基因L、CD4基因和CCR5基因。然后以PCR的方法拼接成CD4-IgGl、CCR5_IgGl 和CCR5-L基因，CD4-IgGl和CCR5_IgGl中间含有柔性连接序列11，同时将CD4_IgGl与CCR5-L中间用IRES基因以PCR方法连接成CD4_IgGl-IRES-CCR5_L。穿檢质粒的构律将CD4-IgGl、CCR5-IgGl、CCR5-L 和 CD4-IgGl-IRES-CCR5_L 各基因的 PCR 产物经 Sal I 和 BglII酶切后装入同样酶切的病毒载体pShuttle中，构建成穿梭质粒pShuttle-CD4-IgGl、pShuttle-CCR5-IgGl、pShuttle-CCR5-L 和 pShuttle-CD4-IgGl-IRES-CCR5-L。构建的穿梭质粒均用Pme I酶切线性化处理，回收待用。共转化将线性化的穿梭质粒及病毒骨架质粒PAdEasy-I转化于细菌中，培养鉴定并提取重组病毒质粒，该重组病毒质粒用Pac I单酶切线性化。重组病毒的获得将线性化的重组病毒质粒转染AD-293细胞，两周后观察到细胞病变，此时病毒已感染AD-293细胞，收集细胞、分离得到病毒，后续提取蛋白并用WesternBlot检测。实施例2 PCR扩增及拼接从人新鮮血样中提取总RNA，反转录成人cDNA，以人cDNA为模板，分别以上述引物I和2、3和4、5和6以及7和8扩增出IgGl抗体的重链恒定区基因、人抗体轻链恒定区基因L、CD4基因和CCR5基因。然后以PCR的方法拼接成CD4-IgGl、CCR5_IgGl和CCR5-L基因，CD4-IgGl和CCR5_IgGl中间含有柔性连接序列11，同时将CD4_IgGl与CCR5-L中间用IRES基因以PCR方法连接成CD4_IgGl-IRES-CCR5_L。穿梭质粒的构津:将 CD4-IgGl、CCR5-IgGl、CCR5-L 和 CD4-IgGl-IRES-CCR5_L 各基因的 PCR 产物经 Sal I 和 Bgl II酶切后装入同样酶切的病毒载体pdc316e中，构建成穿梭质粒pdc316e-CD4-IgGl、pdc316e-CCR5-IgGl、pdc316e-CCR5_L 和 pdc316e-CD4-IgGl-IRES-CCR5_L。构建的穿梭质粒均用Pme I酶切线性化处理，回收待用。共转化将线件化的穿梭质粒及病毒骨架质粒PAdEasy-I转化于细菌中，培养鉴定并提取重组病毒质粒，该重组病毒质粒用Pac I单酶切线件化。重组病毒的获得将线件化的重组病毒质粒转染中国仓鼠卵巢细胞,两周后观察到细胞病变，此时病毒已感染中国仓鼠卵巢细胞，收集细胞、分离得到病毒，后续提取蛋白并用 Western Blot 检测。实施例3 PCR扩增及拼接从人新鮮血样中提取总RNA，反转录成人cDNA，以人cDNA为模板，分别以上述引物I和2、3和4、5和6以及7和8扩增出IgA抗体的重链恒定区基因、人抗体轻链恒定区基因L、CD4基因和CCR5基因。然后以PCR的方法拼接成CD4-IgA、CCR5_IgA和CCR5-L基因，CD4-IgA和CCR5_IgA中间含有柔性连接序列11，同时将CD4_IgA与CCR5-L中间用IRES基因以PCR方法连接成CD4-IgA-IRES-CCR5-L。穿檢质粒的构律将CD4_IgA、CCR5-IgA、CCR5-L 和 CD4-IgA-IRES-CCR5_L 各基因的 PCR 产物经 Sal I 和 Bgl II 酶切后装入同样酶切的病毒载体pShuttle-CMV中，构建成穿梭质粒pShuttle-CMV-⑶4-IgGl、pShuttle-CMV-CCR5-IgGl、pShuttle-CMV-CCR5_L 和 pShuttle-CMV-CD4-IgGl-IRES_CCR5-し构建的穿梭质粒均用Pme I酶切线性化处理，回收待用。共转化将线性化的穿梭质粒及病毒骨架质粒PAdEasy-I转化于细菌中，培养鉴定并提取重组病毒质粒，该重组病毒质粒用Pac I单酶切线性化。重组病毒的获得；将线性化的重组病毒质粒转染293细胞，两周后观察到细胞病变，此时病毒已感染293细胞，收集细胞、分离得到病毒，后续提取蛋白并用Western Blot 检测。实施例4
PCR扩增及拼接从人新鮮血样中提取总RNA，反转录成人cDNA，以人cDNA为模板，分别以上述引物I和2、3和4、5和6以及7和8扩增出IgM抗体的重链恒定区基因、人抗体轻链恒定区基因L、CD4基因和CCR5基因。然后以PCR的方法拼接成CD4-IgM、CCR5_IgM和CCR5-L基因，CD4-IgM和CCR5_IgAM中间含有柔性连接序列11，同时将CD4_IgM与CCR5-L中间用IRES基因以PCR方法连接成CD4-IgM-IRES-CCR5-L。穿檢质粒的构律将⑶4_IgM、CCR5-IgM、CCR5-L 和 CD4-IgM-IRES-CCR5_L 各基因的 PCR 产物经 Sal I 和 Bgl 11 酶切后装入同样酶切的病毒载体pGC-FU中，构建成穿梭质粒pGC-FU-CD4-IgGl、pGC-FU-CCR5-IgGl、PGC-FU-CCR5-L 和 pGC-FU-CD4-IgGl-IRES-CCR5-L。构建的穿梭质粒均用 Pme I 酶切线性化处理，回收待用。共转化将线件化的穿梭质粒及病毒骨架质粒pAdEasy-Ι转化于细菌中，培养鉴定并提取重组病毒质粒，该重组病毒质粒用Pac I单酶切线性化。重组病毒的获得将线性化的重组病毒质粒转染293细胞，两周后观察到细胞病变，此时病毒已感染293细胞，收集细胞、分离得到病毒，后续提取蛋白并用Western Blot检测。实施例5 :该实施例的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法由以下步骤组成PCR扩增及拼接、穿梭质粒的构建、共转化制得重组病毒质粒和获得重组病毒。与实施例I不同 的是，本实施例采用的病毒载体为pAdTrack ;其余步骤均与实施例I相同，此处不再重复叙述。实施例6 :该实施例的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法由以下步骤组成PCR扩增及拼接、穿梭质粒的构建、共转化制得重组病毒质粒和获得重组病毒。与实施例2不同的是，本实施例采用的病毒载体为pAdTrack-CMV ;其余步骤均与实施例2相同，此处不再重复叙述。实施例7 :该实施例的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法由以下步骤组成PCR扩增及拼接、穿梭质粒的构建、共转化制得重组病毒质粒和获得重组病毒。与实施例3不同的是，本实施例采用的病毒载体为PLenti ;其余步骤均与实施例3相同，此处不再重复叙述。实施例8 :该实施例的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法由以下步骤组成PCR扩增及拼接、穿梭质粒的构建、共转化制得重组病毒质粒和获得重组病毒。与实施例4不同的是，本实施例采用的病毒载体为pLVTHM;其余步骤均与实施例4相同，此处不再重复叙述。
实施例9 :该实施例的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法由以下步骤组成PCR扩增及拼接、穿梭质粒的构建、共转化制得重组病毒质粒和获得重组病毒。与实施例4不同的是，本实施例采用的病毒载体为PRRL ;其余步骤均与实施例4相同，此处不再重复叙述。本发明所制备得到的抗HIV基因工程重组病毒可制成抗HIV基因工程药物，然后用于人对HIV感染的预防和治疗。或者也可以通过特定载体将本发明所制备得到的抗HIV基因工程重组病毒导入人体中，在人体内表达，从而产生预防和治疗HIV感染的效果。另夕卜，由于所述重组病毒内还包含有抗体Fe片段。因此，除了上述对HIV感染的预防和治疗夕卜，还具有HIV感染的诊断功能。综上所述，本发明的抗HIV基因工程重组病毒由于同时具有可与HIV病毒上的⑶4位点和CCR5位点特异性结合的⑶4和CCR5，特异性结合作用显著增強，并因此可以实现双 重阻止HIV病毒感染宿主细胞的作用；本发明的制备方法エ艺简单、切实可行；具有本发明的重组病毒的抗HIV基因工程药物可有效作用于HIV病毒，从而有效预防和治疗HIV病毒 感染。
权利要求
1.ー种抗HIV基因工程重组病毒，所述重组病毒包括人抗体的恒定区，其特征在干，所述重组病毒还包括与所述人抗体的恒定区连接的⑶4和CCR5。
2.根据权利要求I所述的抗HIV基因工程重组病毒，其特征在于，所述人抗体的恒定区为人抗体的重链恒定区和/或人抗体的轻链恒定区。
3.根据权利要求2所述的抗HIV基因工程重组病毒，其特征在干，所述人抗体的重链恒定区还包括激活人体免疫功能的抗体Fe片段。
4.根据权利要求2所述的抗HIV基因工程重组病毒，其特征在干，所述⑶4和所述CCR5通过柔性连接肽与所述人抗体的重链恒定区柔性连接，所述柔性连接肽具有序列表中的氨基酸序列。
5.根据权利要求I所述的抗HIV基因工程重组病毒，其特征在于，所述人抗体的恒定区为IgG抗体的重链恒定区、IgA抗体的恒定区或IgM抗体的恒定区。
6.—种权利要求I中抗HIV基因工程重组病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤 A :分别获取人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因； B:采用病毒载体构建包括所述人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因的病毒载体的穿梭质粒； C :选用病毒辅质粒，使所述病毒辅质粒与步骤B的穿梭质粒共转化产生重组病毒质粒; D :将步骤C中形成的重组病毒质粒转染至细胞株中进行培养，得到重组病毒； E :离心收集上清或细胞进行纯化后得到所述重组病毒。
7.根据权利要求6所述的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法，其特征在于，在步骤A中，所述人抗体的恒定区基因为人抗体的轻链恒定区基因与IgG抗体的重链恒定区基因、IgA抗体的重链恒定区基因或IgM抗体的重链恒定区基因。
8.根据权利要求6所述的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法，其特征在于，在步骤 B 中，所述病毒载体包括 pShuttle、pAdTrack、pAdTrack-CMV、pdc316、pShuttle-CMV、pLenti、pGC-FU、pLVTHM 或 pRRL。
9.根据权利要求6所述的抗HIV基因工程重组病毒的制备方法，其特征在于，在步骤C中，所述病毒辅质粒为病毒骨架质粒pAdEasy-Ι ;在所述步骤D中，所述表达细胞株为293细胞、AD-293细胞或中国仓鼠卵巢细胞。
10.ー种抗HIV基因工程药物，其特征在于，所述抗HIV基因工程药物含有权利要求1-5中任ー权利要求的抗HIV基因工程重组病毒。
全文摘要
本发明涉及抗HIV基因工程重组病毒及其制备方法及抗HIV基因工程药物，该抗HIV基因工程重组病毒包括人抗体的恒定区以及与之相连的CD4和CCR5。该抗HIV基因工程重组病毒的制备方法包括获取人抗体的重链恒定区基因、人抗体的轻链恒定区基因、CD4基因和CCR5基因；构建包括该四种基因的病毒载体穿梭质粒；将穿梭质粒和病毒辅质粒共转化产生重组病毒质粒；将其转染至细胞株中培养并提纯病毒。本发明的重组病毒同时具有可与HIV病毒的CD4位点和CCR5位点特异性结合的CD4和CCR5，特异性结合作用显著增强，可以实现双重阻止HIV病毒感染宿主细胞的作用；本发明的制备方法工艺简单、切实可行；具有重组病毒的抗HIV基因工程药物可有效作用于HIV病毒，并有效预防和治疗HIV病毒感染。
文档编号C12N15/85GK102690792SQ201210166678
公开日2012年9月26日 申请日期2012年5月25日 优先权日2012年5月25日
发明者周兆平, 易俊波, 苏庆宁, 郑永唐, 雷明军 申请人:深圳大学