专利名称：提高栉孔扇贝免疫力的褐藻多糖复合剂的制备和投喂方法
技术领域：
本发明涉及一种免疫增强剂，是一种通过投喂提高三倍体和二倍体栉孔扇贝免疫力的褐藻多糖复合剂的制备和投喂方法。
背景技术：
贝类养殖在我国海水养殖业中占有重要地位，也是出口创汇的支柱产业之一。近年来，频繁发生的贝类大规模死亡事件，给中国的贝类养殖业造成了重大经济损失。至今，扇贝养殖业也未得到完全恢复。究其原因，扇贝的免疫防御能力下降是目前扇贝大规模死亡的重要原因。
采用免疫增强剂增强水产动物的抗疾病感染能力是有效解决养殖病害问题的重要途径。本发明在未作出之前，周永灿(海南大学)等，1997年在“贝类细胞和体液的防御机制研究进展”文中曾提出贝类非特异性的免疫因子，包括免疫相关酶类存在一定程度的可诱导性，通过注射诱导剂可以增加免疫因子的存在浓度和活性。孙虎山(烟台师范学院)等，2002年；牟海津(中国海洋大学)等，1999年在“硒化卡拉胶和酵母葡聚糖对栉孔扇贝血淋巴中两种水解酶活力的影响”和“免疫多糖对栉孔扇贝酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影响”等文中通过注射β-葡聚糖、硒化卡拉胶、虫草多糖、海藻多糖等多糖类物质对贝类免疫都表现出了一定的增强作用。但他们研究的多糖对扇贝的免疫增强作用均采用注射刺激的方法，对生产性问题未加以考虑，故技术内容难以在生产中推广使用。目前国内外对提高三倍体栉孔扇贝的免疫能力方面还未见报道。
发明内容
本发明的目的是通过投喂褐藻多糖类物质，提高三倍体与二倍体栉孔扇贝的免疫力，从而在一定程度上遏制扇贝在苗种和养殖生产过程中因存在免疫力下降而大面积死亡的问题，为扇贝养殖业的持续稳定发展提供了一条新的出路。
本发明是按照以下操作方法完成的褐藻多糖复合剂的制备褐藻多糖复合剂是由低分子量褐藻多糖和壳聚糖复合而成。先用蒸馏水配制5％的褐藻胶，按1∶20(V∶V)的比例加入褐藻胶裂合酶，降解2～4小时，4000rpm离心6～10分钟后收集上清液，获得低分子量的水溶性褐藻多糖。后将壳聚糖配制成1％的溶液，在连续搅拌状态下，按1∶5(W∶W)的比例加入到褐藻多糖水溶液中，形成非水溶性多糖复合物，多糖复合物从溶液中逐渐析出，经过滤、烘干等工艺后制备出粉末状的褐藻多糖复合剂。
褐藻多糖复合剂的投喂褐藻多糖复合剂投喂时，用海水浸湿后用500目筛绢洗搓，然后洗入海水中。扇贝换水后投喂褐藻多糖复合剂，每次投喂量为0.01～0.1g/L海水，每日投喂两次。在投喂多糖的同时进行饵料的正常投喂。
与已有技术对比，本发明技术具有如下特点1.利用低分子量褐藻多糖具有免疫增强作用的特点，通过与壳聚糖相互中和、包埋，从而转变为非水溶性物质，能够随扇贝的滤食作用而被摄入。
2.采用投喂的方法，使免疫多糖能够被扇贝摄入，从而简化了操作程序，适应于大规模培育扇贝的需要。
3.将免疫多糖应用到三倍体和二倍体栉孔扇贝生产和苗种培育中去，弥补在三倍体扇贝苗种生产中苗种成活率低的不足。本发明能够使三倍体苗种成活率提高10-20％。
实施方式下面通过实施例详细叙述本发明褐藻多糖复合剂的制备及投喂三倍体与二倍体栉孔扇贝的方法一、褐藻多糖复合剂的制备褐藻多糖复合剂是由低分子量褐藻多糖和壳聚糖复合而成。取50g褐藻胶，用蒸馏水配制成5％的褐藻胶底物，按1∶20(V∶V)的比例加入褐藻胶裂合酶于32℃降解2小时，4000rpm离心8分钟后收集上清液，获得低分子量的水溶性褐藻多糖。然后将壳聚糖配制成1％的溶液，在连续搅拌状态下，按1∶5(W∶W)的比例加入到褐藻多糖水溶液中，形成多糖复合物。低分子量褐藻多糖和壳聚糖经相互中和、包埋，从而转变为非水溶性多糖复合物。多糖复合物从溶液中逐渐析出，经过滤、烘干等工艺后制备出粉末状的褐藻多糖复合剂。
二、褐藻多糖复合剂投喂三倍体与二倍体栉孔扇贝褐藻多糖复合剂的投喂适合于在室内育苗和亲贝暂养时应用。
1.三倍体苗种生产中投喂褐藻多糖复合剂在三倍体扇贝苗种生产中投喂褐藻多糖复合剂要在幼虫达到150-160微米后进行。褐藻多糖复合剂投喂时，用海水浸湿后用500目筛绢洗搓，然后洗入海水中。扇贝换水后投喂褐藻多糖复合剂，每次投喂量为0.01g/L海水，每日投喂两次。在投喂多糖的同时进行饵料的正常投喂。
2004年按本发明的方法进行了养殖试验。试验在山东省长岛增殖试验站进行，试验池2个，每池水体20立方米。对照池一个，水体20立方米。试验池投喂褐藻多糖复合剂，结果表明，三倍体栉孔扇贝的成活率比对照提高14％。通过投喂的方式，由低分子量褐藻多糖和壳聚糖形成的非水溶性复合物，能够随扇贝的滤食作用而被摄入，从而简化了操作程序，适应于大规模培育扇贝的需要。
2.在亲贝培育中投喂褐藻多糖复合剂2004年4月在黄海水产研究所实验室内进行。在亲贝培育过程中也用海水浸湿后用500目筛绢洗搓，然后洗入海水中。褐藻多糖复合剂的投喂也采用每天两次，投喂量为0.1g/L海水。在投喂一个月以后，检测扇贝血细胞吞噬能力、肝脏酸性磷酸酶以及碱性磷酸酶的活性的免疫指标。发现投喂褐藻多糖复合剂能够显著增加扇贝的血细胞吞噬能力(见表1)、肝脏酸性磷酸酶(见表2)以及碱性磷酸酶(见表3)的活性。能够具有明显的免疫增强作用。
表1 多糖投喂对栉孔扇贝血细胞吞噬作用的影响投喂方式吞噬百分率(％)褐藻多糖复合剂 44.0±5.74对照 35.3±2.91表2 多糖投喂对栉孔扇贝肝脏ACP活力的影响投喂方式ACP活力(金氏单位/ml)褐藻多糖复合剂 1014.0±73.91对照 840.3±55.12表3 多糖投喂对栉孔扇贝肝脏ALP活力的影响投喂方式ALP活力(金氏单位/100ul)褐藻多糖复合剂 161.9±22.22对照 134.4±12.30从表1中看出投喂褐藻多糖复合剂后扇贝的血细胞吞噬百分率由对照组的35.3％±2.91％提高到44.0％±5.74％。从表2中看出投喂褐藻多糖复合剂扇贝的肝脏酸性磷酸酶的活性由对照组的840.3±55.12金氏单位/ml提高到1014.0±73.91金氏单位/ml。从表3中看出投喂褐藻多糖复合剂扇贝的碱性磷酸酶的活性由对照组134.4±12.30金氏单位/100ul提高到161.9±22.22金氏单位/100ul。
权利要求
1.一种提高栉孔扇贝免疫力的褐藻多糖复合剂的制备和投喂方法，其特征在于它的制备方法是它是由低分子量褐藻多糖和壳聚糖复合而成，先用蒸馏水配制5％的褐藻胶，按1∶20(V∶V)的比例加入褐藻胶裂合酶，降解2～4小时，4000rpm离心6～10分钟后收集上清液，获得低分子量的水溶性褐藻多糖，后将壳聚糖配制成1％的溶液，在连续搅拌状态下，按1∶5(W∶W)的比例加入到褐藻多糖水溶液中，形成非水溶性多糖复合物，多糖复合物从溶液中逐渐析出，经过滤、烘干等工艺后制备出粉末状的褐藻多糖复合剂。
2.一种提高栉孔扇贝免疫力的褐藻多糖复合剂的制备和投喂方法，其特征在于它的投喂方法是将褐藻多糖复合剂用海水浸湿后，用500目筛绢洗搓，然后洗入海水中，扇贝换水后投喂褐藻多糖复合剂，每次投喂量为0.01～0.1g/L海水，每日投喂两次，在投喂多糖的同时进行饵料的正常投喂。
全文摘要
一种提高栉孔扇贝免疫力的褐藻多糖复合剂制备和投喂方法，是将褐藻胶经酶解后形成低分子量的褐藻多糖，与壳聚糖相互中和制备成非水溶性的褐藻多糖复合剂；后将褐藻多糖复合剂用海水洗入。定量定时与饵料同时进行正常投喂，使褐藻多糖复合剂随扇贝的滤食而被摄入。褐藻多糖复合剂能够显著提高三倍体与二倍体栉孔扇贝的血细胞吞噬能力以及肝脏酸性磷酸酶、碱性磷酸酶的活性，增强其免疫功能和抗病力。本发明可适用于三倍体与二倍体栉孔扇贝苗种培育及亲贝培育，将有助于提高栉孔扇贝的抗病力和成活率，经生产应用，三倍体苗种成活率可提高10－20％。
文档编号A61K31/715GK1602890SQ20041002457
公开日2005年4月6日 申请日期2004年8月19日 优先权日2004年8月19日
发明者刘志鸿, 江晓路, 杨爱国 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所