专利名称：可用于治疗慢性髓细胞性白血病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及借助含有氯原酸类似物和/或其盐，例如从氯原酸或其类似物制得的氯原酸钠或钾或铵盐，的组合物对慢性髓细胞样白血病(CML)的治疗。
慢性髓细胞样白血病是致死的，没有针对破坏白血病细胞的药物，而且这些细胞对化学疗法的反应较差，这些化学疗法总是非特异性的因此对正常细胞产生不良影响。使用NaChl的这一疗法其独特之处在于杀死骨髓癌细胞而不使正常细胞受影响。
背景技术：
髓细胞样白血病通常分为两组急性髓细胞样白血病(AML)和慢性髓细胞样白血病(CML)。AML的特征是在骨髓中骨髓细胞数量的增长以及骨髓细胞成熟停止。在美国，AML的年发生率约为每100,000中2.4人，而且它随年龄逐渐上升，达到每100,000名65岁或以上成年人中12.6人的高峰。CML是一种造血干细胞恶性无性系失调。发病的中值年龄是53岁，但它出现在所有年龄组，包括儿童。CML的自然进程是在三至五年内甚至更早从良性慢性期向快速致命疾病的骤变发展。尽管在临床药物上有巨大的进展，但是CML的预后仍然是薄弱的(1)。CD33扮演着骨髓细胞分化过程中的一个特异的有用标记(2)。近来的报道暗示，CD33与单克隆抗体的结合诱导导致体外AML和CML细胞增殖生长抑制的细胞凋亡(2，3)。利用CD33的骨髓特异性表达，已在AML病人中极大成功地使用了与抗癌药物缀合的人源化抗-CD33单克隆抗体(4)。类似地，淋巴系白血病也分作两组急性淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。淋巴系白血病对T和B细胞系都可感染，并且在儿童中普遍。早前已经请求保护了蒌叶(Piper betel)叶片提取物的抗髓细胞活性(2002年12月12日提交的专利申请no.PCT/IN00/00118)。从蒌叶提取物中分离的两种化合物也显示出抗髓细胞样白血病活性。一种化合物是3-O-香豆酰奎尼酸(3-O-Coumaryl quinic acid)(2002年5月31日递交的专利申请no.US 60/384 163)。另一种化合物是氯原酸(2002年7月8日递交的专利申请no.US 60/393750)。
因此，申请人早前的发现与关于从蒌叶提取物级分制备的、用于治疗慢性髓细胞样白血病的氯原酸钠的本专利申请一致。已知氯原酸(Chl)具有抗-变应活性(5)。Chl还抑制肝和肾葡萄糖-6-磷酸酶系统(6)。Chl是表皮脂肪氧化酶(epidermal lypoxygenase)活性以及TPA-诱导的耳炎症的抑制剂(7)。Chl还在小鼠皮肤中表现对TPA-诱导的肿瘤促进作用的抑制效应(7)。还报道了Chl的抗-HIV活性(8)。Bcr与Abl基因的意外融合导致产生组成型活性酪氨酸激酶(Bcr-Abl)，该酶将细胞转化为慢性骨髓性白血病(CML)9。已知了抑制Bcr-Abl依赖性细胞生长的高潜力小分子10，11。近来关于对一种这样的化合物的抗性发展的报道强调了对控制CML12的进一步治疗性研究的需求。在此，我们请求保护一种分离自植物即蒌叶的化合物抑制Abl蛋白质酪氨酸激酶，从而开启表达Bcr-Abl的CML细胞K562的凋亡。结构解释将该分子鉴定为氯原酸。其钠、钾、铵及其它盐也表现对CML细胞的杀灭活性，尽管钠盐氯原酸钠(NaChl)稍比氯原酸的其它盐表现出更高的潜力。在杀伤K562细胞上，氯原酸钠比氯原酸表现出高2.0倍的效率。有趣的是，NaChl还破坏CML病人中表达Bcr-Abl的外周血细胞而对Bcr-Abl阴性CML病人的外周血细胞没有任何影响。分子模型分析指示，Na-Chl占据Abl激酶结构域的ATP-结合位点。NaChl因此成为CML的又一种治疗试剂。本专利申请中，首次宣称了Na-Chl的抗髓细胞样白血病活性。
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发明目的本发明的主要目的是提供一种含有氯原酸类似物和/或其盐的药物组合物。
本发明的另一目的是为治疗慢性髓细胞样白血病提供一种含有氯原酸类似物和/或其盐的药物组合物。
本发明的另一目的是为治疗慢性髓细胞样白血病提供一种含有氯原酸盐和/或其盐，例如从氯原酸或其类似物制得的氯原酸钠(Na-Chl)或钾或铵盐，的药物组合物。
本发明的另一目的是提供从蒌叶提取物或任何其它来源分离的氯原酸(Chl)制备而成的化合物氯原酸钠(NaChl)用于治疗慢性髓细胞样白血病的新用途。
本发明的另一目的是为治疗慢性髓细胞样白血病提供含有化合物氯原酸钠和载体的新药物组合物。
本发明的再一目的是提供从氯原酸制备氯原酸钠以治疗CML的方法。
本发明的再一目的是提供从氯原酸制备NaChl的简化方法，其中氯原酸分离自蒌叶所有具有与CML治疗相关生物活性的植物部分。
本发明的再一目的是为CML治疗提供氯原酸的钠盐，即一种来自蒌叶叶片或其任何其它植物部分的草药产物。
发明概述因此，本发明通过一种含有氯原酸类似物和/或其盐，例如从氯原酸或其类似物制得的氯原酸钠(Na-Chl)或钾或铵盐，的组合物为慢性髓细胞样白血病(CML)的治疗提供一种药物组合物。
特别是，本发明提供一种药物组合物，它杀死骨髓癌细胞而保持其它正常细胞不受影响。慢性髓细胞样白血病是致死的，没有针对破坏白血病细胞的药物，而且这些细胞对化学疗法的反应较差，这些化学疗法总是非特异性的因此对正常细胞产生不良影响。
使用氯原酸的类似物和/或盐的这一疗法其独特之处在于杀死骨髓癌细胞而使正常细胞不受影响。
发明详述因此，本发明提供对治疗慢性髓细胞样白血病有用的药物组合物，该慢性髓细胞样白血病中Bcr-Abl激酶在动物及人体内组成型表达，所述组合物含有有效量的氯原酸类似物和/或其盐以及药学可接受的添加剂。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物还在治疗由Abl型激酶过表达引起的疾病中有用。
在另一种实施方式中，所述氯原酸的类似物选自新氯原酸(5-O-咖啡酰奎尼酸)、隐氯原酸(cryptochlorogenic acid)(4-O-咖啡酰奎尼酸)、3-O-(3’-甲基咖啡酰)奎尼酸和5-O-(咖啡酰-4’-甲基)奎尼酸。
仍在另一实施方式中，氯原酸类似物获自天然来源或由合成制得。
仍在另一实施方式中，氯原酸类似物的盐选自钠、钾和铵盐。
仍是另一实施方式，添加剂选自象蛋白质、碳水化合物、糖类这样的营养成分，滑石粉，硬脂酸镁，纤维素，碳酸钙，淀粉-明胶糊剂和/或药学可接受的载体，赋形剂，稀释剂或溶剂。
本发明的另一实施方式涉及对受试者施用组合物的方法。该组合物可以经口服、静脉内、肌肉内或皮下途径给药。
仍是另一实施方式，所述组合物以约1至100mg每kg体重/天，优选1至25mg/kg体重/天，的剂量水平给药。
仍是另一实施方式，所述组合物可以以介于至少四周至高达十二周的时间段给药，而且在复发情况下还可以再次对受试者给药而不具毒性。
仍是另一实施方式，所述组合物抑制白血病细胞类型K562.和Molt-4.的生长。
仍是另一实施方式，所述组合物抑制白血病细胞类型Molt-4的生长。
仍是另一实施方式，所述组合物，对浓度为104/孔的K562细胞的体外活性IC50值高达27.0纳摩尔/ml。
本发明的再一实施方式提供一种治疗患有慢性髓细胞样白血病或者任何由Abl型激酶过表达引起的疾病的受试者的方法，其中所述慢性髓细胞样白血病中Bcr-Abl激酶在动物及人体内组成型表达。
在另一实施方式中，氯原酸和氯原酸钠对K562细胞的IC50值分别为13.5和27.0μm/104细胞(附图2C&2D)。
另一实施方式，氯原酸钠在小鼠模型中的急性毒性，其中化合物经口服途径在高达2mg/kg体重剂量水平下是非毒性的。
参照以下给出的实施例，本发明得到了详细描述，所提供的这些实施例是为了阐述本发明，而不应解释为限制本发明的范围。
附图简述附
图1氯原酸钠(一种氯原酸盐)的结构。
附图2氯原酸自蒌叶叶片中的纯化，以及其在体外对细胞系和Ph+/-CML病人PBMC的效果。示出了纯化流程图。利用光谱法(IR，NMR，13CNMR，FABMS)将用HPLC分离自级分E的峰09的结构推断为氯原酸。通过将细胞铺平板于含或不含指定量的提取物(a)、级分(b)、纯化混合物(c)及其钠盐(d)的常规细胞培养基上完成了细胞计数分析。每天，根据锥虫蓝排除法来估算活细胞数。(e)，获自三名Ph+CML病人以及一名Ph-CML病人的PBMC用Na-Chl(67.5nmole/105细胞)处理后的活力。(f)，K562细胞在用NaChl(67.5nmole/105细胞)处理六小时(相差显微图，×400)后的形态学变化。
附图3氯原酸钠诱导Ph+CML细胞系和CML病人的PBMC凋亡。
a)对细胞不做处理(NT)或与NaChl(67.5nmole/105细胞)温育六小时，并在用膜联蛋白V-FITC和PI染色后做流式细胞术分析。有活力的细胞在方框的左下四分之一中。被膜联蛋白V染色的凋亡细胞在方框的右下四分之一中。被膜联蛋白V和PI二者染色的末期凋亡细胞在方框的右上四分之一中。
b)用NaChl处理导致Ph+细胞中细胞周期早期停止以及之后的细胞凋亡。将细胞在NaChl存在或不存在下培养。培养1或2天后，收集、透化细胞，并用PI染色以做DNA含量分析。设置阈值以评估死亡(＜2n DNA，M1)、G0/G1(2n DNA，M2)、和S+G2+M(＞2n DNA，M3)细胞的百分数。
c)用NaChl处理并用膜联蛋白V-AllexaTM染色、用膜联蛋白V染色的K562和Molt-4细胞的荧光图示于左版，亮视野相差图示于右版。
d)用NaChl处理导致Ph+细胞中的procaspase-3活化。对细胞不做处理或用NaChl处理24小时(T)。收集、裂解细胞，将等量裂解物用SDS-PAGE分离以及电转移。滤膜用识别procaspase-3(32Kda，上带)和caspase-3切割产物(17Kda，下带)二者的抗-caspase-3探测。
附图4.氯原酸钠抑制Ph+细胞中Bcr-Abl自磷酸化。
a)Abl磷酸化状态的流式细胞确定。对细胞不做处理(NT)或用NaChl处理3小时(T)，透化并用兔抗-磷酸-c-Abl(Tyr245)抗体染色。虚线，用正常兔IgG染色；实线，用免疫IgG染色。
b)基于免疫印迹的Abl磷酸化状态的确定。收集、裂解细胞，将等量裂解物用SDS-PAGE分离以及电转移。滤膜用抗-磷酸-c-Abl(Tyr 245)(上版)或抗-c-Abl抗体(中版)探测。为证实所分析样品中的等量蛋白质水平，还将抗-肌动蛋白抗体用作载样对照(下版)。
c)Abl表达状态的流式细胞确定。细胞做透化处理并用兔抗-c-Abl抗体染色。虚线，用正常兔IgG染色；实线，用免疫IgG染色。
d)Abl酪氨酸激酶失活(版A&B)形式与gleevec(A)和Chl(B)的复合物以及激酶活性(版C&D)形式与PD173955(C)和Chl(D)的复合物的结构。失活形式与gleevec(A)的复合物以及活性形式与PD173955(C)的复合物的结构通过X-射线结晶法获得。用那些X-射线结构对失活形式与Chl(B)以及活性形式与Chl(D)的复合物的结构建模。条带显示激酶的结合袋；黄线是部分活化环，其在失活(A&B)和活性(C&D)构象中不同。环绕抑制剂分子的封套是它们的Connolly表面。
实施例实施例1氯原酸钠的制备新鲜收集4.7kg蒌叶叶片，用蒸馏水洗涤，之后切成小片。收集叶的小碎片，与1.0升蒸馏水混合，并在混合器中彻底匀浆。将匀浆物滤过细棉布以过滤掉大块颗粒，收集滤过物。将该过程重复2～3次以得到最大量的收集物。之后将混在一起的滤过物离心，将等分试样(一种澄清的溶液)收集起来，并冻干成半固态，其约为110gm。检测所收集材料的生物活性，即，CML细胞的破坏。观察到阳性活性时，即开始纯化。将10gm上述材料上载入Sephadex LH-20柱，并用水、水-甲醇(1∶1)以及甲醇做洗脱液进行层析。分别对由三种不同的溶剂系统获得的三种不同级分做生物活性检测。只在甲醇-水(1∶1)中检测到了活性，称作级分E。之后用M-Bonda pak柱(19×300mm)以及溶剂系统甲醇∶水∶乙酸(23∶76∶1)、以流速12ml/min对级分E(0.23g)进行制备型HPLC，并在280nm下检测。从滞留时间为9.16分钟的峰(第09号峰)处分离到了一种纯化的化合物，即氯原酸(4mg)。
将10.5mg氯原酸与碳酸氢钠(3.6mg)在2ml水中搅拌，并冻干所得溶液，由此制得了氯原酸钠(13mg)。测试了其生物活性。将其结构确定为氯原酸钠(附图1)IR，NMR，13CNMR和FABMS m/2。
KBrIRγmaxcm-13398(OH)，1685(CO)，1593，15271449，1443，1394，1279，1159，11181081，1038，975，916和8101H-NMR(D2O)7.45(1H)，6.99(1H)，6.93(1H)，6.77(1H)6.18(1H)，5.16(1H)，4.11(1H)，3.75(1H)和2.09-1.85(4H)13C NMR(D2O)181.28，169.49，147.69，146.45，144.67，127.14，123.10，116.51，115.40，114.68，77.28，73.33，71.56，71.17，38.88和37.72FABMS m/Z355(M++H)和377(M++Na)
实施例2氯原酸可以在市场上以纯的形式获得。将氯原酸(1gm)与碳酸氢钠(0.24g，溶于5ml水)溶液手摇混合。将溶液冻干成纯氯原酸钠(1.12gm)并测试生物活性。从分离自蒌叶或者从商业获得的氯原酸制得的氯原酸钠具有相似的结构和活性。
实施例3Bcr-Abl阳性CML细胞系(K562)、CML病人外周血细胞、Bcr-Abl-阴性ALL细胞系(Molt-4)和CML病人外周血细胞的培养。通过将细胞铺平板于含或不含指定量的提取物、级分、纯化化合物及其钠盐的常规细胞培养基上完成了细胞计数分析。每天，根据锥虫蓝排除法估算活细胞数目。
实施例4用相差显微镜对Bcr-Abl阳性CML细胞系K562做形态学分析。对细胞不做处理(NT)或用NaChl(Nachl；67.5nmole/105细胞)处理，并在相差显微镜下观察(放大×400)。
实施例5用流式细胞术测定凋亡。对细胞不做处理或用NaChl(67.5nmole/105细胞)处理6小时。洗涤后，用异硫氰酸荧光素(FITC)缀合的膜联蛋白V和碘化丙锭(PI)对细胞染色，并在流式细胞仪(FACSCalibur，Beckton Dickinson，USA)中分析。
实施例6共焦显微术。用NaChl处理K562和Molt-4细胞，之后如实施例5中所述用Annexin-V-AllexaTM染色，并允许其粘附于聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上10分钟。用Leica TCS SP2共焦激光扫描显微镜(Heidolberg，Germany)分析代表性视野中的细胞。
实施例7DNA细胞周期分析。如实施例5中所述用NaChl培养细胞。培养1或2天后，收集细胞，透化处理并用PI染色以做DNA细胞周期分析。
实施例8
免疫印迹分析。收集、裂解细胞，将等量裂解物用SDS-PAGE分离以及电转移。滤膜用抗-caspase-3抗体(B.D.Pharmingen)、抗-c-Abl抗体或抗-磷酸-c-Abl抗体(Cell Signaling Technology)探测。
实施例9Abl磷酸化或Abl表达状态的流式细胞测定。透化细胞，用兔抗-磷酸-c-Abl抗体、抗-c-Abl抗体或对照兔抗体染色，并在流式细胞仪中分析。
实施例10用InsightII98.0(Accelrys)对Chl与失活和活性形式的激酶的复合物的结构建立模型。用近来确定的该酶与两种重要药物分子的两种复合物的结构建立复合物模型，这两种药物分子与Chl具有某些结构及功能相似性。通过反复的极小化和动力学模拟建立和优化了Chl结构。通过将Chl的功能基团与药物分子试验结构的类似基团重叠建立了复合物的初始结构。用cff91力场通过能量极小化(100步，每一急剧下降和缀合梯度方法)将其优化。进行千万亿分之一秒的1000步动力学，每一步在100步的平衡之后，于300°K下于10步中的一步进行构象取样。模拟末期选择具有最低势能的构象进行下一循环的模拟。重复这种极小化与动力学的组合直到获得令人满意的构象。在结合袋腔中用不同的初始条件做了一系列的优化。对在能量极小化和分子动力学过程中距离大于10的原子施加位置约束。
实施例3和4的结果蒌叶叶片水提物以剂量依赖方式杀死K562细胞(附图2a)。该提取物对AAL细胞系Molt-4没有可以感知的效应。级分E诱导的对K562细胞的杀伤活性限制在峰09(附图2b)，该峰09随后被鉴定为氯原酸(附图2c)，并且显示出比粗提物或级分E更高的对K562细胞的杀伤活性。有趣的是，氯原酸钠(NaChl)在杀伤K562细胞的潜力上比氯原酸高两倍(附图2d)。NaChl对杀伤Philadelphia染色体(Bcr-Abl)阳性CML病人外周血单核细胞(PBMC)也有活性(附图2e)。NaChl对Bcr-Abl阴性CML病人PBMC(附图2e)没有活性。相差显微术显示，NaChl诱导K562细胞中的形态学变化(核浓缩)，即凋亡迹象(附图2f)。
氯原酸和氯原酸钠对K562细胞的IC50值分别为13.5和27.0μm/104细胞(附图2C和2D)。至于氯原酸钠在小鼠模型中的急性毒性，该化合物经口服途径在高至2gm/kg体重下是非毒性的。
实施例5和9的结果用NaChl处理未诱导Molt-4细胞、正常PBMC或Bcr-Abl阴性CML病人PBMC中的凋亡。相反，相同的处理导致Bcr-Abl阳性K562细胞和Bcr-Abl阳性CML病人PBMC中的凋亡(附图3a)。DNA细胞周期分析也指示，NaChl在Bcr-Abl阳性CML细胞系K562细胞和Bcr-Abl阳性CML病人PBMC中诱导细胞周期停止以及之后的DNA降解(附图3b)。共焦显微术指示，用NaChl处理后在K562细胞中而非Molt-4细胞中出现了阳性膜联蛋白V染色，其示于附图3c中。通过对caspase3活化的免疫印迹探测进一步证实了在K562细胞、Bcr-Abl(Ph)阳性CML病人PBMC中，但非Molt-4细胞、或Bcr-Abl阴性CML病人或正常供体的PBMC中，的凋亡(附图3d)。NaChl抑制Bcr-Abl蛋白质酪氨酸激酶的磷酸化而不影响Abl蛋白质表达水平。借助对磷酸-c-Abl状态的流式细胞探测(附图4a)、以及借助免疫印迹探测(附图4b，上版)，证实了这一结果。Abl蛋白质的表达也用流式细胞术(附图4c)和免疫印迹(附图4b，中版)做了分析。因此，我们的发现表明，氯原酸钠抑制Abl蛋白质酪氨酸激酶(包括Bcr-Abl激酶)的磷酸化，导致细胞凋亡。氯原酸和氯原酸钠对K562细胞的IC50值分别为13.5和27.0μm/104细胞，附图2C和2D。至于氯原酸钠在小鼠模型中的急性毒性，该化合物经口服途径在高至2gm/kg体重下是非毒性的。
实施例10的结果附图-4d显示，氯原酸(Chl，版B)能够在与Gleevec相似的位置正好进入处于失活构象的Abl激酶的结合袋中(版A)，以及在与PD173955相似的位置(版C)正好进入活性构象(版D)。与配体锚定进入激酶的活性和失活构象的结合袋中相关的实验能是负的，并且与其它表现稳定复合物形成的小分子抑制剂例如Gleevec和PD173955的那些实验能相当。带电荷以及不带电形式的Chl的结合能是不同的，而且与不带电抑制剂不同，电互作的大小依赖于分子的电状态。模型研究指示，Chl和PD173955一样能结合激酶的活性和失活两种构象。如同在Gleevec复合物中所发现的，Chl与周围的残基形成大量氢键而同时保持一些疏水互作不受影响。与PD173955相比，Chl形成较多的氢键而同时保持相似的疏水接触数量。已发现，Chl的芳香羟基基团在结合袋中形成一个氢键网络，这暗示着这些基团在复合物形成中的重要性。
权利要求
1.一种可用于治疗其中Bcr-Abl激酶在动物和人中组成型表达的慢性髓细胞样白血病的药物组合物，所述组合物含有有效量的氯原酸类似物和/或其盐以及药学可接受的添加剂。
2.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述组合物还可用于由Abl型激酶过表达引起的疾病。
3.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述氯原酸类似物选自新氯原酸(5-O-咖啡酰奎尼酸)、隐氯原酸(4-O-咖啡酰奎尼酸)、3-O-(3’-甲基咖啡酰)奎尼酸和5-O-(咖啡酰-4’-甲基)奎尼酸。
4.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述氯原酸类似物获自天然来源或者由合成制备。
5.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述氯原酸类似物的盐选自钠、钾和铵盐。
6.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述添加剂选自象蛋白质、碳水化合物、糖类这样的营养成分，滑石粉，硬脂酸镁，纤维素，碳酸钙，淀粉-明胶糊剂和/或药学可接受的载体，赋形剂，稀释剂或溶剂。
7.如权利要求1中所请求保护的组合物是经口服、静脉内、肌内或皮下途径给药的。
8.如权利要求1中所请求保护的组合物是以介于1和20mg每kg体重/天的剂量水平给药的。
9.如权利要求1中所请求保护的组合物，它给药至少四周，多至十二周。
10.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述组合物还可用于CML的复发病症。
11.如权利要求1中所请求保护的组合物，其中所述组合物抑制白血病细胞类型K562和Molt-4的生长。
12.如权利要求1中所请求保护的组合物，对浓度为104/孔的K562细胞的体外活性的IC50值高达27.0nanomole/ml。
13.如权利要求1中所请求保护的药物组合物用于治疗受试者中慢性髓细胞样白血病的用途，其中所述白血病中Bcr-Abl激酶在动物和人中组成型表达，所述组合物含有有效量的氯原酸类似物和/或其盐以及药学可接受的添加剂。
14.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述受试者选自哺乳动物，优选为人。
15.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述组合物还可用于由Abl型激酶过表达引起的疾病。
16.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述氯原酸类似物选自新氯原酸(5-O-咖啡酰奎尼酸)、隐氯原酸(4-O-咖啡酰奎尼酸)、3-O-(3’-甲基咖啡酰)奎尼酸和5-O-(咖啡酰-4’-甲基)奎尼酸。
17.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述氯原酸类似物获自天然来源或者由合成制备。
18.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述氯原酸类似物的盐选自钠、钾和铵盐。
19.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述添加剂选自象蛋白质、碳水化合物、糖类这样的营养成分，滑石粉，硬脂酸镁，纤维素，碳酸钙，淀粉-明胶糊剂和/或药学可接受的载体，赋形剂，稀释剂或溶剂。
20.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述组合物是经口服、静脉内、肌内或皮下途径给药的。
21.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述组合物是以介于1和20mg每kg体重/天的剂量水平给药的。
22.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述组合物给药至少四周，多至十二周。
23.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述组合物还可用于CML的复发病症。
24.如权利要求13所请求保护的用途，其中所述组合物抑制白血病细胞类型K562和Molt-4的生长。
25.如权利要求13所请求保护的用途，其中该组合物对浓度为104/孔的K562细胞的体外活性的IC50值高达27.0nanomole/ml。
26.一种治疗慢性髓细胞样白血病CML的方法，该白血病中Bcr-Abl激酶在动物和人中组成型表达，所述方法包括施用药物组合物，所述药物组合物含有有效量的氯原酸类似物和/或其盐以及药学可接受的添加剂。
27.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述组合物还可用于由Abl型激酶过表达引起的疾病。
28.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述氯原酸类似物选自新氯原酸(5-O-咖啡酰奎尼酸)、隐氯原酸(4-O-咖啡酰奎尼酸)、3-O-(3’-甲基咖啡酰)奎尼酸和5-O-(咖啡酰-4’-甲基)奎尼酸。
29.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述氯原酸类似物获自天然来源或者由合成制备。
30.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述氯原酸类似物的盐选自钠、钾和铵盐。
31.如权利要求26中所请求保护的方法，其中，所述添加剂选自象蛋白质、碳水化合物、糖类这样的营养成分，滑石粉，硬脂酸镁，纤维素，碳酸钙，淀粉-明胶糊剂和/或药学可接受的载体，赋形剂，稀释剂或溶剂。
32.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述组合物是经口服、静脉内、肌内或皮下途径给药的。
33.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述组合物是以介于1和20mg每kg体重/天的剂量水平给药的。
34.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述组合物给药至少四周，多至十二周。
35.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述组合物还可用于CML的复发病症。
36.如权利要求26中所请求保护的方法，其中所述组合物抑制白血病细胞类型K562和Molt-4的生长。
37.如权利要求26中所请求保护的方法，其中该组合物对浓度为104/孔的K562细胞的体外活性的IC50值高达27.0nanomole/ml。
全文摘要
本发明涉及可用于治疗慢性髓细胞样白血病的药物组合物，在该慢性髓细胞样白血病中，Bcr－Abl激酶在动物和人中组成型表达，所述组合物含有有效量的氯原酸类似物例如新氯原酸(5－O－咖啡酰奎尼酸)、隐氯原酸(4－O－咖啡酰奎尼酸)、3－O－(3’－甲基咖啡酰)奎尼酸和5－O－(咖啡酰－4’－甲基)奎尼酸和/或其盐例如钠、钾和铵以及药学可接受的添加剂。
文档编号A61P35/02GK1678300SQ03820559
公开日2005年10月5日 申请日期2003年1月10日 优先权日2002年7月8日
发明者S·班德约帕德亚, B·C·帕尔, S·巴塔查尔亚, K·C·洛伊, G·班德约帕德亚 申请人:科学与工业研究会