专利名称：一种冻干人血浆病毒灭活方法
技术领域：
本发明涉及医用材料消毒方法，特别是一种冻干人血浆病毒灭活方法。
背景技术：
长期以来成分输血在救死扶伤中成为医学上的重要手段。然而自二十世纪六十年代以后，肝炎病毒通过输血引起肝炎传染的严重事件，人们对血浆的病毒安全性有了新的关注。八十年代中期，艾滋病的出现以及艾滋病毒通过注射血液制品导致传染的事件，引起了世界各国的高度重视。欧美各国临床上要求使用经病毒灭活的全血浆。我国政府1995年禁止使用未经病毒灭活的冻干人全血浆，生产冻干人血浆的厂家均已停止生产。但现在国内各地的中心血站提供的新鲜冰冻血浆仍未使用病毒灭活的技术措施，因此，我国现行使用新鲜冰冻血浆应认为是一种高危险度的血液制品。全血浆的病毒灭活技术成为我国输血界急迫需要解决的一项课题。
目前，国外在制备病毒灭活血浆或血液制品时，已经使用S/D、低PH孵放和巴氏灭活法等，其中S/D病毒灭活技术得到了美国卫生部门的认可，其使用有十五年的历史，其病毒灭活效果是肯定的。S/D灭活病毒的方法是，在血浆中加入1％的TNBP(磷酸三丁酯)和1％的Tritonx-100(曲拉通一100)，加热至30±1℃，搅拌4小时，即可灭活病毒。尽管S/D、低PH孵放和巴氏灭活法能使原有的血液制品病毒传播的可能性大为降低，由于上述灭活病毒方法对病毒灭活机制的差异性而不能保证受者在大量、多次输注这些制品而不受其感染。已知S/D法仅能灭活脂包膜病毒，而对细小病毒不能灭活，而目前国外的病毒灭活血浆仅采用一步法进行病毒灭活，因此，这种一步法制备的病毒灭活血浆仍存在有病毒感染的危险性，同时，S/D灭活病毒血浆为冰冻剂型，其储存和运输要求-30℃的条件，为储存和运输造成较大困难。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，采用双病毒灭活方法使血浆中的病毒灭活更彻底，并且便于储存和运输。本发明的技术方案是这样的，本方法包含有以下步骤，(1)将冰冻血浆置于融浆罐中，融浆水温≤30℃，使浆液温度升至20-25℃，(2)上述的融浆置于灭活病毒罐中，将重量比1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血浆中并搅拌均匀和升温，当血浆升温至30±1℃时，保持4小时，其间搅拌不停止，(3)将灭活病毒的血浆从灭活病毒罐中移入杯式离心机中，并加入体积比5％的植物油，进行离心分离20分钟，弃油相保留水相血浆备用，(4)将分离后的水相血浆经含有C18树脂层析柱流出，制得不含磷酸三丁酯和曲拉通-100的血浆，(5)将上述血浆经超滤膜进行浓缩，(6)将浓缩的血浆经孔径为0.2微米的滤膜过滤除菌后进行分装，其特征在于还有以下步骤，(7)将分装的血浆瓶在0-4℃环境中预冻，并于-40℃以下旋冻，然后置于冷冻干燥机内冷冻至-40℃以下，并进行抽真空，真空度为10pa以下，升华40～45小时，然后缓慢升温至小于35℃，整个过程为100～120小时，瓶内血浆呈粉末状，对瓶口进行真空密封，(8)将冷冻干燥后的瓶装血浆置于沸水中浴加温30分钟，沸水温度为98-100℃。本发明由于在现有的S/D病毒灭活工艺制取的血浆进一步实施干热灭活技术，和冷冻干燥技术，血浆的剂型为粉末状，因此，本发明所制取的血浆具有输注更安全，且存储温度为2-8℃，三年，便于存储和运输。
具体实施例方式取AB型或者同种凝集素含量较低的A型或者B型的血浆20l置于(1)融浆罐中进行融浆，融浆水温20-30℃，不停地进行搅拌，当浆液温度升至23℃为止；(2)将上述融浆置于灭活病毒罐中，在罐外先配2LS/D浓液，即取磷酸三丁酯224.4Ml(11％，W/V)和曲拉通-100为220克(11％，W/V)加入注射用水至2L搅匀后以500ml/分钟的速度加入到灭活病毒罐内的血浆中，此时血浆的体积为22L，搅拌并升温至30±1℃后，继续搅拌4小时，实现灭活病毒；(3)将灭活病毒的血浆置于杯式离心机，取1.1L蓖麻油加入到血浆中搅拌30分钟进行萃取后，开动离心机，其转速为2500转/分，保持温度20±1℃，分离20分钟，用泵抽出上层油层废弃物约1.3L，大部分的灭活剂磷酸三丁酯和曲拉通-100从血浆中取出，得水相血浆约21.6L；(4)将上述的水相血浆注入树脂C18层析柱流出进行层析分离，将血浆中的残余灭活剂吸附在C18树脂中。要求每次经过C18树脂的血浆量为6倍的树脂量，流速为60cm/小时，得层析柱流出液约25L，由于注射用水进行冲洗树脂柱，所以流出液量会增加；(5)将上述的层析柱流出液在分子量为10K的超滤膜中进行浓缩，得浓缩液约18-19L，其浓度约为5-5.5％；(6)浓缩液经孔径为0.2微米的滤膜过滤进行除菌后用玻璃瓶分装，分装瓶规格可以有100毫升、50毫升和25毫升/瓶，瓶塞半压在瓶口中；(7)对分装瓶中的血浆进行冷冻干燥，首先对分装瓶进行4℃的预冻，然后将分装瓶放在冻干机内，冻干机温度为-40℃以下，同时抽真空，真空度为10pa以下进行升华40-45小时后，逐渐地缓缓升温到≤35℃，全部过程为100-120小时，得粉末血浆，血浆中的水份小于1％，对分装瓶进行真空密封；(8)对密封的瓶内粉末血浆进行干热灭活病毒处理，将分装瓶置于沸水浴中加热30分钟，沸水温度为98-100℃，得到二次灭活病毒的冻干血浆成品。
冻干血浆的适应症与使用方法，本品主要用于防止手术、烧伤、失血、创伤性休克及治疗低蛋白血症，凝血因子水平低下者。使用本品时应先用30-37℃的0.1％枸橼酸溶液溶解，并以带有滤网的输血器进行静脉输注，输注剂量一般为12-15毫升/公斤体重。
本发明制品于2002年1月已经中国药品生物制品检定所检测，各项指标均符合要求。
权利要求
1.一种冻干人血浆病毒灭活方法，本方法包含有以下步骤，(1)将冰冻血浆置于融浆罐中，融浆水温≤30℃，使浆液温度升至20-25℃，(2)上述的融浆置于灭活病毒罐中，将重量比1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血浆中并搅拌均匀和升温，当血浆升温至30±1℃时，保持4小时，其间搅拌不停止，(3)将灭活病毒的血浆从灭活病毒罐中移入杯式离心机中，并加入体积比5％的植物油，进行离心分离20分钟，弃油相保留水相血浆备用，(4)将分离后的水相血浆经含有C18树脂层析柱流出，制得不含磷酸三丁酯和曲拉通-100的血浆，(5)将上述血浆经超滤膜进行浓缩，(6)将浓缩的血浆经孔径为0.2微米的膜过滤除菌后进行分装，其特征在于还有以下步骤，(7)将分装的血浆瓶在0-4℃冷浴中预冻，并于-40℃下旋冻，然后置于冷冻干燥机内冷冻至-40℃以下，并进行抽真空，真空度为10pa以下，升华40～45小时，然后缓慢升温至小于35℃，整个过程为100～120小时，瓶内血浆呈粉末状，对瓶口进行真空密封，(8)将冷冻干燥后的瓶装血浆置于沸水浴中加温30分钟。
2.根据权利要求1所述的一种冻干人血浆病毒灭活方法，其特征在于步骤(8)所述的沸水温度为98-100℃。
全文摘要
一种冻干人血浆病毒灭活方法,它包含有以下步骤,冰冻血浆→融浆→S/D灭活病毒→植物萃取灭活剂→C18层析柱吸附灭活剂→超滤浓缩→滤膜除菌分装,其特征在于:将分装的血浆置于冻干机内进行真空低温升华干燥密封→在沸水浴中进行干热灭活制得粉状成品血浆。本发明的血浆制品病毒灭活更彻底,使用更安全,且具有保存和运输更方便的优点。
文档编号A61L2/16GK1376520SQ02103960
公开日2002年10月30日 申请日期2002年2月28日 优先权日2002年2月28日
发明者安康, 马小伟, 潘若文, 刘文芳, 范蓓 申请人:华兰生物工程股份有限公司