一株产几丁质酶的枯草芽孢杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明的目的是提供一株产几丁质酶的枯草芽孢杆菌其应用，所述产几丁质酶枯草芽孢杆菌经等离子体诱变获得，具有更高的几丁质酶酶活力和蛋白酶酶活力，可作为发酵剂、益生菌和防腐剂，广泛应用于酶制剂和食品工业。本发明的枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.9166。本发明的菌株具有较高的几丁质酶酶活力和蛋白酶酶活力，且该菌株营养需要简单，繁殖力强，可作为发酵剂、益生菌和防腐剂，应用前景广阔。CGMCC No.91662014.05.14
【专利说明】-株产几T质酶的枯草芽抱杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物应用【技术领域】，具体涉及一株产几下质酶枯草芽抱杆菌及其应 用。
【背景技术】
[0002] 几下质酶（Chitinase)能催化降解甲壳素（几下质）生成几下寡糖，几下寡糖具 有水溶性，是甲壳素、壳聚糖产品的升级产品，对腐败菌的抑制效果显著，是性能优良的天 然食品防腐保鲜剂。同时，几下寡糖还具有能促进有益微生物（如双歧杆菌、乳酸菌）的生 长，改善肠道微生物菌群，提高机体免疫力，促进肝脾抗体形成、促进巧及矿物质的吸收、降 血脂、去除氧负离子自由基延缓衰老、抑制肿瘤细胞生长等功能，可应用于医药、功能性食 品、化妆品等领域。
[0003] 我国有广阔的海岸线和大面积水产养殖基地，几下质资源丰富，但开发利用率低， 生产水平不高，产品档次低，造成资料浪费的同时也造成了环境污染。而生产几下寡糖就 是一条利用几下质开发高附加值产品的一条重要途径。目前，几下寡糖的生产主要有化学 降解法和生物酶法两种方法；但化学降解法成本高，不易控制，产物聚合度较低（生物活性 低）且多为单糖，应用价值不高，而且会带来的严重的酸污染，其使用受到严格限制。而生 物酶法具有催化效率高，反应温，具有特异性，易控制，可生成不同聚合度的几下寡糖，具有 良好的应用前景，但一个限定因素就是需要具有高几下质酶酶活性的微生物。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一株产几下质酶的枯草芽抱杆菌其应用，所述产几下质酶枯 草芽抱杆菌经等离子体诱变获得，具有更高的几下质酶酶活力和蛋白酶酶活力，可作为发 酵剂、益生菌和防腐剂，广泛应用于酶制剂和食品工业。
[0005] 本发明一方面提供了一株枯草芽抱杆菌炬acillus subtilis)PLall9,于2014年 5月14日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的的中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中也，保藏编号为CGMCC No. 9166。
[0006] 本发明的枯草芽抱杆菌可应用于酶制剂、菌制剂、防腐剂和制备几下寡糖。
[0007] 本发明的另一方面提供了含有上述枯草芽抱杆菌的邮头酱。
[0008] 所述的邮头酱，制备过程为；邮头清洗打浆，接入枯草芽抱杆菌化all9,经半固态 发酵，加入香辛料，制得邮头酱成品。
[0009] 上述枯草芽抱杆菌可作为益生菌生产菌制剂，制备过程为：邮壳烘干，粉碎打浆， 接入枯草芽抱杆菌PLall9,经半固态发酵，加入奶粉和藏糖，制得枯草芽抱杆菌菌制剂。
[0010] 本发明还提供一种几下质酶的制备方法，是用上述的枯草芽抱杆菌化all9接种 到培养基中发酵后制备的；其中培养基组成如下：胶体几下质12g/L、豆稍9. 5g/L、蛋白腺 5g/L、酵母膏 4g/L、KH2PO4O. 3g/L、葡萄糖 0. 5g/L、M拆〇4 ? 7&0 0. 6g/L g/L、FeS〇4 ? 7&0 0. Olg/L、ZnS〇4〇. Olg/L。最佳发酵条件为；温度为35°C、转速为180r/min、接种量为4%、 初始抑为7. O、发酵时间为4她。
[0011] 本发明经等离子体诱变筛选到一株枯草芽抱杆菌化all9。该菌株具有较高的几下 质酶酶活力和蛋白酶酶活力，且该菌株营养需要简单，繁殖力强，可作为发酵剂、益生菌和 防腐剂，应用前景广阔。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
[0013] 实施例1 ;枯草芽抱杆菌化al 19的选育及其产酶条件优化
[0014] 1、出发菌株的枯草芽抱杆菌筛选自邮头富集过的±壤，经青岛农业大学食品微生 物实验室鉴定、保藏，具有产几下质酶和蛋白酶能力。
[001引 2、培养基
[001引 （1)富集培养基（g/L);牛肉膏3,蛋白腺10,化Cl 5,抑7.0。
[0017]似分离培养基（g/L);胶体几下质 2. 5, M拆〇4 ? 7&0 0. 5, ^HPO"皿2?〇4〇. 3， FeS〇4*7H2〇 0. 01，（畑4)25〇43,琼脂 20。抑 7. 0，12rC，灭菌 20min。
[001引 做摇瓶筛选培养基（产酶培养基）（g/L);胶体几下质10,豆稍10,蛋白腺5,酵 母膏 5, K2HPO4O. 7, KH2PO4O. 3,葡萄糖 1，M拆04 ? 7&00. 5, FeS04 ? 7&0 0. 01，ZnS040. 01。抑 7. 0,121°C，灭菌 20min0
[0019] 3、等离子体诱变选育
[0020] 取出发菌株枯草芽抱杆菌，加入富集培养基，37C培养2化，梯度稀释至IO6C化/ 血，常温等离子体诱变处理lOmin，将诱变后菌液涂布于分离培养基，于37C培养72h，挑 取菌落典型且圈径比较大菌株，进行重复分离纯化，本次实验共获得12株菌株，并分别依 次命名为PLallU PLall2、化all3至化al22。将纯化得到的菌株接种到摇瓶筛选培养基， 测试各菌株在37°C、180r/min培养72h时上述12株菌的几了质酶和蛋白酶活力，其中菌 株化all9的几了质酶酶活力最高，达到1. 92 + 0. 02U/mU且兼具产蛋白酶，蛋白酶活力 95. 6抓/mL (表 1)。
[0021] 表1 ;12株菌在7化几下质酶及蛋白酶酶活力实验结果
[0022]
【权利要求】
1. 一株枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.9166。
2. 权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在制备于酶制剂、菌制剂、防腐剂或制备几丁寡糖 中的应用。
3. -种虾头酱，其特征在于，所述的虾头酱的制备过程如下：将虾头清洗打浆，接入权 利要求1所述的枯草芽孢杆菌，经半固态发酵，加入香辛料，制得虾头酱成品。
4. 一种菌制剂，其特征在于，所述的菌制剂的制备过程如下：将虾壳烘干，粉碎打浆， 接入权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，经半固态发酵，加入奶粉和蔗糖，制得枯草芽孢杆菌 囷制剂。
5. -种几丁质酶的制备方法，其特征在于，所述的制备方法，是用权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌接种到培养基中发酵后制备的；其中培养基组成如下：胶体几丁质12g/L、蛋白 胨 5g/L、酵母膏 4g/L、KH2P04 0. 3g/L、葡萄糖 0. 5g/L、MgS04*7H20 0. 6g/L g/L、FeS04*7H20 0.01g/L、ZnS04 0.01g/L。最佳发酵条件为：温度为35°C、转速为180r/min、接种量为4%、 初始pH为7. 0、发酵时间为48h。
【文档编号】C12R1/125GK104357361SQ201410643071
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月14日 优先权日:2014年11月14日
【发明者】李静, 谭海刚, 王凤舞 申请人:青岛农业大学