一种唐松草属植物提取物的制备方法及其制备的唐松草属植物提取物和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于水果病害防治和保鲜领域，具体涉及一种具有抑制柑橘采后病原菌作 用的唐松草属植物提取物及其制备方法和新用途。
【背景技术】
[0002] 柑橘是世界第一大贸易水果，也是第三大贸易农产品。我国柑橘资源丰富、种植历 史悠久。目前我国柑橘的种植面积和产量均居世界第一位，2013年柑橘种植面积达3600多 万亩，总产量约为3200多万吨，柑橘产业在我国农业经济中占有非常重要的地位。
[0003] 柑橘果实组织细嫩多汁且富含糖分，在采摘、贮运和销售等过程中容易发生机械 损伤，果皮损伤后易受多种病原真菌的侵染而产生采后病害。柑橘采后发生的病理性病害 种类多达20余种，主要有意大利青霉（Penicillium italicum)引起的青霉病和指状青霉 (Penicillium digitatum)引起的绿霉病，这些病害易造成果实腐烂变质，腐烂率一般为 10 %?30 %，严重时可高达40 %?50 %以上，造成巨大的经济损失。柑橘其它的病理性病 害还包括黑腐病、酸腐病、褐腐病、褐色帝腐病、炭疽病和焦腐病等。
[0004] 长期以来，人们主要采用化学合成物质作为保鲜剂对柑橘进行保鲜，不同时期 使用的化学杀菌剂有所不同。硼砂、山梨酸及其盐类等是最早使用的柑橘防腐剂；包括 苯菌灵（Benomy 1)、托布津（Thiophanate)、甲基托布津（Thiophanate methyl)、多菌灵 (Carbendazim)、噻菌灵（Thiabendazole)等的苯并咪挫类杀菌剂是70年代应用的第二代 柑橘防腐剂；目前使用的第三代柑橘防腐剂包括抑霉唑（Imazalil)、双胍盐（Guazatine)、 咪鲜胺（Prochloraz)等。这些化学杀菌剂能杀死或抑制病原微生物的生长，有较好的防腐 保鲜效果。由于化学杀菌剂会造成药剂残留、污染环境，以及长期使用导致柑橘采后病菌产 生抗药性等原因使得化学杀菌剂的使用安全性日益得到人们的关注。另外，随着科技的发 展、检测分析手段的完善和化学杀菌剂毒理的深入研宄，发现一些化学防腐剂有致癌或潜 在致癌、致突变、致畸的可能性。目前一些化学杀菌剂已被欧美等发达国家禁止或限制使 用，如苯菌灵和双胍盐类杀菌剂等己被美国环保局明令禁止使用或在部分果实产品上限制 使用。
[0005] 近年来，人们开始转向天然植物源保鲜剂的研发。天然植物源保鲜剂具有高效、低 毒、低残留、无污染、使用安全等优点，采用其处理柑橘进行防腐保鲜将受到消费者的普遍 欢迎。另外，植物源药剂是通过多成分，多靶点发挥抑菌作用，不易产生抗药性。因此，有必 要从天然植物中寻找、开发天然植物源防腐剂对柑橘进行保鲜以减少对化学药剂的依赖。
[0006] 唐松草属为毛茛科下的一个属，为多年生草本植物，多分布在我国西南，作为观赏 或药用。我国本属植物约有29种可供药用，不少种类均有清热、治湿、发汗、止痢、治目赤 等作用。其中，水黄连是唐松草属植物箭头唐松草（Thalictrum simplex L.var.brevipes Hara)的根，以全草入药，性寒，味苦，可用于黄疸、腹水，小便不利等症；外用煎水洗眼可治 眼结膜炎。马尾连为唐松草属植物金丝马尾连（Thalictrum glandulosissimum)、多叶唐 松草（Thalictrum foliolosum DC.)、昭通唐松草（Thalictrum glandulosissimum var. chaotungense)及高原唐松草（Thalictrum cultratum Wall. T. deciternatum Boivin)等 的根及根茎，性寒，味苦。马尾连具有清热燥湿、泻火解毒的功效，主治湿热泄泻、痢疾黄疸、 感冒发热、麻瘆、痈肿疮疖、目赤肿痛等症。
[0007] 化学成分及药理活性研宄证明，生物碱为唐松草属植物的主要活性成分，包括唐 松西宁、唐松西明定、尖刺碱、箭头唐松草碱、高车前苷等生物碱类成分，具有抗病毒、抑制 肿瘤、免疫调节等作用。（李圣各，苏钰清，等；唐松草属植物中生物碱类化学成分和药理 作用的研宄进展，《现代药物与临床》，2014, 20(3) :312-321)。文献报道唐松草属植物还具 有治疗急性细菌性痢疾的作用（邓晓冬，杨昭；唐松草属植物治疗细菌性痢疾30例临床分 析，《中国现代医学杂志》，1996, 6(8) : 65 ;田华泳；唐松草属植物治疗急性菌痢300例疗效 观察，《湖南医学》，1986, 3 (1) : 20-21)。王海坤等人报道了马尾连对金黄色葡萄球菌、表皮 球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌等六种病原菌的抑菌作用（王海 坤，李淑仪；马尾连的抗菌作用，《中国民族民间医药杂志》，1999, 8(5) :289-290, 310)。发 明名称"马尾连提取物在制备抗肿瘤药物中的应用"（公开号CN101306094A)的中国发明专 利申请，公开了马尾连水或有机溶剂提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0008] 中国发明专利申请"一种从硬唐松草属植物中提取箭头唐松草碱的方法（公开号 CN102516257A) "，公开了采用超临界二氧化碳萃取从硬唐松草属植物中提取箭头唐松草碱 的方法。
[0009] 分析上述文献检索内容，发现唐松草属植物提取物的用途主要在抗肿瘤和抑制一 些人感染病原菌；对植物病原真菌的抑菌作用未见报道，尤其在抑制柑橘采后病原真菌方 面的系统研宄未见报道。基于上述研宄背景，发明人开展了唐松草属植物提取物的制备及 其制备物抑制柑橘采后青霉病菌、黑腐病菌和酸腐病菌的研宄。
【发明内容】
[0010] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种唐松草属植物提取物的制备方法 及其制备的唐松草属植物提取物新用途。本发明以天然的中草药植物为原料，制备的唐松 草属植物提取物对柑橘采后病原真菌的抑菌效果明显且无化学残留，对人体无健康危害， 对环境无污染，预示着很好的应用前景。
[0011] 为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
[0012] 一种唐松草属植物提取物的制备方法，采用超声波辅助提取，以乙醇为提取溶剂， 包括如下步骤：
[0013] 所述唐松草属植物中加入唐松草属植物重量10?40倍的质量百分比浓度为 40%?100%的乙醇，在提取温度为40?60°〇，提取时间为3011^11?1201^11，超声频率为 30?40KHz的条件下提取；过滤，回收乙醇，浓缩，即得。
[0014] 在本发明所述制备方法中，优选的，乙醇的重量为所述唐松草属植物重量的10? 30倍；更优选为20?30倍。
[0015] 优选的，乙醇的质量百分比浓度优选为40%?70% ;更优选为50%?60%。
[0016] 优选的，超声波辅助提取时间优选为60?120min，更优选为60?90min。
[0017] 优选的，超声波辅助提取的温度为45 °C。
[0018] 还优选的，乙醇提取前，所述唐松草属植物40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛 下粉末进行超声波辅助提取。
[0019] 作为一个优选的【具体实施方式】，本发明提供一种唐松草属植物提取物的制备方 法，包括如下步骤：
[0020] I.将唐松草属植物40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末；
[0021] II.步骤I得到的粉末中加入所述唐松草属植物重量20?30倍的质量百分比 浓度为40 %?70 %的乙醇进行超声波辅助提取，提取温度为40 °C?60 °C，提取时间为 60min?120min，超声频率为30?40KHz ;过滤，得到醇提取液；
[0022] III.步骤II得到的醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，即得。
[0023] 作为一个更优选的【具体实施方式】，本发明提供一种唐松草属植物提取物的制备方 法，包括如下步骤：
[0024] I.将唐松草属植物40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末；
[0025] II.步骤I得到的粉末中加入所述唐松草属植物重量20?30倍的质量百分比浓 度为50%?60 %的乙醇进行超声波辅助提取，提取温度为45°C，提取时间为60?90min， 超声频率为30?40KHz ;过滤，得到醇提取液；
[0026] III.步骤II得到的醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，即得。
[0027] 优选的，本发明所述唐松草属植物选自水黄连和/或马尾连。
[0028] 作为一个优选的实施方式，本发明提供一种水黄连提取物的制备方法，包括如下 步骤：
[0029] I.将水黄连40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末；
[0030] II.步骤I得到的粉末中加入所述水黄连重量20倍的质量百分比浓度为60%的 乙醇进行超声波辅助提取，提取温度为45°C，提取时间为60min，超声频率为30?40KHz ; 过滤，得到醇提取液；
[0031] III.步骤II得到的醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，即得。
[0032] 作为另一个优选的实施方法，本发明提供一种马尾连提取物的制备方法，具体包 括如下步骤：
[0033] I.将马尾连40?50°C烘干，粉碎后过40目筛，取筛下粉末；
[0034] II.步骤I得到的粉末中加入所述马尾连重量30倍的质量百分比浓度为50%的 乙醇进行超声波辅助提取，提取温度为45°C，提取时间为90min，超声频率为30?40KHz ; 过滤，得到醇提取液；
[0035] III.步骤II得到的醇提取液，减压回收乙醇至无醇味，即得。
[0036] 本发明的另一个目的，在于提供上述制备方法制备得到的唐松草属植物提取物； 特别是水黄连提取物和马尾连提取物。
[0037] 本发明还有一个目的，在于提供唐松草属植物或唐松草属植物提取物在制备用于 防治柑橘采后病原菌的药物组合物和/或柑橘采后保鲜剂中的用途；优选的，所述唐松草 属植物提取物通过本发明所述制备方法制备得到。
[0038] 所述柑橘采后病原菌选自意大利青霉（Penicillium italicum)，柑橘酸腐病菌 (Geotrichum candidum)和柑橘黑腐病菌（Alternaria citri)中的一种或几种。
[0039] 由此，本发明提供一种防治柑橘采后病原菌的药物组合物，包括本发明所述制备 方法制备得到的唐松草属植物提取物。
[0040] 另外，本发明还提供一种柑橘采后保鲜剂，包括本发明所述制备方法制备得到的 所述唐松草属植物提取物。
[0041] 本发明所述的药物组合物或柑橘采后保鲜剂，除所述唐松草属植物提取物外，还 可以包括可以接受的辅料，例如选自羧甲基纤维素、壳聚糖等成膜剂，选自甘油、鹿糖醋、吐 温等的助溶剂，选自柠檬酸、丙酸钙、山梨酸钾或苯甲酸钠等的防腐剂，以及适当的溶剂，如 水。
[0042] 超声波具有"空化效应"，"机械振动"以及"热效应"等特性，"空化效应"可瞬间产 生几千个大气压力，使提取介质的微小气泡压缩、爆裂、破碎提取原料的细胞壁，加