专利名称：一种瓜蒌皮的药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种瓜蒌皮的药物组合物，特别是一种注射用瓜蒌皮冻干粉针剂组合物及其制备方法。
背景技术：
瓜蒌皮为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichos-anthes rosthornii Harms的干燥成熟果皮。秋季采摘成熟果实，剖开，除去果瓤及种子，阴干即得，多产于湖南、湖北、贵州、四川等地。瓜蒌含三萜皂苷、有机酸、树脂、糖类、色素等，种子含有脂肪油。传统医学认为瓜蒌皮甘、微苦，寒，入肺、胃及大肠经。具有宽胸散结，润肺祛痰，滑肠通便的功效。传统用于痰热咳嗽，心胸闷痛，乳腺炎症，液干便秘。
现代研究表明，瓜蒌皮多含各种氨基酸和挥发性成分，临床开发有瓜蒌皮注射液的应用。瓜蒌皮注射液具有扩张冠状动脉、增加血流量、改善心肌缺血微循环的作用，特别是对抗垂体后叶素所致的急性心肌缺血有明显的保护作用。临床文献报道，120例冠心病心绞痛患者，治疗组应用瓜蒌皮注射液治疗量10ml，加入0.9％生理盐水或5％葡萄糖注射液150ml静滴，15d为1个疗程。对照组口服单硝酸异山梨酯20mg/次，3次/天，15d为1个疗程；或加服异博定5mg/次，2次/天，15d为1个疗程。结果表明在症状上，治疗组与对照组疗效经过统计学处理，差异有显著性(P＜0.05)，说明瓜蒌皮注射液治疗心绞痛作用优于单硝酸异山梨酯及异博定。临床结果显示治疗组总有效率高达95％，明显优于对照组。
瓜蒌皮注射液临床应用多年，疗效得到了确证。但是限于当时的技术和认知水平不可避免的存在着一些缺陷，主要表现在1)注射液的剂型因为要经过灭菌的工艺，存在有效成分高温损失的问题；2)注射液不容易保存、运输、一些特殊条件不能应用(例如极低温环境)；3)稳定性较差，长时间放置有可能产生浑浊。这些都严重影响着瓜蒌皮的临床应用，甚至产生临床不良反应。我们创造性地将新型冻干粉的剂型应用到瓜蒌皮注射制剂中，一般认为普通技术人员并不能预测瓜蒌皮改为注射用冻干粉所遇到的问题，并且我们通过大量的实验尝试确证注射用瓜蒌皮冻干粉的制备工艺，这也不是普通技术人员不通过创造性的劳动就能解决得。
发明内容
本发明的目的之一是克服现有瓜蒌皮注射液的不足，提供一种注射用瓜蒌皮冻干粉针剂，本发明的另一个目的是提供该注射用瓜蒌皮冻干粉的制备方法。
为了达到上述技术目的，我们采取了以下技术手段我们提供了一种瓜蒌皮的药物组合物，是注射用冻干粉针剂，由瓜蒌皮的提取物5-100％重量份，药学上可接受的药用辅料0-95％重量份组成。
优选由瓜蒌皮的提取物5-20％重量份，药学上可接受的药用辅料80-95％重量份组成。
其中所述的瓜蒌皮提取物中总氨基酸的含量以精氨酸计为25％以上。优选瓜蒌皮提取物中总氨基酸的含量以精氨酸计不低于80％。
我们提供的注射用瓜蒌皮冻干粉每支装量瓜蒌皮提取物不少于35mg。
本发明所述的瓜蒌皮药物组合物，其中瓜蒌皮提取物可以是以下方法制备的取处方量瓜蒌皮加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，分次滤过，合并滤液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇，通过732型阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用1mol/L氨溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物；其中药学上可接受的辅料包括冻干用的骨架支撑剂，可以是甘露醇、乳糖、甘露糖、山梨醇、低分子右旋糖苷中的一种或几种。
优选骨架支撑剂使用甘露醇，且冻干前甘露醇的浓度为4-12％。优选甘露醇冻干前的浓度为8％。
为了增加药品的稳定性组合物中还可以添加药学上接受的增溶剂和抗氧化剂。
我们提供了注射用瓜蒌皮冻干粉的制备方法，包括以下步骤1)取处方量瓜蒌皮加水煎煮三次，合并三次提取液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)的清膏，加入高浓度乙醇使含醇量达60-80％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇至无醇味，通过阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用氨水溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物；2)将瓜蒌皮提取物充分溶解于注射用水中，用盐酸调节pH值至3-4，冷藏24小时，滤过，滤液加入注射用辅料，用氢氧化钠试液调节pH值至6.0-7.5，精滤，分装，冻干即得。
我们提供了注射用瓜蒌皮冻干粉还可以通过下面的方法获得1)取处方量瓜蒌皮加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，分次滤过，合并滤液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)的清膏，加入90％乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇，通过732型阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用1mol/L氨溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物。
2)取步骤1)的瓜蒌皮提取物充分溶解于注射用水中，用盐酸调节pH值至3-4，冷藏24小时，滤过，滤液用氢氧化钠试液调节pH值至7.0，活性炭脱碳后精滤，分装，冻干即得。
为了得到稳定性更好的制剂上面的方法还可以包括超滤的步骤，是指步骤2)中冷藏24小时后，续滤液过5000的超滤膜超滤，超滤液再用氢氧化钠试液调节pH值至6.0-7.5，精滤，分装，冻干即可。
实验中我们发现冻干前调节pH值至7.0，对于冻干粉的再溶解有很好的帮助。
本发明还提供了所述的瓜蒌皮药物组合物在制备治疗心脑血管疾病方面药物中的应用。其中瓜蒌皮提取物每日使用剂量为150mg至400mg。优选瓜蒌皮提取物每日使用剂量为200mg。
通过大量的实验我们成功的制备了注射用瓜蒌皮的粉针剂，并且提供了注射用瓜蒌皮冻干粉的制备方法。该方法工艺稳定、重现性好，达到了优选的目的，优选的增加超滤步骤使制剂稳定性显著提高，并且在保证有效成分的基础上降低了固形物，降低了颜色。冻干粉的剂型成功地解决了原瓜蒌皮注射液存在的问题，药理实验证明我们制备的注射用瓜蒌皮冻干粉具有很好的治疗心脑血管疾病的疗效，尤其对小鼠的耐缺氧和缺血再灌注损伤的保护表现出很好的效果。
具体实施例实施例1注射用瓜蒌皮冻干粉的制备取5kg瓜蒌皮加水煎煮三次，每次10倍量，第一次2小时，第二、三次各1小时，分次滤过，合并滤液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)(实测值1.20)的清膏，加入95％药用乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇，通过预处理好的732型阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用1mol/L氨水溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物。
将瓜蒌皮提取物充分溶解于500ml注射用水中，用盐酸调节pH值至3-4，冷藏24小时，滤过，滤液加入甘露醇60g，充分溶解后补充注射用水至1000ml，用氢氧化钠试液调节pH值至7.0，活性炭脱碳后精滤，分装至7ml西林瓶中，每支4ml，冻干即得。
实施例2注射用瓜蒌皮冻干粉的制备参照实施例1的方法，处方为瓜蒌皮5000g甘露醇40g制成1000ml，装量4ml。
实施例3注射用瓜蒌皮冻干粉的制备参照实施例1的方法，处方为瓜蒌皮5000g甘露醇80g亚硫酸氢钠1g制成1000ml，装量4ml。
实施例4注射用瓜蒌皮冻干粉的制备参照实施例1的方法，处方为瓜蒌皮5000g甘露醇100g波罗沙姆5g制成1000ml，装量4ml。
实施例5注射用瓜蒌皮冻干粉的制备参考实施例1的方法，处方为瓜蒌皮5000g
右旋糖苷100g制成1000ml，装量4ml。
实施例6注射用瓜蒌皮冻干粉的制备取5kg瓜蒌皮加水煎煮三次，每次10倍量，第一次2小时，第二、三次各1小时，分次滤过，合并滤液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)(实测值1.20)的清膏，加入95％药用乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇，通过预处理好的732型阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用1mol/L氨水溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物。
将瓜蒌皮提取物充分溶解于500ml注射用水中，用盐酸调节pH值至3-4，冷藏24小时，滤过，续滤液过5000的超滤膜超滤，超滤液加入甘露醇60g，充分溶解后补充注射用水至1000ml，用氢氧化钠试液调节pH值至7.0，活性炭脱碳后精滤，分装至7ml西林瓶中，每支3ml，冻干即得。
实施例7注射用瓜蒌皮冻干粉对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究实验药物本发明注射用瓜蒌皮冻干粉(广东中科药物研发有限公司提供)。实验中加入注射用水按所需溶解配制得瓜蒌皮注射液。
丹参注射液生理盐水实验动物Wistar II级大白鼠50只，雌雄各半，体重200g-250g实验方法以冠脉结扎法制造大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉(30mg/kg)，置于大鼠手术台上固定仰卧位固定，纵形切开颈部皮肤，钝性分离气管周围组织，暴露气管，行气管内插管，并确认插入气管中，后缝线固定插管于大鼠嘴旁。于大鼠腋下平行线，左侧横行切开皮肤约1.5cm，在第4或第5肋间钝性分离肌层，打开胸腔，紧接上动物呼吸机，辅助大鼠呼吸。剪开心包，轻压右侧胸廓，挤出心脏，在肺动脉圆锥右缘、平左心耳下缘1-2mm处，经左冠状动脉下浅层心肌穿5/0号线，连同一直径2mm聚氯乙烯管结扎冠状动脉左前降支，造成心肌缺血。结扎冠脉后1小时，用眼科剪剪开聚氯乙管同时剪断丝线，使缺血心肌恢复血流灌注，再灌注3小时后结束实验。整个实验过程中用SUMP-PC型四道生物信号采集处理连续记录标准肢体II导ST段抬高或降低为模型成功的标志。
实验分组随机将50只大鼠分为5组，每组10只。①假手术组仅切开胸腔，暴露心脏，穿线但不结扎冠状动脉，腹腔注射等渗盐水2ml。②模型组穿线结扎冠状动脉，立即腹腔注射等渗盐水2ml后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。③低剂量组穿线结扎冠状动脉，立即腹腔注射瓜蒌注射液(1g生药/kg)后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。④高剂量组穿线结扎冠状动脉，立即腹腔注射配制的瓜蒌皮注射液(3g生药/kg)后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。⑤丹参注射液对照组穿线结扎冠状动脉，立即腹腔注射丹参注射液(0.2g生药/kg)后，制作成缺血1h、再灌注3h大鼠模型。
检测指标(1)大鼠血清CPK，LDH，SOD，MDA活性测定，再灌注结束后即刻从取血5ml分离血清，磷酸肌酸激酶(CPK)和乳酸脱氢酶(LDH)按试剂盒说明测定酶活性，SOD，丙二醛(MDA)根据试剂盒操作，用UV-754型紫外可见分光光度计检测血清SOD活性和MDA含量。结果见表1。
(2)心肌组织中NO、NOS、SOD、MDA含量的检测，再灌注结束后将制造模型成功的大鼠处死，迅速取心脏组织，用冰生理盐水冲洗干净心肌组织血迹，在4℃条件下制成10％的心肌匀浆后，4000r/min离心10min，取上清液。根据试剂盒说明测定心肌NO、NOS、SOD活性和MDA含量。结果见表2。
表1注射用瓜蒌皮冻干粉对大鼠心肌缺血再灌注损伤血清中CPK，LDH，SOD，MDA的影响
注与模型组比较△P＜0.05 △△P＜0.01表2注射用瓜蒌皮冻干粉对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌组织NO，NOS，SOD，MDA的影响
注与模型组比较△P＜0.05△△P＜0.01实施例8注射用瓜蒌皮冻干粉对小鼠耐缺氧的影响实验药物本发明注射用瓜蒌皮冻干粉(广东中科药物研发有限公司提供)。实验中加入注射用水按所需溶解配制得瓜蒌皮注射液。
生理盐水丹参注射液实验动物Wistar II级大白鼠40只，雌雄各半，体重200g-250g实验方法取Wistar小鼠40只，随机分为正常对照组(生量盐水)、瓜蒌皮注射液高剂量组(3g生药/kg)、瓜蒌皮注射液小剂量组(1g生药/kg)、丹参注射液组(0.2g生药/kg)，每组10只。各药物组按0.2ml/10g体重，分别给各组药液，腹腔注射，给药30min后，每只小鼠分别腹腔注射异丙肾上腺素0.1ml/10g体重，然后，将小鼠放入密闭的容器瓶中，记录小鼠死亡时间。结果见表3。
表3注射用瓜蒌皮冻干粉对小鼠耐缺氧的影响(x±s，min)
注与正常组对比，*P＜0.05，**P＜0.01。
权利要求
1.一种瓜蒌皮的药物组合物，是注射用冻干粉针剂，由瓜蒌皮的提取物5-100％重量份，药学上可接受的药用辅料0-95％重量份组成。
2.如权力要求1所述的药物组合物，其特征是由瓜蒌皮的提取物5-20％重量份，药学上可接受的药用辅料80-95％重量份组成。
3.如权力要求1或2所述的药物组合物，其特征是瓜蒌皮提取物中总氨基酸的含量以精氨酸计为25％以上。
4.如权力要求3所述的药物组合物，其特征是每支装量瓜蒌皮提取物不少于35mg。
5.如权力要求3所述的瓜蒌皮的药物组合物，其特征是瓜蒌皮提取物中总氨基酸的含量以精氨酸计为80％以上。
6.如权力要求3所述的药物组合物，其特征是瓜蒌皮提取物是通过以下方法制备的取处方量瓜蒌皮加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，分次滤过，合并滤液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇，通过732型阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用1mol/L氨溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物；药学上可接受的辅料包括冻干用的骨架支撑剂，可以是甘露醇、乳糖、甘露糖、山梨醇、低分子右旋糖苷中的一种或几种。
7.如权力要求6所述的药物组合物，其特征是骨架支撑剂使用甘露醇，且冻干前甘露醇的浓度为4-12％。
8.如权力要求7所述的药物组合物，其特征是甘露醇冻干前的浓度为8％。
9.如权力要求6所述的药物组合物，其特征是药学上可接受的辅料还包括药学上接受的增溶剂和抗氧化剂。
10.一种注射用瓜蒌皮冻干粉的制备方法，其特征是包括以下步骤1)取处方量瓜蒌皮加水煎煮三次，合并三次提取液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)的清膏，加入高浓度乙醇使含醇量达60-80％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇至无醇味，通过阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用氨水洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物；2)将瓜蒌皮提取物充分溶解于注射用水中，用盐酸调节pH值至3-4，冷藏24小时，滤过，滤液加入注射用辅料，用氢氧化钠试液调节pH值至6.0-7.5，精滤，分装，冻干即得。
11.如权力要求10所述的注射用瓜蒌皮冻干粉的制备方法，其特征是包括以下步骤1)取处方量瓜蒌皮加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，分次滤过，合并滤液并减压浓缩至相对密度为1.10-1.25(30℃)的清膏，加入90％乙醇使含醇量达70％，静置24小时，取上清液，滤过，回收乙醇，通过732型阳离子交换树脂，用注射用水适量洗涤树脂，再用1mol/L氨溶液洗脱，收集洗脱液，减压除去氨味，并浓缩至稠膏后真空干燥，得瓜蒌皮提取物。2)取步骤1)的瓜蒌皮提取物充分溶解于注射用水中，用盐酸调节pH值至3-4，冷藏24小时，滤过，滤液用氢氧化钠试液调节pH值至7.0，活性炭脱碳后精滤，分装，冻干即得。
12.如权力要求10或11所述的注射用瓜蒌皮冻干粉的制备方法，其特征是还包括超滤的步骤，是指步骤2)冷藏24小时滤过后过5000的超滤膜超滤，超滤液再用氢氧化钠试液调节pH值至6.0-7.5，精滤，分装，冻干即可。
13.如权力要求1-9所述的瓜蒌皮药物组合物在制备治疗心脑血管疾病方面药物中的应用。
14.如权力要求13所述的瓜蒌皮药物组合物在制备治疗心脑血管疾病方面药物中的用途，其特征是瓜蒌皮提取物每日使用剂量为150mg至400mg。
15.如权力要求14所述的瓜蒌皮药物组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用，其特征是瓜蒌皮提取物每日使用剂量为200mg。
全文摘要
本发明涉及一种瓜蒌皮的药物组合物，是注射用冻干粉针剂，由瓜蒌皮的提取物5－100％重量份，药学上可接受的药用辅料0－95％重量份组成。本发明提供的冻干粉的剂型成功地解决了原瓜蒌皮注射液存在的问题，药理实验证明我们制备的注射用瓜蒌皮冻干粉具有很好的治疗心脑血管疾病的疗效，试验中发现对小鼠的耐缺氧和缺血再灌注损伤的保护表现出很好的效果。本发明的注射用瓜蒌皮冻干粉工艺先进、疗效确切便于运输和保存。
文档编号A61P9/10GK1823875SQ20051012113
公开日2006年8月30日 申请日期2005年12月27日 优先权日2005年12月27日
发明者王伟, 刘二伟 申请人:广东大光药业有限公司