本发明涉及真菌领域，具体而言，涉及一种用于培养灵芝菌丝体的培养基及制成的灵芝菌丝体。
背景技术：
灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。灵芝是担子菌纲多孔菌科(polyporaceae)灵芝属(ganodelma)真菌赤芝(g.lucidum.karst)和紫芝(g.japonicrnlloyd)的总称，被《本经》称为上品。自古以来，灵芝就被认为是吉祥、富贵、美好和长寿的象征，有“仙草”和“瑞草”之称，中华传统医学长期以来一直视之为滋补强身、固本扶正的珍贵中草药。
现代科学研究表明，灵芝的营养成分包括：碳、氢、氧、氮、硫、磷、钾、镁、钙、铁、铜、锰、和锌等微量元素以及灵芝多糖、灵芝三萜和核苷酸等。这些营养成分直接进入人体的肝、肾、胆、脾、肺诸经，而且具有广泛的药理作用，且毒性极低，如已发现灵芝具有抗肿瘤、免疫调节、镇静安神、强心及抗心肌缺血、调节血脂、平喘、保肝、降血糖、抗缺氧和清除自由基以及延缓衰老的作用。长期服用灵芝，能够扶正固本作用，延年益寿。因此，灵芝成为目前研究和开发最多的药用真菌之一。
目前，灵芝的利用主要集中于子实体和孢子粉。市面上的灵芝产品多为灵芝子实体或灵芝孢子粉。然而灵芝子实体的品质容易受多种因素的影响，比如培养用的木材种类，生长的温度、湿度、采收的时间、干燥的方式等因素影响，造成以子实体为原料生产出的灵芝产品质量不稳定的后果。而灵芝孢子中各营养物质的含量虽然高，但其孢子壁厚，不经破壁处理，营养成分难以被人体有效吸收，而灵芝破壁处理的工艺复杂，使得灵芝孢子粉末的造价成本过高。
与子实体和孢子粉相比，灵芝菌丝体具有培养周期短、品质稳定、易于加工处理和性价比高等优势，具有极大的社会经济价值。但目前缺乏适合灵芝菌丝体生长的专用培养基和培养方法，现有的培养基和培养方法不但产量低而且培养所得菌丝体中各营养物质的含量低、品质不高。
因此，本领域亟待对现有的培养基和培养方法进行改进，以期提高灵芝菌丝体的产量，同时提升灵芝菌丝体的品质。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种用于培养灵芝菌丝体的培养基，所述培养基满足灵芝生长过程中对营养和透气性的需求，能够使灵芝健康、快速成长，所得灵芝菌丝体中各种营养物质的含量高，营养丰富。
本发明的第二目的在于提供一种制备灵芝菌丝体的方法，所述方法具有产量高、灵芝菌丝中营养物质含量丰富、品质高的优点。
本发明的第三目的在于提供根据前述方法制成的灵芝菌丝体，本发明所述灵芝菌丝体具有营养物质含量丰富，品质好，易于人体吸收等优点。
为实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种用于培养灵芝菌丝体的培养基，所述培养基主要由以下重量份的原料制备而成：玉米30～80份、小麦20～40份、大豆2～10份、小米2～10份和水81～210份；其中，所述玉米、小麦、大豆和小米均未破碎，为完整的粮食颗粒。
培养基是灵芝赖以生存的各种营养物质之所在，在使用品种和生产环境条件相同的情况下，培养基的好坏将直接影响灵芝的品质。首先，本发明所述培养基以玉米、小麦、大豆和小米为主要原料制备而成。其中，玉米的营养成分全面，含蛋白质8.5％、脂肪4.3％、糖类73.2％、钙0.022％、磷0.021％、铁0.0016％，还含有有胡萝卜素、维生素b1、b2和尼克酸以及谷固醇、卵磷脂、维生素e等微量元素；小麦含淀粉53～70％，蛋白质约11％，糖类2～7％，糊精2～10％，脂肪约1.6％，粗纤维约2％；大豆含蛋白质36.3％、脂肪13.4％、碳水化合物25％、钙0.0037％、磷0.00571％、铁0.0011％，还含有胡萝卜素、硫胺素和核黄素等；小米中含淀66.85％～69.76％，蛋白质达11.2％～13.4％，脂肪4.5％～5.85％。本发明通过玉米、小麦、大豆和小米之间的配合，满足灵芝菌丝体在快速生长过程中对c源、n源、磷、硫、钙、铁、微量元素和生长因子的要求，培养所得的灵芝菌丝体中各营养物质的含量高、菌丝体菌丝体浓密、洁白、整齐，品相好，品质含量高。
其次，本发明所述培养基中的所述玉米、小麦、大豆和小米均未破碎，为完整的粮食颗粒，尤其是玉米和大豆，粮食颗粒本身的粒径大于一般的粮食，使得制成的培养基的孔隙率大，透气性好，能够充分保障灵芝菌丝体对氧气的需求，使得灵芝菌丝体在短时间内能够快速地增殖，提高菌丝体的产量。
在一些具体的实施方式中，按重量份计，所述玉米为30、40、50、60、70或80份；
在一些具体的实施方式中，按重量份计，所述小麦为20、25、30、35或40份；
在一些具体的实施方式中，按重量份计，所述大豆为2、3、4、5、6、7、8、9或10份；
在一些具体的实施方式中，按重量份计，所述小米为2、3、4、5、6、7、8、9或10份；
在一些具体的实施方式中，按重量份计，所述水为81、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200或210份。
在一些具体的实施方式中，所述培养基按以下方式制备而成：将所述原料按比例混合均匀，在121℃以上、1～1.5个大气压的条件下，灭菌2～4h；灭菌之后，冷却至30℃以下，即得。
在一些具体的实施方式中，所述大气压为1个、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5个大气压；
在一些具体的实施方式中，所述灭菌时间为2、2.5、3、3.5或4h；
在一些具体的实施方式中，所述培养基冷却至30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或20℃；
本发明还涉及一种制备灵芝菌丝体的方法，所述方法包括：
(1)在前述的培养基中接种灵芝菌种，接种量为1～5g/kg培养基；
(2)在温度为23～27℃、相对湿度为55～79％的条件下培养所述灵芝，期间，先避光培养10～15天，然后光照培养15～20天。
本发明所述方法以前述培养基为基质进行培养，所述基质不但为菌丝体的快速生长提供充足的营养物质，同时，所述基质以未破碎的粮食颗粒制备而成，具有高的孔隙度和通气性，满足菌丝体在快速生长过程中对高耗氧量的要求。
其次，本发明所述方法还进一步限定灵芝培养的温度、湿度和光照条件，所述温度、湿度和光照条件符合灵芝菌丝体生长的生理需求，能够诱发灵芝萌发菌丝体，促进菌丝体的增殖。
在一些具体的实施方式中，所述接种量为1、2、3、4或5g/kg培养基；
在一些具体的实施方式中，所述步骤(2)的温度为23、24、25、26、或27℃；
在一些具体的实施方式中，所述步骤(2)的相对湿度为55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77或79％；
在一些具体的实施方式中，在整个菌丝体的培养过程中，每天通风1～2次，每次通风20～35min；优选地，每天通风2次，每次通风30min。
在一些具体的实施方式中，步骤(1)中，所述灵芝菌种的接种量为2g/kg培养基。
在一些具体的实施方式中，步骤(2)中，所述温度为25℃，相对湿度为60％，避光培养时间为12天和光照培养时间为17天。
在一些具体的实施方式中，所述方法还包括将灵芝菌丝体与培养基一起干燥和粉碎，即得菌丝体成品。
在一些具体的实施方式中，为避免杂菌分泌的毒素污染菌丝体，影响其品质，本发明所述方法还包括在干燥粉碎之前，剔除已被杂菌感染的灵芝菌丝体。
在一些具体的实施方式中，本发明所述方法还包括将粉碎后得到的菌丝体成品进一步加工为灵芝菌丝体食品或灵芝菌丝体食品添加剂的步骤。
在一些具体的实施方式中，为进一步促进人体对灵芝菌丝体的吸收，本发明所述方法还包括将菌丝体浸泡在溶剂中；之后固液分离，即得灵芝菌丝体提取液。
在一些具体的实施方式中，所述溶剂为水或乙醇。
本发明还涉及根据前述方法制成的灵芝菌丝体、灵芝菌丝体食品或灵芝菌丝体食品添加剂。本发明所述灵芝菌丝体不但品相好，而且，灵芝多糖和灵芝三萜等含量均高于通过一般方法培育而成的灵芝菌丝体，营养价值高。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明所述培养基的主要原料为玉米、小麦、大豆和小米，各组分之间搭配得当，能够满足满足灵芝菌丝体在快速生长过程中对c源、n源、磷、硫、钙、铁、微量元素和生长因子的要求，培养所得的灵芝菌丝体中各营养物质的含量高、菌丝体菌丝体浓密、洁白、整齐，品相好，品质含量高。
(2)本发明所述培养基中的玉米、小麦、大豆和小米均未破碎，为完整的粮食颗粒，尤其是玉米和大豆，粮食颗粒本身的粒径大于一般的粮食，使得制成的培养基的孔隙率大，透气性好，能够充分保障灵芝菌丝体对氧气的需求，使得灵芝菌丝体在短时间内能够快速地增殖，提高菌丝体的产量。
(3)根据本发明所述方法制备的灵芝菌丝体具有菌丝体菌丝体浓密、洁白、整齐、品相好，且灵芝多糖和灵芝三萜的含量高，品质好的优点，制成的灵芝菌丝体食品或灵芝菌丝体食品添加剂具有营养价值和性价比高的优点。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。
实施例1
按照以下方法制备用于培养灵芝菌丝体的培养基：
(1)称取以下重量份的原料：玉米30份，小麦40份，大豆2份，小米10份和水81份，所述玉米、小麦、大豆和小米均未破碎，为完整的粮食颗粒；
(2)将原料混合均匀，用装袋机装袋，压紧，用棉线将袋口扣扎紧，放置在灭菌锅中，在121℃，1个大气压下，灭菌3小时；
(3)灭菌结束后，待培养基冷却至30℃时，放入接种箱中接种灵芝菌种，其中，所述灵芝菌种的接种量为1g/kg培养基；
(4)接种后，将袋装的培养基放置在木架培养上，具体培养条件为：室内温度恒定在23℃，相对湿度为55％，每天通风1次，每次通风20min；前期避光培养10天，之后，光照培养15天，光照强度为500lux；
(5)培养结束后，将被杂菌污染的灵芝菌丝体剔除；拆开袋装的培养基，将菌丝体与培养基一起破碎，烘干后进行微粉粉碎，即获得灵芝菌丝体微粉粉末。
实施例2
按照以下方法制备用于培养灵芝菌丝体的培养基：
(1)称取以下重量份的原料：玉米50份，小麦30份，大豆6份，小米6份和水120份，所述玉米、小麦、大豆和小米均未破碎，为完整的粮食颗粒；
(2)将原料混合均匀，用装袋机装袋，压紧，用棉线将袋口扣扎紧，放置在灭菌锅中，在121℃，1.3个大气压下，灭菌2小时；
(3)灭菌结束后，待培养基冷却至25℃时，放入接种箱中接种灵芝菌种，其中，所述灵芝菌种的接种量为3g/kg培养基；
(4)接种后，将袋装的培养基放置在木架培养上，具体培养条件为：室内温度恒定在25℃，相对湿度为65％，每天通风1次，每次通风30min；前期避光培养12天，之后，光照培养17天，光照强度为700lux；
(5)培养结束后，将被杂菌污染的灵芝菌丝体剔除；拆开袋装的培养基，将菌丝体与基质一起破碎，烘干后进行微粉粉碎，即获得灵芝菌丝体微粉粉末。
实施例3
按照以下方法制备用于培养灵芝菌丝体的培养基：
(1)称取以下重量份的原料：玉米80份，小麦20份，大豆10份，小米2份和水210份，所述玉米、小麦、大豆和小米均未破碎，为完整的粮食颗粒；
(2)将原料混合均匀，用装袋机装袋，压紧，用棉线将袋口扣扎紧，放置在灭菌锅中，在121℃，1.5个大气压下，灭菌2小时；
(3)灭菌结束后，待培养基冷却至27℃时，放入接种箱中接种灵芝菌种，其中，所述灵芝菌种的接种量为5g/kg培养基；
(4)接种后，将袋装的培养基放置在木架培养上，具体培养条件为：室内温度恒定在27℃，相对湿度为79％，每天通风2次，每次通风20min；前期避光培养15天，之后，光照培养17天，光照强度为700lux；
(5)培养结束后，将被杂菌污染的灵芝菌丝体剔除；拆开袋装的培养基，将菌丝体与基质一起破碎，烘干后进行微粉粉碎，即获得灵芝菌丝体微粉粉末。
实施例4
参照实施例2所述方法制备灵芝菌丝体，区别仅在于，所述方法在获得灵芝菌丝体微粉粉末后，将所述粉末加入到乙醇溶液中，料液比为1g:1ml，浸泡12小时，之后离心，固液分离，即得灵芝菌丝体提取液。
对比例1
参照实施例2所述方法制备灵芝菌丝体，区别仅在于，所述玉米、小麦、大豆和小米为被粉碎的粉末。
对比例2
参照实施例2所述方法制备灵芝菌丝体，区别仅在于，步骤(1)中所述原料的组成为：玉米50份、荞麦30份、燕麦6份、大米6份和水120份。
实验例1
(1)观察实施例1～3和对比例1～2所述方法制备的灵芝菌丝体的品相，并统计灵芝菌丝体粉末的质量，计算上述方法的产率；
(2)检测实施例1～3以及对比例1～2所述灵芝菌丝体粉末中灵芝多糖和灵芝三萜的含量；具体检测方法如下所示：
采用硫酸蒽酮法检测灵芝多糖的含量：取灵芝菌丝体粉末2.0g，精密称重，置索氏提取器中，加水90ml，加热回流提取至无色，将提取液转移至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密吸取10ml，加入95％乙醇150ml摇匀，4℃放置12h，取出，离心，弃上清加水溶解并定量转移至50ml容量瓶中稀释至刻度。
灵芝三萜的检测方法：以齐墩果酸为标准品，绘制标准曲线；称取菌丝体粉末2.0g，加入30ml氯仿回流提取2h，过滤后残渣继续回流提取，重复3次，合并滤液并定容至100ml。精密移取1.0ml于具塞磨口试管中，水浴加热挥去溶剂，再分别加入0.3ml5％香草醛冰醋酸溶液、1.0ml高氯酸，密封。于70℃水浴恒温加热25min，取出后立即冰水冷却，加入冰醋酸10ml，摇匀，于550nm处测定吸光度，计算灵芝三萜含量。
步骤(1)和步骤(2)的具体检测结果参见表1。根据表1所示检测结果可知，本发明实施例1～3所述方法制备的菌丝体无论是在品相、产率还是在灵芝多糖和灵芝三萜的含量上均明显优于对比例1～2。
表1灵芝菌丝体的品相、产率、灵芝多糖和灵芝三萜的含量
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。