专利名称：用活性的维生素d化合物预防动脉再狭窄的制作方法
发明
背景技术：
领域本发明涉及通过对动物给予活性的维生素D化合物来预防、治疗或改善该动物在血管成形术后的动脉再狭窄的方法。本发明还涉及通过对动物联合给予活性的维生素D化合物和其它治疗剂来预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄的方法。本发明的再一方面提供了在动物中的动脉旁路移植物中和/或其周围预防、治疗或改善狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物活性的维生素D化合物。
相关技术动脉粥样硬化是心血管疾病的主要原因之一。由于血管成形术治疗动脉粥样硬化病变与旁路手术相比恢复时间较短且价格较低，该方法已日趋普及。(参见Harrison′s Principles of Internal MedicinePart Eight，″CoronaryAngioplαsty and Other Therapeutic Applications of Cardiac Catheterization，″Chapter 245，pp.1375-1379，A.S。Fauci等编，McGraw-Hill，纽约(1998))。美国每年进行超过400,000例的经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)手术，超过了旁路手术的数量。
虽然PTCA的初期成功率很高(大于90％)，但6个月内在30-45％的患者中会发生扩张区段的再狭窄。这就导致了需要重复进行血管成形术或旁路手术。再狭窄大部分是因动脉内膜层在对损伤的反应中所发生的平滑肌细胞过度增殖而导致的。血管形成术后的再狭窄不仅会在动脉中发生，还会在旁路手术中所用的移植物中发生。在动脉旁路移植物中所发生的类似过度增殖性反应(可能由手术造成的损伤引起)，导致了移植物内和/或周围的狭窄。
外周动脉也会发生动脉粥样硬化，尤其是在老年人中。动脉粥样硬化病变最常见的部位是髂动脉、股动脉和腘动脉，但病变也可发生在其它动脉中，例如发生于主动脉、脑动脉、颈动脉、肺动脉和肾动脉。对这些动脉堵塞的血管成形术获得了很高的早期成功率(大于80％)，但普遍会发生再狭窄。
在血管成形术的某些条件下，在术后会插入管状金属或聚合物支架以防止血管的弹性回缩并提供较大的内腔，从而将患者中的再狭窄机率降低到20-30％。可用一种或多种抑制细胞增殖的药物对支架进行涂覆或浸渍以防止或改善支架中的再狭窄(Regar等，Br.Med.Bull.59227-48(2001))。然而，支架中的再狭窄仍然频繁发生。
维生素D是一种必需的作为钙体内平衡的正调节剂的脂溶性维生素(见Harrison′s Principles of Internal MedicinePart Thirteen，″Disorders of Bone andMineral Metabolism，″第353章，第2214-2226页，A.S.Fauci等编，McGraw-Hill，纽约(1998))。维生素D的活性形式是1α，25-二羟基维生素D3(也称为钙三醇)。已从不参与钙体内平衡的各种器官的细胞中发现了对于活性的维生素D化合物的特异性核受体(Miller等，Cancer Res.52515-520(1992))。除了影响钙体内平衡外，活性的维生素D化合物还涉及骨形成、免疫反应的调节、胰腺B细胞分泌胰岛素过程的调节、肌细胞的机能以及表皮和造血组织的分化和生长。
另外，已有许多报道证实了活性的维生素D化合物在治疗过度增殖性疾病(例如癌症和牛皮癣)中的用途。例如，现已表明某些维生素D化合物和类似物通过诱导恶性细胞(具体是白血病细胞)分化成非恶性巨噬细胞(单核细胞)而具有很强的抗白血病活性，从而可用于治疗白血病(Suda等人，美国专利No.4,391,802；Partridge等，美国专利No.4,594,340)。还报道了钙三醇和其它维生素D3类似物在治疗前列腺癌方面的抗增殖和分化作用(Bishop等人，美国专利No.5,795,882)。活性的维生素D化合物也参与了皮肤癌的治疗(Chida等，CancerResearch 455426-5430(1985))、结肠癌的治疗(Disman等，Cancer Research4721-25(1987))和肺癌的治疗(Sato等人，Tohoku J.Exp.Med.138445-446(1982))。提示活性的维生素D化合物的重要治疗用途的其它报道归纳总结在Rodriguez等的美国专利No.6,034,079中。
已将活性的维生素D化合物与其它药物制剂(尤其是细胞毒剂)联合用于治疗增殖性疾病。例如，已表明用活性的维生素D化合物预处理过度增殖细胞，然后再用细胞毒剂处理，可增强细胞毒剂的效力(美国专利No.6,087,350和6,559,139)。
尽管活性的维生素D化合物的给药可得到显著的治疗效果，但是用该化合物治疗癌症受到了这些化合物对钙代谢的影响的限制。在有效用作抗增殖剂的体内所需水平下，活性的维生素D化合物会通过其内在固有的钙血(calcemic)活性来诱导显著升高且有潜在危险性的血钙水平。即，由于高钙血症效应风险，钙三醇和其它活性的维生素D化合物在临床上用作抗增殖剂的用途受到严格的限制。
已针对鉴别出能保持抗增殖作用但对钙代谢具有降低的作用的维生素D类似物和衍生物进行了大量的研究。研制出了上百种化合物，其中有许多化合物具有减轻的高钙血症效应，但未发现任何化合物能在完全消除高钙血症效应的同时保持抗增殖活性。
现已表明，全身性高钙血症效应的问题可通过以“高剂量脉冲给药(HDPA)”方式给予足量活性的维生素D化合物来克服，从而使得在观察到抗增殖效应时同时避免严重高钙血症的发展。根据美国专利No.6,521,608，活性的维生素D化合物可不超过每三天给予，例如一周一次，剂量为每天至少0.12微克/千克(对于70千克人而言为8.4微克)。用于美国专利No.6,521,608的HDPA方案中的药物组合物含有5-100微克活性的维生素D化合物，其可以口服、静脉内、肌内、局部、透皮、舌下、鼻内、瘤内或其它制剂形式给予。
发明概述本发明的一个方面提供了一种在动物中预防、治疗或改善血管成形术后的动脉再狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物活性的维生素D化合物。本发明的第二方面中，所述活性的维生素D化合物具有降低的高钙血症效应，使得对动物给予较高剂量的所述化合物时不会引起高钙血症。在本发明的另一实施方式中，通过HDPA给予所述活性的维生素D化合物，从而可给予动物高剂量活性的维生素D化合物而不会引起高钙血症。本发明的另一方面提供了一种在动物中预防、治疗或改善血管成形术后的动脉再狭窄的方法，所述方法包括联合给予所述动物活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂。在本发明的另一方面，将支架置入血管成形术后的动脉内以帮助预防、治疗或改善再狭窄。本发明的再一方面提供了一种治疗、预防或改善动物动脉旁路移植物中和/或其周围的狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物活性的维生素D化合物。
在本发明的优选实施方式中，给予治疗剂的组合。在本发明的一个实施方式中，维生素D给药可在给予一种或多种治疗剂之前开始和/或在给予一种或多种治疗剂时继续，以及在给予一种或多种治疗剂后(beyond)给予。在本发明的另一实施方式中，将活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂的联合给药的方法重复多次。
本发明的活性的维生素D化合物与一种或多种治疗剂的组合可具有加合的药效或加合的治疗作用。本发明也包括疗效大于加合的协同组合。优选地，这些组合也降低或避免了不为所需的或不良的影响。在某些实施方式中，相对于单独给予活性的维生素D化合物或单独给予任何治疗剂，本发明的联合治疗提供了改善的整体治疗。在某些实施方式中，可降低现存或实验性治疗剂的剂量或降低给药频率，这将提高患者的顺应性，从而改善治疗并降低不为所需的影响或不良反应。
此外，本发明的方法不仅可用于先前未经治疗的患者，还可用于对目前用于预防、治疗或改善再狭窄的标准和/或试验性治疗部分或完全不显疗效的患者。在优选的实施方式中，本发明提供了用于预防、治疗或改善已显示会或可能会对其它治疗不显效或没有应答的再狭窄或狭窄的治疗方法。
发明详述本发明的一个方面提供了一种在动物中预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物活性的维生素D化合物。本发明的第二方面中，所述活性的维生素D化合物具有降低的高钙血症效应，使得给予较高剂量的所述化合物时不会导致高钙血症。本发明的另一方面提供了一种在动物中预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄的方法，所述方法包括通过HDPA给予所述动物活性的维生素D化合物，从而使得给予动物高剂量活性的维生素D化合物时不会导致高钙血症。
本发明的另一方面提供了一种在动物中预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄的方法，所述方法包括对所述的动物联合给予活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂，所述治疗剂目前正在使用、已被使用或已知可用于预防、治疗或改善再狭窄。
在本发明的另一方面中，在血管成形术中或术后将支架置入动脉以帮助预防、治疗或改善再狭窄。
本发明的再一方面提供了一种预防、治疗或改善动物动脉旁路移植物中和/或其周围狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物活性的维生素D化合物。
本文所述的方法可用于预防、治疗或改善发生在冠状动脉、外周动脉和旁路移植物中的血管成形术后的再狭窄。所述方法还可用于预防、治疗或改善发生在旁路移植物中的旁路手术后的狭窄。
如本文所用，术语″治疗有效量″是指足以预防再狭窄或狭窄、改善一种或多种再狭窄或狭窄症状、或防止再狭窄或狭窄发展的治疗剂的用量。例如，对于治疗再狭窄或狭窄而言，治疗有效量优选是指将再狭窄或狭窄程度降低至少10％，优选至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％的治疗剂用量。可用本领域已知的任何用于使血流显影的方法(例如对比血管造影术)来确定再狭窄或狭窄的程度。
如本文所用，术语″预防″是指降低血管成形术后再狭窄的发生或外科旁路术后的狭窄。所述预防可为完全预防，例如在血管成形术后的6个月内不发生再狭窄。所述预防也可为部分预防，从而使得再狭窄或狭窄小于不使用本发明将会发生的再狭窄或狭窄。例如，使用本发明方法的再狭窄或狭窄程度可比不用本发明将会发生的再狭窄或狭窄的量少至少10％，优选至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。
如本文所用，术语″再狭窄″是指血管形成术后动脉或动脉旁路移植物血管部位或邻近部位的任何变窄或收缩。再狭窄大部分上是由血管成形术导致创伤后的新生内膜生长所造成的。新生内膜是平滑肌细胞在粘蛋白基质中的聚集，其使得血管的内腔变得狭窄。
如本文所用，术语″狭窄″是指旁路手术过程后动脉旁路移植物中和/或周围的任何变窄或收缩。
如本文所用，术语″治疗剂″是指本领域技术人员已知的可预防、治疗或改善再狭窄或狭窄的任何治疗剂。治疗剂包括但不限于小分子。合成药物、肽、多肽、蛋白质、核酸(例如，DNA和RNA多核苷酸，包括但不限于反义核苷酸序列、三螺旋和编码生物活性蛋白质的核苷酸序列、多肽或肽)、抗体、合成或天然无机分子、模拟剂以及合成或天然有机分子。已知已使用的或目前正用于预防、治疗或改善再狭窄或狭窄的任何制剂均可根据本发明所述与活性的维生素D化合物联合使用。已使用或目前正用于预防、治疗或改善再狭窄或狭窄的治疗剂的相关信息可参见例如，Hardman等编，1996，Goodman & Gilman′s ThePharmacological Basis of Therapeutics，第九版，McGraw-Hill，纽约，NY。
用于本发明方法和组合物中的治疗剂包括抗瘤剂(例如，放线菌素D、依立替康、长春新碱、长春碱、甲氨喋呤、硫唑嘌呤、氟尿嘧啶、阿霉素、丝裂霉素)、血管扩张剂(例如，硝酸盐类、钙通道阻滞剂)、抗凝血剂(例如，肝素)、抗血小板剂(例如，阿司匹林、IIb/IIIa受体的阻滞剂)、抗纤维蛋白酶(例如，水蛭素、伊洛前列素)、免疫抑制剂(例如，西罗莫司、利喘贝、地塞米松、他克莫司、依维莫司、A24)、胶原合成酶抑制剂(例如，溴氯哌喹酮、丙基羟化酶、C-蛋白水解酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂)、抗炎类(例如，皮质激素、非类固醇类抗炎药物)、17-雌二醇、加压素转化酶抑制剂、秋水仙素、成纤维细胞生长因子拮抗剂、组胺拮抗剂、洛伐它丁、硝普盐、磷酸二酯酶抑制剂、前列腺素抑制剂、苏拉灭、5-羟色胺阻滞剂、硫蛋白酶抑制剂、血小板衍生的生长因子的拮抗剂、一氧化氮和血管肽素。在一个实施力式中，所述治疗剂是紫杉烷、例如紫杉醇(paclitaxel)或多西他赛(docetaxel)。
治疗剂也可为适于在血管成形术旁路手术部位降低细胞增殖的放射性物质。适宜的放射性试剂的例子包括放射性同位素，例如钴-60、铯-137、钯-103、磷-32、钇-90、锶-90和铱-192。血管成形术过程中所用放射性物质的例子见美国专利6,353,756、6,192,271、6,179,789、6,159,142、5,871,437和5,871,436。
治疗剂也可为放射治疗。可将外线束放射治疗用于血管形成术或旁路过程的部位以降低细胞增殖。通常，外线束放射疗法包括用高能线束照射对象中的特定体积，从而使得该体积中的增殖细胞死亡。用于外线束放射疗法的给予方法和设备以及组合物见美国专利6,449,336、6,398,710、6,393,096、6,335,961、6,307,914、6,256,591、6,245,005、6,038,283、6,001,054、5,802,136、5,596,619和5,528,652。也可采用其它放射技术，例如带电粒子放射疗法、中子放射疗法、光动力疗法。美国专利5,668,371、6,400,796、5,877,165、5,872,107、5,653,957、6,283,957、6,071,908、6,011,563、5,855,595、5,716,595和5,707,401。
如本文所用，术语″支架″是指在血管成形术中或之后插入血管中以预防、治疗或改善再狭窄的任何结构体。支架通常用金属或聚合材料制成，并具有许多不同的结构。用于血管成形术过程中的支架的例子见美国专利6,491,718、6,491,617、6,353,756、6,315,708、6,206,915、6,203,536、6,192,271、6,015,430、5,997,563、5,871,437、5,695,516、5,549,635、5,443,500、5,403,341、5,334,201、5,266,073、5,059,211、5,059,166、4,990,155、4,886,062、4,800,882、4,795,458和4,733,665。可用活性的维生素D化合物和/或前述的治疗剂涂覆或浸渍支架以在血管成形术的部位局部输递所述的药剂(参见Regar等，Br.Med.Bull.59227-48(2001)；Evers，Drug Market Dev.第295页(2003年11月))。所述涂覆或浸渍材料可包含控制药物释放的基质。药物递送支架的例子见美国专利6,589,546、6,335,029、6,218,016和5,304,121。
如本文所用，术语″联用活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂″是指联合给予活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂，其中可在给予所述治疗剂之前、同时或之后给予所述活性的维生素D化合物。可在给予治疗剂之前或之后最多达3个月给予所述活性的维生素D化合物，这仍可被认为是联合治疗。
如本文所用，术语″活性的维生素D化合物″是指当给予对象或与细胞接触时具有生物活性的维生素D化合物。可用本领域技术人员熟知的测定方法来评估维生素D化合物的生物活性，例如可采用测定与维生素D相关基因表达的免疫测定法。维生素D化合物在体内以不同活性水平的多种形式存在。例如，首先在肝脏使维生素D化合物的碳-25位点发生羟化可部分活化维生素D化合物，然后在肾脏使其碳-1位点进一步羟化可使其完全活化。原型活性的维生素D化合物是1α，25-羟基维生素D3，也称为钙三醇。已知数量众多的其它活性的维生素D化合物，它们可用于本发明的实施中。本发明的活性的维生素D化合物包括但不限于，以下专利中所描述的维生素D化合物的类似物、同系物和衍生物，各专利纳入本文作为参考美国专利4,391,802(1α-羟基维生素D衍生物)；4,717,721(17位侧链长度大于胆固醇或麦角甾醇侧链的1α-羟基衍生物)；4,851,401(环戊维生素D类似物(cyclopentano-vitamin D analogs))；4,866,048和5,145,846(带有炔基、烯基和烷基侧链的维生素D3类似物)；5,120,722(三羟基维生素D2)；5,547,947(氟维生素D3化合物)；5,446,035(甲基取代的维生素D)；5,411,949(23-氧杂-衍生物)；5,237,110(19-去甲-维生素D化合物；4,857,518(羟基化24-高-维生素D衍生物)。具体的例子包括ROCALTROL(Roche1αboratories)；CALCIJEX注射用钙三醇；Leo Pharmaceuticals的研究药物，包括EB 1089(24a，26a，27a-三高-22，24-二烯-1αa，25-(OH)2-D3、KH 1060(20-表-22-氧杂-24a，26a，27a-三高-1α，25-(OH)2-D3)，MC 1288(1，25-(OH)2-20-表-D3)和MC903(卡泊三醇，1α24s-(OH)2-22-烯-26，27-脱氢-D3)；罗氏(Roche)的药物包括1，25-(OH)2-16-烯-D3、1，25-(OH)2-16-烯-23-炔-D3和25-(OH)2-16-烯-23-炔-D3；Chugai Pharmaceuticals的22-氧杂钙三醇(22-氧杂-1α，25-(OH)2-D3；获自依利诺斯大学(University of Illinois)的1α-(OH)-D；以及Chemistry-Schering AG药物研究所的药物，包括ZK 161422(20-甲基-1，25-(OH)2-D3)和ZK 157202(20-甲基-23-烯-1，25-(OH)2-D3)；1α-(OH)-D2；1α-(OH)-D3和1α-(OH)-D4。其它的例子包括1α，25-(OH)2-26，27-d6-D3；1α，25-(OH)2-22-烯-D3；1α，25-(OH)2-D3；
1α，25-(OH)2-D2；1α，25-(OH)2-D4；1α，24，25-(OH)3-D3；1α，24，25-(OH)3-D2；1α，24，25-(OH)3-D4；1α-(OH)-25-FD3；1α-(OH)-25-FD4；1α-(OH)-25-FD2；1α，24-(OH)2-D4；1α，24-(OH)2-D3；1α，24-(OH)2-D2；1α，24-(OH)2-25-FD4；1α，24-(OH)2-25-FD3；1α，24-(OH)2-25-FD2；1α，25-(OH)2-26，27-F6-22-烯-D3；1α，25-(OH)2-26，27-F6-D3；1α，25S-(OH)2-26-F3-D3；1α，25-(OH)2-24-F2-D3；1α，25S，26-(OH)2-22-烯-D3；1α，25R，26-(OH)2-22-烯-D3；1α，25-(OH)2-D2；1α，25-(OH)2-24-表-D3；1α，25-(OH)2-23-炔-D3；1α，25-(OH)2-24R-F-D3；1α，25S，26-(OH)2-D3；1α，24R-(OH)2-25F-D3；1α，25-(OH)2-26，27-F6-23-炔-D3；1α，25R-(OH)2-26-F3-D3；1α，25，28-(OH)3-D2；1α，25-(OH)2-16-烯-23-炔-D3；1α，24R，25-(OH)3-D3；1α，25-(OH)2-26，27-F6-23-烯-D3；1α，25R-(OH)2-22-烯-26-F3-D3；1[α]，25S-(OH)2-22-enc-26-F3-D3；1α，25R-(OH)2-D3-26，26，26-D3；1α，25S-(OH)2-D3-26，26，26-D3；以及1α，25R-(OH)2-22-烯-D3-26，26，26-D3。其它的例子见美国专利6,521,608。也可参见，例如美国专利6,503,893、6,482,812、6,441,207、6,410,523、6,399,797、6,392,071、6,376,480、6,372,926、6,372,731、6,359,152、6,329,357、6,326,503、6,310,226、6,288,249、6,281,249、6,277,837、6,218,430、6,207,656、6,197,982、6,127,559、6,103,709、6,080,878、6,075,015、6,072,062、6,043,385、6,017,908、6,017,907、6,013,814、5,994,332、5,976,784、5,972,917、5,945,410、5,939,406、5,936,105、5,932,565、5,929,056、5,919,986、5,905,074、5,883,271、5,880,113、5,877,168、5,872,140、5,847,173、5,843,927、5,840,938、5,830,885、5,824,811、5,811,562、5,786,347、5,767,111、5,756,733、5,716,945、5,710,142、5,700,791、5,665,716、5,663,157、5,637,742、5,612,325、5,589,471、5,585,368、5,583,125、5,565,589、5,565,442、5,554,599、5,545,633、5,532,228、5,508,392、5,508,274、5,478,955、5,457,217、5,447,924、5,446,034、5,414,098、5,403,940、5,384,313、5,374,629、5,373,004、5,371,249、5,430,196、5,260,290、5,393,749、5,395,830、5,250,523、5,247,104、5,397,775、5,194,431、5,281,731、5,254,538、5,232,836、5,185,150、5,321,018、5,086,191、5,036,061、5,030,772、5,246,925、4,973,584、5,354,744、4,927,815、4,804,502、4,857,518、4,851,401、4,851,400、4,847,012、4,755,329、4,940,700、4,619,920、4,594,192、4,588,716、4,564,474、4,552,698、4,588,528、4,719,204、4,719,205、4,689,180、4,505,906、4,769,181、4,502,991、4,481,198、4,448,726、4,448,721、4,428,946、4,411,833、4,367,177、4,336,193、4,360,472、4,360,471、4,307,231、4,307,025、4,358,406、4,305,880、4,279,826和4,248,791。
在本发明的优选实施方式中，所述活性的维生素D化合物于维生素D相比具有降低的高钙血症效应，从而可给予动物提高剂量的化合物而不会导致高钙血症。降低的高钙血症效应定义为比给予等量的1α，25-羟基维生素D3(钙三醇)所致的致高钙血症作用降低了的作用。作为例子的是，EB 1089具有相当于钙三醇致高钙血症作用50％的致高钙血症作用。其它具有降低的高钙血症效应的活性的维生素D化合物包括可购自Hoffinan LaRoche的Ro23-7553和Ro24-5531。其它具有降低的高钙血症效应的活性的维生素D化合物见美国专利4,717,721。活性的维生素D化合物的致高钙血症作用的测定在本领域中是常规的方法，可如Hansen等在Curr.Pharm.Des.6803-828(2000)中所述的方法进行测定。
在本发明的一个实施方式中，在血管形成术过程或旁路过程之前、之时和/或之后将活性的维生素D化合物给予动物。可在血管形成术或旁路过程之前1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周或更早之前给予所述活性的维生素D化合物。可在血管形成术或旁路过程之前1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周或更迟之后给予所述活性的维生素D化合物并连续给药直至6个月。在某些实施方式中，可在血管形成术或旁路过程之前、之时和之后给予所述活性的维生素D化合物。
在本发明的一个方面中除了活性的维生素D化合物，还额外给予动物一种或多种治疗剂。可在给予一种或多种治疗剂之前(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2周、3周、4周或更早)、同时或之后(例如，0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天、2周、3周、4周或更迟)给予所述活性的维生素D化合物。
在某些实施方式中，可将联合给予活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂的方法重复至少一次。可根据需要将所述方法重复多次以获得或保持治疗反应，例如重复1-约10次。每次重复所述方法时所用的活性的维生素D化合物和一种或多种治疗剂可与在先的重复相同或不同。例外，各次重复间给予活性的维生素D化合物的时间段及其给药方式可以不同(即，每日用药或HDPA)。
在本发明的某些实施方式中，在血管成形术过程之中或之后将支架导入动脉。在本发明中可使用本领域技术人员已知的可预防、治疗或改善再狭窄的任何支架。在某些实施方式中，可用活性的维生素D化合物、一种或多种治疗剂或两者同时涂覆或浸渍所述支架。所述维生素D化合物和治疗剂可任选地包含在涂覆于支架之上或浸渍于支架中的基质中，而该基质对药物的释放进行控制。
在使用时，以本领域技术人员已知的可预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄或旁路手术后狭窄的剂量给予所述一种或多种治疗剂。在药物组合物中用已知有效的方式给予所述一种或多种治疗剂。例如，可全身性(例如，静脉内、口服)或局部给予所述治疗剂。
优选以约0.5微克-300微克的剂量给予所述活性的维生素D化合物，更优选为15微克-200微克。在一个具体的实施方式中，有效量的活性的维生素D化合物为3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295或300微克或者更高。在某些实施方式中，活性的维生素D化合物的有效量约为3微克-300微克，更优选约15微克-260微克，更优选约30微克-240微克，更优选约50微克-220微克，更优选约75微克-200微克。在某些实施方式中，本发明的方法包括给予剂量约为0.12-3微克/kg体重的活性的维生素D化合物。可用任何途径给予所述化合物，包括口服、肌内、静脉内、胃肠道外、直肠、鼻内、局部或透皮给药。
如果要每天给予所述活性的维生素D化合物，可保持较低的剂量，例如约0.5微克-5微克，以避免或消除对高钙血症的诱导作用。如果活性的维生素D化合物具有减轻的高钙血症效应，可给予较高剂量的该化合物而不会导致高钙血症，例如采用约10微克-20微克或更高(最高达约50微克-100微克)的剂量。
在本发明的优选实施方式中，采用HDPA给予所述活性的维生素D化合物，从而可给予高剂量的活性的维生素D化合物而不会导致高钙血症。HDPA是指以连续性间隙增量方案或非连续性间歇增量方案，间歇性地给予活性的维生素D化合物。高剂量的活性的维生素D化合物包括前述部分中讨论的大于约3微克的剂量。因此，在本发明的某些实施方式中，用于预防、治疗或改善再狭窄或狭窄的方法包括间歇性地给予高剂量的活性的维生素D化合物。许多因素可限制HDPA的频率，这些因素包括但不限于化合物或制剂的药效学参数以及活性的维生素D化合物对动物的药代动力学作用。例如，肾功能受损动物可能需要较低频率的活性的维生素D化合物给药，这是由于这些动物钙排泄能力有所降低。
以下只是示范例，仅供说明术语HDPA可包括由本领域技术人员设计的任何非连续性的给药方案。
在一个实施例中，可不超过每3天、每4天、每5天、每6天、每7天、每8天、每9天或每10天给予一次所述活性的维生素D化合物。所述给药可连续进行1、2、3或4周，或者1、2或3个月，或者更长时间。任选地，在一段时间的休整后，可用同样或不同的方案给予所述活性的维生素D化合物。所述的休整时间可为1、2、3或4周，或者更长，这可根据所述活性的维生素D化合物对动物的药效学作用而定。
在另一实施例中，每周一次给予所述活性的维生素D化合物，给药3个月。
在优选的实施方式中，可在4周的周期中，每周给予给予所述维生素D化合物，给药3周。在一周的休整时间后，可用相同或不同的方案给予所述活性的维生素D化合物。
美国专利6,521,608中提供了用于本发明方法中的剂量方案的其它例子，该专利以其全文纳入本文作为参考。
上述的给药方案仅是为了提供说明的目的，而不应被认为是限定。本领域的技术人员将很容易理解所有活性的维生素D化合物均在本发明的范围中，而活性的维生素D化合物的确切剂量和给药方案则可因许多因素而改变。
在疾病或病症的急性或长期治疗中，药物制剂的有效治疗量的变化可取决于以下因素，包括但不限于要治疗的疾病或病症、药物制剂的特性以及给药途径。根据本发明的方法，活性的维生素D化合物的有效剂量可为任何可有效预防、治疗或改善再狭窄或狭窄的化合物的剂量。高剂量活性的维生素D化合物可为约3-300g的剂量或上述范围内的任何剂量。所述剂量、给药频率、持续时间或它们的任何组合也都取决于以下因素动物的年龄、体重、反应和既往病史，以及药物制剂的给药途径、药物动力学和药效学作用。可由本领域的技术人员常规地考虑这些因素。
维生素D化合物的吸收和清除速率受到本领域技术人员熟知的各种因素的影响。如前所述，活性的维生素D化合物的药代动力学特性限制了维生素D化合物的峰值浓度，可在血液中达到该浓度而不引发高钙血症。活性的维生素D化合物在组织中的吸收、分布、结合或定位、生物转化和排泄的速率和程度都可影响给予所述药物制剂的频率。
在本发明的一个实施方式中，以足以获得约0.1-25nM的活性的维生素D化合物峰值血浆浓度的剂量给予所述活性的维生素D化合物。在某些实施方式中，本发明的方法包括以足以获得0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM、10nM、12.5nM、15nM、17.5nM、20nM、22.5nM或25nM或者其中的任何浓度范围的峰值血浆浓度的剂量给予所述活性的维生素D化合物。在其它实施方式中，以足以获得超过约0.5nM，优选约0.5-25nM，更优选约5-20nM，甚至更优选约10-15nM的峰值血浆浓度的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
在另一优选实施方式中，以至少约0.12微克/kg体重，更优选至少约0.5微克/kg体重的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
本领域技术人员将认识到这些标准剂量是针对约70kg平均身材的成人的，可根据如上所述的常规考虑因素进行调整。
在某些实施方式中，本发明的方法还包括给予可迅速(例如在4小时中)获得峰值血浆浓度的剂量的活性的维生素D化合物。在另一实施方式中，本发明的方法包括可迅速清除的剂量的活性的维生素D化合物，例如在短于12小时的清除半衰期中清除。
虽然获得高浓度活性的维生素D化合物是有利的，但必须与治疗安全性相均衡，例如高钙血症。因此，在本发明的一个方面中，本发明的方法包括在血管成形术或旁路手术之前、之时或之后，以HDPA方式将活性的维生素D化合物给予动物，并监测所述动物与高钙血症症相关的症状。此类症状包括软组织(例如心脏组织)的钙化、骨密度的提高以及高钙性肾病。在其它实施方式中，本发明的方法包括在血管成形术或旁路手术之前、之时或之后，以HDPA方式给予动物活性的维生素D化合物，并监测所述动物中钙血浆浓度以确保钙血浆浓度低于约10.2mg/dL。
在某些实施方式中，可安全获得维生素D化合物的高血液水平，同时减少输送到血液中的钙。在一个实施方式中，当结合给予低钙饮食时，可获得较高的活性的维生素D化合物浓度而不引发高钙血症。在一个实施例中，可用不能通过小肠转运入血液的吸附剂、吸附剂、配体、螯合剂或其它结合部分捕获钙。在另一实施例中，可通过联合给予例如二磷酸(例如，zoledronate、氨羟二磷酸二钠或阿伦膦酸盐)或皮质类固醇(例如，地塞米松或泼尼松)和活性的维生素D化合物来抑制破骨细胞的活化速率。
在某些实施方式中，可安全获得活性的维生素D化合物的高血药水平，并同时使钙的清除速率最大化。在一个实施例中，通过确保适度的水合作用和盐摄入来提高钙分泌。在另一实施例中，可采用利尿治疗来提高钙排泄。
当局部递送活性的维生素D化合物时(例如作为支架的涂层)，无需监控活性的维生素D化合物或钙的血液浓度，这是由于输送局部给药不太可能得到可整体检测水平的活性的维生素D化合物或影响整体钙水平。
可将所述维生素D化合物作为包含药学上可接受载体的药物组合物的部分给药，其中所述活性的维生素D化合物的用量足以达到其所预期的目的，即起到抗增殖作用。所述药物组合物还可包括一种或多种赋形剂、稀释剂或本领域技术人员已知的任何其它组分，并与本发明的配制方法密切相关。所述药物组合物可额外地包含在预防、治疗或改善再狭窄中通常用做添加剂的其它化合物。
如本文所用，术语″药物组合物″应理解为定义所含各个组分或成分本身均为药学上可接受的组合物，例如如果预计进行口服给药，则其为口服可接受，如果进行局部给药，则为局部可接受的。
可以单位剂型制备药物组合物。所述剂型可适于口服、粘膜(鼻、舌下、阴道、颊、直肠)、胃肠道外(静脉内、肌内、动脉内)或局部给药。本发明的优选剂型包括口服剂型和静脉内剂型。
静脉内形式包括但不限于大输液和滴注注射。在优选的实施方式中，所述静脉内剂型为无菌或可在给予对象前进行灭菌，这是由于它们通常可通过对象的天然抗污染物防御。静脉内制剂的例子包括但不限于注射用USP水；水性赋形剂包括但不限于，氯化钠注射液、林格氏注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液以及乳酸林格氏注射液；水可混溶赋形剂包括但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；非水性赋形剂包括但不限于，玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯酯。
在本发明的优选实施方式中，包含活性的维生素D化合物的药物组合物为乳剂预-浓缩制剂(emulsion pre-concentrate formations)。本发明的组合物满足或基本上减少了迄今为止本领域中所遇到的与活性的维生素D治疗相关的难度，这些难度包括具体为给予患者后所述化合物所需的药物动力学参数。
根据本发明的一个方面，所提供的药物组合物中包括(a)亲脂相成分，(b)一种或多种表面活性剂，(c)活性的维生素D化合物；其中所述组合物为乳剂预浓缩物(emulsion pre-concentrate)，它在稀释于水中时的水与组合物比例为约1∶1或更多的水，形成400nm处吸光度大于0.3的乳剂。本发明的药物组合物还可包括亲水相组分。
在本发明的另一方面，提供了一种含水(或其它水性溶液)和乳剂预浓缩物的药物乳剂。
如本文所用，术语″乳剂预浓缩物″是指与例如水接触时能提供乳剂的系统。如本文所用，术语″乳剂″是指包含水和有机组分(包括疏水性(亲脂性)有机组分)的胶态分散液。术语“乳剂”是指包括本领域熟练技术人员能理解的常规的乳剂，以及下文即将定义的“亚微米液滴乳剂”。
如本文所用，术语“亚微米液滴乳剂”是指包含水和有机组分(包括疏水性(亲脂性)有机组分)的胶态分散液，其中有机组分形成的液滴或颗粒具有小于约1000nm的最大平均尺寸。
亚微米液滴乳剂可被认定为具有以下一个或多个特征。当使其各组分接触且基本上不提供能量(例如没有加热或使用高速剪切装置或其它显著搅动)时，它们是自发或基本上自发形成的。它们显示出热动力学稳定性且它们的是单相的。
亚微米液滴乳剂颗粒可以是球形的，但也可以是其它结构，例如具有片层、六角形或各向同性对称性的液晶。通常，亚微米液滴乳剂包括最大尺寸(例如平均直径)在约50-约1000nm、更佳在约200-300nm之间的液滴或颗粒。
本发明的药物组合物通常在用水稀释后形成乳剂。根据本发明，在以水∶组合物约为1∶1或所述水更高的比例下用水稀释乳剂前浓缩物后将形成乳剂。根据本发明，水与组合物的比例可为，例如在1∶1-5000∶1之间。例如水和组合物的比例可为约1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、10∶1、200∶1、300∶1、500∶1、1000∶1或5000∶1。本领域熟练技术人员将可很容易地确定适合任何给定情况或场合的水与组合物的具体比例。
根据本发明，在用水稀释所述乳剂预浓缩物后，将形成在400nm处吸光度大于0.3的乳剂。在以1∶100稀释本发明的乳剂前浓缩物时所形成的乳剂在400nm下的吸光度可为，例如在0.3-4.0之间。例如，在400nm下的吸光度可为例如，约0.4、0.5、0.6、1.0、1.2、1.6、2.0、2.2、2.4、2.5、3.0、或4.0。测定液体溶液吸光度的方法是本领域所熟知的。本领域熟练技术人员将可确定和调节本发明的乳剂前浓缩物的组分的相对比例，以便在用水稀释时获得具有本发明范围内任何具体吸光度的乳剂。
本发明的药物组合物可为例如，固体、半固体或液体制剂。本发明的半固体制剂可以是本领域普通技术人员所知的任何半固体制剂，包括例如，凝胶、糊剂、乳膏和油膏。
本发明的药物组合物包含亲脂相组分。用作亲脂相组分的合适组分包括任何药学上可接受的、与水不互混溶的溶剂。这些溶剂宜没有或基本上无表面活性剂功能。
亲脂相组分可包括单酸-、二酸-或三酸甘油酯。可用于本发明范围内的单酸-、二酸-或三酸甘油酯包括从C6、C8、C10、C12、C14、C16、C18、C20和C22脂肪酸衍生获得的那些。典型的二酸甘油包括，具体为二油精、二棕榈精以及混合的三辛酸甘油酯-三癸酸甘油酯二酯。较佳的三酸甘油酯包括植物油、鱼油、动物脂肪、氢化的植物油、部分氢化的植物油、合成的甘油三酯、改性的甘油三酯、分级的甘油三酯、中等和长链甘油三酯、结构性甘油三酯及其混合物。
在上述列出的三酸甘油酯中，较佳的三酸甘油酯包括杏仁油、巴巴苏油、琉璃苣油、黑醋栗油、菜籽油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、月见草油、葡萄籽油、落花生油、芥菜籽油、橄榄油、棕榈油、棕榈籽油、花生油、油菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、豆油、向日葵油、氢化的蓖麻油、氢化的椰子油、氢化的棕榈油、氢化的豆油、氢化的植物油、氢化的棉籽油和蓖麻油、部分氢化的豆油、部分大豆和棉籽油、三已酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯、三(十一烷酸)甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯、三亚油酸甘油酯、三亚麻酸甘油酯、辛酸/癸酸甘油三酯、辛酸/癸酸/月桂酸甘油三酯、辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯和辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯。
较佳的三酸甘油酯是以LABRAFAC CC商品名购买的中链甘油三酯。其它较佳的三酸甘油酯包括中性油，例如中性植物油，具体是分级的椰子油如以已知并以商品名MIGLYOL市售的产品，包括产品MIGLYOL 810、MIGLYOL812、MIGLYOL 818和CAPTEX 355。
其它合适的是辛酸-癸酸甘油三酯，例如已知并以MYRITOL商品名市售的产品(包括产品MYRITOL 813)。其它合适的此类产品是CAPMUL MCT、CAPTEX 200、CAPTEX 300、CAPTEX 800、NEOBEE M5和MAZOL 1400。
作为亲脂相组分，尤其优选的是产品MIGLYOL 812(见美国专利No.5,342,625)。
本发明的药物组合物可进一步包含亲水相组分。亲水相组分可包括，例如，药学上可接受的低分子量单氧基烷二醇或多氧基烷二醇的C1-5烷基或四氢糠基二醚或偏醚。合适的亲水相组分包括，例如单氧烷二醇或多氧烷二醇(尤其是含2-12个碳原子(尤其是4个碳原子)的单或二氧烷二醇)的二醚或偏醚(尤其是偏醚)。较佳的是，单或多氧烷二醇部分为直链。用于本发明的典型亲水相组分是已知以TRANSCUTOL和COLYCOFUROL为商品名出售的产品(见美国专利No.5,342,625)。
在一个尤为优选的实施方式中，所述亲水相组分包含1，2-丙二醇。
本发明的亲水相组分当然还可包括一种或多种额外的组分。然而，较好的是任何额外添加的组分宜包含足以溶解活性的维生素D化合物的材料，从而使得作为活性的维生素D化合物载体介质的亲水相的效力没有显著受损。可用的额外亲水相组分的例子包括低级(例如C1-5)烷醇，具体为乙醇。
本发明的药物组合物还包含一种或多种表面活性剂。可与本发明联用的表面活性剂包括亲水性或亲脂性表面活性剂，或其混合物。尤其佳的是非离子亲水性和非离子亲脂性表面活性剂。
合适的亲水性表面活性剂包括天然或氢化植物油与乙二醇的反应产物，即聚乙二醇化的天然或氢化的植物油，例如聚氧乙二醇化的天然或氢化的蓖麻油。这些产物可用已知方式获得，例如通过将天然或氢化的蓖麻油或其馏分(fraction)与环氧乙烷以如约1∶35-约1∶60的摩尔比反应获得，并从产物中任选地除去游离的聚乙二醇组分，例如按照德国Auslegeschriften 1,182,388和1,518,819中公开的方法进行。
适用于本发明药物化合物的亲水性表面活性剂也包括聚氧乙烯-山梨糖醇酐-脂肪酸酯，例如，单和三月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基和油酰基酯，例如已知以TWEEN为商品名购得的产品，包括产品TWEEN 20(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯)、TWEEN 40(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸酯)、
TWEEN 60(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯)、TWEEN 80(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)、TWEEN 65(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三硬脂酸酯)、TWEEN 85(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐三油酸酯)、TWEEN 21(聚氧乙烯(4)山梨糖醇酐单月桂酸酯)、TWEEN 61(聚氧乙烯(4)山梨糖醇酐单硬脂酸酯)和TWEEN 81(聚氧乙烯(5)山梨糖醇酐单油酸酯)。
用于本发明组合物的此类产品中尤其优选的是上述产品中的TWEEN 40和TWEEN 80(见Hauer等，美国专利No.5,342,625)。
同样适合用于本发明药物化合物的亲水性表面活性剂是聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙二醇脂肪酸酯，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；聚氧乙烯植物油；聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和诸如脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油以及固醇类的反应混合物；聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；琥珀酸二辛酯(dioctylsuccinate)、二辛基磺基琥珀酸钠(diocytlsodiumsulfosuccinate)、二-[2-乙基己基]-琥珀酸酯或十二烷基硫酸钠；磷脂类，尤其是卵磷脂如大豆卵磷脂；丙二醇单-和二-脂肪酸酯，例如丙二醇二辛酸酯、丙二醇二月桂酸酯、丙二醇羟基硬脂酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇蓖麻油酸酯、丙二醇硬脂酸酯，且尤其佳的是丙二醇辛酸-癸酸二酯；以及胆汁盐，如碱金属盐，如牛磺胆酸钠。
合适的亲脂性表面活性剂包括醇类；聚氧乙烯烷基醚；脂肪酸；胆汁酸；甘油脂肪酸酯；乙酰化甘油脂肪酸酯；低级醇脂肪酸酯；聚乙二醇脂肪酸酯；聚乙二醇甘油脂肪酸酯；聚丙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯甘油酯；单/二甘油酯的乳酸酯；丙二醇二甘油酯；山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；酯交换的植物油；固醇类；糖酯类；糖醚类；蔗糖甘油酯类(sucroglycerides)；聚氧乙烯植物油；聚氧乙烯氢化植物油；多元醇和至少一种选自下组物质的反应混合物脂肪酸、甘油酯、植物油、氢化植物油和固醇类；及它们的混合物。
适合用于本发明药物化合物的亲脂性表面活性剂也包括天然植物油三酸甘油酯和聚亚烷基多元醇的酯交换产物。这些酯交换产物是本领域中已知的，可根据例如，美国专利No.3,288,824中所述的通用步骤获得。它们包括各种天然(例如非氢化的)植物油(例如玉米油、核仁油、杏仁油、落花生油、橄榄油和棕榈油及其混合物)与聚乙二醇(尤其是平均分子量为200-800的聚乙二醇)的酯交换产物。较佳的是通过2摩尔份天然植物油三酸甘油酯与一摩尔份聚乙二醇(如平均分子量为200-800)酯交换而获得的产物。各种形式的酯交换产物是已知的，以商品名LABRAFIL购得。
适用于本发明药物组合物的其它亲脂性表面活性剂包括油溶性维生素衍生物，例如生育酚PEG-1000琥珀酸酯(“维生素E TPGS”)。
其它适合用作本发明药物化合物中的亲脂性表面活性剂是单酸-、二酸-和单酸/二酸-甘油酯，尤其是辛酸或癸酸与甘油的酯交换产物；山梨糖醇酐脂肪酸酯；季戊四醇脂肪酸酯和聚亚烷基二醇醚，例如季戊四醇-二油酸酯、-二硬脂酸酯、-单月桂酸酯、-聚乙二醇醚和-单硬脂酸酯，以及季戊四醇-脂肪酸酯；单甘油酯，例如甘油单油酸酯、甘油单棕榈酸酯和甘油单硬脂酸酯；甘油三乙酸酯或(1，2，3)-三醋精；以及固醇类及其衍生物，例如胆固醇及其衍生物，尤其是植物甾醇(如包含谷甾醇、菜油甾醇或豆甾醇的产物)，及其环氧乙烷加合物，例如大豆固醇及其衍生物。
本领域普通技术人员可以理解，几种市售的表面活性剂组合物含有少量至适量三酸甘油酯，通常是诸如酯交换反应中三酸甘油酯起始物的不完全反应的结果。因此，适用于本发明药物组合物的表面活性剂包括那些含有三酸甘油酯的表面活性剂。含有三酸甘油酯的市售表面活性剂组合物的例子包括，表面活性剂家族GELUCIRES、MAISINES、和IMWITORS中的一些成员。这些化合物的具体例子是GELUCIRE 44/14(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE50/13(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 53/10(饱和聚乙二醇化甘油三酯)；GELUCIRE 33/01(半合成的C8-C18的饱和脂肪酸的甘油三酯)；GELUCIRE 39/01(半合成的甘油三酯)；其它GELUCIRE，例如37/06、43/01、35/10、37/02、46/07、48/09、50/02、62/05等；MAISINE 35-I(亚油酸甘油三酯)；和IMWITOR 742(辛酸/癸酸甘油三酯)(见美国专利No.6,267,985)。
本领域技术人员还知道其它具有显著含量的甘油三酯的市售表面活性剂组合物。应当理解这些含甘油三酯和表面活性剂的组合物也适合来提供本发明全部或部分的亲脂相组分以及全部或部分的表面活性剂。
当然，本发明组合物中组分的相对比例将根据组合物的具体类型的不同而显著不同。该相对比例也将根据组合物中组分的具体功能而异。相对比例还将根据采用的具体组分以及产品组合物所需的物理性质而异，例如在组合物作为局部使用时，它是自由流动的液体还是糊浆。在任何具体情况下确定可行的比例是本领域普通技术人员力所能及的。因此，下述所有的比例和相对重量应理解为仅仅是表示较佳的或个别的发明教导，而不是对本发明最宽范围的限制。
本发明的亲脂相组分的合适含量为以组合物总重量计的约30-约90重量％。较佳的是，所述亲脂相组分的含量为组合物总重量计的约50-约85重量％。
本发明的一种表面活性剂或多种表面活性剂的合适含量为组合物总重量计的约1-50重量％。较佳的是，表面活性剂的含量为组合物总重量计的约5-40重量％。
本发明组合物中活性的维生素D化合物的含量显然取决于，例如预定的给药途径以及其它组分存在的程度。然而，通常本发明的活性的维生素D化合物的合适含量约为以组合物总重量计的0.005-20重量％。较佳的是，活性的维生素D化合物的含量为以组合物总重量计的0.01-15重量％。
本发明的亲水相组分的合适含量为以组合物总重量计的约2-约20重量％。较佳的是，所述亲水相组分的含量约为以组合物总重量计的约5-15重量％。
本发明的药物组合物可以是半固体制剂。本发明范围内的半固体制剂可包括，例如含量为以组合物总重量计约60-约80重量％的亲脂相组分、含量为以组合物总重量计约5-约35重量％的表面活性剂、以及含量为以组合物总重量计的约0.01-约15重量％的活性的维生素D化合物。
本发明的药物组合物可以是液体制剂。本发明范围内的液体制剂可包含，例如，含量为以组合物总重量计约50-约60重量％的亲脂相组分、含量为以组合物总重量计约4约-25重量％的表面活性剂、含量为以组合物总重量计约0.01-约15重量％的活性的维生素D化合物、以及含量为以组合物总重量计约5-约10重量％的亲水相组分。
可采用的附加组合物包括以下组合物，其中各组分的百分比是以排除了活性的维生素D化合物后该组合物总重量为基准计的a.Gelucire 44/14 约50％MIGLYOL 812 约50％；b.Gelucire 44/14 约50％维生素E TPGS 约10％MIGLYOL 812 约40％；c.Gelucjre 44/14 约50％
维生素E TPGS 约20％MIGLYOL 812 约30％；d.Gelucire 44/14约40％维生素E TPGS 约30％MIGLYOL 812 约30％；e.Gelucire 44/14约40％维生素E TPGS 约20％MIGLYOL 812 约40％；f.Gelucire 44/14约30％维生素E TPGS 约30％MIGLYOL 812 约40％；g.Gelucire 44/14约20％维生素E TPGS 约30％MIGLYOL 812 约50％；h.维生素E TPGS 约50％MIGLYOL 812 约50％；i.Gelucire 44/14约60％维生素E TPGS 约25％MIGLYOL 812 约15％；j.Gelucire 50/13约30％维生素E TPGS 约5％MIGLYOL 812 约65％；k.Gelucire 50/13约50％MIGLYOL 812 约50％；l.Gelucire 50/13约50％维生素E TPGS 约10％MIGLYOL 812 约40％；m.Gelucire 50/13约50％维生素E TPGS 约20％MIGLYOL 812 约30％；n.Gelucire 50/13约40％
维生素E TPGS约30％MIGLYOL 812 约30％；o.Gelucire 50/13 约40％维生素E TPGS约20％MIGLYOL 812 约40％；p.Gelucire 50/13 约30％维生素E TPGS约30％MIGLYOL 812 约40％；q.Gelucire 50/13 约20％维生素E TPGS约30％MIGLYOL 812 约50％；r.Gelucire 50/13 约60％维生素E TPGS约25％MIGLYOL 812 约15％；s.Gelucire 44/14 约50％PEG 4000约50％；t.Gelucire 50/13 约50％PEG 4000约50％；u.维生素E TPGS约50％PEG 4000约50％；v.Gelucire 44/14 约33.3％维生素E TPGS约33.3％PEG 4000约33.3％；w.Gelucire 50/13 约33.3％维生素E TPGS约33.3％PEG 4000约33.3％；x.Gelucire 44/14 约50％维生素E TPGS约50％；y.Gelucire 50/13 约50％维生素E TPGS约50％；z.维生素E TPGS约5％
MIGLYOL 812 约95％；aa.维生素E TPGS约5％MIGLYOL 812 约65％PEG 4000约30％；ab.维生素E TPGS约10％MIGLYOL 812 约90％；ac.维生素E TPGS约5％MIGLYOL 812 约85％PEG 4000约10％；和ad.维生素E TPGS约10％MIGLYOL 812 约80％PEG 4000约10％。
在本发明的一个实施方式中，所述药物组合物中含有活性的维生素D化合物、亲脂性成分和表面活性剂。亲脂性成分可以从约1％-约100％中任一百分比存在。亲脂性成分可以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％存在。表面活性剂可以从约1％一约100％中任一百分比存在。表面活性剂可以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100％存在。在一个实施方式中，亲脂性成分为MIGLYOL 812且表面活性剂为维生素E TPGS。在优选的实施方式中，药物组合物含有约50％的MIGLYOL 812和约50％的维生素ETPGS、约90％的MIGLYOL 812和约10％的维生素E TPGS、或约95％的MIGLYOL 812和约5％的维生素E TPGS。
在本发明的另一实施方式中，药物组合物含有活性的维生素D化合物和亲脂性成分，如约100％的MIGLYOL 812。
在一个优选的实施方式中，药物组合物含有约50％的MIGLYOL 812、约50％的维生素E TPGS、以及少量的BHA和BHT。此制剂在化学和物理上均已显示出出乎意料的稳定性(见实施例3)。增强了的稳定性赋予该组合物更长的储存期限。重要的是，该稳定性还使得组合物可在室温下保持，从而避免了冻存的复杂性和费用。此外，该组合物适于口服给药，并已显示出增溶高剂量活性的维生素D化合物的能力，由此使得在过度增殖和其它病症的治疗中采用高剂量脉冲给药给予活性的维生素D化合物成为可能。
本发明包含活性的维生素D化合物的药物组合物还可包含一种或多种添加剂。本领域熟知的添加剂包括，例如防粘剂、防沫剂、缓冲剂、抗氧化剂(例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)和生育酚，例如α-生育酚(维生素E))、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂(tonicifier)、调味剂、着色剂、香料、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、润滑剂及其混合物。这些添加剂的用量可很容易地由本领域熟练技术人员根据所需具体性质来确定。例如，抗氧化剂可以基于组合物总重量的约0.05％-约0.35％的量存在。
添加剂还可包括增稠剂。合适的增稠剂可以是本领域中已知和使用的那些，包括例如，药学上可接受的聚合物材料和无机增稠剂。用于本发明药物组合物的示例性增稠剂包括聚丙烯酸酯和聚丙烯酸酯共聚物树脂，例如聚丙烯酸和聚丙烯酸/甲基丙烯酸树脂；纤维素和纤维素衍生物，包括烷基纤维素如甲基-、乙基-、和丙基-纤维素；羟烷基纤维素如羟丙基纤维素和羟丙基烷基纤维素如羟丙基甲基纤维素；乙酰化纤维素如醋酸纤维素、乙酸苯二甲酸纤维素、乙酸琥珀酸纤维素和苯二甲酸羟丙基甲基纤维素；及其盐，例如羧甲基纤维素钠；聚乙烯吡咯烷酮，包括例如聚-N-乙烯吡咯烷酮，和乙烯吡咯烷酮共聚物如乙烯吡咯烷酮-乙酸乙烯酯共聚物；聚乙烯树脂，例如包括聚乙酸乙烯酯和醇，以及其它聚合材料，包括黄树胶(gum traganth)、阿拉伯胶、海藻酸盐如海藻酸及其盐如海藻酸钠；和无机增稠剂，如atapulgite、膨润土和硅土，包括亲水性二氧化硅产物如烷基化(如甲基化)硅胶，具体是胶态二氧化硅产品。
可加入上述这些增稠剂，例如来提供缓释效果。然而，当希望口服给药时，通常不需要使用前述增稠剂，它们通常不是优选的。另一方面，当预计用于局部施用时，要施用增稠剂。
本发明的组合物可以任何合适的方式来给药，例如以口服形式、例如以单位剂型形式，如在溶液中、以硬胶囊或软胶囊形式(包括明胶胶囊形式)、胃肠道外或以诸如软膏、糊剂、洗液、凝胶、油膏、泥罨剂(poultice)、泥敷剂(cataplasm)、膏药、皮肤贴剂等方式进行局部给药(例如施加到皮肤上)、或作为医疗设备(例如支架)的涂层、或以例如滴眼剂、洗液或凝胶制剂形式用于眼用。还可采用易流动的形式如溶液和乳剂，例如用于病灶内注射或例如作为灌肠剂进行直肠给药。
当本发明的组合物配制成单位剂型时，活性的维生素D化合物的量宜为每单位剂量1-200微克。更佳地，活性的维生素D化合物的量宜为每单位剂量约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200微克或其中的任一量。在一个优选实施方式中，每单位剂量活性的维生素D化合物的量宜为约5微克一约180微克，较佳地为约10微克-约135微克，更佳地为约45微克。在一个实施方式中，单位剂型含有45、90、135或180微克的钙三醇。
当组合物的单位剂型是胶囊时，胶囊中组分的总量宜为约10-1000微升。更佳的是，胶囊中组分的总量约为100-300微升。在另一实施方式中，胶囊中所存在的成分的总量较佳为约10-1500毫克，较佳为约100-1000毫克。在一个实施方式中，所述总量约为225、450、675或900毫克。在一个实施方式中，单位剂型为含有45、90、135或180微克钙三醇的胶囊。
可用本发明治疗的动物包括所有能受益于本发明化合物给药的动物。这些动物包括人、宠物如狗和猫，以及畜养动物如奶牛、猪、绵羊、山羊等。
下列实施例是本发明方法和组合物的描述而非限制性的例子。本领域技术人员显然能根据临床治疗和药学中通常会遇到的各种条件和参数的差异作其它合适的变化和改进，这些均在本发明的精神和范围内。
实施例1半固体钙三醇制剂的制备制备了含有表1所示组分的5种半固体钙三醇制剂(SS1-SS5)。最终制剂含有0.208毫克钙三醇/克半固体制剂。
表1半固体钙三醇制剂的组成
所示量以克表示。
1.赋形剂的制备如下制备100克的表1所列的五种半固体钙三醇制剂(SS1-SS5)。
将除钙三醇以外的所列组分，在合适的玻璃容器中合并，并将之混合直至均匀化。将维生素E TPGS和GELUCIRE 44/14在60℃下加热和均化，然后称重并加入制剂中。
2.活性制剂的制备将半固体赋形剂在≤60℃的温度下加热并均化。在柔和光下，称取出12±1毫克钙三醇于各带拧盖的玻璃瓶中，每制剂放一个瓶子。(钙三醇对光敏感，在使用钙三醇/钙三醇制剂时应使用柔和的光/红光)。记录精确到0.1毫克的确切重量。钙三醇放入瓶中后立即将盖子盖到瓶上。然后，用下式计算使浓度为0.208毫克/克所需的各赋形剂的量Cw/0.208＝所需的赋形剂重量其中Cw＝钙三醇的重量(毫克)，0.208＝钙三醇的最终浓度(毫克/克)。
最后，将适量的各赋形剂加入各个对应的含钙三醇的瓶中。将制剂在加热(≤60℃)的同时混合，以使钙三醇溶解。
实施例2
其它制剂的制备根据实施例的方法，制备了含有表2所列成分的12种用于钙三醇的不同制剂。
表2组合物组成
所示量为百分比。
实施例3稳定的单位剂量制剂制备钙三醇制剂以获得表3所列的组成。将维生素E TPGS加热到约50℃并以适当的比例与MIGLYOL 812混合。在各制剂中加入BHA和BHT，使其在最终制剂中各占0.35％w/w。
表3钙三醇制剂
配制制剂后，将制剂2-4加热到约50℃并与钙三醇混合，以制得0.1微克钙三醇/毫克总制剂。然后将含钙三醇的制剂(～250微升)加入到25mL的容量瓶中，向该25mL容量瓶中加入去离子水。然后涡旋混匀所示溶液，混合后立即(初始)和混合后10分钟时在400nm处测定各制剂的吸光度。如表4所示，三种制剂在与水混合时均产生了带乳光的溶液。制剂4似乎形成了稳定的悬浮液，在10分钟后于400nm处未观察到可见的变化。
表4悬浮在水中的制剂的吸光度
为进一步评估钙三醇制剂，进行了溶解性的研究以评估在各制剂中所溶解的钙三醇的量。制备了钙三醇浓度为0.1-0.6微克钙三醇/毫克制剂的制剂，制备方法为将制剂加热到50℃，然后加入适量的钙三醇。然后将制剂冷却到室温，并以带有或不带有偏振光的光学显微镜确定未溶解钙三醇的存在。在各制剂中，最高测试浓度(0.6微克钙三醇/毫克制剂)的钙三醇均可溶。
目前，正用45微克剂量的钙三醇进行人的2期临床试验。为开发一种具有这一剂量的胶囊，制备了含有0.2微克钙三醇/毫克制剂和各0.35％w/w的BHA和BHT的各制剂。将散装的制剂混合物以225毫克(45微克钙三醇)的质量填装入3号明胶硬胶囊。然后将胶囊在5℃、25℃/60％相对湿度(RH)、30℃/65％RH和40℃/75％RH下进行稳定性分析。在适当的时间点，分析稳定性样品的整体钙三醇含量和胶囊的溶出度。胶囊中的钙三醇含量是通过将3个打开的胶囊溶于5毫升甲醇中，并在分析前置于5℃保存而进行的。然后将该经溶解的样品以反相HPLC分析。使用了30℃的Phemonex Hypersil BDS碳18柱，乙腈梯度为55％乙腈水溶液-95％乙腈，洗脱中的流速为1.0毫升/分钟。在265nm处测得峰，每次运行注入25微升的样品。将样品峰面积与标准对照品比较，以计算出表5中所报告的钙三醇含量。溶出度测试是在6个低容量溶出容器(在该容器中装有50毫升含有0.5％十二烷基硫酸钠的去离子水)中各放入一粒胶囊进行的。在37℃、75转/分钟条件下混合30、60和90分钟后取样。样品中的钙三醇含量的测定是通过将100微升样品注入Betasil碳18柱，并在30℃下，以1毫升/分钟流速的流动相(乙腈∶水∶四氢呋喃＝50∶40∶10)操作(在265nm处检测峰)而进行的。报告了获自6粒胶囊的90分钟溶出试验的平均值(表6)。
表5明胶硬胶囊中钙三醇制剂的化学稳定性(每粒胶囊填充的总质量为225毫克，钙三醇为45微克)
a.分析结果表示相对于基于45微克含量/胶囊期望值的钙三醇％。数值中包括前钙三醇(其为钙三醇的活性异构体)。
表6明胶硬胶囊中钙三醇制剂的物理稳定性(每粒胶囊填充的总质量为225毫克，钙三醇为45微克)
a.胶囊的溶出按所述进行，钙三醇％是基于标准和45微克钙三醇/胶囊的期望含量而进行计算的。前钙三醇(活性异构体)未包括在溶解的钙三醇％计算中。所报告的数值来自90分钟的样品。
化学稳定性结果表明MIGLYOL 812含量的降低伴随维生素E TPGS含量的提高提供了如表5中所记录的整体钙三醇回收率的提高。制剂4(50∶50的MIGLYOL812/维生素E TPGS)为化学稳定性最佳的制剂，在25℃/60％RH条件下，其整体钙三醇回收率仅有较小下降，使其能在室温下储存。
制剂的物理稳定性是通过胶囊在各稳定性条件下储存后的溶出行为来分析的。与化学稳定性相符，MIGLYOL 812含量的降低和维生素E TPGS含量的提高改善了制剂的溶出性质(表6)。制剂4(50∶50的MIGLYOL 812/维生素E TPGS)具有最佳的溶出性质，并具有适合室温储存的稳定性。
在充分描述了本发明后，本领域普通技术人员应当理解，在广泛的且与所述条件、制剂和其它参数等价的范围内，能实施相同的发明而不影响本发明或其实施方式的范围。本文所引用的所有专利、专利申请和出版物全部完整地纳入本文作为参考。
权利要求
1.一种在动物中预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄或动脉旁路手术后狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物治疗有效量的活性的维生素D化合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血管成形术是在冠状动脉、外周动脉或旁路移植物中进行的。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动脉旁路手术是在冠状动脉或外周动脉中进行的。
4.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括在所述血管成形术期间或之后插入支架。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在血管成形术或旁路手术之前给予所述活性的维生素D化合物。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在血管成形术或旁路手术之后给予所述活性的维生素D化合物。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在血管成形术或旁路手术之前和之后给予所述活性的维生素D化合物。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性的维生素D化合物是钙三醇。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性的维生素D化合物具有降低的高钙血症效应。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述活性的维生素D化合物选自下组EB 1089、Ro23-7553或Ro24-5531。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以约0.5微克-约5微克的剂量每天给予所述活性的维生素D化合物。
12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过高剂量脉冲给药(HDPA)给予所述活性的维生素D化合物，其中各个脉冲剂量为足以产生治疗效果的量。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述HDPA的给药频率不超过每3天1次。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述HDPA的给药频率不超过每4天1次。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述HDPA的给药频率不超过每周1次。
16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，以约3微克-约300微克的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，以约15微克-约260微克的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，以约3微克-约240微克的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，以约50微克-220微克的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，以约75微克-约200微克的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
21.如权利要求12所述的方法，其特征在于，以足以获得至少0.5nM活性的维生素D化合物峰值血浆浓度的剂量给予所述活性的维生素D化合物。
22.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性的维生素D化合物是通过口服、静脉内、非胃肠道、直肠、局部、鼻部或透皮给药的。
23.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性的维生素D化合物是口服给药的。
24.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述活性的维生素D化合物是静脉内给药的。
25.如权利要求1所述的方法，所述方法还包括给予一种或多种治疗剂。
26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述一种或多种治疗剂选自下组抗瘤剂、血管扩张剂、抗凝血剂、抗血小板剂、抗纤维蛋白酶、免疫抑制剂、抗炎类或胶原合成酶抑制剂。
27.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述一种或多种治疗剂选自下组放线菌素D、依立替康、长春新碱、长春碱、甲氨喋呤、硫唑嘌呤、氟尿嘧啶、阿霉素、丝裂霉素、硝酸盐、钙通道阻滞剂、肝素、阿司匹林、IIb/IIIa受体的阻滞剂、水蛭素、伊洛前列素、西罗莫司、依维莫司、A24、利喘贝、地塞米松、他克莫司、溴氯哌喹酮、丙基羟化酶、C-蛋白水解酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、皮质激素、非类固醇类抗炎药物、17β-雌二醇、加压素转化酶抑制剂、秋水仙素、成纤维细胞生长因子拮抗剂、组胺拮抗剂、洛伐它丁、硝普盐、磷酸二酯酶抑制剂、前列腺素抑制剂、苏拉灭、5-羟色胺阻滞剂、硫蛋白酶抑制剂、血小板衍生的生长因子的拮抗剂、一氧化氮或血管肽素。
28.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述一种或多种治疗剂是紫杉烷。
29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述紫杉烷是紫杉醇或多西他赛。
30.如权利要求25所述的方法，其特征在于，在给予所述活性的维生素D化合物之前给予所述一种或多种治疗剂。
31.如权利要求25所述的方法，其特征在于，在给予所述活性的维生素D化合物的同时给予所述一种或多种治疗剂。
32.如权利要求25所述的方法，其特征在于，在给予所述活性的维生素D化合物的之后给予所述一种或多种治疗剂。
33.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以包含以下物质的单位剂型给予所述活性的维生素D化合物约10微克-约75微克的钙三醇、约50％的MIGLYOL 812和约50％的生育酚PEG-1000琥珀酸酯(维生素E TPGS)。
34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述单位剂型包含约45微克的钙三醇。
35.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述单位剂型还包含至少一种选自下组的添加剂抗氧化剂、缓冲剂、防沫剂、防粘剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张力调节剂、调味剂、着色剂、香料、遮光剂、悬浮剂、粘合剂、填充剂、增塑剂、增稠剂、润滑剂、或它们的混合物。
36.如权利要求35所述的方法，其特征在于，所述添加剂中的一种是抗氧化剂。
37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述抗氧化剂选自下组丁基羟基茴香醚(BHA)或丁基羟基甲苯(BHT)。
38.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述单位剂型中包含BHA和BHT。
39.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述单位剂型是胶囊。
40.如权利要求39所述的方法，其特征在于，所述胶囊是明胶胶囊。
41.如权利要求39所述的方法，其特征在于，所述胶囊中的成分总体积为10-1000微升。
42如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述单位剂型包含约45微克的钙三醇、约50％的MIGLYOL 812、约50％的维生素E TPGS、BHA以及BHT。
全文摘要
本发明涉及通过对动物给予活性的维生素D化合物来预防、治疗或改善动物血管成形术后的动脉再狭窄的方法。本发明还涉及通过对动物联合给予所述动物活性的维生素D化合物和其它治疗剂来预防、治疗或改善血管成形术后再狭窄的方法。本发明的另一方面提供了在动物中的动脉旁路移植物中和/或周围预防、治疗或改善狭窄的方法，所述方法包括给予所述动物活性的维生素D化合物。
文档编号A61K31/715GK1950095SQ200580014870
公开日2007年4月18日 申请日期2005年5月10日 优先权日2004年5月10日
发明者M·J·怀特豪斯, B·S·古德温 申请人:诺瓦西股份有限公司