专利名称：一种甜瓜白粉病菌的分离方法
技术领域：
本发明涉及一种生物病原菌的分离方法技术领域，具体的说，本发明涉及及一种甜瓜白粉病菌的分离方法技术领域。
背景技术：
甜瓜是葫芦科ifucurbitaceae)甜瓜属{Cucumis Linn) 一年生蔓性草本植物,在国内外广泛栽培，是一种重要的经济作物。据统计，我国甜瓜播种面积约为15. 3万公顷， 年总产量在300万吨以上，居世界首位(刘君璞等，2000);目前，各种病虫害对甜瓜的生产造成了不同程度的影响，甜瓜白粉病是甜瓜生产中重要的病害之一，我国露地和保护地甜瓜每年都因甜瓜白粉病造成大量减产，并严重的影响到了产品的品质；据资料报道，瓜类白粉病主要由瓜单囊壳{S. fuliginea)和二孢白粉菌(万.cichoracearum)引起,我国以瓜单囊壳危害较为普遍(吕佩珂，1996)。
甜瓜白粉病是一种广泛发生的世界性病害，在我国各甜瓜产区普遍发生；白粉病菌主要侵染甜瓜植株的叶片，在甜瓜植株幼苗期和成株期都可发病；在适宜的条件下，甜瓜白粉病发展很快，几天或一周时间蔓延到整个瓜田或温室，造成叶片发黄、失去功能、渐渐枯死，严重影响了甜瓜果实的产量和品质。
甜瓜白粉病菌的小种演替快、分化情况复杂，使其小种鉴定和相关病理研究十分困难；分离和培养出纯化的白粉病菌，是进行甜瓜白粉病菌病理分析和抗病育种研究的前提，然而到目前为止，仍未建立分离纯化甜瓜白粉病菌的技术；因此，提供一种合适的甜瓜白粉病菌的分离方法非常必要。发明内容
针对上述现有技术中未见有效的甜瓜白粉病菌分离方法的技术现状，本发明的目的旨在于提供一种甜瓜白粉病菌的分离方法，确切的是提供一种甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法，该方法操作简便，而且能分离培养出纯化的甜瓜白粉病菌。
本发明的主要技术方案采集发病的甜瓜叶片，用灭菌的刷子刷去其表面的老孢子，将病叶保温保湿繁殖新孢子；在超净工作台上，将新长出的分生孢子用灭菌的洗耳球吹入水琼脂平板上，用解剖镜在水琼脂平板上找到无色透明的小颗粒，即单个白粉病菌分生孢子；用特制挑针挑出单孢子接种在灭菌的感病甜瓜或黄瓜品种的直径1. 2厘米叶碟上，将叶碟平铺在装入甘露醇培养基的培养皿中；培养皿放入光照培养箱，培养7天以后，长出纯化的甜瓜白粉病菌菌落。
本发明具体提供一种甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法，具体方法步骤如下。
(I)将在甜瓜田间采集的白粉病病叶，放在冰盒中，吹去表面老孢子，放入培养皿中，25°C光照培养箱中保湿培养，繁殖新鲜的分生孢子；在超净工作台上，将新长出的分生孢子用灭菌的洗耳球吹入水琼脂平板上，用解剖镜在水琼脂平板上找到无色透明的小颗粒，即单个白粉病菌分生孢子。
(2)用特制挑针挑出单孢子接种在灭菌的感病甜瓜或黄瓜品种的直径1. 2厘米叶碟上，将叶碟平铺在装入甘露醇培养基的培养皿中；培养皿放入光照培养箱，培养7天以后，长出纯化的甜瓜白粉病菌菌落。
(3)特制挑针制作方法将人眉毛根部用透明胶布粘在牙签上，灭菌处理，眉毛尖用灭菌的剪刀剪掉I毫米。
(4)上述步骤(2)中的甘露醇培养基每升含30克甘露醇，50毫克苯并咪唑，9克琼脂，蒸馏水定容至I升后灭菌。
(5)甜瓜白粉病菌单孢子培养条件光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，1500勒克斯；温度，12小时光照时22°C /12小时暗培养时18°C。
通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果本发明与传统方法比较，提供的甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法，用特制的挑针挑取单个分生孢子时不易使其破裂，而且在合适的培养基和培养条件下，促使单个分生孢子正常萌发，培养7天后，叶碟上长出纯化的甜瓜白粉病菌菌落，获得甜瓜白粉病菌纯性培养， 此项技术的建立，为甜瓜白粉病菌病理分析和抗病育种研究提供支撑。
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
本发明中选用的所有原辅材料和用具、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领 域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
实施例一甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法具体步骤如下(I)将在甜瓜田间采集的白粉病病叶，放在冰盒中，吹去表面老孢子，放入培养皿中， 25°C光照培养箱中保湿培养，繁殖新鲜的分生孢子；在超净工作台上，将新长出的分生孢子用灭菌的洗耳球吹入水琼脂平板上，用解剖镜在水琼脂平板上找到无色透明的小颗粒，即单个白粉病菌分生孢子。
(2)用特制挑针挑出单孢子接种在灭菌的感病甜瓜或黄瓜品种的直径1. 2厘米叶碟上，将叶碟平铺在装入甘露醇培养基的培养皿中；培养皿放入光照培养箱，培养7天以后，长出纯化的甜瓜白粉病菌菌落。
(3)特制挑针制作方法将人眉毛根部用透明胶布粘在牙签上，灭菌处理，眉毛尖用灭菌的剪刀剪掉I毫米。
(4)上述步骤(2)中的甘露醇培养基每升含30克甘露醇，50毫克苯并咪唑，9克琼脂，蒸馏水定容至I升后灭菌。
(5)甜瓜白粉病菌单孢子培养条件光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度，1500勒克斯；温度，12小时光照时22°C /12小时暗培养时18°C。
权利要求
1.一种甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法，其特征在于，具体分离方法步骤如下(1)将在甜瓜田间采集的白粉病病叶，放在冰盒中，吹去表面老孢子，放入培养皿中， 25°C光照培养箱中保湿培养，繁殖新鲜的分生孢子；在超净工作台上，将新长出的分生孢子用灭菌的洗耳球吹入水琼脂平板上，用解剖镜在水琼脂平板上找到无色透明的小颗粒，即单个白粉病菌分生孢子；(2)用特制挑针挑出单孢子接种在灭菌的感病甜瓜或黄瓜品种的直径1.2厘米叶碟上，将叶碟平铺在装入甘露醇培养基的培养皿中；培养皿放入光照培养箱，培养7天以后， 长出纯化的甜瓜白粉病菌菌落；(3)特制挑针制作方法将人眉毛根部用透明胶布粘在牙签上，灭菌处理，眉毛尖用灭菌的剪刀剪掉I毫米；(4)上述步骤(2)中的甘露醇培养基每升含30克甘露醇，50毫克苯并咪唑，9克琼脂， 蒸懼水定容至I升后灭菌；(5)甜瓜白粉病菌单孢子培养条件光周期，12小时光照/12小时暗培养；光照强度， 1500勒克斯；温度，12小时光照时22°C /12小时暗培养时18°C。
全文摘要
本发明公开一种甜瓜白粉病菌的单孢子分离方法，通过采集发病的甜瓜叶片，用灭菌的刷子刷去其表面的老孢子，将病叶保温保湿繁殖新孢子。把培养好的新鲜分生孢子用洗耳球吹入水琼脂平板上，在解剖镜下，用特制的挑针挑取单个分生孢子接种在灭菌的感病甜瓜或黄瓜品种的叶碟上。将叶碟平铺在装入甘露醇培养基的培养皿里，盖上培养皿盖后放入光照培养箱，培养7天后即可得到纯化的甜瓜白粉病菌菌落。本项发明通过特制的挑针挑出单个分生孢子，并在合适的培养基和培养条件下，促使单个分生孢子正常萌发，分离出的甜瓜白粉菌病原菌纯、无小种交叉感染，保障了后续研究结果的准确和可靠，具有重要的实用价值。
文档编号C12R1/645GK102994440SQ201210578048
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月27日 优先权日2012年12月27日
发明者伊鸿平, 张永兵, 张学军, 李寐华, 季娟, 郭丽霞, 吴明珠 申请人:新疆农业科学院哈密瓜研究中心