一种保存生物样品的方法及试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种保存生物样品的方法及试剂盒，广泛应 用于生物学、化学及医学检测反应中基因疾病的诊断、监测、生物库的建立、分子诊断、PCR 扩增、法医、遗传鉴定等。
【背景技术】
[0002] 生物遗传物质（GM)，其中包括人或动物的生理/病理体液（分泌物、渗出液等）； 人或动物的细胞悬液（血液、淋巴液、滑膜液、精液、唾液等）；植物的生理/病理体液或者 细胞悬液；细菌、真菌、质粒、病毒、寄生虫等的提取液或者悬液；人或动物机体组织（肝脏、 肾脏）提取液或者组织匀浆；DNA或者RNA合成过程的中间体；化学或生化合成的DNA/RNA 的混合物；其他任何可以提供液态GM的物质。
[0003] 核酸是生物遗传物质，包括脱氧核糖核酸（DNA)及核糖核酸（RNA)。核酸检测具有 现有分子检测中最高的灵敏度及特异性，被广泛用于以下几个方面：传染病病原微生物的 检测、遗传性疾病的诊断、血液中病毒的筛查、寄生虫疾病的诊断及监测（疟疾）、人身份鉴 定如法医DNA分析及亲子鉴定、肿瘤疾病引起的血液中其他非正常细胞增殖的监测、食品 安全及GMO检测、健康咨询等。
[0004] 然而上述所有的应用均首先涉及生物样品检材的采集，之后将生物样品运输至检 测实验室进行核酸提取及检测。在这一系列的操作中面临的最主要的问题是如何有效保存 待检生物样品中的核酸使之不被降解，同时灭活生物样品中可能带有的病原微生物以确保 操作者及大众的安全。
[0005] 目前国内外使用最广泛的生物样品的保存方法是通过采集血液或者唾液样品保 存至各类保存卡上。商品化保存卡主要有英国Whatman公司生产的FTA系列保存卡。FTA 卡是Whatman专利产品，为在室温下收集、运输和储存核酸提供了稳妥、安全、可靠的方法。 FTA卡经过专利的化学配方浸渍，含有独特的化学物质，当样品吸附在卡上时，细胞膜和细 胞器被裂解，蛋白质变性，释放出的核酸被捕获在FTA卡纤维上，使其免受核酸酶、氧化剂 和紫外线损伤及降解，在室温条件下长期稳定地保存。FTA卡可以快速地使有机体（包括血 液中的各种病原体）失活，并抑制细菌和其它微生物生长。样品中的传染性病原体在FTA 卡上5秒钟内失活。
[0006] 近期国内一些企业纷纷致力于国产采集卡的研制，较有影响力的主要有天津诺维 莱博科技有限公司的DNA存储卡、长春市博坤生物科技有限公司的生物样本采集卡等，其 基本核心技术都同FTA技术较类似。
[0007] 英国Whatman公司的FTA系列保存卡可以在室温条件下长期稳定地保存DNA使其 免受降解。但其有众多不足之处，包括：
[0008] 1、样品转移效率低：指示型FTA卡的样品采集棒的设计不利于样品的采集和转 移，实际操作过程中样品的转移效率低。
[0009] 2、直接扩增技术受限：由于FTA卡设计的初衷是以核酸分离提取为前提，而随着 核酸扩增技术的发展，直接扩增技术已经开始普遍应用于法医DNA分析中，使得FTA卡在直 接扩增技术方面受到一定的限制。
[0010] 3、FTA卡保存过程中易褪色：目前市场上的大部分保存卡都设计成粉红色，颜色 单一，其利用pH值的改变来指示样品，当无色的样品如唾液，接触到粉红色的保存卡后，样 品区由于pH值发生变化而产生颜色变化，由原来的粉红色变成白色，从而可以用来指示样 品区域。然而该方法仍存在一个问题，即滤纸卡在空气中保存的过程中随着保存时间的延 长及受保存条件、环境温度、环境湿度、以及空气中C02含量的影响，从而导致滤纸卡pH值 发生改变，粉红色的样品保存卡极易发生褪色现象。
[0011] 4、使用成本高：FTA卡是Whatman专利产品，价格昂贵，使用成本相当高。
【发明内容】
[0012] 有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种操作简便、样品转移 效率高、能更有效杀灭细菌、病毒的生物样品保存方法及试剂盒，可以使用直接扩增技术广 泛应用于法医市场DNA分析。同时由于本发明含有颜色指示剂的功能性溶液为密封保存， 保存时间不受保存条件的限制，因此可保证长期保存不发生褪色现象。
[0013] 为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
[0014] -种保存生物样品的方法及试剂盒，将吸附有生物样品的采集工具与功能性溶液 充分混合，将混合后生物样品转印至滤纸卡上保存；所述功能性溶液包括缓冲溶液、络合 剂、抗菌剂、颜色指示剂和抗氧化剂。
[0015] 优选的，所述缓冲溶液为pH6~10的缓冲溶液。
[0016] 优选的，所述络合剂为氨基羧酸盐、羟基羧酸盐、有机膦酸盐或聚丙烯酸类络合剂 等。
[0017] 优选的，所述抗菌剂为阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子型表面活 性剂、非离子型表面活性剂、烷基胍表面活性剂、抗生素、防腐剂、EDTA等。
[0018] 优选的，所述颜色指示剂为有色染料、氧化还原指示剂、金属指示剂、钙指示剂、天 然pH指示剂、生物指示剂等。
[0019] 优选的，所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚（BHA)、二丁基羟基甲苯（BHT)、没食子 酸丙酯（PG)、混合生育酚浓缩物及愈创树脂、抗坏血酸及其钠盐、异抗坏血酸及其钠盐、硫 辛酸、维生素E，类胡萝卜素、枸橼酸、EDTA、磷酸衍生物、甲基硅酮、亚硫酸及其钠盐。
[0020] 优选的，所述样品为人或动物的生理/病理体液、细胞悬液；人或动物机体组织提 取液或者组织匀浆；植物的生理/病理体液或者细胞悬液；细菌、真菌、质粒、病毒、寄生虫 等的提取液或者悬液；DNA或者RNA合成过程的中间体；化学或生化合成的DNA或者RNA的 混合物；其他任何可以提供液态遗传物质。
[0021] 优选的，所述缓冲溶液浓度< 600mM;所述络合剂浓度为< 60mM;所述抗菌剂浓度 彡120mg/mL;所述颜色指示剂浓度为彡1%;所述抗氧化剂浓度彡180mM。
[0022] 优选的，所述缓冲溶液浓度为240mM-480mM;所述络合剂浓度为10mM-30mM;所述 抗菌剂浓度为45mg/mL-90mg/mL;所述颜色指示剂浓度为0. 02% ;所述抗氧化剂浓度为 30mM-60mM〇
[0023]本发明还提供一种保存生物样品的试剂盒，包括功能性溶液，所述功能性溶液包 括缓冲溶液、络合剂、抗菌剂、颜色指示剂和抗氧化剂。
[0024] 优选的，所述的试剂盒还包括滤纸卡和/或采集工具。
[0025] 优选的，所述的滤纸卡为普通滤纸卡。
[0026] 优选的，所述采集工具为医用采集工具。
[0027] 本发明提供了一种保存生物样品的方法，使用采集工具采集生物样品，之后将吸 附有生物样品的采集工具置于功能性溶液中充分混合，最后将混合后生物样品转印至滤纸 卡上保存，其中所述功能性溶液包括缓冲溶液、络合剂、抗菌剂、颜色指示剂、抗氧化剂。与 现有技术相比，本发明所述保存生物样品的方法，采集的生物样品经过一步混合操作，再转 印至普通滤纸卡上，即可达到快速安全有效的保存生物样品中遗传物质的目的，无需使用 制作成本高、价格昂贵的FTA卡，并具有操作简便、样品转移效率高、能更有效杀灭细菌、病 毒的特点。本发明所述功能性溶液能够与生物样品中的细胞发生作用，抗菌剂使细胞膜破 裂、细胞核裂解，从而释放出细胞核中的核酸，还能够保证各类核酸长期保存，同时具有灭 菌作用，能够及时杀灭生物样品中可能存在的病原微生物，从而保证操作人员的安全性。此 外本发明含有颜色指示剂的功能性溶液为密封保存，保存时间不受保存条件的限制，因此 可保证长期保存不发生褪色现象。
[0028] 本发明所述试剂盒不含有毒试剂、适用范围广，保存各类生物样品的效果优于市 场上的大部分保存卡，而且成本低，适用于广大的实验室和科研工作。
【附图说明】
[0029] 图1示荧光定量PCR扩增图，其中