专利名称：一种以山牛蒡为原料制备多糖皂甙的方法
技术领域：
本发明涉及一种多糖皂甙的制备方法，具体讲是涉及一种以山牛蒡为原料制备多糖皂甙的方法。
背景技术：
随着人们生活水平的提高，人们对产品的营养价值、保健及药用价值的追求也日益丰富，所以安全可靠的植物食品营养摄入的消费市场空间极其巨大。从天然产物山牛蒡中提取的有效成份——多糖、皂甙精细化学品，既可作为医药、保健品原料，可以用于抗疲劳、抗衰老以及健脑的药品、保健品生产，如山牛蒡多糖及皂甙胶囊、片剂或口服液等；也可应用于美容化妆品行业，可以配制成祛斑、减少皱纹、活化皮肤细胞、增强皮肤弹性的化妆品；还可以用做高档食品添加剂，用途广泛，因此市场前景广阔。目前，我国山牛蒡产品还仅仅停留在盐溃、切丝等简单的初加工水平上，产品附加值不高，严重制约了山牛蒡种植业的发展。
发明内容
鉴于现有技术存在的问题，本发明的目的是要提供一种以山牛蒡为原料，通过生物转化、多糖皂甙浸提和膜过滤等步骤制备多糖皂甙的方法。为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是一种以山牛蒡为原料制备多糖的方法，其包括四个阶段 ，分别为:原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段；
所述原料处理阶段的过程为:
1)将选好的山牛蒡用清水进行清洗；
2)将清洗后的山牛蒡超微粉碎:利用行星球研磨机对山牛蒡进行粉碎，并采用气流粉碎技术；所述行星球研磨机转速为27(T280r/min,研磨时间为8(T90min,介质填充率为1(Γ15%，被粉碎物料填充率为1(Γ15% ；
所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述超声波提取的条件为:料液比为1:15，时间为l(T20min，温度为5(T70°C、功率40(T450W ；
所述分离阶段的过程为:
1)、膜过滤，去除杂质；
2)、选用大孔树脂在pH值为6 7，温度为3(Γ40条件下进行柱上分离；
所述色谱分离阶段其采用工业色谱进行分离，其以牛蒡苷、牛蒡苷元为测定指标，测定了提取物中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量；色谱柱为KromasilC18100A(150mmX4.6mm, 5 μ m)；流动相:甲醇-水(采用梯度洗脱方式:0 7min，35% 45%甲醇；7 9min，45% 48%甲醇；9 15min，48% 53% 甲醇；15 24min，53% 80% 甲醇；24 30min，80% 100% 甲醇)；检测波长为280nm，牛蒡苷及牛蒡苷元的平均回收率分别为97.7%,96.9% ；RSD分别为1.3%、0.9%(n=5);线性方程分别为:
Y=782.6Χ-64.ll(r=0.9998)，Y=1220.217Χ-35.26 (r=0.9998)。一种以山牛蒡为原料制备皂甙的方法，其过程为其包括四个阶段，分别为:原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段；
所述原料处理阶段的过程为:
1)挑选好的山牛蒡原料；
2)将选好的山牛蒡用清水进行清洗；
3)将清洗后的山牛蒡超微粉碎:利用行星球研磨机对山牛蒡进行粉碎，并采用气流粉碎技术；所述行星球研磨机转速为27(T280r/min,研磨时间为8(T90min,介质填充率为1(Γ15%，被粉碎物料填充率为1(Γ15% ；
所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述超声波提取饿条件为:料液比为1:15，时间为l(T20min，温度为5(T70°C、功率40(T450W ；所述色谱分离阶段其采用工业色谱进行分离，其以牛蒡苷、牛蒡苷元为测定指标，测定了提取物中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量；色谱柱为KromasilC18100A(150mmX4.6mm, 5 μ m)；流动相:甲醇-水(采用梯度洗脱方式:0 7min，35% 45%甲醇；7 9min，45% 48%甲醇；9 15min，48% 53% 甲醇；15 24min，53% 80% 甲醇；24 30min，80% 100% 甲醇)；检测波长为280nm，牛蒡苷及牛蒡苷元的平均回收率分别为97.7%,96.9%。RSD分别为1.3%、0.9%(n=5);线性方程分别为:
Y=782.6Χ-64.ll(r=0.9998)，Y=1220.217Χ-35.26 (r=0.9998 ；
其特征在于:所述分离阶段的过程为:
1)、膜过滤，去除杂质；
2)、选用硅胶、C18、sephedax为填料，在pH值为6 7，温度为3(Γ40条件下进行柱上分离。本发明的优点在于:选择使用气流粉碎技术制成了山牛蒡超细微粉，确定了粉碎技术参数，微粉最小平均粒径可处理到小于0.2微米；山牛蒡多糖粗分离:利用超声波水提取法对多糖的提取做了初步研究，有效成份的提取率可以提高约10%，纯度达到65%以上；建立了适用于工业色谱分离山牛蒡皂甙类单体化合物的高效液相检测方法和薄层的检测方法，实现对产品进行批量制备。
具体实施例方式实施例1
一种以山牛蒡为原料制备多糖的方法，其包括四个阶段，分别为:原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段；
所述原料处理阶段的过程为:
3)将选好的山牛蒡用清水进行清洗； 4)将清洗后的山牛蒡超微粉碎:利用行星球研磨机对山牛蒡进行粉碎，并采用气流粉碎技术；所述行星球研磨机转速为272r/min,研磨时间为85min,介质填充率为12%,被粉碎物料填充率为13% ；
所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述超声波提取饿条件为:料液比为1:15，时间为15min，温度为60°C、功率420W ；
所述分离阶段的过程为:
3)、膜过滤，去除杂质；
4)、选用大孔树脂在pH值为6.5，温度为35条件下进行柱上分离；
所述色谱分离阶段其采用工业色谱进行分离，其以牛蒡苷、牛蒡苷元为测定指标，测定了提取物中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量；色谱柱为KromasilC18100A(150mmX4.6mm, 5 μ m)；流动相:甲醇-水(采用梯度洗脱方式:0 7min，35% 45%甲醇；7 9min，45% 48%甲醇；9 15min，48% 53% 甲醇；15 24min，53% 80% 甲醇；24 30min，80% 100% 甲醇)；检测波长为280nm，牛蒡苷及牛蒡苷元的平均回收率分别为97.7%,96.9% ；RSD分别为1.3%、0.9%(n=5);线性方程分别为:
Y=782.6Χ-64.ll(r=0.9998)，Y=1220.217Χ-35.26 (r=0.9998)。实施例2
一种以山牛蒡为原料制备皂甙的方法，其过程包括四个阶段，分别为:原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段；
所述原料处理阶段的过程为:
1)挑选好的山牛蒡 原料；
2)将选好的山牛蒡用清水进行清洗；
3)将清洗后的山牛蒡超微粉碎:利用行星球研磨机对山牛蒡进行粉碎，并采用气流粉碎技术；所述行星球研磨机转速为272r/min,研磨时间为85min,介质填充率为12%,被粉碎物料填充率为13% ；
所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述超声波提取的条件为:料液比为1: 15，时间为18min，温度为65°C、功率430W;
所述色谱分离阶段其采用工业色谱进行分离，其以牛蒡苷、牛蒡苷元为测定指标，测定了提取物中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量；色谱柱为KromasilC18100A(150mmX4.6mm, 5 μ m)；流动相:甲醇-水(采用梯度洗脱方式:0 7min，35% 45%甲醇；7 9min，45% 48%甲醇；9 15min，48% 53% 甲醇；15 24min，53% 80% 甲醇；24 30min，80% 100% 甲醇)；检测波长为280nm，牛蒡苷及牛蒡苷元的平均回收率分别为97.7%,96.9%。RSD分别为
1.3%、0.9%(n=5);线性方程分别为:
Y=782.6Χ-64.ll(r=0.9998)，Y=1220.217Χ-35.26 (r=0.9998)；
其特征在于:所述分离阶段的过程为:
1)、膜过滤，去除杂质；
2)、选用硅胶、C18、s印hedax为填料，在pH值为6.5，温度为35°C条件下进行柱上分离。
权利要求
1.一种以山牛蒡为原料制备多糖的方法，其包括四个阶段，分别为:原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段； 所述原料处理阶段的过程为: 1)将选好的山牛蒡用清水进行清洗； 2)将清洗后的山牛蒡超微粉碎:利用行星球研磨机对山牛蒡进行粉碎，并采用气流粉碎技术；所述行星球研磨机转速为27(T280r/min,研磨时间为8(T90min,介质填充率为1(Γ15%，被粉碎物料填充率为1(Γ15% ； 所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述超声波提取的条件为:料液比为1: 15，时间为l(T20min，温度为5(T70°C、功率40(T450W ； 所述分离阶段的过程为: 1)、膜过滤，去除杂质； 2)、选用大孔树脂在pH值为6 7，温度为3(Γ40条件下进行柱上分离； 所述色谱分离阶段其采用工业色谱进行分离，其以牛蒡苷、牛蒡苷元为测定指标，测定了提取物中牛蒡苷和`牛蒡苷元的含量；色谱柱为KromasilC18100A(150mmX4.6mm, 5 μ m)；流动相:甲醇-水(采用梯度洗脱方式:0 7min，35% 45%甲醇；7 9min，45% 48%甲醇；9 15min，48% 53% 甲醇；15 24min，53% 80% 甲醇；24 30min，80% 100% 甲醇)；检测波长为280nm，牛蒡苷及牛蒡苷元的平均回收率分别为97.7%,96.9% ；RSD分别为1.3%、0.9%(n=5)。
2.一种以山牛蒡为原料制备皂甙`的方法，其过程为其包括四个阶段，分别为:原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段； 所述原料处理阶段的过程为: 1)挑选好的山牛蒡原料； 2)将选好的山牛蒡用清水进行清洗； 3)将清洗后的山牛蒡超微粉碎:利用行星球研磨机对山牛蒡进行粉碎，并采用气流粉碎技术；所述行星球研磨机转速为27(T280r/min,研磨时间为8(T90min,介质填充率为1(Γ15%，被粉碎物料填充率为1(Γ15% ； 所述生物转化及提取阶段采用酶对处理后的原料进行转化；采用超声波水提取；所述超声波提取饿条件为:料液比为1:15，时间为l(T20min，温度为5(T70°C、功率40(T450W ； 所述色谱分离阶段其采用工业色谱进行分离，其以牛蒡苷、牛蒡苷元为测定指标，测定了提取物中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量；色谱柱为KromasilC18100A(150mmX4.6mm, 5 μ m)；流动相:甲醇-水(采用梯度洗脱方式:0 7min，35% 45%甲醇；7 9min，45% 48%甲醇；9 15min，48% 53% 甲醇；15 24min，53% 80% 甲醇；24 30min，80% 100% 甲醇)；检测波长为280nm，牛蒡苷及牛蒡苷元的平均回收率分别为97.7%,96.9%。RSD分别为`1.3%,0.9%(n=5)； 其特征在于:所述分离阶段的过程为: 1)、膜过滤，去除杂质； 2)、选用硅胶、C18、sephedax为填料，在pH值为6 7，温度为3(Γ40条件下进行柱上分离。
全文摘要
本发明涉及一种多糖皂甙的制备方法，具体讲是涉及一种以山牛蒡为原料，通过生物转化、多糖皂甙浸提和膜过滤等步骤制备多糖皂甙的方法，其包括四个阶段，分别为原料处理阶段、生物转化及提取阶段、分离阶段和色谱分离阶段；选择使用气流粉碎技术制成了山牛蒡超细微粉，确定了粉碎技术参数，微粉最小平均粒径可处理到小于0.2微米；山牛蒡多糖粗分离利用超声波水提取法对多糖的提取做了初步研究，有效成份的提取率可以提高约10%，纯度达到65%以上；建立了适用于工业色谱分离山牛蒡皂甙类单体化合物的高效液相检测方法和薄层的检测方法，实现对产品进行批量制备。
文档编号C12P17/04GK103159810SQ20131007249
公开日2013年6月19日 申请日期2013年3月7日 优先权日2013年3月7日
发明者孔淑玲, 赵书军 申请人:孔淑玲, 赵书军