虚拟筛选化合物在制备激酶抑制剂中的应用和药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药物领域，更具体地，设及一种虚拟筛选化合物在制备激酶抑制剂中 的应用，W及W该虚拟筛选化合物作为活性组分的药物，该药物能够预防和/或治疗激酶介 导的疾病。
【背景技术】
[0002] 与人类重大疾病相关的药物祀标的发现及其药物的研发是祀向治疗研究中的重 要环节。蛋白激酶(protein kinase，ΡΚ)是细胞内最大的蛋白家族之一，参与细胞生长、分 裂和调亡等多种生理过程。在真核细胞信号转导中蛋白激酶扮演重要的角色。蛋白激酶是 一类憐酸转移酶，其作用是将ΑΤΡ分子的γ憐酸基转移到底物蛋白特定的氨基酸残基上，使 底物蛋白憐酸化。人类基因组内共含有518个蛋白激酶基因，约占真核生物基因的1.7%。蛋 白激酶活性异常通常会引发包括癌症、糖尿病、炎症在内的许多重大疾病。超过400种人类 疾病与蛋白激酶有直接或间接的关系。因此蛋白激酶己成为继G蛋白偶联受体之后的第二 大药物治疗祀标。据统计，目前全世界药物在研或开发项目中约Ξ分之一均与蛋白激酶相 关。
[0003] 蛋白激酶抑制剂(protein kinase inhibitor,ΡΚΙ)可用于多种疾病的治疗，其中 ATP-竞争性蛋白激酶抑制剂研究得最多，运类抑制剂已被研究和开发成为治疗多种复杂性 疾病的新药。目前ATP-竞争性蛋白激酶抑制的研究主要集中在新骨架类型先导化合物的设 计和发现，W及选择性抑制剂和多祀点抑制剂开发等方面。目前，计算机辅助药物设计 (computer-aided drug design,CADD)作为药物研发中的重要技术和工具，被应用于蛋白 激酶抑制剂的研究中，推动了运一研究领域的长足发展。定量构效关系、分子对接、药效团、 同源模建和分子动力学模拟等多种分子模拟方法，W及量子化学等多种CADD方法均被应用 于蛋白激酶抑制剂的设计和发现。
[0004] 因此，通过运用计算机辅助的药物设计技术，对蛋白激酶结构与功能进行模拟研 究，在充分了解祀标活性口袋Ξ维结构的基础上，对小分子抑制剂提出合理的结构修饰，研 发出高效专一的蛋白激酶抑制剂具有重要意义。
【发明内容】
[000引本发明的目的是提供虚拟筛选化合物在制备激酶抑制剂中的新用途，W及提供一 种药物。
[0006] 具体地，本发明提供一种虚拟筛选化合物在制备激酶抑制剂中的应用，该虚拟筛 选化合物为具有式I、式II、式III或式IV所示结构的化合物或其药学上可接受的盐、醋、溶 剂合物；
[0007]
[0008] 其中，Ri和R2不同，且关
；4、Rs和Rs各自独立地为H、Ci-C3的 烷基、或芳基;R3和R?各自独立地为H、Ci-C3的烷基、或共同形成饱和或不饱和的五元控环或 六元控环；
[00川优选地，式I中，R4、Rs和R6各自独立地为Η或C1-C3的烷基;或者，R4和R6之一为芳基， 其余两个基团为Η。
[0012]进一步优选地，式I所示的化合物为W下式V、式VI、式νΠ 或式VIII所示的化合物；
[0013]
[0014] 本发明中所述虚拟筛选是从Molpo;rt(5*109)和Vitas-M( 1.2*109)化合物库进行 SVM筛选，筛选具有W下确定祀点的化合物:皿R2、VEGFR2、FGFR1、B-raf或SRC。因此，本发明 中所述激酶优选为肥R2、VEGFR2、FGFR1、B-raf或SRC。
[0015] 本发明还提供一种药物，该药物能够预防和/或治疗激酶介导的疾病，该药物的活 性组分为具有式I、式II、式ΠΙ或式IV所示结构的化合物或其药学上可接受的盐、醋、溶剂 合物。所述具有式I、式II、式III或式IV所示结构的化合物的限定与上述相同，在此不再寶 述。
[0016] 本发明中，所述激酶介导的疾病选自W下疾病中的至少一种：屯、血管疾病、炎症、 乳腺癌、肝癌、膜腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、鼻咽癌、结肠癌、 膀脫癌和直肠癌。优选为乳腺癌、肝癌、肺癌和膀脫癌中的至少一种。
[0017] 根据本发明，所述药物可W制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、 霜剂等多种形式;上述各种剂型的药物均可W按照药学领域的常规方法制备。所述药物可 通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮 下、静脉、粘膜组织;或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
[0018] 需要的时候，在上述药物中还可W加入一种或多种药学上可接受的载体;所述载 体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面 活性剂、吸附载体、润滑剂等。
[0019] 本发明的其它特征和优点将在随后的【具体实施方式】部分予W详细说明。
【附图说明】
[0020] 通过结合附图对本发明示例性实施方式进行更详细的描述。
[0021 ] 图1为50μΜ ATP/ADP转化率标准曲线。
[0022] 图2为FGFR1激酶滴定曲线(50μΜ ΑΤΡ)。
【具体实施方式】
[0023] 通过ADP-Glo?激酶实验进行体外激酶抑制剂实验，ADP-Glo?激酶实验原理:在激 酶反应过程中形成的ADP能通过巧光检测，从而知道其激酶活性。首先，ADP-Glo?试剂会终 止激酶反应，残留的ATP被废除。反应过程中产生的ADP随即被转化为ATP并且在叫tra-Glo? 双巧光素酶存在的条件下显示巧光，通过巧光分光光度计即可检测。巧光信号代表激酶反 应过程中产生的ADP浓度及其对应的激酶活性。
[0024] ADP-Glo?激酶实验由于能够检测化合物对大范围激酶的作用，同时还能检测高信 号背景下低浓度的ADP，因此适用于体外激酶抑制剂实验。
[0025] 实施例中所用的ADP-Glo?激酶购自Promega公司。
[0026] 1、样品准备
[0027] 冻干样品用一定体积的二甲基亚讽(DMS0)溶解，终浓度为1 Ommo 1 /L，冰箱保存备 用。
[002引 2、ATP转化ADP标准曲线制作
[0029] 参照Promega的说明，检测各种激酶反应中的ATP浓度，用于制作各个激酶的标准 曲线。运些曲线代表ATP/ADP的转化率，并且能直观显示ADP对应的浓度。因此，根据标准曲 线，可W检测激酶反应过程中产生的ADP。ATP在各个激酶反应中的浓度分别为：1 ΟμΜ化ER2) 和50μM(VEGFR2、FGFRl、B-raf和SRC)。10mMATP和ADP母液加入一定体积的去离子水得到10 X ΑΤΡ (ADP)溶液。不同体积的10 X ΑΤΡ和10 X ADP配成不同浓度的10 X ATP-ADP混