糖10g/L，琼脂15 g/L，氯化钙3 g/L,pH 6.0ο
[0021]所述黄芪提取物的制备方法如下:向黄芪粉中加入水，水的加入质量为黄芪粉质量的8倍，40°C下浸渍4小时，然后回流提取2小时，得滤渣和滤液；向滤渣中加入6倍于滤渣质量的水，回流提取2小时，过滤，然后合并两次得到的滤液，浓缩至密度为1.15g/ml，加入乙醇得到混合物，混合物中乙醇质量含量为75%，静置8小时，抽去上清液，将沉淀干燥，即为黄其提取物。
[0022]实施例3
一种复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，包括以下步骤:①按固液比5kg:1L向固体物料中加入水，在灭菌锅中121°C灭菌30分钟，冷却至33 °C，得固液混合物;其中，所述固体物料由下述重量份数的原料组成:杜仲叶粉10份、构树叶粉I份、黄芪提取物5份、麸皮I份、碳酸钙0.05份；
②粪肠球菌种子液的制备:将活化后的粪肠球菌接种于粪肠球菌液体培养基上，39°C培养24小时;枯草芽孢杆菌种子液的制备:将活化后的枯草芽孢杆菌接种于枯草芽孢杆菌液体培养基上，37 0C培养24小时;凝结芽孢杆菌种子液的制备:将活化后凝结芽孢杆菌接种于凝结芽孢杆菌液体培养基上，37 °C培养24小时；
③将步骤②制备的粪肠球菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液和凝结芽孢杆菌种子液按体积比10:1:10混合，得混合种子液，将混合种子液接种(混合种子液的接种重量为步骤①中固液混合物重量的10%)于步骤①灭菌后得到的固液混合物，温度40°C下发酵60小时，流化床上44 °C下干燥至含水量65%，即得到饲料添加剂。
[0023]所述粪肠球菌液体培养基的配方为:蛋白胨50g/L，葡萄糖30 g/L，食盐10 g/L,猪肝粉7 g/L,pH 6.5;枯草芽孢杆菌液体培养基的配方为:酵母浸粉4 g/L，葡萄糖10g/L，硫酸镁3 g/L,pH 6.0;凝结芽孢杆菌液体培养基的配方为:酵母浸粉48/1，胰蛋白胨58/1，葡萄糖20g/L，氯化I丐4 g/L,pH 6.0。
[0024]所述步骤②中粪肠球菌活化是斜面培养基上于38°C下培养24小时进行活化，粪肠球菌活化所用斜面培养基的配方为:蛋白胨50 g/L，葡萄糖30 g/L，食盐10 g/L，猪肝粉7g/L，琼脂18 g/L，pH 6.5;枯草芽孢杆菌活化是斜面培养基上于35°C下培养24小时进行活化，枯草芽孢杆菌活化所用斜面培养基的配方为:酵母浸粉4g/L，葡萄糖10g/L，硫酸镁3g/L，琼脂18 g/L,pH 6.0;凝结芽孢杆菌活化是斜面培养基上于35°C下培养24小时进行活化，凝结芽孢杆菌液体培养基的配方为:酵母浸粉4g/L，胰蛋白胨5g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，氯化I丐4 g/L，pH 6.0ο
[0025]所述黄芪提取物的制备方法如下:向黄芪粉中加入水，水的加入质量为黄芪粉质量的8倍，50°C下浸渍4小时，然后回流提取2小时，得滤渣和滤液；向滤渣中加入6倍于滤渣质量的水，回流提取2小时，过滤，然后合并两次得到的滤液，浓缩至密度为1.25g/ml，加入乙醇得到混合物，混合物中乙醇质量含量为75%，静置8小时，抽去上清液，将沉淀干燥，即为黄其提取物。
[0026]应用试验I 2013年12月I日——2014年I月15日在三门峡灵宝市某养猪场，选取预产期前30天的长白猪共4头，编号为1、2、3、4号，分成两组，I号、2号为试验组，3号、4号为对照组。
[0027]试验组:S卩I号、2号妊娠母猪在预产期前30天，S卩12月I日按质量百分比1%添加实施例3所得饲料添加剂于混合饲料中，饲喂母猪，直到产仔时停用。
[0028]对照组:S卩3号、4号妊娠母猪也从12月I日照常饲喂相同的混合饲料，不添加任何药品和添加剂。
[0029]试验、对照两组均在一定的环境条件下，由一个专门饲养员进行饲养管理，饲喂次数、方法、饮水要求基本一致，要求饲养人员做好记录。试验组和对照组均观察一个半月，记录产仔数、发病情况。
[0030]试验组于2014年I月2日I号猪产仔13头，2号猪产仔12头，共25头;对照组2014年于I月2日3号猪产仔9头，2号猪产仔8头，共17头。产后半月内，试验组仔猪全部正常生长，对照组发病5头。
[0031]经多次试验，预产期前30天使用饲料添加剂，可明显提高产仔率20-30%，且仔猪均能健康生长。
[0032]应用试验2
2014年6月I日——2014年9月30日在三门峡灵宝市养鸡场，选取I月龄土鸡400只，随机分成两组，试验组、对照组各200只。
[0033]试验组:6月I日按质量百分比为3%添加实施例1所得饲料添加剂于混合饲料中饲喂，直到出栏。
[0034]对照组:也从6月I日照常饲喂相同的混合饲料，不添加任何药品和添加剂。
[0035]试验、对照两组均在一定的环境条件下，由一个专门饲养员进行饲养管理，饲喂次数、方法、饮水要求基本一致，要求饲养人员做好记录，并于出栏后屠宰并检验鸡肉。
[0036]试验组在试验期间，发病率明显少于对照组；试验组鸡皮中羟脯氨酸含量达26.27%，高对照组50.29%。屠宰时鸡的韧性增强，大腿部位肌纤维发达，明显变粗，肌细胞间隙变窄;鸡肉中胆固醇和脂肪含量均有不同程度下降。
[0037]应用试验3
2015年5月I日——2015年8月30日在三门峡灵宝市养鸡场，选取产蛋鸡400只，随机分成两组，试验组、对照组各为200只。
[0038]试验组:5月I日按质量百分比1%添加实施例2所得饲料添加剂于混合饲料中饲喂，直到出栏。
[0039]对照组:也从5月I日照常饲喂相同的混合饲料，不添加任何药品和添加剂。
[0040]试验、对照两组均在一定的环境条件下，由一个专门饲养员进行饲养管理，饲喂次数、方法、饮水要求基本一致，要求饲养人员做好记录，定期统计产蛋率，定期检验鸡蛋质量。
[0041 ] 试验组喂养30天后鸡蛋胆固醇降低6.05%?10.45%，喂养60天后降低6.92%?14.29%，喂养90天后降低11.60%-17.65%，鸡喂养4个月后鸡蛋内胆固醇含量降低14.97%?20.69%;产蛋率与对照组相比略有提高，但提高幅度不大;试验组与对照组单枚鸡蛋重量的差异不明显。
【主权项】
1.一种复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，其特征在于，包括以下步骤: ①按固液比2.5kg: IL?5kg: IL向固体物料中加入水，灭菌，冷却至33?38°C，得固液混合物;其中，所述固体物料由下述重量份数的原料组成:杜仲叶粉1-10份、构树叶粉1-10份、黄芪提取物1-5份、麸皮1-3份、碳酸钙0.05-0.3份； ②粪肠球菌种子液的制备:将活化后的粪肠球菌接种于粪肠球菌液体培养基上，37?39°C培养24小时;枯草芽孢杆菌种子液的制备:将活化后的枯草芽孢杆菌接种于枯草芽孢杆菌液体培养基上，33?37 °C培养24小时;凝结芽孢杆菌种子液的制备:将活化后凝结芽孢杆菌接种于凝结芽孢杆菌液体培养基上，33?37 °C培养24小时； ③将步骤②制备的粪肠球菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液和凝结芽孢杆菌种子液按体积比(1-10):(1-10):(1-10)混合，得混合种子液，将混合种子液接种于步骤①得到的固液混合物，温度35-40°C下发酵48-72小时，干燥，即得到饲料添加剂。2.如权利要求1所述复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，其特征在于，所述粪肠球菌液体培养基的配方为:蛋白胨30?50 g/L，葡萄糖30?40 g/L，食盐5?10 g/L，肝粉5?7g/L，pH 6.5;枯草芽孢杆菌液体培养基的配方为:酵母浸粉3-5g/L，葡萄糖10-20g/L，硫酸镁3-5g/L,pH 6.0；凝结芽孢杆菌液体培养基的配方为:酵母浸粉3-5g/L，胰蛋白胨2_5g/L，葡萄糖 10_20g/L，氯化I丐3-5 g/L，pH 6.0。3.如权利要求1所述复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，其特征在于，所述步骤①中灭菌是在灭菌锅中121°C灭菌30分钟。4.如权利要求1所述复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，其特征在于，所述黄芪提取物的制备方法如下:向黄芪粉中加入水，水的加入质量为黄芪粉质量的8倍，40-50°C下浸渍4小时，然后回流提取2小时，得滤渣和滤液；向滤渣中加入6倍于滤渣质量的水，回流提取2小时，过滤，然后合并两次得到的滤液，浓缩至密度为1.15-1.25g/ml，加入乙醇得到混合物，混合物中乙醇质量含量为75%，静置8小时，抽去上清液，将沉淀干燥，即为黄其提取物。5.如权利要求1所述复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，其特征在于，所述步骤③中混合种子液的接种量为步骤①中固液混合物重量的10?20%。6.如权利要求1所述复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，其特征在于，所述步骤②中粪肠球菌活化是斜面培养基上于38°C下培养24小时进行活化，粪肠球菌活化所用斜面培养基的配方为:蛋白胨30?50 g/L，葡萄糖30?40 g/L，食盐5?10 g/L，肝粉5?7 g/L，琼脂15-20 g/L,pH 6.5;枯草芽孢杆菌活化是斜面培养基上于35°C下培养24小时进行活化，枯草芽孢杆菌活化所用斜面培养基的配方为:酵母浸粉3-5g/L，葡萄糖10-20g/L，硫酸镁3-5g/L，琼脂15-20 g/L,pH 6.0;;凝结芽孢杆菌活化是斜面培养基上于35°C下培养24小时进行活化，凝结芽孢杆菌液体培养基的配方为:酵母浸粉3-5g/L，胰蛋白胨2-5g/L，葡萄糖10-20g/L，琼脂 15-20 g/L，氯化钙3-5 g/L,pH 6.0。7.根据权利要求1-6任一所述方法制备的饲料添加剂。
【专利摘要】本发明属于一种复合微生物发酵制备饲料添加剂的方法，包括以下步骤：①按固液比2.5kg︰1L~5kg︰1L向固体物料中加入水，得固液混合物，灭菌，冷却至33~38℃；②将活化后的粪肠球菌接种于粪肠球菌液体培养基上培养；枯草芽孢杆菌种子液的制备：将活化后的枯草芽孢杆菌接种于枯草芽孢杆菌液体培养基上培养；凝结芽孢杆菌种子液的制备：将活化后凝结芽孢杆菌接种于凝结芽孢杆菌液体培养基上培养；③将步骤②制备的粪肠球菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液和凝结芽孢杆菌种子液混合，得混合种子液，将混合种子液接种于步骤①灭菌后得到的固液混合物，发酵，干燥，即得到饲料添加剂。
【IPC分类】A23K10/12, A23K20/24, A23K40/00, A23K10/18, A23K10/37, A23K20/00, A23K10/30
【公开号】CN105595012
【申请号】CN201610100497
【发明人】张少少, 赵占武, 赵一品, 赵晓棠
【申请人】三门峡为宝生物科技有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年2月24日