专利名称：伐昔洛韦的合成与纯化的制作方法
技术领域：
本发明涉及被保护的伐昔洛韦—N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯及其制备方法。本发明也涉及抗病毒化合物盐酸伐昔洛韦的一种新的合成和纯化方法。本发明还涉及纯形式的伐昔洛韦、纯伐昔洛韦的制备方法以及包含纯伐昔洛韦的组合物。
背景技术：
伐昔洛韦是阿昔洛韦的L-缬氨酸酯前药。阿昔洛韦—2-氨基-1，9-二氢-9-[(2-羟乙氧基)甲基]-6H-嘌呤-6-酮，是一种衍生自鸟嘌呤的合成嘌呤核苷类似物；具有下面图I所示的化学结构式 CAS登记号59277-89-3图I
已发现阿昔洛韦具有高抗病毒活性，并且广泛用于治疗和预防人类病毒感染，特别是由疱疹病毒组引起的感染。参见Goodman和Gilman的《治疗学的药理学基础》(The Pharmacological Basis ofTherapeutics)，1193-1198(第9版，1996)。阿昔洛韦像其钠盐一样，是市售的，商标为Zovirax_。美国专利第4,199,574号公开了用阿昔洛韦治疗病毒感染。
伐昔洛韦—L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯,具有下面图II所示的化学结构式 CAS登记号124832-26-4图II美国食品与药物管理局已批准伐昔洛韦用于治疗带状疱疹和生殖疱疹。盐酸伐昔洛韦是市售的，商标为Valtrex_。
对于口服给药，给予伐昔洛韦而非阿昔洛韦则是更有利的；因为不但在动物中而且在人中，由胃肠道吸收的阿昔洛韦很少。比较起来，伐昔洛韦在口服后，迅速被胃肠道吸收。此外，在口服给药后，伐昔洛韦在健康成人体内被迅速转化为阿昔洛韦。有人认为伐昔洛韦的转化起因于第一关卡肠和肝脏由于酶促水解而代谢。
美国专利第4,957,924号公开了嘌呤核苷类似物阿昔洛韦的氨基酸酯、其药学上可接受的盐以及这类化合物的制备方法。也公开了药用制剂和应用所公开的化合物治疗疱疹病毒感染。伐昔洛韦及其盐(包括盐酸盐)，全都属于所公开的化合物之列。
特别是，所述‘924号专利公开了通过缩合被保护的缬氨酸而制备伐昔洛韦的方法；在该方法中，向阿昔洛韦的二甲基甲酰胺溶液中加入CBZ-缬氨酸、催化量的4-二甲氨基吡啶和偶联试剂二环己基碳二亚胺。CBZ基团通过催化氢化而除去，该反应需要使用氢气和专门的设备(例如高压釜)。该方法也需要除去所得到的、由二环己基碳二亚胺偶联剂产生的尿素副产物。由于与所述‘924号专利方法有关的问题，因而显然需要有使用较少的艰难脱保护步骤且较容易除去副产物的、制备伐昔洛韦的方法。
发明概述本发明涉及被保护的伐昔洛韦(N-t-BOC-伐昔洛韦)及其制备方法。本发明还涉及一种包括偶联步骤和脱保护(去封闭)步骤的制备伐昔洛韦或其药学上可接受盐的方法。本发明还涉及纯形式的伐昔洛韦(纯伐昔洛韦)、纯伐昔洛韦的制备方法以及包含纯伐昔洛韦的组合物。
一方面，本发明涉及N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯(N-t-BOC-伐昔洛韦)。
另一方面，本发明涉及一种制备N-t-BOC-伐昔洛韦的方法，包括使N-叔丁氧羰基缬氨酸与阿昔洛韦在偶联剂存在下发生偶联的步骤。在一个具体的方面，该偶联剂是碳二亚胺例如二环己基碳二亚胺，或是水溶性碳二亚胺例如N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺。
另一方面，本发明涉及一种制备N-t-BOC-伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，然后使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成伐昔洛韦或其药学上可接受的盐。氨基受保护的缬氨酸的实例包括N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸。在一个具体的方面，用偶联剂即碳二亚胺例如二环己基碳二亚胺或N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺，来实现偶联。
另一方面，本发明涉及一种制备盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，其中用选自二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺的碳二亚胺，来实现偶联，然后用盐酸使被保护的伐昔洛韦脱保护。
另一方面，本发明涉及一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使盐酸伐昔洛韦在低级烷基醇中形成浆液，将所得浆液回流，然后从所得浆液中分离出纯伐昔洛韦。合适低级烷基醇的实例包括C1-6烷基醇。乙醇是优选的低级烷基醇。
另一方面，本发明涉及一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使盐酸伐昔洛韦在乙醇中形成浆液，将所得浆液回流，然后从所得浆液中分离出纯伐昔洛韦。
另一方面，本发明涉及一种制备纯盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的、氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，其中用一种选自二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺的碳二亚胺来实现偶联；用盐酸使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成盐酸伐昔洛韦；使盐酸伐昔洛韦在乙醇中形成浆液；将所得浆液回流；然后从所得浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。
另一方面，本发明涉及一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤形成盐酸伐昔洛韦水溶液，任选将该溶液过滤，将该溶液与异丙醇混合，形成浆液，然后从所得浆液中分离出纯形式的盐酸伐昔洛韦。
另一方面，本发明涉及一种制备纯盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的、氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，其中用一种选自二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺的碳二亚胺来实现偶联；用盐酸使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成盐酸伐昔洛韦；形成盐酸伐昔洛韦水溶液；任选将该溶液过滤；将该溶液与异丙醇混合，形成浆液，然后从所得浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。
再一方面，本发明涉及纯形式的盐酸伐昔洛韦。在一个具体的方面，本发明涉及盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量经HPLC测定约为0.1％至约0.7％(但不超过约0.7％)。在另一个具体的方面，本发明涉及盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量低于约0.3％。在另一个具体的方面，本发明涉及盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量低于约0.1％。在另一个具体的方面，本发明涉及盐酸伐昔洛韦中的任一杂质含量低于约0.2％。在另一个具体的方面，本发明涉及盐酸伐昔洛韦的任一杂质含量低于约0.1％。
发明详述本文与数量测定值联用的术语“约”表示预期将会由技术人员测定或确定的数量测定值方面的偏差，所述技术人员即进行测量或测定且运用与测量结果和所用测量仪器之精度相称的注意标准的技术人员。
除非本文中另有说明，本文所用的短语“盐酸伐昔洛韦”包括其无水形式、水合物和溶剂合物。
当用于描述纯度时或当与杂质含量有关时，百分率(％)是指用下面描述的高压液相色谱(HPLC)—也称为高效液相色谱测定的色谱图面积百分率，并且按以下等式计算杂质i百分率＝100×(杂质i峰面积)/(所有峰面积之和)。
用一根5μm、150×4.6mm的Inertsil ODS-3V柱(例如GLSciences第5020-01731号)，在25℃下，使用乙腈/水(含有0.4％F3CCOOH，用三乙胺调至pH 3.0)梯度洗脱液(3％CH3CN/97％水-60％CH3CN/40％水，30分钟内)，流速为1ml/分钟，经HPLC测定纯度。使用一台254nm的紫外检测器。
通过制备含有约22mg溶于稀释剂的样品、溶液总体积25.0ml的母液，来制备供HPLC分析用的样品，所述稀释剂由3倍体积乙腈和97倍体积的60％CH3CN/40％水(即上述终洗脱液)组成。用该稀释剂把母液的5ml等分试样稀释到总体积10.0ml。所得溶液通过0.45μm薄膜滤器过滤。标称注射体积为20μl。在这些条件下，阿昔洛韦的保留时间约4.95分钟；伐昔洛韦的保留时间约8.20分钟；第一种杂质的保留时间约3.15分钟；第二种杂质的保留时间约9.10分钟；而第三种杂质的保留时间约12.05分钟。
在一个实施方案中，本发明提供N-t-BOC-伐昔洛韦。正如下面所讨论的，可以通过使N-叔丁氧羰基缬氨酸与阿昔洛韦在碳二亚胺存在下发生偶联，来制备这种被保护的伐昔洛韦。
在另一个实施方案中，本发明提供一种制备被保护的N-t-BOC-伐昔洛韦的方法，所述方法包括使N-叔丁氧基羰基缬氨酸和阿昔洛韦在碳二亚胺存在下发生偶联的步骤。
在本发明的偶联步骤中，用N-叔丁氧羰基保护的缬氨酸使阿昔洛韦的羟基(I)酯化，形成被保护的N-t-BOC-伐昔洛韦。可以采用本领域已知的技术，在溶液中，优选在偶极非质子溶剂中，最优选在二甲基甲酰胺中，使用碱催化剂、偶联剂和任选脂族胺例如三乙胺，进行该偶联步骤。优选的催化剂是4-(二甲氨基)吡啶。
虽然不限于任何具体的操作理论，但是据信偶联剂形成一种倾向于与醇的羟基在原位反应形成酯的活性基团。碳二亚胺结构上的特点在于-N＝C＝N-的部分，且碳二亚胺是可用于实施本发明的偶联剂的一个实例。优选的偶联剂包括二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺，它们两者均为市售的。
本发明的被保护的N-t-BOC-伐昔洛韦不同于伐昔洛韦，因为该缬氨酸部分的氨基具有一个N-t-BOC封闭取代基。可以在本发明的脱保护步骤中通过除去保护基，而使被保护的伐昔洛韦转化为伐昔洛韦或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，本发明提供一种制备伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，然后使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成伐昔洛韦或其药学上可接受盐。最好用碳二亚胺偶联剂例如二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺，来完成所述偶联步骤。
如上所讨论的，氨基受保护的缬氨酸是N-取代的2-氨基-3-甲基丁酸；在该化合物中，所述取代基封闭氨基，从而使该氨基不参与或不干扰或不竞争本发明的偶联反应，但在偶联反应后，能从该氨基上除去所述取代基。优选的氨基受保护的缬氨酸包括N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸。N-叔丁氧羰基缬氨酸是一种特别优选的氨基受保护的缬氨酸。
当把N-叔丁氧羰基缬氨酸或者N-甲酰基缬氨酸用作氨基受保护的缬氨酸时，可以在温和条件下，用例如约1-10倍过量(基于待脱保护的被保护的伐昔洛韦的摩尔量)的无机酸，进行该脱保护步骤。一种优选的无机酸是盐酸水溶液。如果用盐酸水溶液进行该脱保护步骤，则所述脱保护步骤的产物是盐酸伐昔洛韦—伐昔洛韦的一种药学上可接受的盐。也可以在溶液中或最好在含水悬浮液中，在加有或不加有机溶剂例如丙酮、乙酸、乙醇、异丙醇、甲酸或其混合物的情况下，用被保护的伐昔洛韦来进行所述脱保护步骤。
如果在悬浮液中用盐酸水溶液进行脱保护，则向伐昔洛韦的含水悬浮液中滴加盐酸水溶液(2-10N)，每克被保护的伐昔洛韦一般加2ml的所述盐酸。通过将该溶液与异丙醇混合(一般约4-8体积/溶液体积)，则可以从最终形成的溶液中沉淀出盐酸伐昔洛韦。可以用有机合成化学领域技术人员已知的任何技术，例如通过过滤(重力或吸力)或离心，回收沉淀产物。优选真空干燥所回收的产物。
优选在温度为约-10℃至约50℃，更优选约-10℃至约25℃，最优选约20℃至约25℃，进行所述脱保护步骤。
在另一个实施方案中，本发明提供一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法。可以将如上制备的或用任何其它方法制备的盐酸伐昔洛韦通过进行本发明的悬浮液法而纯化成纯盐酸伐昔洛韦。本发明的悬浮液法包括下述步骤使盐酸伐昔洛韦在低级烷基醇中形成浆液，将所得浆液回流，并且在回流后，从浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。合适低级烷基醇的实例包括C1-6烷基醇。乙醇是一种优选的低级烷基醇。
为了形成浆液，使盐酸伐昔洛韦与低级烷基醇例如乙醇(每克固体约25-100ml)在一个合适的容器中混合。合适的容器将为搅拌浆液创造条件，且将为在回流步骤中使低级烷基醇冷凝和回收创造条件。配备有搅拌器和冷凝器的烧瓶和罐式反应器是已知的合适容器。技术人员将按照该容器的大小和设计来挑选搅拌设备(例如磁力搅拌器、悬吊的搅棒、螺旋桨或汽轮搅拌机)和冷凝装置。
在一个优选的实施方案中，将所得浆液在约20℃至约30℃的温度下搅拌约15分钟至约2小时。然后将所得浆液加热至回流。技术人员将会调节回流步骤的时间，尤其是按照盐酸伐昔洛韦的起始纯度、所希望的最终产物的纯度水平以及所用设备的性能来调节回流步骤的时间。如果需要，通过从该容器中取出一份所述混合物的等分试样、将其冷却至约25℃或25℃以下并按照上述HPLC方法分析所得固体，可以检查纯度。常用的回流时间是约15分钟至约2小时。如果用本发明的偶联和脱保护法来制备盐酸伐昔洛韦，回流时间约1小时则通常是足够的。
在回流之后，把容器里面的内容物冷却至约25℃或更低，并搅拌约15分钟至约1小时。用技术人员已知的任何方法，从所得浆液中回收固体。然后最好在约30℃至约80℃的温度下，优选在约40℃，真空干燥所回收的固体，从而得到纯形式的盐酸伐昔洛韦。
在另一个实施方案中，本发明提供纯形式的盐酸伐昔洛韦。用本发明的悬浮液法获得的纯形式的盐酸伐昔洛韦除含有阿昔洛韦以外，还可能含有第一种杂质、第二种杂质和第三种杂质。可用上述HPLC法来测定阿昔洛韦和第一种杂质、第二种杂质和第三种杂质的含量。技术人员将会知道，第一种杂质、第二种杂质和第三种杂质可包含不止一种具有近似之保留时间的化学物质；所述保留时间即上述HPLC法中叙述的保留时间。纯形式的盐酸伐昔洛韦中的第一种杂质、第二种杂质和第三种杂质含量各约0.1％至至多约0.5％；在一个优选实施方案中，第一种杂质、第二种杂质和第三种杂质的含量各约0.1％至0.3％。
最优选的是，盐酸伐昔洛韦中的第一种杂质、第二种杂质和第三种杂质含量各不超过约0.1％。纯盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量将不超过约0.7％，优选纯盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量约0.1％至约0.3％但不超过0.5％，最优选纯盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量不超过约0.1％。纯盐酸伐昔洛韦中的任一杂质含量不超过约0.2％，最好是任一杂质含量不超过约0.1％。
可将所获得的纯盐酸伐昔洛韦粉末磨成更细的粉末。可把这粉末用于药品中，或可例如通过制粒而产生较大的颗粒而改变物理性能。纯盐酸伐昔洛韦可用于治疗带状疱疹和生殖疱疹患者。可把纯盐酸伐昔洛韦配制到各种各样的组合物中，供给予有需要的患者使用。
可以将如上制备的或用任何其它方法制备的盐酸伐昔洛韦通过进行本发明的溶液法而纯化成纯盐酸伐昔洛韦。本发明的溶液法包括下述步骤形成盐酸伐昔洛韦水溶液，任选将所得溶液过滤，将该溶液与异丙醇混合，形成浆液，然后从所得浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。
为了形成所述溶液，使盐酸伐昔洛韦与水在合适的容器中混合。在一个优选的实施方案中，将该溶液在约20℃至约50℃的温度下搅拌约15分钟至约4小时。在过滤该溶液后，于约0℃至约10℃的温度下加入异丙醇，并在约20℃搅拌足以形成浆液的保留时间。保留时间最高约12小时是足够的。可用技术人员已知的、如上讨论的任一方法，从所得浆液中回收固体并将其干燥。
本发明的药用组合物包含纯盐酸伐昔洛韦。除了该有效成分外，本发明的药用组合物还可包含一种或多种赋形剂。将赋形剂加入到所述组合物中，用于各种各样的目的。
稀释剂可增加固体药用组合物的体积，且可成为含有所述组合物的、患者和护理员较易操作的药物剂型的组成成分。固体组合物用稀释剂包括例如微晶纤维素(例如Avicel_)、微细纤维素、乳糖、淀粉、预胶化淀粉、碳酸钙、硫酸钙、糖、葡萄糖结合剂、糊精、葡萄糖、磷酸氢钙二水合物、磷酸钙、白陶土、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖糊精合剂、甘露醇、聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit_)、氯化钾、粉状纤维素、氯化钠、山梨醇和滑石粉。
被压缩到像片剂那样剂型中的固体药用组合物可以包括赋形剂，所述赋形剂的作用包括在压缩后有助于使有效成分和其它赋形剂结合在一起。固体药用组合物用粘合剂包括阿拉伯胶、藻酸、卡波姆(例如卡波普)、羧甲基纤维素钠、糊精、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、氢化植物油、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(例如Klucel_)、羟丙基甲基纤维素(例如Methocel_)、液体葡萄糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精合剂、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon_、Plasdone_)、预胶化淀粉、藻酸钠和淀粉。
通过向所述组合物中加入崩解剂，可增加压缩固体药用组合物在患者胃中的溶出率。崩解剂包括藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠(例如Ac-Di-Sol_、Primellose_)、胶态二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮(例如Kollidon_、Polyplasdone_)、瓜尔胶、硅酸镁铝、甲基纤维素、微晶纤维素、聚克立林钾、粉状纤维素、预胶化淀粉、藻酸钠、淀粉羟乙酸钠(例如Explotab_)和淀粉。
可加入助流剂来改善非压缩固体组合物的流动性并且改善给药的准确性。能作为助流剂起作用的赋形剂包括胶态二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石粉和磷酸钙。
当用压缩粉状组合物制备诸如片剂的剂型时，让该组合物经受来自冲头和冲模的压力。某些赋形剂和有效成分往往粘附于冲头和冲模表面，这可导致所述产物具有凹痕及其他的表面不规则性。可将润滑剂加入到所述组合物中，以减少粘附，且容易从冲模中释放出产物。润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、一硬脂酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酰延胡索酸钠、硬脂酸、滑石粉和硬脂酸锌。
可由配方科学家根据经验并考虑本领域的标准步骤及参考书，容易地确定选择的赋形剂及用量。
本发明的固体组合物包括散剂、颗粒剂、聚集体和压缩组合物。
可把口服单位剂型的纯盐酸伐昔洛韦给予患者。可按照本领域已知的方法，把所述有效成分和赋形剂配制成组合物和剂型。剂型不仅包括像片剂、散剂、胶囊剂、小药囊、药片以及锭剂那样的固体剂型，而且包括液体糖浆剂、混悬剂和酏剂。
可通过湿法制粒制备压片或装胶囊用组合物。在湿法制粒中，将一些或全部粉状有效成分和赋形剂混合在一起，然后在使粉末结块成颗粒的液体(一般为水)存在下进一步混合。将所述颗粒过筛和/或磨碎，干燥，然后再过筛和/或磨碎至所需粒度。然后可将所述颗粒压片，或者可以在压片前加入诸如助流剂和/或润滑剂的其它赋形剂。
通过干法混合，可以常规制备压片组合物。例如，可将所述有效成分和赋形剂的混合组合物压缩成压缩块或薄片，然后将其粉碎成压缩颗粒。接着可把这压缩颗粒压制成片剂。
作为干法制粒的一种替代方法，可用直接压片技术把混合组合物直接压制成压缩剂型。直接压片产生一种无颗粒的更均匀片剂。特别好地适合于直接压片的赋形剂包括微晶纤维素、喷雾干燥乳糖、磷酸氢钙二水合物和胶态二氧化硅。在对直接压片有特殊要求时，这些赋形剂和其它赋形剂在直接压片过程中的适当使用是本领域有经验技术人员已知的。
本发明的胶囊填充剂可以包括任何前面提到的混合物和颗粒剂，只是它们不进行最后的压片步骤。
例如通过用上述的片剂组合物填充一粒明胶胶囊的一半，然后套上作为囊帽的该明胶胶囊的另一半，可以制备胶囊剂。
胶囊剂、片剂和锭剂以及其它单位剂型优选包含约100mg至约1000mg剂量水平的纯盐酸伐昔洛韦，更优选包含约500mg至约1000mg剂量水平的纯盐酸伐昔洛韦。
用下面的实施例进一步阐明本发明。
实施例1N-t-BOC-伐昔洛韦(N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯)将N-t-BOC-L-缬氨酸(2.9g，13.2mmol)、阿昔洛韦(2.3g，10mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(3.0g，15mmol)、4-(二甲氨基)吡啶(0.2g，1.6mmol)和三乙胺(1.4g，13.9mmol)在二甲基甲酰胺(15ml)中的悬浮液在约0℃下搅拌约4小时，然后在室温下搅拌过夜。向该反应混合物中加入追加量的N-t-BOC-L-缬氨酸(0.3g，1.36mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.3g，1.5mmol)，然后继续搅拌过夜。把0.3N盐酸溶液(53ml)在约0℃下加入到澄清溶液中，得到白色沉淀，然后将所得悬浮液在约0℃下搅拌约1小时。滤出沉淀并减压干燥，得到N-t-BOC-伐昔洛韦(4.1g，97％)，经HPLC测定，其纯度为98.2％。
1H NMR(DMSO-d6，d，ppm)0.79(d，J＝6.6Hz，6H)；1.35(s，9H)；1.80-2.00(m，1H)；3.60-3.80(m，2H)；4.00-4.30(m，2H)，5.33(s，2H)；6.49(s，2H)；7.11(d，J＝7.9)；7.79(s，1H)；10.63(s，1H)。
实施例2N-t-BOC-伐昔洛韦(N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯)一个双层夹套式反应器(1升)装有阿昔洛韦(50.00g)、N-t-BOC-L-缬氨酸(72.35g)、4-(二甲氨基)吡啶(4.07g)和N，N-二甲基甲酰胺(210.0g)并且充满氮气。将所得混合物在约25℃下搅拌约1小时，然后冷却至约20℃。在约20-25℃下，向该反应混合物中滴加溶于N，N-二甲基甲酰胺(160g)的1，3-二环己基碳二亚胺(91.61g)的溶液。将该反应混合物在约25℃下剧烈搅拌约2小时。此后，向该反应混合物中加入水(17.0g)，然后在约20-25℃下搅拌约12小时。滤出沉淀并在滤器上用N，N-二甲基甲酰胺(150.0g)洗涤。在约65℃减压浓缩滤液至约235克。在约60-65℃下，向搅拌的残余物中滴加甲醇(280g)。将所得溶液在回流条件下搅拌约15分钟，然后在约0℃下搅拌约12小时。滤出沉淀固体，在滤器上用冷甲醇(150.0g)洗涤，然后在50℃(水浴)减压干燥至恒重，得到N-t-BOC-伐昔洛韦(70.70g，75％)，经HPLC测定，其纯度为99.7％。
实施例3N-t-BOC-伐昔洛韦(N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯)一个双层夹套式反应器(6升)装有N-t-BOC-L-缬氨酸(435.0g，2.002mmol)和二甲基甲酰胺(2790g)并且充满氮气。将该混合物在约25℃下搅拌约30分钟，然后冷却至约-5℃。在约20分钟内，加入溶于N，N-二甲基甲酰胺(300g)的1，3-二环己基碳二亚胺(165.0g，2.660mmol)的溶液。将所得混合物在约-5℃下搅拌约30分钟，然后在该温度下，在约5分钟内，加入阿昔洛韦(300.0g，1.332mmol)。在约-5℃，一次性加入4-(二甲氨基)吡啶(162.0g，1.327mmol)，然后将该混合物在该温度下搅拌约6小时。
在约-5℃，向该混合物中滴加新的一部分溶于N，N-二甲基甲酰胺(300g)的1，3-二环己基碳二亚胺(165.0g)，然后将所得混合物在该温度下搅拌约13小时。
在约-5℃，向所述混合物中滴加最后一部分溶于N，N-二甲基甲酰胺(390g)的1，3-二环己基碳二亚胺(219.0g)，然后在该温度下连续搅拌约6小时。然后，升温至约25℃达约15小时。接着，向该混合物中加入水(102g，5.667mmol)，然后在约25℃下连续搅拌约3小时。滤出沉淀并用N，N-二甲基甲酰胺(900g)洗涤。于约65℃减压浓缩滤液。将该残余物在回流下溶于异丙醇(900g)中并于约40-50℃(水浴)减压干燥至恒重，得到N-t-BOC-伐昔洛韦(486g，86％)，经HPLC测定，其纯度为97.5％。
实施例4由N-t-BOC-伐昔洛韦制备盐酸伐昔洛韦向溶于水(11ml)的N-t-BOC-伐昔洛韦(3.4g，8mmol)悬浮液中滴加5N盐酸溶液(7ml)，然后在室温下搅拌约5小时，在这段时间内，该悬浮液消失而形成澄清溶液。把该溶液冷却至约0℃，将其与异丙醇(60ml)混合，此后，形成沉淀。将所得悬浮液在约0℃下搅拌约1小时，然后在约4℃下保持过夜。滤出白色沉淀并减压干燥，得到盐酸伐昔洛韦(1.8g，62％)。
1H NMR对应于与先前公开的盐酸伐昔洛韦的NMR。
实施例5由N-t-BOC-伐昔洛韦制备盐酸伐昔洛韦向溶于水(22ml)的N-t-BOC-伐昔洛韦(9.0g，21mmol)悬浮液中滴加12N盐酸溶液(8ml，96mmol)，然后将其在室温下搅拌约3.5小时，在这段时间内，该悬浮液消失而形成混浊溶液。把该溶液冷却至约0℃，将其与异丙醇(500ml)混合，此后，形成沉淀。将所得悬浮液在约0℃下搅拌约1小时，然后在约4℃下保持过夜。滤出白色沉淀并于约40-50℃减压干燥至恒重，得到盐酸伐昔洛韦(7.0g，92％)，经HPLC测定，其纯度为97.9％。
将盐酸伐昔洛韦(2.0g)与乙醇(100ml)一起在回流条件下研磨约1小时，然后冷却至室温。滤出白色沉淀并于约40-50℃减压干燥至恒重，得到盐酸伐昔洛韦(1.3g，65％)，经HPLC测定，其纯度为99.27％。
实施例6由N-t-BOC-伐昔洛韦制备盐酸伐昔洛韦一个双层夹套式反应器(1升)装有N-t-BOC-伐昔洛韦(100.0g，235.6mmol)和甲酸(300.0g)。将所得混合物在约50℃下搅拌，直至固体完全溶解，然后冷却至约20-25℃。在约1小时内，滴加37％盐酸(92.8g)和水(200g)的混合物，然后将所得溶液在约20-25℃下再搅拌3小时。过滤该反应混合物，然后在约20℃下，在1小时内，将滤液逐滴加入到异丙醇(1256g)中。将所得悬浮液在同样的温度下搅拌约2小时，然后在约-15℃下搅拌约14小时。滤出沉淀固体，用冷异丙醇(400g)洗涤并于约25℃减压干燥至恒重，得到盐酸伐昔洛韦(62.5g，73.5％)，经HPLC测定，其纯度为98.67％。
实施例7纯形式的盐酸伐昔洛韦在约20-25℃，向溶于水(22ml)的N-t-BOC-伐昔洛韦(9.0g，21mmol，1当量)浆液中滴加12N盐酸溶液(8.0ml，96mmol，4.6当量)，然后在同样的温度下搅拌约3.5小时。在这段时间内，所得浆液消失而形成油状溶液。在约0-5℃，向搅拌的溶液中加入异丙醇(500ml)。将所得悬浮液在同样的温度下搅拌过夜。滤出沉淀固体并于约20-30℃减压干燥至恒重，得到盐酸伐昔洛韦(7.0g，92％)，经HPLC测定，其纯度为97.93％；二环己基脲＜0.1％，而未反应的N-t-BOC-缬氨酸在约0.1％和0.2％之间(通过薄层色谱(TLC)估计)。
将盐酸伐昔洛韦(2.0g)与乙醇(100ml)一起在回流条件下搅拌约1小时，然后在室温下搅拌约30分钟。将该悬浮液过滤并于约40℃减压干燥，得到盐酸伐昔洛韦(1.3g，65％)，经HPLC测定，其纯度为99.27％。
实施例8纯形式的盐酸伐昔洛韦一个反应器(1升)装有粗制盐酸伐昔洛韦(60.00g)和水(240g)。将所得混合物在约40℃下搅拌，直至固体完全溶解，然后过滤该溶液。在约40℃，将该滤液加入到异丙醇(900g)中，然后将所得悬浮液在约20℃下搅拌约2小时，接着在约-15℃下再搅拌17小时。滤出沉淀固体，用冷异丙醇(120g)洗涤并于约25℃减压干燥至恒重，得到盐酸伐昔洛韦(53.24g，88.7％)，经HPLC测定，其纯度为99.56％。
权利要求
1.N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯。
2.一种制备N-叔丁氧羰基-L-缬氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氢-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯的方法，所述方法包括使N-叔丁氧羰基缬氨酸与阿昔洛韦在偶联剂存在下发生偶联的步骤。
3.权利要求2的方法，其中所述偶联剂是碳二亚胺。
4.权利要求3的方法，其中所述碳二亚胺是二环己基碳二亚胺。
5.权利要求3的方法，其中所述碳二亚胺是水溶性的。
6.权利要求5的方法，其中所述水溶性碳二亚胺是N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺。
7.一种制备伐昔洛韦或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦；然后使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成伐昔洛韦或其药学上可接受的盐。
8.权利要求7的方法，其中所述氨基受保护的缬氨酸是N-叔丁氧羰基缬氨酸。
9.权利要求7的方法，其中用偶联剂来实现所述偶联。
10.权利要求9的方法，其中所述偶联剂是碳二亚胺。
11.权利要求10的方法，其中所述碳二亚胺是二环己基碳二亚胺。
12.权利要求10的方法，其中所述碳二亚胺是水溶性的。
13.权利要求12的方法，其中所述水溶性碳二亚胺是N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺。
14.权利要求7的方法，其中在约20℃至约25℃的温度下，来实现所述脱保护。
15.权利要求7的方法，其中在一种选自由丙酮、乙酸、甲酸及其混合物的溶剂中，来实现所述脱保护。
16.权利要求7的方法，其中用无机酸来实现脱保护。
17.权利要求16的方法，其中所述无机酸是盐酸，从而形成盐酸伐昔洛韦。
18.一种制备盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的氨基受保护的缬氨酸和阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，其中用一种选自N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺和二环己基碳二亚胺的偶联剂来实现所述偶联，然后用盐酸使被保护的伐昔洛韦脱保护。
19.权利要求18的方法，其中所述氨基受保护的缬氨酸是N-叔丁氧羰基缬氨酸。
20.权利要求18的方法，其中在约20℃至约25℃的温度下，来实现所述脱保护。
21.权利要求18的方法，其中在一种选自由丙酮、乙酸、甲酸及其混合物的溶剂中，来实现所述脱保护。
22.一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使盐酸伐昔洛韦在低级烷基醇中形成浆液，将所得浆液回流，然后从所得浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。
23.权利要求22的方法，其中所述低级烷基醇是乙醇。
24.一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤形成盐酸伐昔洛韦水溶液，将该溶液与异丙醇混合，形成浆液，然后从所得浆液中分离出纯形式的盐酸伐昔洛韦。
25.一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的氨基受保护的缬氨酸和阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，其中用一种选自N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺和二环己基碳二亚胺的偶联剂来实现所述偶联，用盐酸使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成盐酸伐昔洛韦，使盐酸伐昔洛韦在低级烷基醇中形成浆液，将所得浆液回流，然后从所得浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。
26.权利要求25的方法，其中所述氨基受保护的缬氨酸是N-叔丁氧羰基缬氨酸。
27.权利要求25的方法，其中在约20℃至约25℃的温度下，来实现所述脱保护。
28.权利要求25的方法，其中在一种选自由丙酮、乙酸、甲酸及其混合物的溶剂中，来实现所述脱保护。
29.权利要求25的方法，其中所述低级烷基醇是乙醇。
30.一种制备纯形式的盐酸伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤使选自N-叔丁氧羰基缬氨酸和N-甲酰基缬氨酸的氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，其中用一种选自N-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺和二环己基碳二亚胺的偶联剂来实现所述偶联，用盐酸使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成盐酸伐昔洛韦水溶液，将该溶液与异丙醇混合，形成浆液，然后从所得浆液中分离出纯盐酸伐昔洛韦。
31.权利要求30的方法，其中所述氨基受保护的缬氨酸是N-叔丁氧羰基缬氨酸。
32.权利要求30的方法，其中在将所述溶液与异丙醇混合的步骤之前，过滤该溶液。
33.权利要求30的方法，其中在约-10℃至约25℃的温度下，实现所述脱保护。
34.权利要求30的方法，其中在一种选自由丙酮、乙酸、甲酸及其混合物的溶剂中，来实现所述脱保护。
35.纯形式的盐酸伐昔洛韦。
36.权利要求35的纯盐酸伐昔洛韦，所述纯盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量经HPLC测定不超过约0.7％。
37.权利要求36的纯盐酸伐昔洛韦，所述纯盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量经HPLC测定不超过约0.3％。
38.权利要求37的纯盐酸伐昔洛韦，所述纯盐酸伐昔洛韦中的阿昔洛韦含量经HPLC测定不超过约0.1％。
39.权利要求35的纯盐酸伐昔洛韦，所述纯盐酸伐昔洛韦中的任一杂质含量不超过约0.2％。
40.权利要求39的纯盐酸伐昔洛韦，所述纯盐酸伐昔洛韦中的任一杂质含量不超过约0.1％。
41.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求35的纯盐酸伐昔洛韦以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
42.一种药物剂型，所述药物剂型包含权利要求41的药用组合物。
43.权利要求42的药物剂型，其中所述剂型是口服剂型。
44.权利要求43的药物剂型，其中所述口服剂型是胶囊剂或片剂。
45.一种治疗疱疹病毒感染患者的疱疹病毒的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求41的组合物。
全文摘要
本发明涉及被保护的伐昔洛韦－N－叔丁氧羰基－L－缬氨酸2－[(2－氨基－1，6－二氢－6－氧代－9H－嘌呤－9－基)甲氧基]乙酯及其制备方法。本发明还涉及一种制备伐昔洛韦的方法，所述方法包括下述步骤用偶联剂使选自N－叔丁氧羰基缬氨酸和N－甲酰基缬氨酸的氨基受保护的缬氨酸与阿昔洛韦发生偶联，形成被保护的伐昔洛韦，然后使被保护的伐昔洛韦脱保护，形成伐昔洛韦或其药学上可接受的盐。本发明还涉及纯形式的伐昔洛韦、纯伐昔洛韦的制备方法以及包含纯伐昔洛韦的组合物。
文档编号A61K31/522GK1612878SQ02826897
公开日2005年5月4日 申请日期2002年11月13日 优先权日2001年11月14日
发明者M·Y·埃廷格尔, L·M·于多维奇, M·于泽福维奇, G·A·尼斯内维奇, B·Z·多利茨基, B·佩尔特西科夫, B·蒂辛, D·布拉斯博格 申请人:特瓦制药工业有限公司