专利名称：一种高耐受性产酯酵母菌株及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物化工领域，具体涉及一种高耐受性产酯酵母菌株及其应用。
背景技术：
产酯酵母，亦称生香酵母，大多属于异型汉逊氏酵母，具有较强的氧化特性和产酯能力，是白酒产香的主要菌种之一。白酒是一种含有丰富香味物质的蒸馏酒，酯类在白酒的香味形成中有特别重要的作用。如何提高白酒中酯类的含量，是白酒生产者普遍关注的问题。白洒中的酯类，根据其香型的不同，其主要酯的种类和含量都不相同。一般在清香型大曲和川法小曲酒中是乙酸乙酯的含量最多。它是在发酵过程中由酵母菌所产生，其代谢产生途径是在酵母菌细胞内产生。目前大多数小曲白酒酿造企业普遍出现白酒中乙酸乙酯含量较低，分析其原因有:入池后高发酵力菌株的生长，导致基质中乙醇含量过高，影响乙酸乙酯的生成。因为当基质中乙醇含量超过4%，酯化作用受到抑制；其次可能由于多菌株的生长，导致基质的温度、PH发生变化，影响乙酸乙酯的生成。因此，选育适应性好、高耐受性、高产乙酸乙酯酵母成为解决这一问题的关键点。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种高耐受性产酯酵母菌株。
本发明的另一目的在于提供上述高耐受性产酯酵母菌株的应用。本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种高耐受性产酯酵母菌株异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(保藏日期:2013年4月I日，保藏地址:中国.武汉.武汉大学)，其分类命名为产酯酵母 BTL-YOl Hansenula anomala BTL-YOI，保藏编号为 CCTCC NO:M2013115。所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl来源于一株分离于小曲酒生产用曲的异常汉逊氏酵母菌株(保藏编号为CCTCC NO:M2013115，可以从中国典型培养物保藏中心或湖北工业大学轻工学部酿酒实验室购买)，通过耐性(温度、PH和乙醇浓度耐性)驯化后得到。所述的异常 汉逊氏酵母菌BTL-YOl的培养特征为:YEro固体培养基(酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水至lOOOmL，pH6.0-6.5) 32°C培养24h，菌落呈圆形，白色，凸起，边缘光滑，表面干燥有脂质感，菌落易挑取，菌落大小为0.05-0.10cm。所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl于400倍显微镜观察的菌体形态特征为:菌体有圆形或椭圆形，大小为3.66X5.48 μ m (平均)；美兰染色，大部分(80-90%)细胞不着色，为无色，少部分呈蓝色，可以见着液泡；繁殖方式为一端出芽繁殖。
所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl的生物学特征为:其最高耐受温度为38°C，最适生长温度在32°C;耐酸性能好，在pH为I的环境中仍然生长良好，最适生长pH为4 ;最高耐受酒精浓度为12% (体积浓度)。所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl的稳定性特征为:在YEH)固体培养基32°C培养24h，连续传代10代培养，其培养特征及形态特征均无变化，该菌株的生物学性状稳定。所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl能够以含葡萄糖的培养基作为发酵基质静置培养，可获得酯香味突出，乙酸乙酯含量较高的发酵液；其最佳产酯培养方式为静止培养；产酯最佳培养基为小麦糖化液，小麦糖化液的制备如下:以小麦为原料，将其粉碎后，称取200g，加一定量的水煮沸，糊化IOmin ;待冷却至50_60°C后，加入糖化酶保温糖化1_2小时，然后过滤，补水至IOOOmL,加葡萄糖将其糖度调节至8度。上述异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl在酿酒中的应用。将所述的高耐受性产酯酵母菌株制成液体种子液或强化曲投入清香型大曲及川法小曲白酒酿造生产；或者单独发酵，将发酵液加入糟醅中一起蒸酒，可提高酒体中乙酸乙酯含量，改善酒质，提高经济效益。本发明相对于现有技术具有如下优点和效果:
本发明高耐受性异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl对温度、pH和酒精浓度的耐受性高，乙酸乙酯产量高；以小麦糖化液作为产酯培养基其产乙酸乙酯量可达到3.903g/L ;将其用于酿酒可以提高白酒总酯含量，改善酒质。
具体实施例方式以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术 手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1高耐受性产酯酵母菌株异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl的获得
从小曲酒厂生产用曲中分离到产乙酸乙酯酵母菌异常汉逊氏酵母菌株(可以从中国典型培养物保藏中心或湖北工业大学轻工学部酿酒实验室购买)，菌株的保藏采用YEro固体斜面培养基，其配方为:酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水至IOOOmL,pH6.0-6.5，115°C灭菌30min。菌株的培养也采用YETO培养基。菌株的培养方式可选用两种:(I)液体培养制种子液:把菌株接种于YEro液体培养基(酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加水至IOOOmL, ρΗ6.0-6.5，)中，在30°C温度下，120rpm摇瓶培养20h ；(2)固体培养活化菌株:接种于YEH)固体琼脂培养基中，于30°C培养箱培养20h。将异常汉逊氏酵母菌株分别进行温度梯度，pH梯度及乙醇浓度梯度的逐级驯化，最终得到异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01 (该菌株于2013年4月I日交于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址:中国.武汉.武汉大学，其分类命名为产酯酵母BTL-Y01 Hansenulaanomala BTL-Y01，保藏编号为 CCTCC NO:M2013115。)。实施例2高耐受性产酯酵母菌株异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01的耐受性测试
温度耐受性实验:将活化后的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01培养液按无菌操作法分别接种到装有50mL YEPD液体培养基的三角瓶中，将接种后的培养管置于摇床上，分别放置在30°C、32°C、35°C、38°C、40°C下，120rpm振荡培养24h后，测定600nm波长下的OD值，浓度大的菌液可以作适当稀释，经稀释后测得的OD值乘以稀释倍数，即为培养液实际的OD值。从表I中可以看出，异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01在38°C下仍能有一定的生长量，在40°C菌株几乎没有生长。因此该菌株的最高耐受温度为38°C，最适生长温度32°C。表I不同温度下异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl的生长情况
权利要求
1.一种高耐受性产酯酵母菌株异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于:该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，其分类命名为产酯酵母BTL-YOl Hansenula anomalaBTL-YOI，保藏编号为 CCTCC NO:M2013115。
2.根据权利要求1所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于该菌株培养特征为:YEPD固体培养基32°C培养24h，菌落呈圆形，白色，凸起，边缘光滑，表面干燥有脂质感，菌落易挑取，菌落大小为0.05-0.10cm。
3.根据权利要求1所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于该菌株于400倍显微镜观察的菌体形态特征为:菌体有圆形或椭圆形，大小为3.66X5.48 μ m ;美兰染色，大部分细胞不着色，为无色，少部分呈蓝色，可以见着液泡；繁殖方式为一端出芽繁殖。
4.根据权利要求1所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于该菌株的生物学特征为:最高耐受温度为38°C，最适生长温度在32°C;耐酸性能好，在pH为I的环境中生长良好，最适生长pH为4 ;最闻耐受:酒精浓度为12%。
5.根据权利要求1所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于该菌株的稳定性特征为:在YEro固体培养基32°C培养24h，连续传代10代培养，其培养特征及形态特征均无变化，该菌株的生物学性状稳定。
6.根据权利要求1所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于该菌株产酯的培养方式为静置培养。
7.根据权利要求1所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于该菌株产酯的培养基为小麦糖化液；小麦糖化液的制备为:以小麦为原料，将其粉碎后，称取200g，加一定量的水煮沸，糊化IOmin ;待冷却至50-60°C后，加入糖化酶保温糖化1_2小时，然后过滤，补水至IOOOmL,加葡萄糖将其糖度调节至8度。
8.权利要求1-7任一·项所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl在酿酒中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于:将权利要求1-7任一项所述的异常汉逊氏酵母菌BTL-YOl制成液体种子液或强化曲投入清香型大曲及川法小曲白酒酿造生产；或将权利要求1-7任一项所述的异常汉逊氏酵母菌单独发酵，将发酵液加入糟醅中一起蒸酒。
全文摘要
本发明公开了一种高耐受性产酯酵母菌株及其应用，属于生物化工领域。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名为产酯酵母BTL-Y01 Hansenula anomala BTL-Y01，保藏编号为CCTCC NOM2013115。BTL-Y01最高耐受温度为38℃，最适生长温度在32℃；耐酸性能好，在pH为1的环境中生长良好，最适生长pH为4；最高耐受酒精浓度为12%。其静置培养发酵产乙酸乙酯高于摇床振荡培养，以小麦糖化液作为产酯培养基其产乙酸乙酯量可达到3.903g/L。该菌株适用于酿酒中，能够提高白酒中乙酸乙酯及总酯含量，提升清香型白酒的典型风味，改善酒质，提高经济效益。
文档编号C12R1/78GK103232946SQ201310191489
公开日2013年8月7日 申请日期2013年5月22日 优先权日2013年5月22日
发明者方尚玲, 陈茂彬, 汪江波, 镇达, 薛栋升, 李锐利, 严锦 申请人:湖北工业大学