专利名称：作为蛋白激酶抑制剂的噻吩并[3,2－b]吡啶－6－甲腈的制作方法
本申请涉及可用作药物的噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈、更特别地涉及3-取代的-噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈、制备它们的方法以及包含它们的药物组合物。3-取代的-噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈作为蛋白激酶抑制剂可用于特别是治疗癌症、中风、心肌梗死、神经性疼痛、骨质疏松、多囊肾、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎和移植物排斥。
背景技术：
本发明涉及抑制蛋白激酶活性的化合物。蛋白激酶是催化磷酸基团从ATP向蛋白上的氨基酸残基如酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸或组氨酸转移的酶。这些蛋白激酶的调节对于包括增殖和迁移在内的许多细胞事件的控制是很重要的。已经表明在不同的病症中涉及特定的蛋白激酶，所述的病症包括癌症[Blume-Jensen，P.，Nature，411，355(2001)Traxler，P.M.，Exp.Opin.Ther.Patents，8，1599(1998)；Bridges，A.J.，Emerging Drugs，3，279(1998)]；再狭窄[Mattsson，E.，Trends Cardiovascular Medicine 5，200(1995)]；动脉粥样硬化[Raines，E.W.，Bioessays，18，271(1996)]；血管生成[Shawver，L.K.，Drug Discovery Today，2，50(1997)；Folkman，J.，NatureMedicine，1，27(1995)]；中风[Paul，R.，Nature Medicine 7，222(2001)]；和骨质疏松[Boyce，J.Glin.Invest.，90，1622(1992)]。
酪氨酸激酶(TK)是一类蛋白激酶。胞质蛋白TK的主要家族是包括至少八个参与各种信号传导途径的成员(Src、Fyn、Lyn、Yes、Lck、Fgr、Hck和Blk)的Src家族[Schwartzberg，P.L.，Oncogene，17，1463(1998)]。这种酪氨酸激酶家族的原型成员是Src，其参与许多细胞类型的增殖和迁移响应[Sawyer，T.，Expert Opin.Investig.Drugs，10，1327(2001)]。已经表明在乳房、结肠(～90％)、胰腺(＞90％)和肝脏(＞90％)肿瘤中Src活性升高。大大增加的Scr活性还与转移(＞90％)和预后差有关。反义Src信息阻止裸鼠体内结肠肿瘤细胞的生长[Staley，C.A.，Cell Growth Differentiation，8，269(1997)]，这表明Src抑制剂能减缓肿瘤生长。除了在细胞增殖中起作用外，Src还在包括缺氧响应在内的应激响应途径中起作用。在用表达反义Src信息的结肠肿瘤细胞进行的裸鼠研究中，血管形成减少[Ellis，L.M.，J.Biol.Chem.，273，1052(1998)]，其表明Src抑制剂能抗血管生成以及抗增殖。
Src破坏了与E-钙粘着蛋白有关的细胞-细胞相互作用[E.Avezienyte，Nature Cell Bio.，4，632(2002)]。低分子量的Src抑制剂防止这种破坏，从而减少癌细胞转移[Nam，J.S.，Clinical Carcer Res.，8，2340(2002)]。
Src抑制剂可以预防由VEGF介导的血管渗透性增加如中风后观察到的血管渗透性增加而导致的继发性损伤[Eliceiri，B.P.，Mol.Cell.，4，915(1999)；Paul，R.，Nat.Med.7，222(2001)]。
Src的阻断以相同的动力学预防涉及Flk、VE-钙粘着蛋白和β-连环蛋白的复合物的解离，从而防止VEGF-介导的VP/水肿，解释VEGF-介导的渗透性中的Src需求，为Src抑制作为患有急性心肌梗死的患者的治疗选择提供了基础[Weis，S.，J.Clin.Invest，113，885(2004)]。
Src还在骨质疏松中发挥作用。发现在遗传上Src产生不足的小鼠表现出骨硬化病、骨吸收不能[Soriano，P.，Cell，64，693(1991)；Boyce，B.F.，J.Clin.，Invest.，90，1622(1992)]。该缺陷以破骨细胞活性不足为特征。因为破骨细胞通常表达高水平的Src，所以在骨质疏松的治疗中抑制Src激酶活性可能是有用的[Missbach，M.，Bone，24，437(1999)]。
NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体的抑制剂可治疗慢性神经性疼痛[Urban，L.Drug Dev.Res.，54，159(2002)]。NMDA受体的活性是由Src家族激酶(SFK)调节的(Yu，X.M.，Proc.Nat.Acad.Sci.，U.S.A.，96，7697(1999)，低分子量SFK抑制剂PP2降低NMDA受体NR2亚基的磷酸化作用[Guo，W.J.Neuro.，22(14)，6208(2002)]。因此，SFK抑制剂具有治疗神经性疼痛的潜能。
酪氨酸激酶(TK)被分为两类非跨膜TK和跨膜生长因子受体TK(RTK)[Blume-Jensen，P.，Nature，411，355(2001)]。生长因子如表皮生长因子(EGF)与其位于细胞表面上的伴侣RTK的胞外域结合，其激活RTK，从而引发控制包括增殖和迁移在内的各种细胞响应的信号转导级联。在癌症的形成和进展中涉及EGF的过量表达以及表皮生长因子受体(EGFr)家族成员的过量表达，所述成员包括EGF-r、erbB-2、erbB-3和erbB-4[Rusch，V.，Cytokine Growth Factor Rev.，7，133(1996)，Davies，D.E.，Biochem.Pharmacol.，51，1101(1996)和Modjtahedi，E.，Int.J.Oncol.，4，277(1994)]。特别地，已经表明erbB-2致癌基因的受体激酶产物的过量表达与人乳腺癌和卵巢癌有关[Slamon，D.J.，Science，244，707(1989)和Slamon，D.J.，Science，235，177(1987)]。已经表明EGFr激酶活性的上调与表皮样瘤[Reiss，M.，Cancer Res.，51，6254(1991)]、乳腺肿瘤[Macias，A.，AnticancerRes.，7，459(1987)]和涉及其它主要器官的肿瘤[Gullick，W.J.，Brit.Med.Bull.，47，87(1991)]有关。
还已知EGF受体失调是被描述为多囊肾的疾病中上皮囊肿生长的一种因素[Du，J.，Amer.J.Physiol.，269(2 Pt 1)，487(1995)；Nauta，J.，Pediatric Res.，37(6)，(1995)；Gattone，V.H.，Developmental Biology，169(2)，504(1995)；Wilson，P.D.，Eur.J.Cell Biol.，61(1)，(1993)]。因此，抑制EGF受体的催化功能的本发明的化合物可用于治疗该疾病。
除了EGFr外，还有多种其它RTK，包括FGFr，即成纤维细胞生长因子(FGF)的受体；也被称为KDR的flk-1和flt-1，即血管内皮生长因子(VEGF)的受体；和PDGFr，即血小板衍生生长因子(PDGF)的受体。新血管的形成(一种被称为血管生成的过程)对于肿瘤生长而言是至关重要的。两种天然的血管生成抑制剂—制管张素和内皮抑素(endostatin)显著抑制多种实体瘤的生长[O′Reilly，M.S.，Cell，79，315(1994)；O′Reilly，M.S.，Nature Medicine，2，689(1996)；O′Reilly，M.S.，Cell，88，277(1997)]。因为已知FGF和VEGF刺激血管生成，所以抑制其受体的激酶活性应当可阻断这些生长因子的血管生成作用。此外，受体酪氨酸激酶tie-1和tie-2也在血管生成中发挥关键作用[Sato，T.N.，Nature，376，70(1995)]。抑制FGFr、flk-1、flt-1、tie-1或tie-2的激酶活性的本发明的化合物可通过其对血管生成的作用来抑制肿瘤生长。
对于平滑肌细胞(SMC)，PDGF是一种有效的生长因子和化学引诱物。血管成形术后冠状动脉的重新变窄部分是由于对PDGF水平增加的响应中的SMC的增殖增加。因此，抑制PDGFr的激酶活性的化合物可用于治疗再狭窄。此外，因为PDGF和PDGFr在多种类型的人神经胶质瘤中过量表达，所以能抑制PDGFr活性的小分子具有用作抗癌治疗剂的潜能[Nister，M.，J.Biol.Chem.266，16755(1991)；Strawn，L.M.，J.Biol.Chem.269，21215(1994)]。
本发明的化合物可能能抑制的其它RTK包括集落刺激因子受体、神经生长因子受体(trka、trkB和trkC)、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、肝细胞生长因子受体和产生红细胞生成素的肝细胞受体(EPH)。
除了RTK外，还有另一族TK，它们被称为胞质蛋白或非受体TK。胞质蛋白TK具有内在激酶活性，存在于细胞质和细胞核中，并且参与多种信号传导途径。存在大量非受体TK，包括Abl、Jak、Fak、Syk、Zap-70和Csk。如STI-571(以Gleevec的形式被市售)所证明的那样，Abl激酶的抑制剂可用于治疗慢性髓性白血病[Kantarjian，H.，N.Engl.J.Med.，346(9)，645(2110)]。为Src和Ab1的双重抑制剂的化合物可用于治疗耐Gleevec的慢性髓性白血病(CML)[Warmuth，M.，Current Pharm.Design，9，2043(2003)]。
胞质蛋白TK、Ick和ZAP-70的两个成员主要在T-细胞和天然杀伤(NK)细胞上进行表达。这些激酶的抑制剂可抑制免疫系统，因此具有用于治疗自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、脓毒症和移植物排斥的治疗潜能[Kamens，J.S.，Current Opin.Investig.Drugs，2，1213(2001)；Myers，M.，Current Pharm.Design，3，473(1997)]。低分子量的Lck抑制剂可有效预防同种异体移植物排斥[Waegell，W.Transplant.Proceed.34，1411(2002)]。
除了TK外，还存在另外的激酶，包括将蛋白上的丝氨酸和/或苏氨酸残基磷酸化的那些激酶。细胞信号转导级联中的一种主要途径是由MAP激酶激酶(MAPKK)(包括mek)及其底物MAP激酶(MAPK)(包括erk)组成的促分裂原-活化的蛋白激酶(MAPK)途径[Seger，R.，FASEB，9，726(1995)]。当通过上游激酶如raf家族的成员在两个丝氨酸残基上的磷酸化作用被激活时，mek催化erk上的苏氨酸和酪氨酸残基的磷酸化作用。然后，被激活的erk磷酸化并激活细胞核中的转录因子和其它细胞靶标。mek或erk的过量表达和/或过度活化与多种人的癌症有关[Sivaraman，V.S.，J.Clin.Invest.，99，1478(1997)]。
如上所述，raf家族激酶的成员将mek上的丝氨酸残基磷酸化。Raf家族有三种丝氨酸/苏氨酸激酶成员，其被称为a-raf、b-raf和c-raf。虽然在人的癌症中raf基因的突变很罕见，但是c-raf被ras致癌基因激活，而ras致癌基因在许多人肿瘤中存在变异。因此，抑制c-raf激酶活性可提供一种预防ras介导的肿瘤生长的方法[Campbell，S.L.，Oncogene，17，1395(1998)]。
细胞周期蛋白-依赖性激酶(cdks)(包括cdc2/细胞周期蛋白B、cdk2/细胞周期蛋白A、cdk2/细胞周期蛋白E和cdk4/细胞周期蛋白D等)是调节哺乳动物细胞分裂的丝氨酸/苏氨酸激酶。这些激酶的活性或活化增加与人肿瘤的发展有关[Garrett，M.D.，Current Opin.Genetics Devel.，9，104(1999)；Webster，K.R.，Exp.Opin.Invest.Drugs，7，865(1998)]。其它丝氨酸/苏氨酸激酶包括PDK1、SGK以及被称为PKA或环腺苷酸-依赖性蛋白激酶、PKB(Akt)和PKC的蛋白激酶A、B和C(这三种激酶在造成瘤形成的信号转导途径中都发挥关键作用)[Glazer，R.I.，Current Pharm.Design，4(3)，277(1998)]。能抑制mek、erk、raf、cdc2/细胞周期蛋白B、cdk2/细胞周期蛋白A、cdk2/细胞周期蛋白E、cdk4/细胞周期蛋白D、PDK1、SGK、PKA、PKB(Akt)或PKC的激酶活性的化合物可用于治疗特征为细胞增殖异常的疾病，如癌症。
丝氨酸/苏氨酸激酶UL97是一种人巨细胞病毒复制所需的与病毒体有关的蛋白激酶[Wolf，D.G.，Arch.Virology 143(6)，1223(1998)和He，Z.，J.Virology，71，405(1997)]。能抑制UL97的激酶活性的化合物可能是有用的抗病毒治疗剂。因为某些细菌需要组氨酸激酶的作用来进行增殖[Loomis，W.F.，J.Cell Sci.，110，1141(1997)]，所以能抑制该类组氨酸激酶活性的化合物可能是有用的抗菌剂。
一些噻吩并[3，2-b]吡啶、噻吩并[2，3-b]吡啶以及某些吡啶和嘧啶衍生物已经被确定为激酶抑制剂。这些化合物在各种位置上的取代基的性质和布局都与本发明的化合物不同。我们的于2004年6月10日公开的待审的WO 2004/048386(将其内容全部引入本文作为参考)描述了作为蛋白激酶抑制剂的2-取代的-噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈和2-取代的-噻吩并[2，3-b]吡啶-5-甲腈。
发明概述本发明涉及式II的化合物 其中X是-NH-、-NR4-、-O-、-S(O)m-或-NHCH2-；m是0-2的整数；n是2-5的整数；q是0-5的整数；R1是任选地被一至四个选自J、-NO2、-CN、-N3、-CHO、-CF3、-OCF3、R4、-OR4、-S(O)mR4、-NR4R4、-NR4S(O)mR4、-OR6OR4、-OR6NR4R4、-N(R4)R6OR4、-N(R4)R6NR4R4、-NR4C(O)R4、-C(O)R4、-C(O)OR4、-C(O)NR4R4、-OC(O)R4、-OC(O)OR4、-OC(O)NR4R4、NR4C(O)R4、-NR4C(O)OR4、-NR4C(O)NR4R4、-R5OR4、-R5NR4R4、-R5S(O)mR4、-R5C(O)R4、-R5C(O)OR4、-R5C(O)NR4R4、-R5OC(O)R4、-R5OC(O)OR4、-R5OC(O)NR4R4、-R5NR4C(O)R4、-R5NR4C(O)OR4、-R5NR4C(O)NR4R4或YR7的取代基取代的苯环；R2是R3、J、-C(O)XR3或-CHO，其中R3可以被一个或多个选自-C(O)XR8、-CHO、-C(O)Q、1，3-二氧戊环、-R8、-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qQ、-X(C(R9)2)nXR8、-X(C(R9)2)nQ或-X(C(R9)2)qR8的基团取代；R3是1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环；R4是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基或2-6个碳原子的炔基；R5是1-6个碳原子的二价烷基、2-6个碳原子的二价链烯基或2-6个碳原子的二价炔基；R6是2-6个碳原子的二价烷基；R7是3-7个碳的环烷基环、芳基或杂环的环或与一至三个芳基或杂环的环稠合的芳基或杂环的环，其中任何所述的芳基、环烷基或杂环的环都可以任选地被一至四个选自H、-芳基、-CH2-芳基、-NH-芳基、-O-芳基、-S(O)m-芳基、J、-NO2、-CN、-N3、-CHO、-CF3、-OCF3、R4、-OR4、-S(O)mR4、-NR4R4、-NR4S(O)mR4、-OR6OR4、-OR6NR4R4、-N(R4)R6OR4、-N(R4)R6NR4R4、-NR4C(O)R4、-C(O)R4、-C(O)OR4、-C(O)NR4R4、-OC(O)R4-、-OC(O)OR4、-OC(O)NR4R4、-NR4C(O)R4、-NR4C(O)OR4、-NR4C(O)NR4R4、-R5OR4、R5NR4R4、-R5S(O)mR4、-R5C(O)R4、-R5C(O)OR4、-R5C(O)NR4R4、-R5C(O)R4、-R5C(O)OR4、-R5C(O)NR4R4、-R5OC(O)R4、-R5OC(O)OR4、-R5OC(O)NR4R4、-R5NR4C(O)R4、-R5NR4C(O)OR4或-R5NR4C(O)NR4R4的取代基取代；R8是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环；R9是R4或F；Y是-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHSO2-、-SO2NH-、-C(OH)H-、-X(C(R9)2)q-、-(C(R9)2)q-、-(C(R9)2)qX-、-C≡C-、-CH＝CH-或3-10个碳原子的环烷基；
Q是NZZ’，其中Z和Z’可以相同或不同，并且可以是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环，或者Z和Z’与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以具有另外的选自氮、氧和硫的杂原子，并且可以包括吗啉、哌嗪、哌啶，任选地在碳或氮上被-R8取代或者在氮上被基团-(C(R9)2)nXR8、-(C(R9)2)nNZ”Z取代或者在碳上被基团-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qNZ”Z取代；Z和Z”可以是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环，或者Z”和Z与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以含有另外的选自氮、氧和硫的杂原子；且J是氟、氯、溴或碘；或其可药用的盐。
在一些实施方案中，XR1是-NH-R1。
R1可以是例如任选地被一至四个选自J或-OR4的取代基取代的苯环，其中R4可以是例如H或1-4个碳原子的烷基。
R2可以是J或R3，其中R3是芳基或杂环并且R3基团任选地被至少一个选自-C(O)XR8、-CHO、-C(O)Q、1，3-二氧戊环、R8、-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qQ、-X(C(R9)2)nXR8、-X(C(R9)2)nQ或-X(C(R9)2)qR8的基团取代。在一些实施方案中，R2可以是J或R3，其中R3是芳基或杂环并且R3基团任选地被至少一个选自-CHO、-(C(R9)2)qQ或R8的基团取代。
Q可以是NZZ’，其中Z和Z’可以相同或不同并且可以是H或1至6个碳原子的烷基；或者Z和Z’与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以具有另外的选自氮和氧的杂原子，所述环可以在氮上被R4取代。
R8可以是H、1至6个碳原子的烷基、芳基或杂环。J可以是氯或溴。在一些实施方案中，R9是H。某些实施方案包括其中q是1的化合物。
本发明的化合物包括3-溴-7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，
7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-(4-甲酰基苯基)噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-[4-(吗啉-4-基甲基)苯基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，和其可药用的盐。
对于本发明的目的而言，杂环或杂环的环是3-14员的芳族或非芳族的含1至4个选自S、N和O的杂原子的一至三个稠合环的杂环环系。该环系的各环可以是完全不饱和的、部分饱和的或完全饱和的。杂环部分包括但不限于噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、四唑、噻吩、唑、异噻唑、异唑、1，3，4-二唑、1，2，4-二唑、1，3，4-噻二唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、1，3，5-三嗪、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S，S-二氧化物、哌啶、哌嗪、吡咯烷、氮丙啶、环氧乙烷、四氢噻吩、四氢呋喃、1，2-吡喃、1，4-吡喃、二烷、1，3-二氧戊环、四氢吡喃、异茚(isoindene)、吲哚、2，3-二氢吲哚、2-吲唑、异吲唑、喹啉、异喹啉、四氢喹啉、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并咪唑、苯并三唑、苯并噻吩、苯并唑、苯并异唑、1，2-苯并吡喃、噌啉、2，3-二氮杂萘、喹唑啉、1，8-萘啶、吡啶并[3，2-b]吡啶、吡啶并[3，4-b]吡啶、吡啶并[4，3-b]吡啶、吡啶并[2，3-d]嘧啶、嘌呤和蝶啶。杂环可以在氮原子上被氧化，从而得到相应的N-氧化物，如吡啶-N-氧化物或喹啉-N-氧化物。杂环还可以在三取代的氮原子上被氧化，从而得到相应的N-氧化物，如N-乙基哌嗪-N-氧化物。杂环可以在碳原子之一上含有羰基，如吡咯烷酮、1，3，4-二唑-2-酮或2-二氢茚酮(2-indanone)。杂环可以任选地被取代基单-、二-、三-或四-取代，所述取代基选自但不限于烷基、酰基、烷氧基羰基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基、氰基、卤素、羟基或硝基。
对于本发明的目的而言，术语“芳基”被定义为芳族烃部分，可以是被取代的或未被取代的，可以含有例如6-14个碳原子并且具有一至三个环。该环系的一个或多个环可以是部分饱和的或完全饱和的。芳基可以选自但不限于苯基、萘基、1，2，3，4-四氢萘基、茚满、茚或联苯基，可以任选地被取代基单-、二-、三-或四-取代，所述取代基选自但不限于烷基、酰基、烷氧基羰基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基、氰基、卤素、羟基或硝基。
对于本发明的目的而言，“烷基”包括直链和支链烷基部分，优选包括1-6个碳原子的支链和直链烷基部分，包括异-丙基、正-丁基等。
对于本发明的目的而言，术语“环烷基”指的是3-7个碳原子的脂环族烃基，包括简单的碳环以及含有烷基取代基的碳环，例如环丙基、环己基、金刚烷基等。
对于本发明的目的而言，“链烯基”被定义为含有至少一个碳-碳双键的脂族烃基，包括所有可能的构型异构体形式例如顺式和反式的2-6个碳原子的直链和支链碳链，包括乙烯基、3-己烯-1-基等。
对于本发明的目的而言，“炔基”包括含有至少一个碳-碳三键的2-6个碳原子的直链或支链碳链，包括丙烯基等。
在本发明的一个实施方案中，烷基、环烷基、链烯基和炔基可以被取代基取代，所述取代基包括但不限于苯基、被取代的苯基、杂环、被取代的杂环、羟基、卤素、烷氧基、硫烷基(thioalkyl)、羧基、烷氧基羰基和酰基。
对于本发明的目的而言，“烷氧基”包含具有与氧原子相连的烷基的1-6个碳原子的基团，包括甲氧基、叔-丁氧基，还包括聚醚如-O-(CH2)2OCH3。1-6个碳原子的硫烷基被定义为与硫原子相连的烷基，包括甲硫基等。羧基被定义为-C(O)OH，烷氧基羰基被定义为-C(O)OR，其中R是1-6个碳原子的基团，包括甲氧基羰基、烯丙氧基羰基等。酰基被定义为其中R是脂族基团(例如烷基)或芳基的-C(O)R，包括乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。
本发明的化合物可以包括在本文中被定义为连接基团的“二价基团”，例如-CH2CH2-。
本发明的化合物可以含有一个或多个不对称碳原子，因此可以产生立体异构体，如对映体和非对映体。当在式II中没有表示出其立体化学时，本发明包括所有各种可能的立体异构体；以及外消旋混合物和R与S立体异构体的其它混合物(为不等量对映体混合物的scalemic混合物)以及其可药用盐。但是应当注意的是，本发明的在手性中心上具有相同相对构型的立体异构体可具有不同的R和S命名，这取决于所示手性中心上的取代基。一些本发明的化合物可含有一个或多个双键；在该类情况中，本发明的化合物包括各种可能构型的异构体以及这些异构体的混合物。
具有酸性部分的式II化合物的可药用盐可以由有机碱和无机碱来形成。实例包括强碱(例如N-四丁基铵)。类似地，当本发明的化合物含有碱性部分时，可以由有机酸和无机酸来形成盐。例如，可以由乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、苯二甲酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟脑磺酸以及类似的已知酸来形成盐。
本发明包括治疗或抑制哺乳动物的病理学病症或障碍的方法，其包括给所述哺乳动物提供有效量的式II化合物或其可药用盐。所述的病理学病症和障碍表现出Src表达增加。所述的病理学病症和障碍的实例包括但不限于癌症、中风、心肌梗死、骨质疏松、多囊肾、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎、移植物排斥和神经性疼痛。癌症可发生于例如乳房、结肠、肺、胰腺和肝。
本发明包括制备式II化合物的方法，其包括a.将式(a)的化合物用N-溴丁二酰亚胺处理，
得到式(b)的化合物 b.向式(b)的化合物中加入式R1XH的化合物，形成其中R2是溴的式II的化合物；和c.在存在钯催化剂的情况下任选地在溶剂系统中用式R3-H、R3-BL1L2或R3SnR3的化合物处理步骤(b)中制得的化合物，形成其中Br被R3替代的式II的化合物。
本发明还包括具有以下结构的化合物 在本发明的上下文中以及在使用各术语的特定上下文中，本说明书中所用的术语一般具有其在本领域中的普通含义。对某些术语在下文或者说明书的其它部分中进行了讨论，以便在本发明的化合物、组合物和方法以及如何制备和使用这些化合物、组合物和方法方面为从业者提供一些额外的指导。此外，应当理解的是，可以用多种方式来描述同一件事情。所以，对于本文所讨论的任何一个或多个术语而言，可以使用另一种措辞和同义词，并不赋予其任何特定的含义，无论在本文中对术语是否进行了详细说明或讨论。说明书任何地方的实例(包括本文中所讨论的任何术语的实例)的使用都仅仅是为了进行举例说明，绝不是用于对本发明的范围和含义或者任何被举例说明的术语的范围和含义进行限制。同样，本发明也不限于所给出的实例。
除了本文所述的效用外，一些本发明的化合物还是可用于制备本发明其它化合物的中间体。
在本申请中，结构用化学名称给出。在命名有任何问题时，以结构为准。
给出以下实验细节是为了帮助理解本发明，并非旨在也不应当将其曲解为以任何方式限制其后的权利要求所列出的发明。
发明详述本发明的化合物是根据以下流程图(1)由可商购获得的起始材料、(2)由可以用文献方法制备的已知起始材料或(3)由流程图和实验操作中所述的新中间体制备的。可以制备光学活性的异构体，例如通过将外消旋的衍生物进行拆分或者通过不对称合成来进行制备。可以用本领域技术人员已知的方法来进行拆分，如在存在拆分试剂的情况下进行拆分、用色谱法进行拆分或者将其联用来进行拆分。
反应是在对所用试剂和材料而言适宜并且适合用于所要实现的转化的溶剂中进行的。有机合成领域的技术人员可以理解的是，分子上存在的各种官能度必需与所要进行的化学转化不矛盾。这可能使得必需对合成步骤的顺序、保护基团(如果需要的话)以及去保护的条件进行判断。起始材料上的取代基可能与一些反应条件不相容。对可与反应条件相容的取代基的限定对于本领域技术人员而言是显而易见的。如果适宜，反应在惰性气氛下进行。
式II所包括的本发明的化合物和中间体的制备如下所述。
如流程图20中所示的那样，在N-甲基吡咯烷酮中用N-甲基哌嗪使式1的3-氨基-2-噻吩甲酸酯脱羧，得到式2的3-氨基噻吩。该脱羧作用也可以在碱如氢氧化钠水溶液中在升高的温度下进行。向位于溶剂如甲苯中的式2的化合物中加入(乙氧基亚甲基)氰基乙酸乙酯，得到中间体丙烯酸酯。使这些中间体丙酸酯在溶剂系统如联苯和二苯基醚中热环化，得到式3的7-氧代-4，7-二氢噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈。式3的化合物还可以用流程图20中所示的另一种途径来进行制备。用二甲基甲酰胺的二甲基缩醛处理式1的3-氨基-2-噻吩甲酸酯，得到式4的脒。将这些脒加入到在溶剂如四氢呋喃中的通过正-丁基锂对乙腈的作用在低温、优选-78℃下产生的乙腈的阴离子中，得到式3的7-氧代-4，7-二氢噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈。
用氯化剂、优选三氯氧化磷(phosphorous oxychloride)处理式3的化合物，得到式5的化合物。在存在盐酸吡啶的情况下在溶剂如2-乙氧基乙醇中在110-130℃的升高的温度下，或者在存在氢化钠的情况下在溶剂如四氢呋喃中在60-70℃的升高的温度下，向式5的化合物中加入其中X是NH或NR4的式R1XH的化合物，得到其中X是NH或NR4的本发明的式II化合物。或者，在存在钯催化剂如三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和配体如2-二环己基膦基-2′-(N，N-二甲基氨基)联苯和磷酸钾的情况下在溶剂如乙二醇二甲醚中在升高的温度、优选90℃下，向式5的化合物中加入其中X是NH或NR4的式R1XH的化合物，得到其中X是NH或NR4的本发明的式II化合物。在溶剂如二甲基甲酰胺中在升高的温度下，向式5的化合物中加入其中X是O的式R1XH的化合物，任选地加入碱如碳酸钾，得到其中X是O的本发明的式II化合物。在溶剂如二甲基甲酰胺中，向式5的化合物中加入其中X是S的式R1XH的化合物，得到其中X是S的本发明的式II化合物。在溶剂如2-乙氧基乙醇中在升高的温度下，向式5的化合物中加入其中X是NHCH2的式R1XH的化合物，任选地加入碱如N，N-二异丙基胺，得到其中X是NHCH2的本发明的式II化合物。
或者，在助溶剂如乙醇中在升高的温度下用氢氧化钠水溶液将6、即7-氯噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲酸乙酯[Thompson，M.；Forbes，I.F.EP 126970]的乙基水解成相应的6-羧酸7。相应的6-甲酰胺类似物8是通过用试剂如亚硫酰氯或N，N-羰基二咪唑等对7进行处理、然后加入氢氧化铵水溶液或氨气来制备的。用试剂如氰尿酰氯将8脱水，得到中间体7-氯噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈9。
流程图20 流程图21描述了一种制备其中R2是溴的本发明的式II化合物的途径。在升高的温度、优选在约40-90℃下、在溶剂如二甲基甲酰胺或乙酸中用N-溴丁二酰亚胺对9进行处理，得到10。在存在盐酸吡啶的情况下在溶剂如2-乙氧基乙醇中在110-130℃的升高的温度下，或者在存在氢化钠的情况下在溶剂如四氢呋喃中在60-70℃的升高的温度下，向式10的化合物中加入其中X是NH或NR4的式R1XH的化合物，得到其中X是NH或NR4且R2是Br的本发明的式II化合物。或者，在存在钯催化剂如三(二亚苄基丙酮)-二钯(O)和配体如2-二环己基膦基-2′-(N，N-二甲基氨基)联苯和磷酸钾的情况下，在溶剂如乙二醇二甲醚中，在升高的温度、优选90℃下，向式10的化合物中加入其中X是NH或NR4的式R1XH的化合物，得到其中X是NH或NR4且R2是Br的本发明的式II化合物。在溶剂如二甲基甲酰胺中，在升高的温度下，向式10的化合物中加入其中X是O的式R1XH的化合物，任选地加入碱如碳酸钾，得到其中X式O且R2是Br的本发明的式II化合物。在溶剂如二甲基甲酰胺中，向式10的化合物中加入其中X是S的式R1XH的化合物，得到其中X是S且R2是Br的本发明的式II化合物。在溶剂如2-乙氧基乙醇中，在升高的温度下，向式10的化合物中加入其中X是NHCH2的式R1XH的化合物，任选地加入碱如N，N-二异丙基胺，得到其中X是NHCH2且R2是Br的本发明的式II化合物。
其中R2是链烯基、炔基、杂环或芳基的本发明的式II化合物可以如流程图21所述的那样由其中R2是Br的式II化合物来制备。在存在钯催化剂的情况下将其中R2是Br的式II化合物用式R3-H的链烯或炔进行处理，得到其中R2是链烯基或炔基的式II化合物。该链烯基或炔基可以被一些基团取代，所述基团包括芳基和杂环，还包括烷基和烷基氨基等。
对于式R3-H的链烯的加入而言，优选的钯催化剂是存在配体、优选三-邻-甲苯基膦的情况下位于包括三乙胺或优选地三乙胺与N，N-二甲基甲酰胺的混合物的溶剂系统中的乙酸钯。对于式R3-H的炔的加入而言，优选的钯催化剂是位于包括三乙胺和苯的溶剂混合物中的与催化量的碘化亚铜(I)一起的四(三苯基膦)钯。
在存在钯催化剂的情况下，用式R3-BL1L2的芳基或杂环有机硼(organoboron)化合物处理其中R2是Br的式II化合物，得到其中R2是芳基或杂环基的式II化合物。在式R3-BL1L2的化合物中，基团L1L2表示配体，包括诸如低级烷氧基或优选地羟基等基团。化合物R3-BL1L2的芳基或杂环基可以被一些基团取代，所述基团包括芳基和杂环，还包括甲酰基、羧酸根、烷基和烷基氨基等。化合物R3-BL1L2的芳基或杂环基也可以与第二个芳基或杂环基稠合。对于式R3-BL1L2的化合物的加入而言，优选的钯催化剂是位于包括饱和碳酸氢钠水溶液和乙二醇二甲醚的溶剂混合物中的四(三苯基膦)钯(0)。
其中R2是芳基或杂环的式II化合物也可以通过使其中R2是Br的式II化合物与式R3-SnR3的芳基或杂环锡烷在存在钯催化剂的情况下进行反应来制备。在式R3-SnR3的化合物中，基团R是低级烷基如丁基或甲基。化合物R3-SnR3的芳基或杂环基可以被一些基团取代，所述基团包括芳基和杂环，还包括甲酰基、羧酸根、缩醛、烷基和烷基氨基等。化合物R3-SnR3的芳基或杂环基也可以与第二个芳基或杂环基稠合。对于式R3-SnR3的化合物的加入而言，优选的钯催化剂是位于溶剂如二烷中的氯化二(三苯基膦)钯(II)。
其中R2是炔基的式II化合物可以通过流程图21中所示的另一种途径来合成。在存在钯催化剂、优选四(三苯基膦)钯(0)的情况下，使用催化量的碘化亚铜(I)，在溶剂系统如三乙胺和苯中，用(三甲基硅烷基)乙炔处理其中R2是Br的式II化合物，得到其中R2是2-(三甲基硅烷基)乙炔基的式II化合物。在存在钯催化剂、优选氯化二(三苯基膦)钯(II)的情况下，在存在三苯基膦、碳酸钾和碘化亚铜(I)的情况下，在四氢呋喃和甲醇的溶剂混合物中，使其中R2是2-(三甲基硅烷基)乙炔基的式II化合物与芳基碘或杂环碘反应，得到其中R2是2-(芳基)乙炔基或2-(杂环)乙炔基的式II化合物。此外，可以通过在甲醇中用碳酸钾处理来裂解2-(三甲基硅烷基)乙炔基，从而得到其中R2是乙炔基的式II化合物。
流程图21 在流程图22中给出了一些获得本发明的式II化合物的其它途径。可以通过还原性氨基化将其中基团R2是R3-CHO的式II化合物转化成其中基团R2是R3-CH2Q的式II化合物。在存在还原剂、优选三乙酰氧基硼氢化钠的情况下，在包括二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺或1-甲基-2-吡咯烷酮的溶剂系统中，任选地在存在乙酸的情况下，用式QH的胺处理其中基团R2是R3-CHO的式II化合物，得到其中基团R2是R3-CH2Q的式II化合物。通过将其中基团R2是R3-CHO的式II化合物的甲酰基进行还原，作为该反应的副产物，得到其中基团R2是R3-CH2OH的式II化合物。
其中基团R2是R3-CHO的式II化合物可以通过水解、优选用盐酸水溶液在存在助溶剂如四氢呋喃的情况下水解其中基团R2是R3-缩醛的式II化合物的缩醛基来制备。
流程图22还描述了由其中R2是R3-(C(R8)2)q-CO2R4的式II化合物制备其中R2是R3-(C(R8)2)q-CO2H和R3-(C(R8)2)q-CONQ的式II化合物的方法。可以通过在助溶剂如乙醇中在升高的温度下用氢氧化钠水溶液进行处理将其中R2是R3-(C(R8)2)q-CO2R4的式II化合物转化成相应的其中R2是R3-(C(R8)2)q-CO2H的式II的酸。其中R2是(C(R8)2)q-CONQ的相应的式II的酰胺是通过用N，N-羰基二咪唑或亚硫酰氯等对酸进行处理、然后加入式QH的胺来制备的。此外，其中R2是R3-(C(R8)2)q-CONHR8或R3-(C(R8)2)q-CONH2的式II的相应的酰胺是通过用N，N-羰基二咪唑或亚硫酰氯等对酸进行处理、然后加入式R8NH2的胺或氢氧化铵或氨(g)来制备的。
流程图22 流程图23描述了另一种制备本发明的式II化合物的途径。在存在钯催化剂的情况下用式R3-H的链烯基或炔基试剂处理中间体10，得到其中R3是链烯基或炔基的式11的中间体。该链烯基或炔基可以被一些基团取代，所述基团包括芳基和杂环，还包括烷基和烷基氨基等。该芳基或杂环基还可以被诸如烷氧基、烷基氨基等基团取代。对于式R3-H的链烯的加入而言，优选的钯催化剂是在存在配体、优选三-邻-甲苯基膦情况下的位于包括三乙胺或优选地三乙胺与N，N′-二甲基甲酰胺的混合物中的乙酸钯。对于式R3-H的炔的加入而言，优选的钯催化剂是位于包括三乙胺和苯的溶剂混合物中的与催化量的碘化亚铜(I)一起的四(三苯基膦)钯(0)。在溶剂如2-乙氧基乙醇中在110-130℃的升高的温度下，或者在存在氢化钠的情况下在溶剂如四氢呋喃中在60-70℃的升高的温度下，或者在钯催化的偶联条件下(包括使用三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和(2-二环己基膦基-2′-(N，N-二甲基氨基)联苯)在溶剂如乙二醇二甲醚中在升高的温度如90℃下，向式11的化合物中加入式R1NH2的化合物，任选地加入盐酸吡啶，得到式II的化合物。
在存在钯催化剂的情况下用式R3-BL1L2的芳基或杂环有机硼化合物处理式10的中间体，得到其中R3是芳基或杂环基的式11的中间体。在式R3-BL1L2的化合物中，基团L1L2表示配体并且包括诸如低级烷氧基或优选地羟基等基团。化合物R3-BL1L2的芳基或杂环基可以被一些基团取代，所述基团包括芳基和杂环，还包括甲酰基、羧酸根、烷基和烷基氨基等。化合物R3-BL1L2的芳基或杂环基还可以与第二个芳基或杂环基稠合。对于式R3-BL1L2的化合物的加入而言，优选的钯催化剂是位于包括饱和碳酸氢钠水溶液和乙二醇二甲醚的溶剂混合物中的四(三苯基膦)钯(0)。在溶剂如2-乙氧基乙醇中在110-130℃的升高的温度下，或者在存在氢化钠的情况下在溶剂如四氢呋喃中在60-70℃的升高的温度下，或者在钯催化的偶联条件下(包括使用三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和(2-二环己基膦基-2′-(N，N-二甲基氨基)联苯)在溶剂如乙二醇二甲醚中在升高的温度如90℃下，向式11的化合物中加入式R1NH2的化合物，任选地加入盐酸吡啶，得到式II的化合物。
其中R2是芳基或杂环的式11的中间体也可以通过使式10的中间体与式R3-SnR3的芳基或杂环锡烷化合物在存在钯催化剂的情况下进行反应来制备。在式R3-SnR3的化合物中，基团R是低级烷基如丁基或甲基。化合物R3-SnR3的芳基或杂环基可以被一些基团取代，所述基团包括芳基和杂环，还包括甲酰基、羧酸根、缩醛、烷基和烷基氨基等。化合物R3-SnR3的芳基或杂环基还可以与第二个芳基或杂芳基稠合。对于式R3-SnR3的化合物的加入而言，优选的钯催化剂是位于溶剂如二烷中的氯化二(三苯基膦)钯(II)。在溶剂如2-乙氧基乙醇中在110-130℃的升高的温度下，或者在存在氢化钠的情况下在溶剂如四氢呋喃中在60-70℃的升高的温度下，或者在钯催化的偶联条件下(包括使用三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和(2-二环己基膦基-2′-(N，N-二甲基氨基)联苯)在溶剂如乙二醇二甲醚中在升高的温度如90℃下，向式11的化合物中加入式R1NH2的化合物，任选地加入盐酸吡啶，得到式II的化合物。
流程图23 在流程图24中给出了另外一些获得本发明地式II化合物的途径。其中R2是R3-CHO的式12的中间体可以通过加入含有醛基的硼或锡试剂来制备。它们还可以通过将其中R2是R3-缩醛的式13的中间体的缩醛基水解来制备，优选地用盐酸水溶液在存在助溶剂如四氢呋喃的情况下进行水解。可以通过在包括二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺或1-甲基-2-吡咯烷酮的溶剂系统中、任选地在存在乙酸的情况下用式QH的胺和还原剂、优选三乙酰氧基硼氢化钠进行还原性氨基化而将式12的中间体转化成式14的中间体。在溶剂如2-乙氧基乙醇中在110-130℃的升高的温度下，或者在存在氢化钠的情况下在溶剂如四氢呋喃中在60-70℃的升高的温度下，或者在钯催化的偶联条件下(包括使用三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)和(2-二环己基膦基-2′-(N，N-二甲基氨基)联苯)在溶剂如乙二醇二甲醚中在升高的温度如90℃下，向式13的化合物中加入式R1NH2的化合物，任选地加入盐酸吡啶，得到式II的化合物。
流程图24 在一些标准药理学试验方法中对本发明的代表性化合物进行评估，表明本发明的化合物具有显著的抗增殖活性，是蛋白酪氨酸激酶的抑制剂。根据在这些标准药理学试验方法中所表现出的活性，本发明的化合物因此可用作抗肿瘤剂。特别地，这些化合物可用于治疗瘤如乳房、肾、膀胱、口、喉、食管、胃、结肠、卵巢、肺、胰腺、肝、前列腺和/或皮肤的瘤、抑制其生长或将其根除。
除了具有抗肿瘤性质外，预期本发明的化合物还可用于治疗各种与蛋白酪氨酸激酶有关的障碍，其包括但不限于骨关节炎、再狭窄、动脉粥样硬化、纤维组织形成、血管纤维瘤、血管瘤、糖尿病、急性和慢性肾病、卡波西肉瘤、粉瘤、新生血管性青光眼、与黄斑变性有关的新血管形成、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、移植物排斥、T-细胞介导的超敏性疾病(hypersensitivity disease)，包括谷蛋白敏感性肠病(乳糜泄)、接触型和迟发型超敏反应、银屑病、接触性皮炎、保护免受缺血或再灌注损伤如器官移植、中风或心肌梗死期间引起的缺血或再灌注损伤、移植耐受诱导、狼疮、移植物抗宿主病、肾小球肾炎、血清病、呼吸系统和皮肤变态反应、自身免疫性脱发、恶性贫血、桥本甲状腺炎、自身免疫性甲状腺功能亢进、艾迪生病、多发性硬化、炎症性肠病、急性炎性响应(例如急性呼吸窘迫综合征)、贝赫切特病、特应性皮炎、系统性硬化病和/或湿疹。
实施例13-溴-7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈 向氢化钠(438mg 60％位于矿物油中的分散物，10.96mmol)在60mL四氢呋喃中的混悬液中加入2，4-二氯-5-甲氧基苯胺(2.10g，10.96mmol)。将该混合物在回流下加热1小时，然后冷却至室温，加入1.50g 3-溴-7-氯噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈和3，7-二溴噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈的1∶2.4的混合物。将反应混合物在回流下加热2小时，然后冷却至室温，用饱和氯化钠水溶液进行处理。分离出有机层，用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物用快速色谱进行纯化，用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱，得到1.78g褐色固体形式的3-溴-7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，mp 265-266℃；1H NMR(DMSO-d6)δ3.85(s，3H)，7.44(s，1H)，7.79(s，1H)，8.31(s，1H)，8.72(s，1H)，9.93(s，1H)；MS 427.9，429.9，431.8(M+H)+。
C15H8BrCl2N3OS的分析计算值C，41.98；H，1.88；N，9.79。
实测值C，41.87；H，1.76；N，9.64。
实施例27-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-(4-甲酰基苯基)噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈 将3-溴-7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈(1.67g，3.89mmol)、4-甲酰基苯基硼酸(1.17g，7.78mmol)和四(三苯基膦)钯(225mg，0.20mmol)在50mL乙二醇二甲醚和42mL饱和碳酸氢钠水溶液中的混合物在回流下加热2小时，然后冷却至室温。通过过滤收集沉淀，用乙酸乙酯和乙醚进行洗涤，得到1.09g褐色固体形式的7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-(4-甲酰基苯基)噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，mp 268℃；1HNMR(DMSO-d6)δ3.87(s，3H)，7.44(s，1H)，7.79(s，1H)，8.01(d，J＝8Hz，2H)，8.23(d，J＝8Hz，2H)，8.55(s，1H)，8.73(s，1H)，9.86(s，1H)，10.05(s，1H)；MS 454.0，456.0(M+H)+；HRMS实测值454.01716(M+H)+。
C22H13Cl2N3O2S的分析计算值C，58.16；H，2.88；N，9.25。
实测值C，57.96；H，2.57；N，8.85。
实施例37-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈
将7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-(4-甲酰基苯基)噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈(200mg，0.44mmol)和1.1mL 2M的二甲胺的四氢呋喃溶液(2.20mmol)在5mL二氯甲烷和1mL二甲基甲酰胺中的混合物冷却至0℃。分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(560mg，2.64mmol)，然后加入3滴乙酸。将所得混合物在室温下搅拌2.5小时，然后通过加入水将其淬灭。将混合物在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间进行分配。将有机相用饱和氯化钠水溶液进行洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物用快速柱色谱进行纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到147mg(69％)白色固体形式的7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，mp 201-202℃；1H NMR(DMSO-d6)δ2.19(s，6H)，3.46(s，2H)，3.86(s，3H)，7.38(d，J＝8Hz，2H)，7.42(s，1H)，7.78(s，1H)，7.89(d，J＝8Hz，2H)，8.31(s，1H)，8.69(s，1H)，9.78(s，1H)；MS 483.0，485.0(M+H)+；HRMS实测值483.08061(M+H)+。
C24H20Cl2N4OS-0.8H2O的分析计算值C，57.90；H，4.37；N，11.25。
实测值C，57.95；H，3.98；N，10.85。
实施例47-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈 MS 538.0，540.0(M+H)+；m.p.197-198。
实施例57-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-[4-(吗啉-4-基甲基)苯基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈
MS 525.0，527.0(M+H)+；m.p.184-185。
所用的试验方法和所得结果如下所示。
锚定非依赖性(Anchorage Independent)Src-转化的成纤维细胞增殖试验用含有CMV启动子控制的v-Src/Hu c-Src融合基因(其中插入人c-Src的催化区代替v-Src基因的v-Src催化区)的质粒稳定转染的Rat2成纤维细胞来测量src依赖性悬浮生长。在第1天，以每孔10,000个细胞对超低簇板(Ultra-low cluster plates)(Costar#3474)进行接种。在第2天，以10微摩尔至0.009微摩尔的连续两倍稀释物加入化合物，在第5天加入MTS试剂(Promega)(100微升MTS/培养基混合物+100微升已有细胞的培养基)，在490nm下测量其吸收度。对结果分析如下，如下得到对增殖的IC50(单位为微摩尔)抑制％＝(Abs490nm样品-空白)/(Abs490nm无化合物的对照-空白)×100％。用本发明的代表性化合物获得的结果如以下表3所列。
锚定非依赖性Lck-转化的成纤维细胞增殖试验用含有CMV启动子控制的v-Src/Hu Lck融合基因(其中插入人Lck的催化区代替v-Src基因的v-Src催化区)的质粒稳定转染的Rat2成纤维细胞来测量src依赖性悬浮生长。在第1天，以每孔10,000个细胞对超低簇板(Costar#3474)进行接种。在第2天，以10微摩尔至0.009微摩尔的连续两倍稀释物加入化合物，在第5天加入MTS试剂(Promega)(100微升MTS/培养基混合物+100微升已有细胞的培养基)，在490nm下测量其吸收度。对结果分析如下，如下得到对增殖的IC50(单位为微摩尔)抑制％＝(Abs490nm样品-空白)/(Abs490nm无化合物的对照-空白)×100％。用本发明的代表性化合物获得的结果如以下表3所列。
Src激酶试验重组人Src酶得自PanVera(P3044)。用相当于Cdkl的6-20残基的生物素化的肽作为底物(Biotin-KVEKIGEGTYGVVYK-COOH)。用铕/APC检测格式(format)(LANCE，Perkin Elmer)进行均匀的荧光共振能量转移激酶试验。将Src酶(10ng)与生物素化的肽(终浓度为2μM)、50mM Hepes(pH7.5)、10mM MgC12、20μg/ml BSA、0.001％Brij-35(Sigma)、100μM ATP、1％DMSO混合。将该激酶反应在37℃下孵育70分钟。以30mMEDTA/25mM Hepes(pH 7.5)/10g/ml BSA的终浓度用EDTA终止反应。将该混合物与Eu-标记的抗-磷酸酪氨酸抗体PT66(Perkin Elmer，AD0068)和链霉抗生物素Surelight-APC(Perkin Elmer，CR130-100)组合在50mMHepes(pH 7.5)/20g/ml BSA中，根据生产商的说明孵育30分钟。用665nm下的荧光强度来监测该激酶反应的程度。给定化合物的多个条目表明其被试验了多次。用本发明的代表性化合物获得的结果如以下表3所列。
表3
权利要求
1.式II的化合物 其中X是-NH-、-NR4-、-O-、-S(O)m-或-NHCH2-；m是0-2的整数；n是1-5的整数；q是0-5的整数；R1是任选地被一至四个选自J、-NO2、-CN、-N3、-CHO、-CF3、-OCF3、R4、-OR4、-S(O)mR4、-NR4R4、-NR4S(O)mR4、-OR6OR4、-OR6NR4R4、-N(R4)R6OR4、-N(R4)R6NR4R4、-NR4C(O)R4、-C(O)R4、-C(O)OR4、-C(O)NR4R4、-OC(O)R4、-OC(O)OR4、-OC(O)NR4R4、NR4C(O)R4、-NR4C(O)OR4、-NR4C(O)NR4R4、-R5OR4、-R5NR4R4、-R5S(O)mR4、-R5C(O)R4、-R5C(O)OR4、-R5C(O)NR4R4、-R5OC(O)R4、-R5OC(O)OR4、-R5OC(O)NR4R4、-R5NR4C(O)R4、-R5NR4C(O)OR4、-R5NR4C(O)NR4R4或YR7的取代基取代的苯环；R2是R3、J、-C(O)XR3或-CHO，其中R3任选地被至少一个选自-C(O)XR8、-CHO、-C(O)Q、1，3-二氧戊环、R8、-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qQ、-X(C(R9)2)nXR8、-X(C(R9)2)nQ或-X(C(R9)2)qR8的基团取代；R3是1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环；R4是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基或2-6个碳原子的炔基；R5是1-6个碳原子的二价烷基、2-6个碳原子的二价链烯基或2-6个碳原子的二价炔基；R6是2-6个碳原子的二价烷基；R7是3-7个碳的环烷基环、芳基或杂环的环或者与一至三个芳基或杂环的环稠合的芳基或杂环的环，其中任何所述的芳基、环烷基或杂环的环都可以任选地被一至四个选自H、芳基、-CH2-芳基、-NH-芳基、-O-芳基、-S(O)m-芳基、J、-NO2、-CN、-N3、-CHO、-CF3、-OCF3、R4、-OR4、-S(O)mR4、-NR4R4、-NR4S(O)mR4、-OR6OR4、-OR6NR4R4、-N(R4)R6OR4、-N(R4)R6NR4R4、-NR4C(O)R4、-C(O)R4、-C(O)OR4、-C(O)NR4R4、-OC(O)R4-、-OC(O)OR4、-OC(O)NR4R4、-NR4C(O)R4、-NR4C(O)OR4、-NR4C(O)NR4R4、-R5OR4、R5NR4R4、-R5S(O)mR4、-R5C(O)R4、-R5C(O)OR4、-R5C(O)NR4R4、-R5C(O)R4、-R5C(O)OR4、-R5C(O)NR4R4、-R5OC(O)R4、-R5OC(O)OR4、-R5OC(O)NR4R4、-R5NR4C(O)R4、-R5NR4C(O)OR4或-R5NR4C(O)NR4R4的取代基取代；R8是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环；R9是R4或F；Y是-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHSO2-、-SO2NH-、-C(OH)H-、-X(C(R9)2)q-、-(C(R9)2)q-、-(C(R9)2)qX-、-C≡C-、-CH＝CH-或3-10个碳原子的环烷基；Q是NZZ’，其中Z和Z’可以相同或不同，并且可以是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环，或者Z和Z’与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以具有另外的选自氮、氧和硫的杂原子，任选地在碳或氮上被R8取代或者在氮上被基团-(C(R9)2)nXR8、-(C(R9)2)nNZ”Z取代或者在碳上被基团-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qNZ”Z取代；Z和Z”可以是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环，或者Z”和Z与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以含有另外的选自氮、氧和硫的杂原子；且J是氟、氯、溴或碘；或其可药用盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中XR1是-NH-R1。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中R1是任选地被一至四个选自J或-OR4的取代基取代的苯环。
4.根据权利要求1至3中任意一项所述的化合物，其中R4是H或1-4个碳原子的烷基。
5.根据权利要求1至4中任意一项所述的化合物，其中R2是J或R3，其中R3是芳基或杂环，并且R3任选地被至少一个选自-C(O)XR8、-CHO、-C(O)Q、1，3-二氧戊环、-R8、-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qQ、-X(C(R9)2)nXR8、-X(C(R9)2)nQ或-X(C(R9)2)qR8的基团取代。
6.根据权利要求1至4中任意一项所述的化合物，其中R2是J或R3，其中R3是芳基或杂环，并且R3任选地被至少一个选自-CHO、-(C(R9)2)qQ或R8的基团取代。
7.根据权利要求1至6中任意一项所述的化合物，其中Q是NZZ’，其中Z和Z’可以相同或不同，并且可以是H、1-6个碳原子的烷基；或者Z和Z’与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以具有另外的选自氮和氧的杂原子，所述环可以在氮上被R4取代。
8.根据权利要求1至7中任意一项所述的化合物，其中R8是H、1至6个碳原子的烷基或芳基。
9.根据权利要求1至8中任意一项所述的化合物，其中J是氯或溴。
10.根据权利要求1至9中任意一项所述的化合物，其中R9是H。
11.根据权利要求1至10中任意一项所述的化合物，其中q是1。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中XR1是-NH-R1；q是0-5的整数；n是1-5的整数；R1是任选地被一至四个选自J或-OR4的取代基取代的苯环R2是J或R3，其中R3任选地被至少一个选自-C(O)XR8、-CHO、-C(O)Q、1，3-二氧戊环、-R8、-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qQ、-X(C(R9)2)nXR8、-X(C(R9)2)nQ或-X(C(R9)2)qR8的基团取代；R3是芳基或杂环；R4是H或1-6个碳原子的烷基；R8是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环；R9是H；Q是NZZ’，其中Z和Z’可以相同或不同，并且可以是H或1-6个碳原子的烷基，或者Z和Z’与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以具有另外的选自氮、氧或硫的杂原子，任选地在碳或氮上被R8取代或者在氮上被基团-(C(R9)2)nXR8、-C(R9)2)nNZ”Z取代或者在碳上被基团-(C(R9)2)qXR8、-(C(R9)2)qNZ”Z取代；Z和Z”可以是H、1-6个碳原子的烷基、2-6个碳原子的链烯基、2-6个碳原子的炔基、芳基或杂环，或者Z”和Z与它们所连接的氮一起可以形成一个杂环的环，所述环可以含有另外的选自氮、氧或硫的杂原子；且J是氯或溴；或其可药用盐。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中XR1是-NH-R1；q是0-5的整数；n是1-5的整数；R1是任选地被一至四个选自J或-OR4的基团取代的苯环；R2是J或R3，其中R3任选地被至少一个选自-CHO、-(C(R9)2)qQ或R8的基团取代；R3是芳基或杂环；R8是H、1-6个碳原子的烷基、芳基或杂环；R9是H；J是氯或溴；或其可药用盐。
14.根据权利要求1所述的化合物，其是下列化合物之一3-溴-7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈；7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-(4-甲酰基苯基)噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈；7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈；7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯基}噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈；和7-[(2，4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-3-[4-(吗啉-4-基甲基)苯基]噻吩并[3，2-b]吡啶-6-甲腈，或其可药用盐。
15.治疗或抑制哺乳动物的由Src表达增加或活化所构成的病理学病症或障碍的方法，其包括给所述哺乳动物提供有效量的权利要求1至14中任意一项所述的化合物或其可药用盐。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述的病理学病症或障碍是癌症。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述的癌症是乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、肝癌和白血病。
18.根据权利要求15所述的方法，其中所述的病理学病症或障碍是中风或心肌梗死。
19.根据权利要求15所述的方法，其中所述的病理学病症或障碍是骨质疏松。
20.根据权利要求15所述的方法，其中所述的病理学病症或障碍是多囊肾。
21.根据权利要求15所述的方法，其中所述的病理学病症或障碍包括自身免疫性疾病、类风湿性关节炎和移植物排斥。
22.根据权利要求15所述的方法，其中所述的病理学病症或障碍是神经性疼痛。
23.包含权利要求1至14中任意一项所述的化合物和可药用载体的药物组合物。
24.制备权利要求1所述的式II化合物的方法，其包括下列步骤之一a.将式(a)的化合物用N-溴丁二酰亚胺处理， 得到式(b)的化合物， 使式(b)的化合物与式R1XH的化合物反应，形成其中R2是溴的式II的化合物；或者b.使其中R2是Br的式II化合物与式R3-H、R3-BL1L2或R3SnR3的化合物在存在钯催化剂的情况下任选地在溶剂系统中进行反应，形成其中Br被R3替代的式II的化合物，或者c.使其中R2如权利要求1中所定义的下式的化合物 与式R1NH2的化合物进行反应，得到式II的化合物；或者d.将碱性的式II化合物转化成可药用的酸加成盐，反之亦然。
25.具有以下结构的化合物
全文摘要
本发明提供了式II的化合物，其中R
文档编号A61K31/4365GK1950379SQ200580014716
公开日2007年4月18日 申请日期2005年5月10日 优先权日2004年5月14日
发明者D·H·博舍利, N·张, A·C·巴里奥斯索萨, H·杜鲁特利克, B·吴 申请人:惠氏公司