专利名称：：成花基因座t(ft)和经遗传修饰可调节开花的植物的制作方法
技术领域：
：本发明一般涉及植物遗传工程，特别涉及具有可调节成花表型的遗传工程植物，以及培育这些植物的方法。背景绝大多数种类的被子植物受环境刺激，如昼夜长短和温度，以及内在因素如年龄的诱导而开花，有花植物的成熟组织由被称作分生组织的几类干细胞发育而来。每种分生组织的特性是由其发育而成的结构决定的营养分生组织发育成根和叶，花序分生组织发育成成花分生组织，成花分生组织发育成花器官如花萼和花瓣。不仅分生组织能够产生具有不同特性的新的分生组织，而且它们自身特性在发育过程中也能改变。例如，营养茎分生组织经成花诱导后可转变为花序分生组织，而且在一些植物种类中花序分生组织自身最终将转变为成花分生组织。尽管分生组织的转化在植物发育过程中具有重要意义，但对其中的机理了解很少。在植物发芽后，茎分生组织在其两侧产生一系列叶分生组织，然而，一旦经成花诱导，茎分生组织会转而产生花分生组织，成花分生组织产生花器官原基，原基进而单独发育成花萼、花瓣、雄蕊和心皮。这样，花的形成可设想为一系列不同的发育阶段，即成花诱导、花原基的形成、花器官的产生，已从多种植物中分离出中断每一阶段的突变体，这说明有整套遗传体系在控制成花过程(见综述，Weigel和Meyerowitz，“形态发生的分子基础”(M.Bernfield编著)，发育生物学会第51届年会，pp.93-107，纽约，1993)。最近通过对二种远缘双子叶植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)和金鱼草(Antirrhinummajus)的研究鉴定出三类同源基因，它们单独或共同决定花组织特性(Bowman等，Development,112:1,1991；Carpenter和Coen等，GenesDevl.,4:1483,1990；Schwarz-Sommer等，Science,250:931,1990)。这些基因其中一些是转录因子，它们DNA结合的保守区已确定为MADS阅读框(Schwarz-Sommer等，见上)。已经鉴定早期启动的控制成花分生组织特性的基因，在拟南芥(Arabidopsisthaliana)和金鱼草(Antirrhinummajus)中成花分生组织是由花序分生组织发育而来，已经知道二种因子参与控制分生细胞发育成为花。在拟南芥中，控制因子是LEAFY基因(Weigel等Cell69:843,1992)和APETALAl基因(Mandel等，Nature360:273,1992)的产物，当这些基因中的一个突变失活后，花和花序的结构和特性便形成(Weigel等见上；Irish和Sussex,PlantCell,2:741,1990)。在金鱼草中，与拟南芥LEAFY基因同源的是FLORICAULA，与APETALAI基因同源的是SQUAMOSA(Huijser等，EMBOJ.,11:1239,1992)，这一对基因包含有MADS阅读框区域。有花植物具有二种类型的花序构成无序型的，其花序生长不定，或有序型的，最终形成定型的花序。在这二个远缘种拟南芥的terminalflower1基因和金鱼草的centroradialis基因突变体中，通常是无序型的花序转变为有序构型。金鱼草的基因CENTRORADIALIS(CEN)和拟南芥的基因TERMINALFLOWER1(TFL1)表现出同源性，说明在这些植物中花序的无定型具有共同的遗传机制。然而，与CEN基因不同的是，TFL1基因在营养生长阶段也表达，这会推迟花序发育，从而影响花序分生组织形成的时间及其特性(见实施例，PCT/GB96/02276，详见参考文献)。在植物生物
技术领域：
已成功构建出包括一些主要作物在内的基因工程植物，这些研究成果让人振奋，其中通过改变植物基因而促使其提前开花是经济上所需要的，花诱导经常是种植作物的制约因素。除地域因素外控制开花诱导最重要的因素之一是白昼的长短，它随季节的变化而变化。需要建立一种方法能人为控制和诱导植物开花而使其不受地域和环境条件的制约，这样就能使作物在所需要的时间内结实，由于大多数作物的果实(即种子，谷粒，水果)来源于花，因此能够控制开花的方法具有经济价值。概述本发明是基于发现的一个调节植物开花的基因。这个基因定义为“开花基因座T”或“FT”，其功能是调节开花时间。在拟南芥中FT基因的过量表达导致开花明显提前，而FT基因通过突变或反义失活丧失功能时会导致延迟开花。本发明第一实施方案是提供了FT多肽，其特征为通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量约20KD；基因位于拟南芥1号染色体上；功能是调节开花时间。FT多肽的一个示例性氨基酸序列见SEQIDNO:2。具有促进开花活性的一个示例性FT多肽见SEQIDNO:4，特别是SEQIDNO:6。本发明还包括分离的编码FT多肽的多聚核苷酸，编码FT的一个示例性核苷酸序列见SEQIDNO:1。本发明又一实施方案是提供一个在基因组中至少含有一个外源核苷酸序列如编码FT的核苷酸序列，并具有可调节成花特性的遗传修饰植物。通过本发明的方法能抑制或促进成花。本发明再一个实施方案是提供了一个构建遗传修饰的植物细胞方法，由该细胞发育而成的植物与野生株相比具有开花可调节的特性。该方法包括至少将本发明的编码FT的多聚核苷酸导入植物细胞，得到转化的植物细胞；在允许FT多肽表达的环境中使转化的植物细胞生长从而生长出开花可调节的植物。本发明再一个实施方案是提供一个培育具有提早成花的基因修饰植物的方法。该方法包括用一个含有至少含有编码FT多肽的结构基因的核苷酸序列的质粒导入植物细胞，并将结构基因与一个启动子有效相连，从而获得转化的植物细胞；从转化的植物细胞生长出植株；筛选提早开花的植株。本发明又一实施方案是提供一个调节植物细胞成花的方法。该方法包括用一个含有至少含有编码可调节成花FT多肽的结构基因的核苷酸序列的质粒导入植物细胞，并将结构基因与一个启动子相连以获得转化的植物细胞；在植株形成的条件下使转化的植物细胞生长；在一定条件下诱导植物提早成花，并诱导一段时间后足以调节花的形成。调节花的形成包括加速或抑制其形成。本发明还包括提供一个含有阻断或干扰开花定时基因(FT)表达的转化基因的遗传修饰植物，该转化基因通过染色体插入到植物基因组中。本发明还包括培育具有延迟成花特性的植株的方法，该方法包括用一个含有一段核苷酸序列的质粒导入植物细胞，该核苷酸序列至少包含有能阻断或干扰FT多肽表达的结构基因，并将结构基因与一个启动子相连以获得转化的植物细胞；从转化的植物细胞生长出植株；筛选具有延迟成花特性的植株。本发明还包括用包含有FT反义核苷酸序列或FT负显性编码核苷酸序列的质粒替代能阻断或干扰FT多肽表达的结构基因。本发明再一个实施方案是提供了一个鉴定调节FT活性或其基因表达的化合物的方法。该方法包括将包括该化合物和FT多肽或表达FT的重组细胞的组分在足以使这些组分相互作用的条件下温育；确定该化合物对FT活性或表达的影响。该化合物可能抑制或刺激FT的活性或表达。本发明又一实施方案是提供一个鉴定模拟或抑制野生型FT活性或表达的FT多肽的方法。该多肽可用于替代野生型FT，以野生型作为对照以便确定该多肽对开花时间的影响。本发明又一实施方案是提供一个对植物细胞进行遗传修饰的方法，由所述细胞长成的植株与野生型相比具有能调节成花的特性，所述方法包括至少将编码FT多肽的多聚核苷酸导入植物细胞以便获得转化的植物细胞，在允许FT多肽表达的条件下使转化的植物细胞生长，这样培育出可调节成花的植株。在一个实施方案中，植株因表达FT和LFY而加速成花，在另一实施方案中，植株通过抑制FT表达而表达TFL1来抑制成花。该多聚核苷酸的表达或抑制表达二者可在其它任何多肽表达之前、实际上同时或之后进行。图1表示T-DNA载体插入的部分图谱。对于质粒pSKI083，如图所示KpnⅠ片断是从原始1733细胞株分离。该序列包含启动FT转录的基因组区、原始T-DNA插入的右边界，以及来自原始激活标记载体的CaMV35S增强子序列的四聚体。FT的外显子用方框标出，内显子用细线标出。3’和5’端非翻译区由阴影标出，翻译区由实心黑标出。对于质粒pSKI059和pSKI060，包含有FTcDNA的XbaⅠ/XhoⅠ片断如图所示，其起始位点与CaMV35S启动子有关，3’端nos序列见图。+1表示转录起点。图2表示用于正义和反义构建载体pSKI059(SEQIDNO:5)和pSKI060FT(SQEIDNO:3)的FTcDNA的核苷酸序列。由正义链翻译而成的FT蛋白序列见DNA序列下面的氨基酸三字母代码，载体序列有下划线。图3显示FT蛋白与植物和哺乳动物中相关蛋白的序列比较，氨基酸用单字母代码表示。At-拟南芥；Am-金鱼草；Rn-小鼠；Hs-人类.TFL1-TERMINALFLOWER1(Fradley等.,(1997),Science275,80-83)；CEN-CENTRORADIALIS(Bradley.等，(1996),Nature379,791-797)；E12A11-EST克隆(GenBank中的部分序列[编号AA042630]；全序列由Kardailsky&Weigel测定，未发表)；HCNP-海马类乙酰胆碱神经刺激多肽前体蛋白(Ojika等，(1992),BrainRes.572,164-171.(1992),BrainRes.572,164-171；Tohdoh等.,(1995),BrainRes.Mol.Brain.Res.30,381-384).图3A表示排列的蛋白全氨基酸序列。在四行蛋白序列中同列至少有2个氨基酸出现才标出，与共有序列不同的氨基酸用点标出，缺失用水平破折号标出。图3B是依据全部五个基因编码的蛋白序列的排列绘制的系统进化树。分支长度反映了进化距离，金鱼草的CEN和拟南芥的TFL1是正调控蛋白(Bradley等.,(1996)同上；Bradley等.,(1997)同上)，而且其聚群在一起。图3C表示出小鼠和人类的海马类乙酰胆碱神经刺激多肽前体蛋白与植物蛋白相对应的区域。对海马类乙酰胆碱神经刺激多肽前体蛋白活性所必须的三个碳端氨基酸(Ojika等.,Neurosci.Lett.215,127-30)中有二个(脯氨酸-亮氨酸)和植物多肽中的相同，而前一个氨基酸在植物中是酸性氨基酸(天冬氨酸或谷氨酸)，在哺乳动物中是甘氨酸。发明详细说明本发明提供了一个编码调节植物成花的多肽的基因。该基因即成花基因座T，定义为“FT”，可用于培育具有可调节成花表型特性的遗传修饰植物，比如提早或延迟开花。这些植物能够至少用编码FT的结构基因进行遗传改造以便调节植物开花。多肽、多聚核苷酸和载体本发明提供了一种基本上纯化的开花位点T(FT)多肽和编码该多肽的多聚核苷酸。本发明的FT的特点是用SDS-PAGE鉴定其分子量为约20KD，位于拟南芥1号染色体上，具有调节成花时间的功能。在一个实施方案中，本发明提供了基本上纯化的FT多肽。FT具有在SEQIDNO:2中所列的氨基酸序列。“基本上纯化”这个词用在这里指多肽基本上不含有天然状态下与之结合的其它蛋白、脂类、碳水化合物或其它物质。本领域的普通技术人员运用标准蛋白纯化技术能纯化FT。基本上纯化的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳上产生一条主带。FT多肽的纯度还可以用氨基端氨基酸序列分析进行鉴定。本发明包括与在SEQIDNO:2中所列出的氨基酸序列基本上一致的多肽或其中的功能片段，或者与SEQIDNO:2基本上相似的氨基酸序列。“基本上一致”或“实质相似”意思是一个多肽或核苷酸与所述氨基酸或核苷酸序列至少有80％，较好的有85％，更好的有90％，最好的有95％的同源性。对于多肽，对照序列的长度一般至少16个氨基酸，较好的至少有20个氨基酸，更好的至少有25个氨基酸，最好的至少有35个氨基酸。对于核苷酸，对照序列的长度一般至少50个核苷酸，较好至少有60个核苷酸，更好至少有75个核苷酸，最好的至少可有110个核苷酸。与FT基本上具有相同序列的FT类似物例如可以用如图3B所示的系统进化树鉴定，FT的类似物在进化图上可能比例如TFL1/CEN距离FT更近。功能片段包括那些保留FT功能或活性的FT片段。这种肽的一个例证见SEQIDNO:4，特别是SEQIDNO:6(来源于植物的多肽)。本领域的普通技术人员运用本文提供的实施例能选出这样的功能片段，在该实施例中描述了全长FT的功能(例如，见转基因植物实施例3)。可以设想用同样的方法鉴定出抑制或延迟开花的FT片段。“基本上相同”还指氨基酸序列的不同仅限于氨基酸保守置换，例如，氨基酸被另一同一族的氨基酸取代(例如缬氨酸取代甘氨酸，精氨酸取代赖氨酸等)，或在供测试的蛋白氨基酸序列中在不使其功能丧失的位置上的一个或多个非保守置换、缺失或插入(例如，如本文所述)。该序列在氨基酸水平上应至少有85％与SEQIDNO:2同源，最好能够完全一样。同源性通常用序列分析软件测定(例如，GeneticsComputerGroup公司的序列分析软件包，威斯康星大学生物技术中心，学院路1710，麦迪逊，WI53705)，这种软件通过对各种置换、缺失、替代或其它改变分配相似程度匹配相似序列。“基本上纯化的多肽”指与FT多肽已从天然状态下与之伴随的多肽中分离出来。典型地，多肽基本上纯净是指当占其重量的60％不含有天然与之结合的蛋白和天然状态下存在的有机分子。优选地，这种分离至少占其重量的75％，更优选地至少90％，更优选地至少99％的分子是FT多肽。基本上纯化的FT多肽例如可以从天然原料(比如，植物细胞)中提取；通过编码FT多肽的重组核苷酸的表达；或通过化学合成蛋白。纯度可用任何适合的方法检测，例如，如柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳或HPLC分析所述方法。蛋白当其从天然状态下与其伴随的污染物中分离出来时即为基本上不含有天然状态下与其相关的成分。这样，一种蛋白若是化学合成的或来自与之天然起源的细胞不同的细胞系统时，则基本上不含有其天然结合的成分，相应地，基本上纯化的多肽包括那些来源于真核生物但在大肠杆菌或其它原核生物表达的蛋白。对FT一级氨基酸序列的较小修饰所产生的蛋白，可以与本文所描述的没有修饰的对应多肽具有基本上相同的活性，这些修饰可能是有意引入的，如点突变，或者是自发的。所有由这些修饰产生的蛋白只要其FT的生物活性仍存在都包含于此。例如，本发明提供了具有FT多肽生物活性的肽段，一个FT肽段的例子见SEQIDNO:4(AADISQWAGPL)，详见SEQIDNO:6(SINIRDPL)(分别见图3C中RnHNCP和AtFT肽段序列；At-拟南芥；Rn-大鼠)本发明的多肽还包括没有FT生物活性的FT多肽的负显性形式(dominantnegativeform)，FT的“负显性形式”指结构与FT类似但没有野生型FT功能的多肽。例如，负显性的FT多肽可通过结合或通过屏蔽、调控因子干扰野生型FT的功能，而这些调控因子例如上游区或下游区成分，正常情况下与FT多肽功能相关。本发明提供了编码FT蛋白的多聚核苷酸。这些多聚核苷酸包括编码FT的DNA、cDNA和RNA序列，可以理解所有编码FT的多聚核苷酸只要它们编码具有FT活性的多肽都包括于此，这些多聚核苷酸包括天然存在的、合成的和人工操作获得的多核苷酸。例如，FT多聚核苷酸可以被点突变。FT多核苷酸序列还包括反义序列，编码FT负显性形式的序列，以及编码诸如象SEQIDNO:4，特别是SEQIDNO:6中的FT多肽。本发明的多聚核苷酸包括遗传密码的简并序列，有20中天然氨基酸，大多数有不只一种密码子，因此，只要核苷酸序列编码的FT多肽功能不变，本发明包括所有这样的简并核苷酸序列。本文具体公开的是包含FT基因的多聚核苷酸序列。首选的FT核苷酸序列见SEQIDNO:1。“多聚核苷酸”或“核苷酸序列”指至少有10碱基长度的核苷酸多聚形式。所使用的术语“分离的多聚核苷酸”意思是不直接与天然存在的生物体的基因组中与其紧密相邻的两个(一个在5’端，一个在3’端)序列紧密相邻。因此该术语包括并入载体的重组DNA；或并入能自我复制的质粒或病毒的重组DNA；或并入原核或真核生物的染色体DNA的重组DNA；或作为独立于其它序列的单独的分子(例如cDNA)。本发明的核苷酸可以是核糖核酸、脱氧核糖核酸或经修饰的任何核苷酸形式，该术语包括单链和双链DNA形式。正如以上所定义的那样，“基本上相同”的核苷酸序列编码基本上相同的氨基酸序列。“纯化的DNA”或“分离的DNA”指的是不直接与天然存在的生物体的基因组中与其紧密相邻的两个(一个在5’端，一个在3’端)序列紧密相邻。因此，该术语包括例如并入载体的重组DNA；或并入能自我复制的质粒或病毒的重组DNA；或并入原核或真核生物的染色体DNA的重组DNA；或作为独立于其它序列的单独的分子(例如cDNA，或通过PCR或者限制性酶切而获得的染色体DNA片段)，还包括作为编码额外多肽序列的杂交基因一部分的重组DNA。术语“基本上纯化的DNA”指的是DNA不与一种基因侧接，而这种基因在产生本发明的DNA的天然存在的生物体的基因组中与其侧接。因此该术语包括，例如，并入载体的重组DNA；或并入能自我复制的质粒或病毒的重组DNA；或并入原核或真核生物的染色体DNA的重组DNA；或作为独立于其它序列的单独的分子(例如cDNA，或通过PCR或者限制性酶切而获得的染色体DNA片段)，还包括作为编码额外多肽序列的杂交基因一部分的重组DNA。编码FT的多聚核苷酸包括SEQIDNO:1,FT的负显性形式和与SEQIDNO:1互补的核苷酸序列。互补序列可包括反义核苷酸。当序列是RNA时，脱氧核糖核酸A、G、C和T分别被核糖核酸A、G、C和U取代。本发明还包括至少有15个碱基长的上述核苷酸序列片段，这么长的片段足以能在生理条件下与编码SEQIDNO:2的蛋白或FT相近的家族成员的DNA选择性杂交。术语“选择性杂交”指在温和条件下或排除非相关核苷酸序列的高度苛刻条件下杂交。在核苷酸杂交反应中，用于获得特定苛刻水平的条件根据杂交的核苷酸性质而变化。例如，在选择杂交条件时核苷酸杂交区的长度、互补程度、核苷酸序列组成(例如，GC和AT含量)、核苷酸类型(例如，RNA还是DNA)都要考虑，另外还要考虑一条核苷酸是否被固定，例如固定在滤膜上。一个苛刻条件逐渐增高的的例子如下约室温下2×SSC/0.1％SDS(杂交条件)；约室温下0.2×SSC/0.1％SDS(低苛刻条件)；约在42℃下0.2×SSC/0.1％SDS(温和苛刻条件)；和约在68℃下0.1×SSC(高苛刻条件)。只用这些方法中的一种，例如高苛刻条件进行清洗，或可以用每种条件按上面所列的顺序清洗，每种条件10-15分钟，可重复所列的任何一种或所有步骤。然而，如上面所提到的，最佳条件有赖于进行的特定杂交反应而不同，而且可以通过经验确定。本发明编码FT多肽的核苷酸序列包括公开的序列和它的保守突变。用在本文的术语“保守突变”指氨基酸残基被另一个生物功能相似的残基取代。保守突变的例子包括一个疏水残基如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸被另一个取代，或者一个极性残基被另一个取代，例如精氨酸取代赖氨酸，谷氨酸取代天冬氨酸，谷氨酰胺取代天冬酰胺，以及类似取代。术语“保守突变”还包括用一个已取代的氨基酸代替一个没被取代的亲本氨基酸，条件是由取代的多肽产生的抗体仍能够和没被取代的多肽免疫反应。编码FT的DNA序列可以通过DNA转移到合适的宿主细胞而体外表达。“宿主细胞”指载体在其中能复制而且它的DNA能表达的细胞，细胞可以是原核或真核细胞，该术语还包括宿主细胞的任何子代细胞。可以理解由于在复制过程中可能发生突变所有子代细胞和亲本细胞可能不完全一样，然而术语“宿主细胞”包括这样的子代细胞。稳定转移的方法，含义是外源DNA在宿主中连续存在，这一点对本领域普通技术人员来说是已知的。在本发明中，FT多聚核苷酸序列可以插入到表达载体中，术语“表达载体”指质粒、病毒或现有技术中已知的已经进行FT遗传序列插入或并入操作的其它载体。编码FT的多聚核苷酸序列可以有效连接到表达调控序列，“有效连接”指使描述的成分并置于能按照预想方式行使功能的位置，编码序列之所以与表达调控序列有效相连，是为了编码序列在与表达调控序列相容的条件下表达。在本文使用的术语“表达调控序列”指调节与之有效相连的一段核苷酸序列表达的核苷酸序列，表达调控序列一旦与一段核苷酸有效连接，它就控制和调节该核苷酸序列的转录和合适的翻译。这样，表达调控序列包括合适的启动子、增强子、转录终止子、位于蛋白编码基因前面的起始密码子(例如，ATG)、内含子的剪接信号、维持正确的阅读框以便允许基因的mRNA恰当翻译。术语“调控序列”设定为至少包括能影响表达的成分，还包括对表达有利的额外成分，例如引导序列和融合伴随序列。表达调控序列可以包括启动子。“启动子”指能指导转录的最小序列。在本发明中还包括那些使启动子依赖型基因的表达对于特定种类细胞和特定组织可控的启动元件，或表达可被外界诱导信号或试剂诱导；这些元件可位于基因的5’或3’区，组成型和诱导型启动子均包括于本发明中(见例如，Bitter等，1987,MethodsinEnzymology,153:516-544)。用于本发明结构基因的表达可以受多个启动子启动。尽管内源启动子可以用于所感性趣的结构基因的转录调节，但倾向于启动子是外源调控序列。对于植物表达载体，适合的病毒启动子包括CaMV病毒35SRNA和19SRNA启动子(Brisson等，Nature,310:511,1984；Odell，等，Nature,313:810,1985)；来自玄参花叶病毒(FMV)的全长转录启动子(Gowda，等，J.CellBiochem.,13D:301,1989)和FMV外壳蛋白启动子(Takamatsu，等，EMBOJ.,6:307,1987)。或者，植物启动子，诸如来自二磷酸核酮糖羧化酶(ssRUBISCO)小亚基的光诱导启动子(Comzzi，等，EMBOH.,3:1671,1984；Broglie，等，Science,224:838,1984)；甘露糖合成酶启动子(Velten，等，EMBOJ.,3:2723,1984),仙人掌素合成酶(NOS)和章鱼碱合成酶(OCS)启动子(携带有土壤根癌农杆菌的根癌诱导质粒并有植物活性)；乙烯诱导启动子，用乙烯或类似化合物如丙烯处理可增加其活性水平；热休克启动子，例如大豆热休克蛋白hsp17.5-E或hsp17.3-B(Gurley，等，Mol.Cell.Biol.,6:559,1986；Severin，等，PlantMol.Biol.,15:827,1990)；也可使用乙醇诱导启动子(Caddick，等，NatureBiotech.,16:177,1998)。本发明中有用的启动子包括组成型和诱导型的天然启动子，还有设计的启动子，CaMV启动子就是组成型启动子的一个例子。要达到最大效用，诱导型启动子应1〕在没有诱导物的条件下低表达；2〕在诱导物存在时高表达；3〕其诱导机制不影响植物正常的生理活动；和4〕不影响其它基因的表达。植物中有益的诱导型启动子的例子包括那些通过化学方法诱导的启动子，如酵母能被铜离子活化的金属硫因启动子(Mett，等，Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,90:4567,1993)；能被替代的苯磺胺药物，如除草安全剂剂活化的In2-1和In2-2调节序列(Hershey，等，PlantMol.Biol.,17:679,1991)；被肾上腺皮质类脂醇诱导的GRE调节序列(Schena，等，Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,88:10421,1991)；以及乙醇诱导启动子(Caddick.，等，同上)。其它启动子，包括组成型和诱导型启动子和增强子，则是本领域普通技术人员已知的。所选择的特定启动子应该能够引发足够的表达，从而使结构基因表达产物达到有效的含量，例如使FT引发提前成花或使反义引发延迟成花。本发明中用于载体构建的启动子如果愿意可以被改变，这样可以影响它们的调控特性。组织特异性启动子也可用于本发明，本文使用的术语“组织特异性启动子”作为启动子的一段DNA序列，例如调控一段特定的与启动子相连的DNA序列的表达，组织特异性启动子在特定细胞中影响特定的DNA序列表达，例如在植物的根或茎中。该术语还包括叫做“泄漏”启动子，这些启动子起初在一种组织中调节特定DNA序列表达，但在其它组织中也可引发表达。这些启动子还包括对表达必需的额外DNA序列，诸如内含子和增强子序列。一个组织特异性分生组织的例子是在茎分生组织表达的HHA启动子(Atanassova，等，PlantJ.,2:291,1992)，其它对于转基因植物有用的组织特异性启动子包括cdc2a启动子和cyc07启动子，则是那些熟练的技术人员所知道的。(见例如，Ito，等PlantMol.Biol,24:863,1994；Martinez,Proc.Natl.Acad.SciUSA,89:7360,1992；Medford,PlantCell,3:359,1991；Terada,PlantJournal,3:241,1993；Wissenbach,PlantJournal,4:411,1993)。在花分生组织有活性的组织特异性启动子的例子是Jack，等，Cell,76:703,1994和Hempel，等，Development,124:3845,1997中表述的无花瓣3和无花瓣1基因，另外，也包括来自UFO基因的分生组织特异性启动子。可选择的标记可随意与异源核苷酸序列相连，即结构基因可有效地与启动子相连。在本文使用的术语“标记”指编码一种特征或表型的基因，它允许含有该标记的植物或植物细胞能被选择或筛选。标记基因可以是抗生素抗性基因，这样使用合适的抗生素就能从没有转化的细胞中筛选出转化的细胞，或者标记基因可以是除草剂抗性基因。合适的可选择的标记的例子包括腺苷脱氨酶、二氢叶酸还原酶、潮霉素B磷酸转移酶、胸腺激酶、黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸-核糖转移酶、甘油磷酸盐抗性和氨基-糖苷3’-O-磷酸转移酶Ⅱ(卡那霉素，新霉素和G418抗性)，其它合适的标记则是本领普通技术人员已知的。本发明中用于转化植物细胞以调节成花分生组织发育的载体包括至少一个编码调节成花分生组织的蛋白的结构基因，及与之相连的一个启动子。为了起始与本发明的转化过程，首先需要构建一个合适的载体并将它适当地导入植物细胞，本文所使用的载体的构建细节是植物基因工程技术人员所知道的。在本发明中，编码调节成花分生组织发育蛋白的基因首选是FT基因。FT基因可以单独使用，或和其它的结构基因联合使用，例如其它对成花进程起重要作用的基因。这些基因的例子包括LEAEY(LFY),APETALA1(AP1),CONSTANS(CO),TERMINALFLOWER1(TFL1),FLORICAULA(FLO),SQUAMOSA(SQUA),FLOWERINGLOCUSCA(FCA)，以及将它们联合使用。当联合使用时，应该了解联合的基因的表达可能先于、基本同时或迟于其它基因，应该了解对于本文描述的所有方法和植物短语“至少(包含)FT基因”(atleastFT)或类似短语指使用一种或多种其他的成花基因，例如以上所列的那些或技术人员所知道的那些。例如，本发明中可以用Ti质粒、根诱导(Ri)质粒和植物病毒载体将异源核苷酸序列导入植物细胞。(这些技术的综述见，例如，Weissbach&Weissbach,1998,MethodsforPlantMolecularBiology(植物分子生物学方法)，AcademicPress(科学出版社)，NY(纽约)，第SVⅢ节，pp.421-463；Grierson&Corey,1998,PlantMolecularBiology(植物分子生物学)，第二版，Blackie，伦敦，7-9章，和Horsch，等，Science,227:1229,1985，在本文将二者一并参考)。本领域普通技术人员能够选择合适的载体将异源核苷酸序列在相对完整的状态下导入，这样，只要载体使植物携带有导入的DNA序列就应该足够了，可以预测即使是裸DNA片段也有本发明中所描述的特性，尽管其转化效率低下。载体的选择，或者是否使用载体，通常是由所选择的转化方法所定。本发明的转化本质上可以通过那些植物分子生物学熟练技术人员所知道的各类方法中的任何一种来完成。(见例如，MethodsofEnzymlogy(酶学方法)，Vol.153,1987,Wu和Grossman.编，AcademicPress(科学出版社)，在本文一并参考)。本文使用的术语“转化”意思是通过导入异源核苷酸序列改变宿主植物的表型。“转化”指将外源多聚核苷酸插入宿主细胞，不论采用何种方式插入，例如直接吸收、转导、基因枪或电穿孔。外源多聚核苷酸可以保持为非整合的载体状态，例如质粒，或者是另外一种状态，即整合到宿主基因组中。一种方法叫做直接转化，包括吸收和质粒或线性化DNA整合到植物原生质体基因组中，原生质体即去除细胞壁材料的单个细胞(Lorz，等，Mol.Genet,199:178-182)。另一种方法包括将外源噬菌体或质粒DNA转入发育的花粉颗粒以改变植物性状。当成熟的花粉颗粒形成花粉管时，细胞壁材料沉积在生长点的后面。第三种方法依赖于土壤农杆菌的侵染，它将质粒即Ti-质粒序列插入到植物细胞的基因组中(Chilton，等，1977,Cell11:263-271)。外源核苷酸能利用带有Ti-质粒的土壤根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)导入植物细胞，在使用土壤农杆菌培养基作为运载体时，最方便的是使用非致瘤的农杆菌种类作为载体传递体，以便可能区分正常非致瘤的转化组织。而且农杆菌首选地带有二元Ti质粒系统，这种二元系统包括1〕第一个质粒含有一个毒力区，它对于将转移的DNA(T-DNA)导入植物是必须的，2〕嵌合质粒。后者至少包含一个位于所要转移的核苷酸二侧野生型，后者至少包括一个位于所要转移核苷酸二侧野生型Ti质粒的T-DNA区的一个边界区，二元Ti质粒系统已表明能有效转化植物细胞(DeFramond,Biotechnology,1:262,1983；Hoekema，等，Nature,303:179,1983)，首选这样的双重系统是因为它在农杆菌中不需要整合到Ti质粒中。涉及使用农杆菌的方法包括，但不只限于1〕将培养分离的原生质体与农杆菌共培养；2〕用农杆菌转化植物细胞或组织；或者3〕用农杆菌转化种子、茎尖或分生组织。此外，基因转移可以通过如Bechtol等人所描述的农杆菌原位转化完成，(C.R.Acad.Sci.Paris,316:1194,1993)，该方法依据农杆菌细胞悬浮液真空渗入。将异源核苷酸导入植物细胞首选的方法是用以上描述的转化的土壤根癌农杆菌侵染植物细胞、外植体、分生组织或种子，在本领域普通技术人员所知道的合适的条件下，转化的植物细胞长成茎、根，并发育成植株。本发明首选的质粒包括含有编码FT蛋白异源核苷酸序列的二元Ti质粒系统，这种质粒至少包含编码另一个成花因子的核苷酸序列，例如LEAEY(LFY),APETALA1(AP1),CONSTANS(CO),TERMINALFLOWER1(TFL1),FLORICAULA(FLO),SQUAMOSA(SQUA),FCA，以及将它们联合使用。或者，可以使用两个质粒，其中每个质粒包含至少一个外源核苷酸序列，在这些核苷酸联合表达的细胞中，第一个核苷酸的表达可能先于、基本同时或后于第二个核苷酸序列的表达。其它成花基因可以类似的方法用于构建一个或多个载体。或者，异源核苷酸可以通过机械或化学方法与植物细胞接触导入植物细胞。例如，核苷酸通过使用显微吸管直接微量注射到植物细胞而进行机械转移，或者核苷酸可通过使用聚乙二醇转移到植物细胞中，聚乙二醇与遗传物质形成沉淀能被细胞吸收。异源核苷酸还可以用电击法导入植物细胞(Fromm，等，Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.,82:5824,1985，在本文一并参考)。在该技术中，在有包含相关核苷酸序列的载体或核酸存在下对植物原生质体电击，高场强的电冲击波可逆性地穿透质膜将核苷酸导入细胞，经电击的植物原生质体重新形成细胞壁，分裂并形成植物愈伤组织，带有转化基因的转化植物细胞的筛选可以通过使用本文描述的表型标记来完成。将核苷酸序列导入植物细胞的又一种方法是将带有需要导入的核苷酸的微粒高速子弹打入，核苷酸可包在微粒的矩阵中，或在其表面(Klein，等，Nature327:79,1987)，尽管典型地只需要一个新的核苷酸序列的单一导入，但该方法尤其能进行多重导入。花椰菜花叶病毒(CaMV)也可以用作载体将异源核苷酸导入植物细胞(美国专利No.4,407,956).CaMV病毒DNA基因组插入亲本细菌质粒构建成的重组DNA分子可以在细菌中繁殖，克隆后，重组质粒可以在此克隆并通过引入想要的核苷酸序列进行进一步修饰，重组质粒经修饰的病毒部分接着从亲本细菌质粒上切下来，用于接种植物细胞或植物。培育遗传修饰植物的方法在又一个实施方案中，本发明提供了一个构建遗传修饰的植物细胞的方法，由该细胞发育而成的植物与野生株相比具有开花可调节的特性。该方法包括至少将本发明中编码FT的多聚核苷酸导入植物细胞得到转化的植物细胞，并在允许FT多肽表达的环境中使转化的植物细胞生长从而生长出开花可调节的植物，术语“可调节”指加速成花，或抑制或延迟成花。加速成花可通过诱导或增加FT基因的表达或FT多肽活性实现。本文描述了本发明方法中有用的编码FT多肽的载体，例如，在诱导型启动子或组成型启动子的调控下FT基因的表达可用于使FT表达量增加到高于野生型植株的水平。同样，抑制成花可通过抑制植物中FT基因表达或FT多肽活性实现。例如，FT反义或FT负显性核苷酸序列可用于抑制FT基因表达。而现有例证表明成花调节基因(FT)的组成型表达引起加速成花，反义核苷酸的表达可用于抑制或延迟成花，该系统能被修改以便成花可以被负显性多肽抑制。例如，FT或其它花调节基因的负显性变型可以组成型表达，负显性的突变蛋白有效干扰正常内源蛋白的功能，这样，基因的行为不通过使结构基因本身或其RNA失活就可以被阻断，这种方法已成功用于信号转导分子和转录因子(例如，Attardi，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:10563,1993；Lloyd，等，Nature,352:635,1991；Logeat，等，EMBOJ.,10:1827,1991；Mantovani，等，J.Biol.Chem.,269:20340,1994；Ransone，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:3806,1990；Richardson，等，Mech.Dev.,45:173,1994:Tsai,GenesDev.,6:2258,1992；Thomas,NatureGenetics,17:58,1997；Wittbrodt,J.AndRosa,F.,GenesandDevelopment,8:1448,1994；Kashles等，Mol.Cell.Biol.,U:1454,1991；Pierce&Kimelman,Development,121:755,1995)。在又一实施方案中，本发明包括一个培育具有成花分生组织发育可调节特性的遗传修饰植物，包括用载体与植物细胞相连，该载体包含至少一个编码FT多肽结构基因的异源核苷酸相连，并将其与启动子相连以获得转化的植物细胞；由转化的植物细胞种植植株；筛选表现成花分生组织发育可调的植株。本文所用的术语“相连”指将载体导入植物细胞的任何方式，包括以上描述的化学和物理方式。首选的“相连”是指通过以上描述的用异源核苷酸转化的土壤根癌农杆菌将核苷酸或载体导入植物细胞(包括外植体、分生组织或种子)。一般地，植物细胞在转化过程中再生获得整个植株。转化的直接产物是指“转基因体”。用在本文的术语“种植”或“再生”意思是由一个植物细胞、一群植物细胞、植物的一部分(包括种子)或植物碎片(例如原生质体、愈伤组织或植株块)。本文所用的植物细胞包括藻类、蓝细菌、种子、培养悬液、胚芽、分生组织区、叶、根、茎、配子体、孢子体、花粉和小孢子，没有限制。原生质体再生依植物种类不同而不同，但一般首先制得原生质体悬液，对于某些种类的植物，接着从原生质体悬液诱导形成胚，直至象天然胚一样到成熟和发芽阶段。培养基一般含生长和再生所必需的各种氨基酸和激素，使用激素的例子包括生长素和分裂素，有时在培养基中添加谷氨酸和脯氨酸，尤其是对于谷类和苜蓿是有利的。有效的再生依赖于培养基、基因型和培养过程。如果这些可变因子都得到控制，再生是可重复的。再生也可以来自植物愈伤组织、外植体、器官或它的一部分，转化可以在器官或植物的一部分再生过程中进行。(见酶学方法(MethodsinEnzymology),Vol118和Klee，等，AnnualReviewofPlantPhysiology,38:467,1987)。利用Horsch，等，Science,227:1229,1985的叶盘一转化一再生方法，叶盘在选择培养基上培养，接着在大约2-4周后茎形成，形成的茎从分生组织上切下移植到生根选择培养基中，根出现后尽快将生根的幼苗移植到土壤中，幼苗如需要可再换盆直至生长成熟。对于无性繁殖的作物，成熟的转基因植物可通过用切块或者组织培养技术培植多个相同的植株，筛选想要的转基因体并获得新的变种，并无性繁殖用于商业。对于种子繁殖的作物，成熟的转基因植株可自交产生同型杂交植株，杂交植株结出的种子含有新导入的外源基因，这些种子长成的植株会具有并选择的表型，例如提早成花。取自再生植株的一部分，例如花、种子、叶、枝、果实以及诸如此类，只要这些部位含有所描述的已经转化的细胞，均包含于本发明中。再生植株的子代和变异体以及突变体，只要这些部位含有导入的核苷酸序列，也包含于本发明的范围之内。成花可调节的植株可以通过肉眼观测筛选。本发明包括使用本发明的方法培植的植株，这包括来自遗传修饰植株的植物组织、种子和其它植物细胞。在又一实施方案中，本发明提供了一个在植物细胞中调控成花分生组织发育的方法，包括如以上描述的将载体与植物细胞相连以获得转化的植物细胞，在植物生长的条件下培植转化的植物细胞，在植物中条件成花分生组织的发育。本发明的方法需要有与结构基因相连的启动子序列，当需要成花诱导时启动子是诱导型启动子。例如，按照上述方法培植出植物细胞或植株，通过与编码FT的核苷酸序列相连的启动子与合适的诱导物接触诱导可调节成花分生组织的形成，这些诱导型启动子上面已经描述，并包括那些首选用化学方法诱导的启动子。“转化”意思是将新的DNA(即对于细胞来说是外源DNA)并入细胞而导致细胞属性的改变。当细胞是哺乳动物细胞时，属性改变一般可通过将DNA导入细胞基因组来实现(即稳定型的)。“转化的细胞”意思是通过重组DNA技术已将编码FT的DNA分子导入其中的细胞，用重组DNA转化宿主细胞可通过常规技术，以及本领域普通技术人员所知道的方法完成。抗体本发明的FT多肽可用于制备抗体，抗体有免疫活性或者和FT多肽表位结合。抗体必须由具有不同表位特性的单克隆抗体总和组成，同时提供独特的单克隆抗体制品。制备单克隆抗体对于本领域普通技术人员是熟知的，见，例如，Green等，单克隆抗血清的制备(ProductionofPolyclonalAntisera),in:ImmunochemicalProtocols(Manson,ed),pages1-5(HumanaPress1992)；Coligan等，兔、小鼠、大鼠和仓鼠单克隆抗血清的制备(ProductionofPolyclonalAntiserainRabbits,Rats,MiceandHamsters),inCurrrentProtocolsinImmunology,section2.4.1(1992),引入本文作为参考。单克隆抗体的制备同样是常规方法。见，例如，Kohler&Milstein,1975,Nature256:495；Coligan等，sections2.5.1-2.6.7；andHarlow等，in:Amidodies:aLaboratoryManual,page726(ColdSpringHarborPub.1998)，据此一并参考。简而言之，单克隆抗体可通过以下途径获得用含有抗原的组合物免疫小鼠，分离血清样品确定抗体产物的存在，切下脾脏获得B淋巴细胞，将B细胞与骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，克隆杂交瘤细胞，选择产生该抗原的抗体的阳性克隆，从杂交瘤细胞培养液中分离抗体。可通过已建立的各种成熟技术分离纯化单克隆抗体，这些分离技术包括用Protein-ASepharose亲和层析、分子排阻层析和离子交换层析，见例如，Coligan等，Sections2.7.1-2.7.12andsections2.9.1-2.9.3；Barnes等，免疫球蛋白G(IgG)的纯化(PurificationofImmunoglobulinG(IgG)),in:MethodsinMolecularBiology,Vol.10,pages79-104(HumanaPress1992).单克隆抗体在体外或体内增殖的方法为本领域普通技术人员熟知，体外增殖可在合适的培养基例如Dulbecco改进伊格耳氏培养基(Dulbecco′sModifiedEagleMedium)或RPMI1640培养基中进行，在培养基中选择加入哺乳动物血清例如胎牛血清，或微量元素和生长维持添加剂，例如正常鼠腹膜分泌细胞、脾细胞、胸腺细胞或骨髓巨噬细胞。体外生产提供相对纯的抗体制品，而且允许扩大规模生产大量所需的抗体。大量培养杂交瘤可在气举反应器、连续振荡反应器或者固定的或夹住的细胞培养器中进行均质悬浮培养。体内增殖可通过将细胞克隆注射到与亲本细胞组织相容的哺乳动物例如同型小鼠中实现，这样抗体产生瘤就能在体内生长，注射前可选择烃类，特别是矿物油例如降植烷(四甲基五葵烷)致敏动物，一至三周后，就能从动物的体液中回收所需的单克隆抗体。本发明中所使用的术语“抗体”包括完整的分子以及其片段，例如能与表位决定簇结合的Fab、F(ab′)2和Fv片段。这些抗体片段保存某些与抗体或受体选择性结合的能力，详细说明如下(1)Fab片段，该片段包含抗体分子单价抗原一结合部分，它可以通过将整个抗体用木瓜蛋白酶消化获得，它含有一个完整的轻链和重链的一部分；(2)Fab′片段，该抗体分子片段可以通过用木瓜蛋白酶处理整个抗体然后还原获得，它含有完整的轻链和重链的一部分；每个抗体分子可得到两个Fab′片段；(3)F(ab′)2片段，该抗体片段可通过将整个抗体用木瓜蛋白酶处理但不进行随后的还原而获得；F(ab′)2是两个Fab′片段通过两个二硫键结合在一起形成的二聚体；(4)Fv片段，定义为表达成为双链的基因工程片段，它包含轻链的可变区和重链可变区；以及(5)单链抗体(“SCA”)，定义为包含有轻链可变区和重链可变区的基因工程分子，二者由一个合适的多肽链连接成为基因融合单链分子。制备这些片段的方法是技术人员所了解的。(见例如，HarlowandLane,Antidodies:ALaboratoryManual(抗体实验室手册)，ColdSpringHarborLaboratory,NewYork(1998)，据此一并参考)。本发明使用的术语“表位”意思是任何抗原决定簇，它们是抗原分子上与抗体结合的抗体结合部位，表位决定簇通常由分子的化学活性表面集团组成，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特异性三维结构特征以及特异的电荷特征。本发明的抗体片段可以通过蛋白酶水解抗体或在大肠杆菌中表达编码该片段的DNA得到，抗体片段可以通过常规方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化整个抗体获得。例如，抗体片段可用胃蛋白酶酶切抗体产生一个5S的F(ab′)2片段制备，该片段用硫醇还原剂进一步切割，并选择性的封闭巯基导致二硫键连接断裂，这样产生3.5SFab′单价片段，或者，用胃蛋白酶酶切直接产生2个单价Fab′片段和Fc片段。这些方法已被例如Goldenberg,U.S.patentNo.4,036,945和No.4,331,647，以及其中提及的文献描述。这些专利据此全部一并参考。同时见Nisonhoff等，1960,Arch.Biochem.Biophys.89:230；Porter,1959,Biochem.J.73:119；Edelman等，1967,MethodsinEnzymlogy,Vol.1,page422(AcademicPress)；以及Coligan等atsections2.8.1-2.8.10and2.10.1-2.10.4。只要片段和完整抗体识别的抗原结合，其它切割抗体的方法，例如分离重链获得单价轻-重链片段，片段进一步切割，其它酶，化学或遗传手段都可以使用。例如，Fv段由VH和VL链的结合组成，这种结合如Inbar等，1972,Proc.Natl.Acad.Sci.USA69:2659描述的可能是单价的，或者，可变链可以由分子间二硫键或化合物如戊二醛脱水交联进行连接，见Sandhu，同上。Fv段由一个多肽连接的VH和VL链组成，这些单链抗原结合蛋白(sFv)可通过构建包含由一个寡聚核苷酸连接的编码VH和VL结构域的DNA序列的结构基因来制备，该结构基因插入到表达载体，随后导入宿主细胞如大肠杆菌中，重组的宿主细胞合成由连接肽连接的两个V结构域的单个多肽链。制备sFvs的方法已有描述，例如Whitlow等，1991,Methods:aCompaniontoMethodsinEnzymology,Vol.2,page97；Bird等，1988,Science242:423-426；Ladner等，U.S.patentNo.4,946,778；Pack等，1993,Bio/Technology11:1271-77；以及Sandhu，同上。抗体片段的另一个形式是对应于单个互补-决定区(CDR)的多肽。CDR多肽(“最小识别单位”)可以通过构建编码所感性趣的抗体的CDR基因获得，制备这些基因，例如，可以通过用聚合酶链反应从抗体产生细胞的RNA合成。见，Larrick等Methods:aCmpaniontoMethodsinEnzymology,Vol.2,page106(1991)等。本发明中与FT多肽结合的抗体可以用完整的多肽或包含有感性趣的小肽的片段作为免疫抗原来制备。用于免疫动物的多肽或小肽可以来自翻译的cDNA或化学合成，如需要它们可以连接载体蛋白，这些普遍使用的将肽化学偶联的载体包括钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)、牛血清清蛋白(BSA)和破伤风类毒素。偶联的肽随后用于免疫动物(例如，小鼠、大鼠或兔)。如需要，单克隆或多克隆抗体可进一步纯化，例如将产生抗体所用的多肽或小肽与基质相连，用它进行抗体的结合与洗脱。熟悉的技术人员知道免疫学技术中多克隆抗体以及单克隆抗体纯化和浓缩的各种常见的方法(见例如，Coligan，等，Unit9,CurrentProtocolsinImmunology(现代免疫学方法)，WileyInterscience,1991，引入本文作为参考)。也可能使用抗个体基因型技术制备模拟表位的单克隆抗体。例如，对应于第一个单克隆抗体制备的抗个体基因型单克隆抗体在多变区具有结合的结构域，它是第一个单克隆抗体结合表位的“映象”。遗传修饰的植株在一个实施方案中，本发明提供了含有在基因组中至少有一个编码FT的异源核苷酸序列的遗传修饰植物，在植物中FT序列调节成花，因此该植物具有可调节成花的特性。这里还包括所有取自本发明遗传修饰植物的植物细胞和植物种子，此外，还提供如本文所描述的能发芽生长成遗传修饰植物的种子。用在本文的术语“遗传修饰”指将一个或多个异源核苷酸序列导入一个或更多个细胞，这些细胞能产生整个有生育能力的可见植株。用在本文的术语“遗传修饰”指通过前面提到的过程之一培育的植株。本发明遗传修饰的植物能够自花授粉或与相同种交叉授粉，以便种系携带的外源基因能够插入或杂交进入农业上有用的植物变种。本文使用的“植物细胞”指原生质体、配子产生细胞和再生为整个植株的细胞，包含有多个植物细胞能再生成为整株植物的种子相应地包括在“植物细胞”的定义中。本文使用的术语“植株”指整株植物、植物一部分、植物细胞或植物细胞群，例如象植物组织，胚也包含于“植株”含义中。本发明的植物包括任何可进行转化技术操作的有花植物，包括单子叶植物和双子叶植物。单子叶植物的例子包括，但不仅限于芦笋、玉米和甜玉米、大麦、小麦、水稻、高粱、洋葱、珍珠粟、黑麦和燕麦。双子叶植物的例子包括，但不仅限于番茄、烟草、棉花、油菜、豆角、大豆、胡椒、莴苣、豌豆、苜蓿、三叶草、油菜类作物或油芸苔(例如，卷心菜、椰菜、花椰菜、芽甘蓝)、萝卜、黄萝卜、甜菜、茄子、菠菜、黄瓜、南瓜、西瓜、甜瓜、向日葵和观赏植物，木本种类包括白杨、松树、美洲杉、雪松和橡树。用在本文的术语“异源核苷酸序列”指至少一个与调控序列如启动子相连的结构基因。核苷酸序列起源于外源种，或者，如果是从其原始形式进行实质改造的则是相同种。例如，术语“外源核苷酸序列”包括起源于相同种的核苷酸序列，这种序列与和天然或野生启动子不同的启动子相连。本文使用的术语“核苷酸序列”指核糖核酸或脱氧核糖核酸的多聚体，以独立的片段存在或作为更大结构的一组份。编码本发明方法中使用的蛋白的DNA可以从cDNA片段组合而成，或是来自含有能够在重组转录单位中表达的合成基因的寡聚核苷酸。本发明中的多聚核苷酸或核苷酸序列包括DNA、RNA和cDNA序列(见先前描述)。反义多聚核苷酸抑制或延迟成花可以通过将反义分子导入植物细胞实现，植物细胞可生长为转化的或遗传修饰的植株。该方法包括，用反义核苷酸、核酶或者三聚体阻断转录或FTmRNA翻译，可用反义核苷酸或三聚体屏蔽mRNA，或者用核酶切割。本发明反义多聚核苷酸的例子见SEQIDNO:3(图2)。在实施方案中，本发明包括对成花时间基因(FT)表达有终止或干扰的遗传修饰植物，转基因插入到植物染色体基因组中。“转基因”是人工插入到细胞，并成为由该细胞发育而成的器官或植物基因组的一部分的DNA片段，该转基因可以包括部分或完全与转基因器官异源的基因，或者代表与器官的内源基因同源。本文使用的术语“转基因”是指含有一个或更多在遗传修饰植物或转基因植物中表达的DNA序列，它们对于转基因植物部分或完全异源，或者与转基因植物内源基因同源但设计插入植物基因组的位点不同于天然基因，转基因包含有一个或更多的启动子和其它任何对所选择的DNA表达必需的DNA，比如内含子，它们与所选择的DNA相连，并可以包括增强子序列。本发明提供培育具有延迟成花特性的遗传修饰植物的方法，它是将含有至少一个能终止或干扰FT多肽表达的结构基因的核苷酸序列的载体与植物细胞相连，为获得转化的植物细胞该基因可与启动子相连接；从转化的植物细胞培育植株；并筛选表现晚成花的植株。晚成花可以按本文实施例上所示方法确定，例如目测观察转基因植物成花时间与野生型植物成花时间的差别，成花时间可以通过第一个花形成前计数叶的数量确定(Koormmeef等，MolGen.Genet.,229:57,1991)。其它指标包括检测花分生组织特征基因例如LEAFY或APETALA1启动子活性，(Blazquez等，Development,124:3838,1997；Hempel,同上)。培育具有延迟成花特性的遗传修饰植物的方法包括将含有与启动子相连的FT反义核苷酸序列或编码FT负显性形式的核苷酸序列的载体与植物细胞相连。在这提供的反义核苷酸序列DEQIDNO:3，应用它培育出相对于野生型植株有延迟成花特性的遗传修饰植物见实施例3。反义核苷酸是与特定mRNA(Weintraub,1990,ScientificAmerican,262:40)至少部分互补的DNA或RNA分子。在细胞中，反义核苷酸与相应的mRNA杂交形成双链分子，由于细胞不能翻译双链的mRNA，反义核苷酸干扰了mRNA的翻译。首选15个碱基的反义多聚物，是因为它们容易合成，并且当导入产生FT的靶细胞时比大分子引起的问题少，在体外应用反义方法抑制基因翻译已为技术人员熟知(Marcus-Sakura,1988,Anal.Biochem.,172:289)，病毒也可用于反义抑制(AngellandBalcombe,EMBOJ.,16:3675,1997)。使用寡聚核苷酸终止转录叫做三重策略，是由于寡聚体缠绕在双链DNA周围形成三链螺旋。因此，这些三重复合物设计成为能识别所选择基因独特位点(Maher，等，1991,AntisenseRes.AndDev.,1(3):227；Helene,C.,1991,AnticancerDrugDesign,6(6):569)。核酶是具有特异切割其它单链RNA能力的RNA分子，切割方式与DNA内切酶类似。通过改变编码这些RNAs的核苷酸序列，可能设计出识别RNA分子中特异核苷酸序列并切割它的分子(Cech,1988,J.Amer.Med.Assn.,260:3030)。该方法的一个主要优点是由于它们具有序列特异性，只有含有特定序列的mRNAs才能被失活。有两种基本类型的核酶，叫做四膜虫型(Hasselhoff,1988,Nature,334:585)和“锤头”型，四膜虫型核酶识别4个碱基长的序列，而“锤头”型核酶识别11-18个碱基长的序列。识别序列越长，特异性切割靶mRNA种类中序列的可能性就越大。因此，优选选择锤头型核酶用于特定mRNA种类失活而不选择四膜虫型核酶，而且宁愿选择18个碱基的识别序列而不选择更短的序列。负显性突变在本发明的另一个实施方案中，提供了编码FT负显性蛋白的核苷酸序列。例如，包含有负显性编码基因的遗传结构可与启动子相连，例如组织特异性启动子，这些启动子和使用方法的例子见以上描述。这些结构在植物中调节成花的方法中十分有用。例如，本发明的方法包括用编码负显性FT蛋白的经验结构和与之相连的合适的启动子转化植物细胞或组织，并表达编码FT负显性基因，这样，可通过干扰野生型FT活性调控成花。筛选FT抑制因子在另一个实施方案中，本发明提供了一个鉴定能调控FT蛋白或基因表达的化合物的方法。该方法包括将含有该化合物的成分，与FT多肽或表达FT多肽的重组细胞在足以使之能相互反应的条件下温育，确定该化合物对FT活性或表达的影响。化合物对FT活性的影响可以通过许多分析测定，可以包括加入化合物温育前和温育后的测定，影响FT活性或基因表达的化合物包括肽、肽类似物、多肽、化合物和生物试剂。分析包括Northernblot分析FT的mRNA(例如对基因表达)，和Westernblot分析(例如对蛋白活性)。温育包括允许供试化合物和FT多肽或表达FT多肽的重组细胞二者相接触的条件，接触包括在液相、固相或在细胞中。供试化合物可以是用于筛选多数化合物的任意组合库。本发明方法中鉴定的化合物可以进一步评价、检测、克隆、测序，诸如此类，可以在溶液中或结合到固体支持物上，可以用检测特异DNA序列的常用方法，例如PCR，多聚物限制(Saiki,等，Bio/Technology,3:1008-1012,1985)，特异位点寡聚核苷酸(ASO)探针分析(Conner,等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80:278,1983),寡聚核苷酸连接分析(OLAs)(Landegren，等，Science,241:1077,1988)，以及类似方法。DNA分析的分子手段已有综述(Landegren，等，Science,242:229-237,1988)。鉴定影响FT的化合物的方法本发明提供了鉴定能调节FT活性化合物的方法。该方法包括将FT多肽或表达FT多肽的重组细胞或其变体与供试化合物在足以允许各个成分相互作用的条件下温育，并测定化合物对FT活性或表达的影响。影响FT活性或基因表达的化合物包括肽、多肽、肽类似物、化学化合物和生物试剂。“温育”包括允许供试化合物和FT多肽二者接触的条件，“接触”包括在液相和固相。供试化合物可以是用于筛选多数化合物的任意组合库，其它各类试剂包括在筛选分析中，这些包括用于优化蛋白-蛋白结合或降低非特异性或背景相互作用的试剂例如盐、中性蛋白例如清蛋白、去污剂等。也可以使用例如蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、抗菌试剂等制剂提供分析效率。各成分的混合物以任何能得到精确结合的顺序加入，温育可在任何适合的温度进行，典型地在4-40℃。依最佳活性选择温育时间，但也可以依据实施快速高效筛选而优化，典型地0.1至10小时就足够了。本发明方法中鉴定的是天然核苷酸的化合物可以进一步评价、检测、克隆、测序，诸如此类，可以在溶液中或结合到固体支持物上，可以用检测特异DNA序列的常用方法，例如PCR，多聚物限制(Saiki，等1985,Bio/Technology,3:1008-1012,)，特异位点寡聚核苷酸(ASO)探针分析(Conner,等，Proc.Nad.Acad.Sci.USA,80:278,1983)，寡聚核苷酸连接分析(OLAs)(Landegren,1988，等，Science,241:1077)，以及类似方法。DNA分析的分子手段已有综述(Landegren，等，1988,Science,242:229-237)。影响FT的候选化合物包括化学化合物。一类是有机分子，首选是分子量大于50并少于2,500道尔顿的小有机化合物。候选试剂包括对蛋白结构的相互作用必需的功能集团，尤其是氢键，以及典型地包括至少一个胺、羰基、羟基或羧基，首选地至少有两个功能化学集团。候选试剂通常包括被以上一个或多个功能集团取代的环碳或杂环结构和/或芳族或多芳族结构。从广泛的各类来源包括合成库或天然化合物中得到候选化合物。例如，有许多方法可进行随机和导向合成广泛多样的有机化合物和生物分子，包括随机寡聚核苷酸和寡聚核苷酸的表达，或者，也可使用细菌、真菌、植物和动物这些天然化合物库。此外，天然或合成制备的化合物很容易通过常规的化学、物理和生化手段进行修饰，并可用于制备组合库，已知的医药试剂可进行有意或随机的化学修饰，例如酰化、烷基化、酯化、酰胺化等以生产结构类似物。候选试剂还可在生物分子中找到，包括但不仅限于肽、糖类、脂肪酸、类固醇、嘌呤、咪啶、衍生物、结构类似物或其中组合。化合物通过刺激或抑制报告基因的表达影响报告基因表达。如果报告基因的转录水平或蛋白产物相对于没有供试化合物时减少，化合物就“抑制”报告基因表达，如果报告基因的转录水平或蛋白产物增加，化合物就“刺激”报告基因表达。本领域普通技术人员能确定许多报告基因用于本发明的筛选方法。本发明使用报告基因的例子是lacZ、发光酶、氯霉素乙酰转移酶、β-葡糖苷酸酶和绿色荧光蛋白。化合物对报告基因转录的影响可通过技术人员所熟悉的检测其表达的方法测定(例如Northem杂交；EMSA)。或者，报告基因的蛋白产物可由技术人员熟悉的方法测定(例如酶联免疫分析(ELISA)或放射免疫测定(RIA)；Western杂交；SDS-PAGE)。本发明进一步提供了鉴定与FT多肽或其突变体结合的细胞蛋白的方法，它是通过将至少一种细胞蛋白与FT多肽或其突变体在足以使之相互作用的条件下温育，并从未结合的FT中分离FT多肽复合物和假定结合的蛋白，并分离这种蛋白(例如，2-杂交系统)。在优选的实施方案中使用了分离的细胞蛋白。然而，部分纯化的蛋白、细胞提取物组份、整个细胞提取物或完整的细胞可用于本发明方法中。“温育”包括允许细胞组份与FT多肽接触的条件，术语“接触”包括在液相和固相中，并包括任何复合物形成或细胞组份与FT多肽的结合，接触还包括任何细胞组份行使对FT多肽生化修饰的酶的相互作用。细胞组份与FT多肽的复合物可以通过本领域普通技术人员所熟知的常规手段从未形成复合物的FT多肽中分离，细胞组份与FT结合的复合物可通过大小分离、物理分离或其它常规方法完成。例如，非变性胶电泳可用于从非结合的FT中分离结合有细胞组份的FT。一旦复合物被分离，用技术人员熟知的方法可对细胞组份分离和定性。例如，如果细胞组份是蛋白，蛋白可以用技术人员熟知的方法测序，编码蛋白的多聚核苷酸可通过DNA合成技术制备，然后多聚核苷酸可用技术人员所熟知的分子技术插入到载体并用以上所描述的技术转化宿主细胞。转化后，大量蛋白可通过常规手段分离和纯化。例如，可制备表达宿主细胞的溶解产物，并运用高压液相色谱(HPLC)、排阻层析、凝胶电泳、亲和层析或其它纯化技术纯化溶解产物。纯化的蛋白一般至少约80％的纯度，最好至少约90％的纯度，甚至可达100％的纯度，纯度指预期不含其它蛋白以及细胞碎片。以上公开的内容一般性地描述本发明，更完整的理解可通过参考以下特定的实施例获得，本文提供实施例仅仅是为了说明，并没有有意限制本发明的范围。实施例1FT的鉴定在过去几年，我们用真空渗透法(Bechtold等，(1993),C.R.Acad.Sci.316,1194-1199)，使有活化标志的T-DNA载体产生了大量转化的拟南芥(Arabidopsisthaliana)。这个载体在T-DNA的右侧有一个椰菜花叶病毒35S增强子的四聚体(Walden等，(1994),PlantMol.Biol.26,1521-1528)。在我们培养的转化植物中，我们鉴定出一个品系，包含有一个显性可遗传的突变，引致开花提前而不受环境因素影响。这个品系1733，不管日照时间长短，在平均只有3.5片叶时就开花，而野生型则受照时间影响，分别在有13和45片叶时开花。在确定这种显性表型与活化标记的栽体共分离后，我们通过质粒回收分离侧翼序列。一个包含3.4kb的基因组序列连同原载体上多聚化的增强子一起，插入另一个T-DNA载子，从而得到pSKIO83(图1)。然后再用真空渗透法把质粒导入植物。大量用pSKI083转化的植物和原来的突变品系表型一致，显示pSKIO83片段包含引致早开花的基因。通过用一组酵母人工染色体库与之杂交做出pSKIO83的图谱，从而将之定位在1号染色体的底部。而己知定位于此区域内与开花有关的基因只有FT基因。其隐性等位基因引致晚开花(Koomneef等，(1991),Mol.Gen.Genet.229,57-66)，编码FT基因座的结构基因在此之前从未被分离。来自三个相互独立的、可被EMS诱导的fl等位基因的基因组片段分别被测序，发现它们都有单碱基对突变，有的在基因组片段上引入错义突变，有的变为终止密码子(参见下文)。因此，最初的活化标记的突变是FT基因座的显性早成花等位基因。它的失活将导致相反的现象-迟开花。实施例2FT序列及其与其他基因的关系我们测定了在pSHI083上的基因组片段序列和来源于该片段的cDNA的序列(图1,2)。FTcDNA包含单独一个开放读码框，编码的蛋白质有175个氨基酸，分子量19.8kD，等电点7.89。搜索基因库的结果显示FT是植物、真菌和哺乳类动物所共有的一个基因家族的成员。我们己经知道植物的一对定向进化同源基因和哺乳类的另一对定向进化同源基因的功能(图3A)。这两个植物基因是金鱼草(Antirrhinummajus)的CENTRORADIALIS(CEN)基因和拟南芥的TERMINALFLOWER1(TFL1)基因(Bradley等，1996,supra；Bradley等，1997,supra)。使这些基因失活的突变导致主枝和侧枝末端长出末端花。此外，和野生株相比，tfl1突变株开花时间稍早一点(ShannonandMeeks-Wagner,(1991),PlantCell3,877-892)，我们最近得而TFL1过度表达的植物(35S∷TFL1)，这些植物的开花时间较晚。因此可知TFL1基因影响开花时间，TFL1和FT的基因序列相关，但FT过度表达却引致提前开花。tfl1突变引致功能缺失也引起提前开花，相反，导致功能缺失的ft突变和TFL1过度表达一样可使开花变晚。拟南芥基因组内至少还有基因属于FT/TFL1基因家族，这基因被确认作假表达序列标记(ESTclone#E12A11)，在GenBank上的访问号是AA042630。我们测定了E12A11cDNA的全部序列(图3A)。与FT和TFL1不同，转基因植物(35S∷E12A11)中该基因的过度表达并不影响开花。CEN,TFL1,FT和E12A11蛋白质序列的系统发生树显示，TFL1和CEN关系比FT和E12A11的关系更近，其中的TFL1,FT和E12A11来自同一物种，与CEN来源不同。TFL1与CEN的较近关系肯定了它们是定向进化同源基因(图3B)。此外，序列比较显示FT与CEN/TFL1较相近，与E12A11则比较远。因此，系统发生树为鉴定其他物种的FT的定向进化同源提供重要的判据这些定向进化同源基因与来自Arabidopsisthaliana的FT的相关性应比CEN/TFL1或E12A11更大。哺乳物物的FT/TFL1家族中的两个成员编码老鼠和人的海马类乙酰胆碱供能神经激肽(HCNP)的前体(Tohdoh等，supra)(图3)。这个鼠蛋白被确认为蛋白前体，产生一个肽类激素，激发脑组织体外培养时乙酰胆碱的合成(Ojika等，supra)。以前，HCNP的活性部分被纯化并测得它是一个长11氨基酸的肽，序列为乙酰-Ala-Ala-Asp-Ile-Ser-Gln-Trp-Ala-Gly-Pro-Leu(SEQIDNO:4)(图3C)。由肽序列推得DNA序列，并且克隆了这个前体蛋白。前体变成活性肽经过N-末端断裂分别删去蛋氨酸和乙酰化，但是乙酰化对活性并不重要。乙酰化和没有乙酰化的HCNP在体内都有发现(Ojika等，supra)。编码人HCNP前体蛋白的基因也被克隆。虽然人与鼠的这两个基因总体上十分相似，但N末端的11个氨基酸中只有六个一样。尽管如此，两者都能激发内隔核培养物中乙酰胆碱的合成。用包括人和鼠HCNP的小肽测定生物活性，只有包括HCNP羧基端的四肽和六肽有生物活性。根据序列比较，HCNP有活性最小共有序列被推定为X-Gly-Pro-Leu(Ojika等，1996)。尽管植物蛋白的氨基端相当不同，但它们都有(Asp/Glu)-Pro-Leu(图3C)。如果植物蛋白的断裂与HCNP一样，发生在亮氨酸之后，预计植物的多肽长度将为7-11个氨基酸(图3C)。序列的相似强有力地暗示植物蛋白是影响植物开花的多肽的前体。因此，我们猜想除了FT的过量表达和失活外，使用FT肽或其过量表达也会影响开花时间。实施例3正义方向和反义方向过量表达FT的转基因植物把质粒回收分离所得的基因组DNA片段作为探针，我们从拟南芥成花cDNA文库得到10个cDNA克隆。把cDNA克隆测序发现它们全都来源于同一个基因。其中pSKI1.1.1长1814bp,包含有完整的开放读码框和5’和3’端非编码序列。上述一些重组DNA的局部构造图见于图1，而正向和反向插入的确切序列可见于图2。我们构建了pSKI090双向T-DNA载体用来转化植物，该载体的T-DNA边界之间有BAR基因，赋予植物对除草剂glufosinate(BASTATM或IgniteTM)的抗性，还有多克隆位点，在一个来源于病毒的植物强启动子和翻译增强子(其中包括椰菜花叶病毒35S启动子的200bp(Odell等，(1985),IdentificationofDNA-sequencesrequiredforactivityofthecauliflowermosaicvirus-35Spromoter.Nature313,810-812)和烟草花叶病毒5’端ω区的70bp(Sleat等,(1987),Gene60,217-225)，此外还有土壤农杆菌胭脂碱合成酶(nos)基因的转录终止子。生成pSKI090的两个中间步骤是pBluescriptKS+(Stratagene)派生载体pSKI087和T-DNA载体pSKI089，前者包括椰菜花叶病毒35S的启动子和3’端的nos序列，后者包含有BAR基因。为了生成正向插入，pSKI1.1.1上的cDNA插入片段被切成XbaⅠ-XhoⅠ片段，亚克隆到pSKI087，构造了pSKI053；用BamHⅠ消化以除去多余的多接头序列，重新连接，得到pSKI058；最后，包含有合成的启动子、FTcDNA和nos终止子的片段被插入到pSKI089载体，得到pSKI059(图1)。用pSKI059转化的转基因植物应会产生过多的FTmRNA。为了得到反向插入，pSKI1.1.1的cDNA插入片段用KpnⅠ和XbaⅠ除去，得到KpnⅠ-XbaⅠ片段，然后与合适的pSKI090载体DNA(图1)连接，得到pSKI060。在pSKI060中FT开放读码框与合成启动子的方向(视作正常转录方向)相反。把pSKI059(35S∷FT)和pSKI060(35S∷antiFT)转入根癌土壤农杆菌ASE品系(Fraley等，(1985)，TheSEVsystem:anewdisarmedTiplasmidvectorsystemforplanttransformation.Biotechnology3,629-635).该质粒用真空渗透法引入到拟南芥哥伦比亚生态型(Bechtold等，1993)。通过反复向幼苗喷洒1∶10,000IgniteTM稀释物来筛选转基因植物。对pSiKI060(35S∷antiFT)而言，我们分析了50株转化株，其中两株晚开花，长出超过25片玫瑰状叶子(野生型只有13片叶子)。对于pSKI059(35S∷FT)，我们分析了50株转化株，其中45株比野生型提前很长时间开花，其中9株开花时间与原始的1733突变株相同。(叶片数3.5)FT还可能作为LEAFY的活性因子(Ruiz-Garcia等，PlantCell,9:1921,1997)。我们用常规方法把35S∷FT和35S∷LFY杂交并观察到协同作用。换句话说，这些植物开花但并未产生任何营养性叶片。应该注意这种增效作用是因为一种或多种基因在另一些基因表达的同时、之前或之后进行表达所引致。例如，同时使两者过度表达使植物发芽后立即开花。(参见表1)表1#数据选用最早开花的一组，但使对照的叶数都一样此外，我们用常规方法把35S∷FT和35S∷TFL1杂交，并观察到拮抗作用。同上，这种作用也缘于基因表达。例如，TFL1过度表达令植物晚开花，而TFL1及FT同时过度表达则出现中间表型。但是，在过度表达TFL1的同时减少FT的表达量，将使植物的开花时间比只有TFL1过度表达晚些。(参见表2)表2<tablesid="table2"num="002"><table>种类开花之前的叶片数标准差n35S∷TFL136.93.310ft-1/+#；35S∷TFL154.32.310</table></tables>#ft突变杂合，如表达50％正常FT以上是为了说明这项发明的范畴，但并不限定于此，事实上，根据如上的说明，只需这方面的普通技术就可以容易地想出并做出更多的具体应用而无需进行过多的实验。因此，这项发明受以下权利要求所限制。权利要求1．一种基本上纯化的成花基因座T(FT)多肽。2．权利要求1所述的多肽，其特征在于a)用SDS-PAGE测得分子量大约20kD；b)位于拟南芥第1条染色体上；c)有调节开花时间功能。3．权利要求1所述的多肽，其中，所说的多肽的氨基酸顺序基本上与SEQIDNO:2相同，或其功能片段。4．权利要求1所述的多肽，其中，氨基酸顺序为SEQIDNO:2。5．分离的编码权利1所述的多肽的多聚核苷酸。6．一种选自下组的分离的多核苷酸a)SEQIDNO:1；b)SEQIDNO:1，其中，T也可为U；c)与SEQIDNO:1互补的核苷酸顺序，和能与编码SEQIDNO:2多肽的核酸杂交，而且长度为至少15bp的a),b)和c)序列的片段。7．权利要求5所述的多聚核苷酸，其中，该多聚核苷酸是从植物细胞中分离的。8．包含权利要求5所述的多聚核苷酸序列的重组表达载体。9．包括有权利要求8所述的载体的宿主细胞。10．与权利要求1所述的多肽结合的抗体，或者与该肽的抗原片段结合的抗体。11．一种遗传修饰的植物，它在基因组中至少包含一个外源核酸序列，该外源序列至少包括编码FT的核酸序列，其特征为成花可调节。12．权利要求11所述的植物，其中的调节是加速成花。13．权利要求11所述的植物，其中的调节是抑制成花。14．权利要求11所述的植物，还包含编码选自下组的多肽的外源基因LEAFY(LFY),APETALA1(AP1),CONSTANS(CO),TERMINALFLOWER1(TFL1),FLORICAULA(FLO),SQUAMOSA(SQUA),FLOWERINGLOCUSCA(FCA)，以及它们的组合。15．权利要求11所述的植物，其中，结构基因与一段调控核酸序列有效连接。16．权利要求15所述的植物，其中的调控核酸序列是启动子。17．权利要求16所述的植物，其中的启动子是组成型启动子。18．权利要求16所述的植物，其中的启动子是可诱导型的启动子。19．权利要求11所述的植物，其中的核酸序列还包括一个选择性标记。20．权利要求11所述的植物，它是双子叶植物。21．权利要求11所述的植物，它是单子叶植物。22．从权利要求11的植物获得的植物细胞。23．从权利要求11所述的植物获得的植物组织。24．能发芽生长成基因组中带有至少一段外源核酸序列的植物种子，该外源核酸序列至少含有编码FT的核苷酸序列，其特征是可调节成花。25．一种载体，它含有一段与一个启动子有效连接的核酸序列，该核酸序列含有至少一个编码调节成花的多肽的结构基因。26．权利要求25所述的载体，其中该载体包括T-DNA衍生的载体。27．权利要求25所述的载体，其中该结构基因编码FT多肽。28．权利要求27所述的载体，进一步包括一个结构基因，该结构基因编码选自下组的多肽LEAFY(LFY),APETALA1(AP1),CONSTANS(CO),TERMINALFLOWER1(TFL1),FLORICAULA(FLO),SQUAMOSA(SQUA),FLOWERINGLOCUSCA(FCA),以及它们的组合。29．权利要求25所述的载体，其中的启动子是组成型启动子。30．权利要求25所述的载体，其中的启动子是诱导型启动子。31．权利要求25所述的载体，其中启动子是用化学方法诱导。32．一种对植物细胞进行遗传修饰的方法，使从这种细胞产生的植物的特征为与野生型的植株相比具有成花可调节的特征，所述方法包括将权利要求5的至少编码FT的多核苷酸导入植物细胞，以获得转化了的植物细胞；在容许FT多肽表达的情况下培养转化了的植物细胞，由此产生可调节成花的植株。33．权利要求32所述的方法，其中所说的调节指的是加速成花。34．权利要求32所述的方法，其中所说的调节指的是抑制成花。35．权利要求33所述的方法，其中所说的加速成花是通过在植物中诱导了FT的表达或活性而完成的。36．权利要求33所述的方法，其中所说的加速成花是通过增加植物内FT的表达或活性而完成的。37．权利要求35所述的方法，还包括诱导LFY的表达或活性。38．权利要求34所述的方法，其中所说的抑制成花是通过在植物内抑制FT的表达或活性而完成的。39．权利要求38所述的方法，其中所说的抑制成花是由FT反义或FT负显性核酸序列完成的。40．权利要求34所述的方法，其中所说的抑制成花是通过TFL1过度表达或活性提高而完成的。41．权利要求38所述的方法，还包含TFL1活性或表达量的提高。42．一种产生具有提早成花特征的遗传修饰植物的方法，包括将植物细胞与一种载体接触，以获得转化植物细胞，该载体含有一种核酸，该核酸含有编码FT多肽的至少一个结构基因，所说的基因与一种启动子有效连接；由上述转化的植物细胞产生植株；筛选表现为提早成花的植株。43．权利要求42所述的方法，其中所说的接触用的是物理方法。44．权利要求42所述的方法，其中所说的接触用的是化学方法。45．权利要求42所述的方法，其中的植物细胞选自下组原生质体、配子生成细胞和能再生出整个植株的细胞。46．权利要求42所述的方法，其中的启动子是组成型启动子。47．权利要求42所述的方法，其中的启动子是诱导型启动子。48．由权利要求42所述的方法产生出的植株。49．来自由权利要求42所述的方法产生出的植株获得的植物组织。50．一种在植物细胞中调节成花的方法，包括将所述植物细胞与权利要求25所述的载体相接触，以获得转化了的植物细胞；在形成植物的条件下生长转化了的植物细胞；在足以加速成花的条件和时间下诱导植物提前开花。51．一种遗传修饰植物，转入的基因破坏或干扰成花时间基因(FT)的表达，并整合进植物基因组染色体。52．培育具有延迟成花特征的遗传修饰植物的方法，该方法包括将植物细胞与含有一种核酸序列的载体相接触，以获得转化了的植物细胞，该核酸序列含有至少一个破坏或干扰FT多肽表达的结构基因，该基因与启动子有效连接；从所说的转化的植物细胞产生植株；筛选表现延迟成花的植株。53．培育具有延迟成花特征的遗传修饰植物的方法，该方法包括将植物细胞与含FT反义核酸序列的载体接触，以获得转化的植物细胞，该基因与一种启动子有效相连；由转化了的植物细胞产生植株；筛选表现延迟成花的植株。54．包含SEQIDNO:3核苷酸序列的反义核酸序列。55．一种分离的多肽，它具有SEQIDNO:2的氨基酸序列。56．用于鉴定影响FT活性或表达的化合物的方法，包括在组分能相互作用的条件下，温育包含该化合物和FT多肽或表达FT多肽的重组细胞的各组分；测定该化合物对FT的活性或表达的影响；57．权利要求56所述的方法，其中所说的影响是FT活性或表达的抑制。58．权利要求56所述的方法，其中所说的影响是FT活性或表达的刺激。全文摘要本发明提供了一种被称作“FT”的基团,表示开花基因座T,以及由FT编码的调节植物成花的多肽。FT可用于本发明的生产遗传修饰的植物的方法,该植物的特征为具有调节成花的表型性状,例如提早或延迟开花。这种植物可用编码功能性的FT肽的核酸;至少一个FT的反义核酸;编码野生型FT多肽的结构基因;或者编码负显性多肽的结构基因进行遗传修饰,以调节植物的成花。文档编号C12N15/29GK1302328SQ99806502公开日2001年7月4日申请日期1999年4月13日优先权日1998年4月15日发明者德特勒夫·魏格尔申请人:索尔克生物研究学会被以下专利引用(1),