一种包含尿酸氧化酶的药用组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供可作为医药品基质使用的尿酸氧化酶（UOX）组合物及其制备方法。该组合物包含在尿酸氧化酶的m个氨基上结合精制卵磷脂残基（PC），精制的卵磷脂残基如下述通式（I）所示，其中m为1-16的整数，结合卵磷脂残基的尿酸氧化酶表示为PC-UOX。该药用组合物以前述尿酸氧化酶氨基被精制卵磷脂残基结合的PC-UOX为主成分，由PC-UOX（m）（m=1-16）组成。
【专利说明】一种包含尿酸氧化酶的药用组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种包含尿酸氧化酶的药用组合物及其制备方法，具体来讲，涉及在来源于微生物、动物、植物尿酸氧化酶(UOX)中结合精制卵磷脂残基制得的药用组合物及其制备方法、精致工序等。
【背景技术】
[0002]尿酸氧化酶是生物体内一种重要的酶，能够将溶解度较低的尿酸代谢为溶解度较高的尿囊素，再通过排泄系统排出体外，防止在体内累积较高浓度的尿酸。在人进化历史上，由于发生编码尿酸氧化酶的基因发生了突变导致人体内无法合成尿酸氧化酶，无法将尿酸降解为尿囊素。
[0003]若长时间的在排泄尿酸或尿酸生成上出现故障后，体内尿酸被累积，由于尿酸在血浆中溶解度较低，导致易沉积结晶在体内温度较低的四肢关节等部位，形成痛风，进一步结晶沉积结块会侵蚀关节部位的骨骼。
[0004]癌症化疗过程中细胞的大量死亡，造成瞬时的尿酸大量生成，血尿酸的浓度的升高也会给患者造成很大的风险。
[0005]黄曲霉提取的尿酸氧化酶作为一种治疗药物，能很快的降解尿酸，降低人体内的血尿酸浓度，从20世纪70年代起就用于癌症化疗过程中的血尿酸浓度的迅速上升的治疗。在生物技术迅速发展的20世纪90年代，更高质量的重组的尿酸氧化酶替代了天然来源的尿酸氧化酶，用于癌症化疗中。
[0006]而尿酸氧化酶作为药物治疗痛风时，由于其较大的分子量(120kDa)，外源的尿酸氧化酶在人体内很容易造成很大的免疫原性，无法用于作为一种长期的代谢疾病痛风的药物，并且尿酸氧化酶在人体内的半衰期很短，限制了尿酸氧化酶在人体内活性的作用。
[0007]在21世纪，聚乙二醇(PEG)化修饰能包裹尿酸氧化酶的表面抗原位点，大大的降低免疫原性，同时也避免了被快速地降解增加了半衰期。PEG化的尿酸氧化酶已经被批准作为一种治疗难治性痛风的药物。
[0008]但是，近年来研究发现PEG化的尿酸氧化酶快速降解体内血尿酸，溶解痛风石的同时会带来小的痛风结晶从痛风石上扩散开来，和免疫细胞内的信号分子结合，造成严重的炎症反应，导致痛风的反复发作。这些缺陷和不足限制了 PEG化尿酸氧化酶在临床中应用。
[0009]中国专利申请CN 101302501 B，发明名称为“聚乙二醇化尿酸氧化酶化合物及其制备方法和其制剂及应用”中公开了聚乙二醇化的尿酸氧化酶制备以及使用，由此方法获得的PEG化尿酸氧化酶无法进入胞内来代谢胞内的尿酸晶体，而且容易造成上述的炎症反应，导致痛风的反复发作，给患者带来了痛苦。
[0010]针对目前尿酸氧化酶应用中存在的不足和缺陷， 申请人:进行潜心研究发现，将具有良好细胞亲和性精制卵磷脂残基特定结合在尿酸氧化酶的氨基上制得的结合了精制卵磷脂残基的尿酸氧化酶药用组合物，可以克服PEG化尿酸氧化酶的免疫原性问题，同时大大提高尿酸氧化酶的半衰期，细胞亲和性高，容易进入人体内的细胞中，代谢细胞内的尿酸晶体，可以很好地防止在溶解痛风石的同时微小痛风结晶的扩散，抑制了痛风的反复发作。
【发明内容】
[0011]本发明的目的是提供一种可作为医药品基质使用的包含尿酸氧化酶的药用组合物。
[0012]本发明的另一目的是提供该尿酸氧化酶药用组合物的制备方法以及精制工艺等。
[0013]本
【发明者】进行研究后发现，特定的尿酸氧化酶(UOX)的1-16个氨基被精制的卵磷脂残基结合后制得的尿酸氧化酶(PC-UOX)为主成分的药用组合物可解决前述课题。对制备该PC-UOX组合物的条件进行探索后发现，通过精制的卵磷脂残基与特定的UOX以特定比例反应，采用特定的精制方法进行精制，可以高收率的获得PC-UOX组合物。
[0014]本发明目的是通过如下技术方案实施的:
一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其中尿酸氧化酶来源于微生物，动物或植物，该组合物中以尿酸氧化酶的m个氨基上结合如下述通式(I)所示的精制卵磷脂残基的组合物A为主成分:
【权利要求】
1.一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，来源于微生物，动物或植物的尿酸氧化酶的m个氨基上结合如下述通式(I)所示的精制卵磷脂残基的组合物A为主成分:
2.如权利要求1所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于其中微生物来源包括假丝酵母菌或黄曲霉；动物来源为除人和猿类以外的哺乳动物；植物来源包括豆类植物的根或叶。
3.如权利要求1所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，精制卵磷脂残基的纯度大于98%。
4.如权利要求1或2或3所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，该药用组合物中还可以含有尿酸氧化酶的16个以上的氨基上结合前述通式(I)表示的精制卵磷脂残基制得的组合物B。
5.如权利要求1至4所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，利用高校液相色谱法测定的组合物A和组合物B的比例之和相对于尿酸氧化酶的总量在90%以上，其单位为色谱图的峰面积％。
6.如权利要求5所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，组合物A的比例相对于结合精制卵磷脂残基的尿酸氧化酶的总量在90%以上，其单位为色谱图峰面积％。
7.如权利要求1-4所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，利用尿酸降解法测定的尿酸氧化酶组合物的活性为每Img该药用组合物的活性单位值在2单位以上。
8.如权利要求1所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物，其特征在于，组合物A含有以4或8分子m相同或不同的结合精制卵磷脂残基的尿酸氧化酶缔合的四聚体或八聚体形式。
9.一种包含尿酸氧化酶的药用组合物的制备方法，其特征在于，实施相对I摩尔的下述通式(II):O
Il
CH2O——C——R
Z——C-(CH2In—C——0 ——CH 0
00CH2O——P——OCH2CH2M-1CH2!,
( II ) 表示的精制卵磷脂衍生物，使用0.005-0.4倍摩尔的来自微生物，动物或植物的尿酸氧化酶与其反应，获得结合精制卵磷脂残基的尿酸氧化酶粗品，通过利用离子交换柱色谱法对该粗品进行精制工序，制造权利要求1-8中任一项所述的含有精制卵磷脂残基的尿酸氧化酶组合物，通式(II)中，R为碳数8-30的烷基，Z为羟基或从形成活性酯的基团除去了羧基而得的基团，n为2-10的整数。
10.如权利9所述的一种包含尿酸氧化酶的药用组合物的制备方法，其特征在于，使用溶剂C使制造结合卵磷脂残基的尿酸氧化酶粗品中未反应的尿酸氧化酶吸附于离子交换树脂中，使权利要求1-8中任一项所述的结合精制卵磷脂残基的尿酸氧化酶组合物穿透析出，其中，溶剂C由无机盐浓度为5-100 mM的pH6-ll，含有0.5%_5%的非离子型去污剂组成的缓冲液。
【文档编号】C12N9/96GK103638516SQ201310549145
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年11月8日 优先权日:2013年11月8日
【发明者】陈静, 尤东超, 齐连权, 肖萱, 张伟强, 周丽莹 申请人:北京泰德制药股份有限公司