专利名称：检测喹乙醇代谢物的elisa试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及检测喹乙醇代谢物残留量的试剂盒，特别是检测动物组织中喹乙醇代谢物残留量的酶联免疫检测(ELISA)试剂盒，ELISA (Enzyme Linked ImmunosorbentAssay)是酶联免疫吸附剂测定的简称，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术。
技术背景
喹乙醇(Olaquindox),又名快育灵、倍育诺(Bayonox)、奥拉金、喹酸胺醇、Fedan。分子式C12H13N304。是1965年由德国Bayer公司由2-甲基喹噁啉_1、4_ 二氧化物与乙醇胺缩合而成的淡黄色结晶性粉末，微溶于水。因其具有良好的广谱抗菌效果尤其是对大肠杆菌、沙门氏杆菌等革兰氏阴性致病菌所致的消化道疾病具有良好的治疗效果，并且有促进畜禽对饲料的消化利用，提高生长速度等作用而被广泛应用于饲料及饲料添加剂中。近年来在水产饲料中，喹乙醇曾一度被称为“水产瘦肉精”，经历了从被忽略毒副作用到被客观评价的过程。喹乙醇的毒性随动物种属不同存在较大差异，特别对禽和鱼类，有中度至明显蓄积毒性和一定遗传毒性，对部分鱼类有明显致畸作用。喹乙醇的蓄积毒性不但能使动物发生中毒或死亡，且其可能残留在畜产品中，对人体也有较大危害。因此，使用时，必须严格按其使用范围、剂量浓度实行休药期。鉴于喹乙醇的毒性和存在的潜在危害，因而人们重新对喹乙醇的安全性进行评价，对喹乙醇的使用也做出了新的规定。美国没有批准使用；欧盟也从1999年开起始全面禁止使用喹乙醇；我国对喹乙醇使用的限制也更加严格。我国农业部颁布的《动物性食品兽药最高残留限量》中也列入了喹乙醇。国家进出口检验检疫局制定了肉中喹乙醇残留量的检验方法《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉中喹乙醇代谢物残留量检验方法SN 0197-93》也把鸡饲料、饮水及鱼饲料中的喹乙醇作为违禁药物进行监督检验。由于动物在摄食喹乙醇后，3-甲基-喹噁啉-2-羧酸(MQCA)是最后离开动物机体的代谢物，也是喹乙醇的标示残留物，所以在监控喹乙醇残留时通常要分析其代谢产物MQCA的含量。目前的喹乙醇检测方法多为色谱法，但是需要复杂昂贵的仪器，且样品前处理过程繁琐，不适应现场大量样本的筛查。基于抗原抗体免疫反应的免疫学检测技术为小分子残留物的分析检测提供了一个新的途径。该技术研究的关键是半抗原分子的设计、合成和人工全抗原及抗体的制备。因为喹乙醇代谢物是小分子化合物，本身没有免疫原性，必须将其与大分子载体蛋白偶联得到具有免疫原性的人工抗原。在此基础上建立起来的酶联免疫检测试剂盒可快速、方便、准确的检测动物组织中的喹乙醇代谢物残留，可为建立监控动物源性食品中喹乙醇残留提供技术支持
实用新型内容
[0007]本实用新型所要解决的问题是提供一种小巧轻便的喹乙醇代谢物残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中喹乙醇代谢物残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。本实用新型的技术方案是一种检测喹乙醇代谢物的ELISA试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、14瓶试剂,其特征在于酶标板是米用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔中预包被喹乙醇代谢物偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别为7瓶喹乙醇代谢物标准品溶液、酶标二抗、抗体浓缩液、显色液A液、显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、复溶工作液。检测喹乙醇代谢物的ELISA试剂盒还包括一张盖板膜和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋，其特征在于盒体是硬纸盒；96孔试剂板为聚苯乙烯酶标板，放于真空铝钼袋内；盖板膜是塑料硬膜；标准品溶液和高浓度标准品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶标二抗用红色帽的白色PE塑料瓶，抗体浓缩液用绿色帽的白色PE塑料瓶，显色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，显色液B液用红色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用透明帽的半透明PE塑料瓶，复溶工作液用蓝色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位共15个，由塑料泡沫制成。酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被喹乙醇代谢物偶联抗原；盖板膜大小与酶标板横切面大小一致；标准品溶液7瓶，ImL/瓶 ；酶标二抗I瓶，12mL ;抗体浓缩液I瓶，ImL ;显色液A液I瓶，7mL ;显色液B液I瓶，7mL ;终止液I瓶，7mL ;浓缩洗涤液I瓶，40mL ;复溶工作液I瓶，lOOmL。经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度动物组织样本的最低检测限为2. 0μ g/kg,回收率为95%土 15%，相对于其他喹乙醇代谢物检测方法，本试剂盒所需仪器较少，且所需仪器同类实验室一般均有配备，所需成本较低。本实用新型的有益效果是能快速、简便、灵敏、准确地用于动物组织中喹乙醇代谢物残留量的检测。
图I为本实用新型酶标板的侧面纵剖面图；图2为本实用新型酶标板的侧面横剖面图；图3为本实用新型酶标板的俯视图；图4为本实用新型盖板膜平面图；图5为本实用新型试剂瓶纵剖面平面图；图6为本实用新型固定泡沫模具的俯视图；图7为本实用新型盒体与固定泡沫模具的侧视图。
具体实施方式
酶标反应微孔条2预包被喹乙醇代谢物偶联抗原3固定于酶标板的外框支撑架I上，酶标反应微孔条2可随要求拆卸；盖板膜4用于酶标板置水浴或恒温箱内反应时封盖酶标反应微孔条2 ;透明帽的半透明塑料试剂瓶5用于封装40mL浓缩洗涤液；蓝色帽的半透明塑料试剂瓶5用于封装IOOmL复溶工作液；白色帽6的白色塑料试剂瓶7用于封装7mL显色液A液，红色帽6的黑色塑料试剂瓶7用于封装7mL显色液B液，黄色帽6的白色塑料试剂瓶7用于封装7mL终止液，红色帽的白色塑料试剂瓶8用于封装12mL酶标二抗，绿色帽的白色塑料试剂瓶8用于封装ImL喹乙醇代谢物抗体浓缩液，黑色帽的白色塑料试剂瓶9用于封装ImL/瓶的标准品溶液；泡沫塑料模具10有15个瓶位，放置位置依次为40mL
浓缩洗涤液瓶位18，IOOmL复溶工作液瓶位11，7mL显色液A液瓶位14，7mL显色液B液瓶位13，7mL终止液瓶位12，ImL喹乙醇代谢物抗体浓缩液瓶位16，7mL酶标二抗瓶位15，7瓶ImL/瓶各种浓度的标准品溶液瓶位17，盒体19是硬纸盒。
权利要求1.一种检测喹乙醇代谢物的ELISA试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、14瓶试剂，其特征在于酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔中预包被喹乙醇代谢物偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别为7瓶喹乙醇代谢物标准品溶液、酶标二抗、抗体浓缩液、显色液A液、显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、复溶工作液。
2.根据权利要求I所述的试剂盒，还包括一张盖板膜和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋，其特征在于盒体是硬纸盒；96孔试剂板为聚苯乙烯酶标板，放于真空铝钼袋内；盖板膜是塑料硬膜；标准品溶液和高浓度标准品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶标二抗用红色帽的白色PE塑料瓶，抗体浓缩液用绿色帽的白色PE塑料瓶，显色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，显色液B液用红色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用透明帽的半透明PE塑料瓶，复溶工作液用蓝色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位共15个，由塑料泡沫制成。
3.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被喹乙醇代谢物偶联抗原；盖板膜大小与酶标板横切面大小一致；标准品溶液7瓶，ImL/瓶；酶标二抗I瓶，12mL ;抗体浓缩液I瓶，ImL ;显色液A液I瓶，7mL ;显色液B液I瓶，7mL ;终止液I瓶，7mL ;浓缩洗涤液I瓶，40mL ;复溶工作液I瓶，lOOmL。
专利摘要本实用新型涉及一种检测喹乙醇代谢物的ELISA试剂盒。该试剂盒组成包括96孔酶标板、酶标二抗、喹乙醇代谢物抗体浓缩液、喹乙醇代谢物6个浓度的标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、复溶工作液、高浓度标准品、盖板膜、自封袋、说明书和质检报告。采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔中预包被偶联抗原，样本中含有的喹乙醇代谢物将和微孔中预包被的偶联抗原竞争结合抗喹乙醇代谢物抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中喹乙醇代谢物的残留量。与仪器分析技术相比具有使用方便、高灵敏度等特点，可在动物组织中喹乙醇代谢物的残留量检测中发挥重要作用。
文档编号G01N33/545GK202794171SQ201220091509
公开日2013年3月13日 申请日期2012年3月13日 优先权日2012年3月13日
发明者何方洋, 万宇平, 孙震, 冯静, 罗晓琴, 崔海峰, 余厚美, 韩京朋, 段盈盈 申请人:北京勤邦生物技术有限公司