本发明属于微生物工程技术领域，涉及一种金银花菌(分类命名：茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden)深层发酵液加工制成饮料制备工艺，用该发酵液加工生产制成饮料，属于传统中药和现代生物技术有机结合的产物。
背景技术：
金银花菌(分类命名：茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden)，曾用名环棱褐孔菌，又名金芝，俗称金银花莪子，是山东著名道地药材金银花植株上的一种药用真菌，2002年载入《山东省中药材标准》。在当地民间具有悠久的食药用历史，该菌子实体用于治疗咽炎、喉炎、扁桃体炎等炎症，临床疗效显著。药理实验研究证明，该菌具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、促进肌体免疫等生物活性，是一种珍贵的、可以替代金银花清热解毒、消炎作用的真菌药物资源。为开发利用这一资源，我们对其进行了深入研究，从金银花植株上获得金银花菌母种并对其分离纯化，得到了该菌的纯菌种，然后通过液体深层发酵的生物技术，达到用规模化生产金银花菌发酵液而加工制成功能饮料的目的。
目前，我国金银花年产量仅800万公斤，而国内外市场需求量为2000万公斤以上，每年供需缺口达1200万公斤。本发明生产的发酵液，在一定程度上可以替代金银花的泡制使用，以缓解金银花供需紧张的局面。此外本发明生产的发酵液经检测富含蛋白质、脂肪、碳水化合物和真菌多糖等营养素，含有甾醇类、三萜类、有机酸、酮类等化学成分；作为健康营养补充剂具有药理学功效，有利于清咽利喉、清肺祛霾，辅以治疗上呼吸道感染和抗病毒、抗肿瘤的作用。以金银花菌发酵液为主要原料，经科学添加其他食品原辅料和(或)食品添加剂加工制成健康型功能饮料等产品，对维护大众健康，提高人们生活品质具有重要意义。
技术实现要素：
本发明所用金银花菌的原菌种经鉴定，属于真菌界、担子菌门、无隔担子菌纲、非褶菌目、绣革孔菌科真菌。子实体形状不规则，呈扁平状、拳形、半圆形或云片状。菌盖表面粗糙，硬而韧，覆瓦状排列，赤酱色至浅栗色，无光泽，有同心环状棱纹及细微绒毛，1.5-4×3-7cm，边缘薄或稍钝，深肉桂色。无菌柄，子实体背面黄褐色，肉眼可见布满细小的管口，管口浅肝褐色至暗褐色，有时可见成簇的新生子实体。断面可见菌肉呈纤维质，棕黄色，菌管长1-2mm。孢子呈淡黄色，球形或阔卵形，直径3μm。
我们选用PDA培养基，对该菌进行了菌种分离纯化，得到了该菌的纯菌种，并通过液体培养实验，初步确定了菌丝体的发酵培养基配方为麦芽汁(10Bx)10％，蛋白胨0.3％，葡萄糖1％，蔗糖1％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0。采用以上培养基，27℃培养96小时摇瓶培养发酵液收率92％，废渣液等8％。确立了中试发酵生产流程：试管斜面菌种——500ml三角瓶液体种子(装量200m1)——5L血清瓶种子(装量3L)——1吨发酵罐(装量500L)——过滤贮存——添加其他食品原辅料和(或)食品添加剂——均质加工——灌装灭菌——包装入库。中试发酵培养基和大生产培养基为；麦芽汁(10Bx)15％，蔗糖1％，葡萄糖1％，蛋白胨0.3％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0，培养条件为：装量50％，接种量6-10％；温度27±1℃，搅拌转速160rpm，通气量6立方米/小时，36～48小时发酵液收率95％。此阶段培养基发酵液收率达到最佳且质量稳定，然后经冷却过滤添加配料和均质加工灌装灭菌等步骤获得功能饮料。
对发酵液质量进行测评，首先是感官要求指标：饮料色泽为淡黄色、口感微甜、具有真菌特有的清香味、外观透明澄清液体、无肉眼可见的外来杂质；理化指标检测：真菌多糖/(mg/mL)≥1.0，可溶性固形物/％≥6；微生物指标检测：菌落总数/(cfu/mL)≤100，大肠菌群/(MPN/100mL)≤3，致病菌不得检出。其次采用气相色谱—质谱(GC-Ms)法分析检测发酵液的成分，表明醇类、酸有机、酮类等化学成分含量高稳定性好。同时还分析测定了其他总膳食纤维符合有关要求规定。
该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保存(北京市海淀区中国科学院微生物研究所；邮编100080)；
分类命名：茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis(Schumach.：Fr.)Ryvarden
保藏编号为；CGMCC No.1195，保藏日期2004年7月22日。
附图说明
附图为一种金银花菌深层发酵液加工制成饮料生产流程。
具体实施方式：
一种金银花菌深层发酵液加工制成饮料生产流程
1、在PDA培养基上的培养情况：将分离到的纯菌种调取少许，转移到PDA培养基上，30℃培养3天，菌落圆形，边缘整齐，平铺，中间部分隆起，白色，絮状，致密，背面黄色，具放射状沟纹，直径2.7-3.2cm。显微镜下观察菌丝无色，细长，具横隔，纵横交错，多分枝，直径2-2.5μm；菌丝细胞的细胞壁薄而透明，菌丝生长初期可见锁状联合，生长后期分枝较多时，锁状联合不明显。
2、液体培养：将马铃薯去除芽眼与外皮，切成1cm见方的小块，称取600克，加水3000ml，用铝锅在电炉上加热，待其沸腾后，保持30分钟，然后用四层纱布过滤，滤液备用。另外称取葡萄糖60克、磷酸二氢钾6克、硫酸镁1.5克、尿素1.2克，加适量水溶解后，与上述马铃薯水煎液混合，最后定容至3000ml。
取300ml三角瓶，洗净烘干放冷后，每瓶加入上述培养液150ml，注意不要使液体粘附到瓶壁上，上盖棉塞，最后用牛皮纸、橡皮筋封口。在接种菌种之前，将包装好的三角瓶整体置于紫外灯下消毒40分钟。
3、菌丝的接种与培养：取小三角瓶中固体培养生长情况较好的金银花菌菌丝进行接种，注意剔除底部含有琼脂的固体培养基，菌丝团的直径大约为1～2mm，尽量使所取菌丝团的大小保持一致，每瓶取5个菌丝团。如前重新封瓶后，置于恒温振荡器上进行培养，保持温度27℃，振幅为2cm，震荡速率为100rpm。
4、菌丝体培养条件优化：摇瓶培养的温度和培养时间的确定，采用500ml三角瓶，装量200ml，摇瓶转速150rpm，在30℃温度条件下，发酵后测定菌丝体干重的收率。由此表明菌丝体的适宜培养温度为27℃，在27℃条件下摇瓶培养的时间为96小时。
5、发酵生产：菌丝体的发酵培养基配方为麦芽汁(10Bx)10％，蛋白胨0.3％，葡萄糖1％，蔗糖1％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0。采用以上培养基，27℃培养96小时摇瓶培养发酵液收率92％，废渣液等8％。确立了中试发酵生产流程：试管斜面菌种——500ml三角瓶液体种子(装量200ml)——5L血清瓶种子(装量3L)——500L发酵罐(装量300L)——5吨发酵罐。培养基为：麦芽汁(10Bx)15％，蔗糖1％，葡萄糖1％，蛋白胨0.3％，玉米浆0.5％，PH5.5-6.0，培养条件为：装量60％，接种量10％；温度27℃，搅拌转速160rpm，通气量6立方米/小时，36小时发酵液收率95％。36小时培养基发酵液收率达到最佳并且质量稳定。
6、在发酵时间达到最佳时，将发酵罐的发酵液与菌丝转入压滤工序，滤掉菌丝体，保留可溶性成分，集中收取压滤后的金银花菌发酵液贮存，然后通过科学配比添加其他食品原辅料和(或)食品添加剂，经均质加工并通过无菌管道处理方式进行灌装，然后灭菌，包装入库。
参考文献
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