专利名称：一种生长抑素的水溶液制剂、其制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物及其制剂领域。发明的核心在于提供了一种生长抑素的新制剂、其制备方法及其在制备用于预防和治疗严重急性食道静脉曲张出血、严重急性胃或十二指肠溃疡出血、急性糜烂性胃炎或出血性胃炎、胰腺外科术后并发症、胆或肠瘘、糖尿病酮症酸中毒等疾病的药物中的应用。
生长抑素为十四肽，其氨基酸顺序如下 生长抑素分子式为C76H104N18O19S2，分子量1638。
生长抑素是由D细胞分泌的一种环状多肽类激素，主要分布在胃肠道及中枢神经系统，其中胃肠道占70％，主要作用是抑制胃肠道粘膜的增殖、分泌和吸收，抑制胃泌素、胰泌素、胰高血糖素和生长激素的释放，称之为内分泌激素的总开关。Itztu等用免疫组化法发现大肠癌粘膜中存在D细胞，认为大肠粘膜中D细胞对其它激素的分泌可能有局部调节作用，如抑制G细胞中胃泌素mRNA的转录，从而抑制胃泌素的合成及释放。
生长抑素可抑制胃和胰液的分泌、刺激粘液分泌、降低门静脉压力、松弛胆道口括约肌(Oddi括约肌)、刺激单核巨噬细胞系统而减轻内毒素血症、抑制血小板活化因子的释放、直接或间接调节细胞因子链产生细胞保护作用等，可用于消化道出血、食管静脉曲张破裂出血、急性胰腺炎及胰腺术后并发症、胰、胆和肠瘘的治疗。由于生长抑素具有十分广泛的生物学作用，作为一种治疗药物其临床前景十分广阔。
生长抑素可抑制胃泌素和胃酸以及胃蛋白酶的分泌，从而治疗上消化道出血，可以明显减少内脏器官的血流量，而又不引起体循环动脉血压的显著变化，因而在治疗食道静脉曲张出血方面有一定的临床价值。
生长抑素还可以减少胰腺的内分泌和外分泌，用以预防和治疗胰腺外科手术后并发症。
生长抑素作为一种具有多种生理功能的多肽类激素，人们已经成功地将其开发成人用药品，其适应症包括1.严重急性食道静脉曲张出血；2.严重急性胃或十二指肠溃疡出血，或并发急性糜烂性胃炎或出血性胃炎；3.胰腺外科术后并发症的预防和治疗；4.胰、胆和肠瘘的辅助治疗；5.糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。
另外，Itztu等用免疫组化法发现大肠癌粘膜中存在D细胞，认为可能与肿瘤的发生与发展有关。生长抑素抗肿瘤作用的机理是生长抑素与癌细胞膜上特异性的生长抑素受体结合，产生直接的抗增殖效应，包括磷酸酪氨酸磷酸酶的激活，抑制cAMP及基因转录，抑制胃泌素、蛙皮素、表皮生长因子等的合成、释放及作用而具有间接的抗增殖作用，还能抑制与肿瘤有关的血管形成。已经有多篇文献报道用生长抑素治疗肝癌和神经内分泌肿瘤如胰岛肿瘤等。
综上所述，生长抑素有非常广泛的应用前景。
和其它多肽类物质一样，生长抑素在制剂方面受限于在水溶液中的稳定性等因素，目前市场上仅有生长抑素的冻干粉针剂，这种剂型在使用时需要进行溶解，在增加了操作步骤的同时也增加了药品污染的机会。本发明正是针对目前生长抑素剂型单一的状况，创制了生长抑素的水溶液制剂，解决了生长抑素在水溶液中的稳定性问题，这是本发明的主要目的。
本发明设计思路、研究内容和技术方案本发明主要内容包括制剂工艺的研制、稳定性考察和药理学研究三个部分。其中，生长抑素在水溶液制剂中的稳定性是需要重点解决的问题。
根据人用水溶液制剂研究的要求，该溶液型制剂应该是澄明、安全、无害、稳定性好的溶液。溶剂可以是水性也可以是非水性的，水性溶剂最常用的是注射用水。根据活性药物的特点，可以选择各种药用辅料，如渗透压调节剂、增溶剂、抗氧化剂、助溶剂、pH值调节剂等等。结合生长抑素的特点，我们主要考虑了应用了以下辅料渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧化剂和防腐剂。
可选的渗透压调节剂可以是但不仅限于氯化钠等无机盐类化合物；可选的pH值调节剂可以是但不仅限于磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液等；可选的增溶剂或者助溶剂可以是但不仅限于甘氨酸等20种人体氨基酸及其盐(如半胱氨酸、亮氨酸、蛋氨酸等)、各种环糊精、甘油(或者山梨醇、聚乙二醇、丙二醇)等碳水化合物、各种环糊精、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆等等；可选的抗氧化剂可以是但不仅限于乙二胺四乙酸及其盐、抗坏血酸、柠檬酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、蛋氨酸等等；可选用的防腐剂可以是但不仅限于肉桂醇、甲酸等等。
经过大量的正交试验表明，上述辅料对生长抑素有很好的稳定效果。其中，优选的pH值调节剂是磷酸缓冲液、优选的增溶剂是环糊精类化合物，优选的渗透压调节剂是氯化钠，优选的抗氧化剂是EDTA二钠。
在处方中生长抑素和辅料用量组成方面，生长抑素可以是0.1-1000mg/支，例如0.5、1、2、5、10、20、50、100、250、500mg/支。单位制剂的体积可以是0.1-500ml。
一个优选的处方方案是0.25-250mg生长抑素、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠。更优选的方案是0.25-10mg生长抑素、10-30mmol/L磷酸缓冲液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-2％的氯化钠。最优选的方案是3mg生长抑素、20mmol/L磷酸缓冲液、2mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.7％的氯化钠，制剂规格是3mg∶1ml/支。
另一个优选的处方方案是0.25-250mg生长抑素、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠、0.1-10％羟丙基β环糊精。在此基础上，更优选的组分方案是0.25-10mg生长抑素、10-30mmol/L磷酸缓冲液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-2％的氯化钠、0.5-5％羟丙基β环糊精。最优选的组分方案是3mg生长抑素、20mmol/L磷酸缓冲液、2mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.7％的氯化钠、2％羟丙基β环糊精，制剂规格是3mg∶1ml/支。
上述制剂处方可以通过如下工艺进行配制(1)在100级层流下按投料量称取所需的氯化钠、十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠、乙二胺四乙酸二钠，装入适宜的容器中，加计算量灭菌注射用水使溶解立即使用。
(2)将处方量生长抑素加入缓冲液，溶解后摇匀，超滤柱超滤除热原，再用高压蒸汽灭菌过的滤器(0.22μm、0.45μm双层滤膜)过滤除菌，封口，准备分装。
(3)分装前先用灭菌注射用水按每支1ml调整剂量，剂量调整合格后，换药液分装。全加塞后，将药瓶送入上瓶轨道，进行压盖。
(4)启动轧盖机，药瓶随转盘进入轨道，铝盖经轨道加至药瓶上，并被机头锁紧。轧盖后铝盖应严密、边缘整齐。
至此，我们的发明完成了制剂制备工艺的设计和研究，开始考察制剂的稳定性。实验用样品来自实施例1所制备的产品。
按照相应的研究要求，稳定性研究我们主要考察了外观性状、pH值、溶液的澄清度与颜色、有关物质、含量、澄明度检查、细菌内毒素和无菌。主要进行了影响因素试验、加速试验和长期试验。
影响因素试验主要考察因素是高温和强光照射。
取本品一批分别于光照(4000Lx)、高温(40℃)条件下放置，并于5、10天取样分析，考察性状、相关肽、含量。结果表明，本品经光照后pH值明显下降，有关物质增加，含量明显下降，因此本品应遮光保存。高温40℃实验结果表明，本品经高温40℃10天后，pH值下降，有关物质增加，含量下降。结果如表1、表2。
表1 光照试验稳定性考察结果
表2 高温试验稳定性考察结果(40℃)
加速试验将本品置于温度25℃±2℃，RH 60±10％的环境中，放置6个月，分别于第1个月，2个月，3个月，6个月末取样，按稳定性重点考察项目进行检测。试验结果见表3。
表3 加速试验考察结果(25℃±2℃，RH60±10％)
加速试验结果表明，生长抑素水溶液在此条件下放置6个月，pH值下降，有关物质增加，含量下降，说明本品属对温度特别敏感的制剂，需放冷处保存。
长期试验将本品置于温度2℃-10℃条件下放置，每3个月取样一次，分别于0个月、3个月、6个月、9个月按稳定性重点考察项目检测。试验结果见表4。
表4 长期试验考察结果(2℃-10℃)
结果表明，生长抑素水溶液在长期试验条件下放置6个月，各项指标均无明显改变，说明本品稳定性良好。
稳定性试验结论影响因素试验结果表明，生长抑素水溶液在光照或者高温40℃条件下放置后pH值下降，含量下降，有关物质增加；在加速试验条件(25℃±2℃，RH 60±10％)放置6个月，PH值下降，含量下降，有关物质增加；在长期试验条件(2℃-10℃，)放置6个月，各项指标均无明显改变。确定本品应在遮光、冷处(2-10℃)保存。02批样品在9个月时的含量检测液相图谱见说明书附
图1。
本发明的另一部分内容是考察所述水溶液注射制剂的药理学。药理学研究的主要目的是比较这种剂型与已有生长抑素冻干粉针剂型的生物活性。通过比较发明所述制剂与市售品的活性来推断该制剂在治疗生长抑素的适应症时与现有制剂的等效性，并以此来确定该制剂的实用性。为此我们采用了胰腺炎治疗试验。
生长抑素对急性胰腺炎的治疗作用仪器、动物和试剂SD大鼠40只、TNFα放免测定试剂盒、微量输液泵、蛙皮素等。
药品及编号本发明实施例制备的01号样品、生长抑素冻干粉(商品名施他宁)。
试验分组健康雄性SD大鼠40只，军事医学科学院动物中心提供，体质量(250±20)g。随机分为4组，每组10只阴性对照组、模型组、01号样品治疗组、施他宁治疗组。
实验步骤动物饲养于实验室1周，适应环境。实验前12h禁食，自由饮水。所有实验动物腹腔内注射戊巴比妥(50mg/kg)麻醉，皮下注射蛙皮素10μg/kg·h，共5次。正常对照组皮下注射同等量生理盐水。两个治疗组经颈外静脉插管，于诱导急性胰腺炎的同时静脉输注生长抑素，首次剂量10μg/kg，后持续静脉滴注10μg/kg·h，共7h。于实验开始后10h处死动物，心脏取血，分离血清，置于-70℃冰箱保存待检测TNFα。打开腹腔，取出胰腺称湿质量，计算胰腺/体质量值(MP/MB)。TNFα依放免试剂盒操作说明进行。各实验结果以均数±标准差表示，组间显著性差异检验用T检验，结果如下表5。
表5.生长抑素对急性胰腺炎的治疗作用(均数±标准差，n＝6)
注**表示与模型组比p＜0.01.
结果表明，本发明提供的生长抑素水溶液与传统的冻干粉针剂具有同样的治疗作用，两个治疗组之间无统计学差别。
综上所述，本发明提供了一个生长抑素的新剂型，该剂型生产工艺比现有的冻干粉针剂生产工艺简单，在生产上易于放大，优势明显，便于产业化的实现；同时，在生物活性和制剂稳定性方面，如权利要求和说明书所述的剂型稳定性好，能够长期储存，其活性与现有冻干粉针剂相同。因此本发明很好地体现了新颖性、创造性和实用性的专利要素。
为了更好地说明本专利的实施过程，我们列举如下实施例。需要说明的是，所列举的实施例是本发明思路和精神的具体体现之一，并不是对发明专利说明书内容的范围限制，更不是对权利要求的细化。在本发明思路下，任何本专利描述的生长抑素的水溶液产品(注射剂、喷雾剂、滴剂等)都应该包含在本专利的范围内。
实施例1、权利要求7所述药物制剂的制备精密称定氯化钠7.0g、磷酸氢二钠(含12结晶水)4.37g、磷酸二氢钠(含2结晶水)1.22g、乙二胺四乙酸二钠1.28g、生长抑素3.0g，溶解于注射用水，最后定溶至1000ml，用2ml西林瓶分装成1000支。最终规格为3mg/支。按照该处方总共生产样品3批，编号分别为01、02、03。操作程序按照说明书描述执行。
实施例2、权利要求10所述药物制剂的制备精密称定氯化钠7.0g、磷酸氢二钠(含12结晶水)4.37g、磷酸二氢钠(含2结晶水)1.22g、乙二胺四乙酸二钠1.28g、生长抑素3.0g、羟丙基β环糊精20g，溶解于注射用水，最后定溶至1000ml，用2ml西林瓶分装成1000支。最终规格为3mg/支。按照该处方总共生产样品1批，编号04。操作程序按照说明书描述执行。
权利要求
1.一种生长抑素的水溶液制剂。
2.权利要求1所述的制剂，其特征是由生长抑素、适宜的药用辅料和水组成。
3.权利要求2所述的制剂，其特征是生长抑素的含量可以是0.1-1000mg/支，例如0.25、0.5、1、2、5、10、20、50、100、250、500mg/支。
4.权利要求3所述的制剂，其药用辅料可以选用但不仅限于甘油(或者甘露醇、山梨醇、聚乙二醇)等糖类化合物、各种环糊精、甘氨酸等20种人体氨基酸、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆、磷酸盐(或者醋酸盐、柠檬酸盐)等缓冲盐类、乙二胺四乙酸及其盐等等中的一种或者几种的组合。
5.权利要求4所述的制剂，其中一个优选的组分方案是0.25-250mg生长抑素、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠。
6.权利要求5所述的制剂，其更优选的组分方案是0.25-10mg生长抑素、10-30mmol/L磷酸缓冲液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-2％的氯化钠。
7.权利要求5所述的制剂，其最优选的方案是3mg生长抑素、20mmol/L磷酸缓冲液、2mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.7％的氯化钠，制备成规格为3mg∶1ml/支的制剂。
8.权利要求4所述的制剂，其义一个优选的组分方案是0.25-250mg生长抑素、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠、0.1-10％羟丙基β环糊精。
9.权利要求8所述的制剂，其更优选的组分方案是0.25-10mg生长抑素、10-30mmol/L磷酸缓冲液、0.5-5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.5-2％的氯化钠、0.5-5％羟丙基β环糊精。
10.权利要求8所述的制剂，其最优选的处方方案是3mg生长抑素、20mmol/L磷酸缓冲液、2mmol/L的乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、0.7％的氯化钠、2％羟丙基β环糊精，制备成规格为3mg∶1ml/支的制剂。
11.权利要求1、2、3、4、5、6、8、9所述的制剂，其单位制剂体积可以是0.1-500ml。
12.权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11所述的制剂，可以通过配液、除菌、分装、压盖等步骤制得。
13.权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12所述的制剂，可以加工成注射剂、喷雾剂、滴剂和其它可以接受的水溶液剂型。
14.权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13所述的制剂在制备用于预防和治疗严重急性食道静脉曲张出血、严重急性胃或十二指肠溃疡出血、急性糜烂性胃炎或出血性胃炎、胰腺外科术后并发症、胆或肠瘘、糖尿病酮症酸中毒等疾病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种生长抑素的水溶液制剂、其制备方法及其在制备用于预防和治疗严重急性食道静脉曲张出血、急性胃或十二指肠溃疡出血、急性糜烂性胃炎或出血性胃炎、胰腺外科术后并发症等疾病的药物中的应用。该制剂由生长抑素、药用辅料和水组成。其中生长抑素的规格可以是0.1－1000mg/支，单位制剂体积可以是0.1－500ml。辅料可以选用但不仅限于甘露醇或者聚乙二醇等碳水化合物、各种环糊精、甘氨酸等20种人体氨基酸、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆、磷酸盐或者醋酸盐等缓冲盐类等等。该制剂的制备方法包括配液、除菌、分装、压塞和包装等步骤。该水溶液制剂具有稳定性好、制备方便的特点，能很好保持生长抑素的结构和活性，在制备用于预防和治疗严重急性食道静脉曲张出血、严重急性胃或十二指肠溃疡出血、急性糜烂性胃炎或出血性胃炎、胰腺外科术后并发症、胆或肠瘘、糖尿病酮症酸中毒等疾病的药物中应用前景广泛。
文档编号A61K9/12GK1739789SQ200510102990
公开日2006年3月1日 申请日期2005年9月16日 优先权日2005年5月11日
发明者徐明波, 吴彦卓, 王勇波, 杨仲凡, 何瑞峰, 刘成东, 李振武, 尚海花, 邵兵, 王俊玲, 邓迪歌, 蔡祥胜 申请人:北京双鹭药业股份有限公司