一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法
【专利摘要】本发明涉及生物学领域中以尿液为样本提取核酸的方法及其应用。本发明提供了一种能快速从大容量尿液中提取核酸的专用试剂盒及提取方法，采用抽滤过柱的方式将尿液中的核酸富集到核酸吸附柱上，再经过洗涤、洗脱等步骤，提取出尿液中含有的微量核酸。使用本发明提供的试剂盒提取得到的核酸包含了尿液中的游离核酸和尿液中脱落细胞内的核酸，操作简单快捷，核酸得率高、纯度高，可直接用于分子生物学检测。
【专利说明】-种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物学领域中核酸（DNA和RNA)的提取方法，具体涉及一种从人类尿 液中提取核酸的方法及其应用。 技术背景
[0002] 尿液是血液流经肾脏后，经肾小球滤过、肾小管重吸收与分泌作用而形成，通过 膀胱、尿道排出体外。尿液是保持机体内环境稳定的最终代谢产物，除了含有水、葡萄糖、 无机盐、蛋白质、尿素、尿酸外，还含有血红细胞、白细胞、器官脱落的表皮细胞、游离DNA及 RNA (mRNA，miRNA等）。尿液中的游离核酸包括经肾脏过滤的来自体循环的游离核酸以及来 自尿道细胞裂解后释放出来的核酸。尿液中蕴藏着丰富的生物学信息，并具有无创收集、 处理相对简单等优点。尿液成分及含量的改变不仅受泌尿系统、生殖系统的影响，而且与血 液循环、内分泌、消化、代谢、呼吸等系统的生理或病理变化有关。从尿液中分离出核酸，并 对这些核酸片段进行测试，可以帮助对癌症、肺结核、艾滋病、疟疾和潜在的一些其它的疾 病的早期、有效的分子检测。
[0003] 由于尿液中的游离核酸和体细胞的含量很低，采用常规的核酸提取方法难以从尿 液细胞中获取足量且高质量的核酸。尿液pH值、密度、温度等理化性质及样本自收集到处 理的时间间隔都可能影响尿液中细胞的完整性，进而影响提取核酸时的回收率。为了从尿 液中以高回收率获取高质量的核酸，除了采用降低存储温度、缩短样本收集及处理时间和 减少实验对样品的处理（离心或浓缩）等保持细胞完整性的方法外，核酸提取时采用的方 法尤为重要。
[0004] 在采用离心柱法提取核酸时，通常将样品离心通过吸附柱，使样品中的核酸结合 到吸附柱的硅胶膜上。然而这样的上样方法对于核酸含量低、样品量较大的尿液而言，所需 上样时间过长，不利于核酸的提取。也有方法先将尿液离心后，取沉淀细胞作为样品，可有 效减小样品的体积，但这类提取方法会损失尿液上清中的游离核酸，而尿液中的游离核酸 包含着很大的生物学信息。因此，针对尿液中核酸含量低、提取核酸时所需样本量较大的实 际情况，发明一种从尿液中快速富集并提取核酸的方法，将对临床应用尿液进行分子检测 具有重要的应用价值。本发明提供了富集尿液核酸专用的抽滤装置，可将大量尿液样本中 的核酸快速富集至核酸吸附柱上，再经过洗涤、洗脱步骤，提取出高质量的核酸，可用于分 子检测。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是为了克服实验室现有技术的不足，提供一种能快速从大容量尿液 中提取核酸的专用试剂盒及提取方法。
[0006] 本发明提供的提取尿液核酸试剂盒所含试剂及耗材装置见表1，提取流程为：在 尿液中加入〇. 5?3倍量的裂解液ULB，37?55°C保温10?60min后，将样品全部通过核 酸吸附柱，样品中的核酸将结合到吸附柱的硅胶膜上。用洗涤液UWB1和UWB2分别洗涤吸 附柱后，再用洗脱液将核酸从吸附柱上洗脱下来。
[0007] 表1 :尿液核酸快速提取试剂盒所含试剂及装置
[0008]
【权利要求】
1. 一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，可快速从大容量尿液中提取微量核 酸，其特征在于：在尿液中加入裂解液ULB，保温一段时间后，将样品全部通过核酸吸附柱， 样品中的核酸将结合到吸附柱的硅胶膜上，用洗涤液UWB1和UWB2分别洗涤吸附柱后，再用 洗脱液将核酸从吸附柱上洗脱下来。
2. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：提 取出的核酸包含了尿液中的游离核酸和尿液中脱落细胞内的核酸。
3. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：裂 解液ULB的用量为尿液样本的0. 5?3倍量。
4. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：在 裂解液ULB中，SDS的浓度为0. lg/uL?lg/uL，最适浓度为0. 2ng/uL?0. 6ng/uL ;EDTA的 浓度为〇. 5mmol/L?2mmol/L，最适浓度为lmmol/L?1. 5mmol/L ;曲拉通X-100的浓度为 0. 5(%?6(%，最适浓度为2(%?3(% ;盐酸胍的浓度为21]1〇1凡?81]1〇1/]^，最适浓度为51]1〇1/ L ?8mol/L〇
5. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：在 尿液样本中加入裂解液ULB后，于37?55°C保温10?60min。
6. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：采 用抽滤的方法将尿液样本全部通过吸附柱，通过抽气泵将废液收集瓶中空气抽净，使外界 大气压大于废液收集瓶中的气压，利用气压差，加快盛样管中的尿液通过吸附柱，达到快速 将核酸富集到吸附柱上的目的。
7. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：盐 酸胍的浓度为2mol/L?8mol/L，最适浓度为3mol/L?6mol/L ;氯化钠浓度为75mmol/L? 1. 5mol/L，最适浓度为 1 20mmo1 /T,?200mmol/L ;EDTA 的浓度为 0· 5mmol/L ?2mmol/L，最 适浓度为lmm〇l/L?1. 5mmol/L ;乙醇浓度为40 %?80%，最适浓度为55 %?75%。
8. 如权利要求1所述的一种从尿液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：洗 脱液UWB2可以为纯水或pH值大于7. 0的低盐溶液。
【文档编号】C12N15/10GK104195134SQ201410479242
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月18日 优先权日:2014年9月18日
【发明者】唐涛, 周细武, 邱英华 申请人:宁波有成生物医药科技有限公司