用于癌症治疗的激酶抑制剂的制作方法
【专利说明】用于癌症治疗的激酶抑制剂 发明领域
[0001] 本发明通常设及用于癌症治疗的激酶抑制剂。具体地，本发明设及氨基乙腊衍生 物(AAD)在癌症治疗中的用途。
[0002] 发明背景
[0003] 氨基乙腊衍生物(AAD)为一类有效针对耐药性线虫的肠驱虫剂。线虫、或咖虫，包 括大量人和家畜的病原体。胃肠道线虫，诸如抢转血矛线虫化aemonchus contortus)为反 当动物的主要寄生虫，引起全世界牲畜生产大量的经济损失。
[0004] 莫奈太尔(Mon邱antel，MPL)(N-[ (IS)-I-氯基-2-(5-氯基-2-S氣甲基-苯氧基)-1-甲基-乙基]-4-S氣甲基硫烷基-苯甲酯胺)为此类AAD的实例，并且已被认可为用于羊胃 肠道寄生虫治疗的杀线虫剂。
[0006] M化已显示有效的抗各种种类的牲畜病原性线虫。
[0007] 作为杀线虫剂，MI^L影响配体口控性离子通道，导致神经肌肉突触处的信号传导干 扰。然后，受影响的寄生虫将经受肌肉收缩失调，麻搏，坏死和蚁皮缺陷。已鉴定出=个烟碱 样乙酷胆碱受体(nA化R)相关的基因为MI^L的主要祀标，并且所有运S个基因编码只存在于 线虫中的代表nA化R亚基的DEG-3亚族的蛋白。DEG-3基因编码nA化Ra-亚基，其与第二跨膜 结构域中的07-亚基相似。
[000引目前令人惊奇地发现AAD在癌症治疗中也有效。过去50年期间医学中最大的挑战 之一为鉴定有效地杀死肿瘤细胞而不伤害正常组织的药物。几乎所有已知种类的抗癌药物 的副作用谱实质性限制了医师治疗癌症患者的能力，特别是在经常发展到药物耐药时的晚 期。尽管已知其他肠驱虫的药物诸如苯并咪挫在控制癌症细胞的生长和发展中有效的，但 是通式（I)的化合物，诸如MPL，令人惊奇的抗癌活性和低毒性允许更为灵活的用于伴有有 限副作用的癌症治疗剂量方案。
[0009] 发明概述
[0010] 根据本发明的第一方面，提供了用于治疗一种或多种癌症的方法，所述方法包括 向有需要的患者给予治疗有效量的通式(I)的化合物：
[0012]或其代谢物，药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中 [001 ；3 ] Ri、R2、R哺R日各自独立地选自H、烷基、面素、-肌或-CN;
[0014] R4和R6各自独立地选自H、烷基、面素、烷氧基、-CF3、-0CF3、-SO2CF3、-S0CF3或-S- 肌；
[001引 X为杂原子，N(烷基)或NH; W及
[0016] n为1-20。
[0017] 优选地，Ri为-CN、H或面素。更优选地，Ri为-CN。优选地，R2为H或面素。更优选地，R 2 为H。优选地，R3为-CF3或面素。更优选地，R3为-CF3。优选地，R4为-S-CF3、-S0CF3、-SO2CF3、-0CF3或-CF3。更优选地，R 4为-S-CF3或-SO2CF3。优选地，R5为H。优选地，X为0。优选地，n为1-15、1 -10、1 -5、1 -2或1。更优选地，n为1。优选地，R4被安排在酷胺部分的对位。
[0018] 通式（I)的化合物可为(R)-对映体或（S)-对映体或外消旋体。优选地，通式（I)的 化合物为(S)-对映体。
[0019] 优选地，通式(I)的化合物选自下列化合物中的任何一个：
[0022] 其中W上化合物的每一个为(R)-对映体或(S)-对映体，或外消旋体，或其代谢物、 药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。
[0023] 优选地，通式（I)的化合物为MPL(N-[ (IS)-I-氯基-2-(5-氯基-2-S氣甲基-苯氧 基)-1-甲基-乙基]-4-S氣甲基硫烷基-苯甲酯胺）：
[0025]或其代谢物、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。
[00%] 优选地，通式（1)的化合物为莫奈太尔讽(111〇]169日]11618111地〇]16，]\^心502):
[0028] 或其代谢物、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。
[0029] 还优选地，通式(I)的化合物选自下列化合物中的任何一个：
[0032] 或其代谢物、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。
[0033] 优选地，癌症与激酶有关。
[0034] 优选地，激酶为周期蛋白依赖性激酶，并且更优选地，C化2或C化4。
[0035] 优选地，与激酶有关的癌症选自W下：恶性肿瘤，包括膀脫癌、乳腺癌、结肠癌、间 皮瘤、肾癌、肝癌、包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌的肺癌、头颈癌、食道癌、胆囊癌、卵巢 癌、膜腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和包括鱗状细胞癌的皮肤癌;淋己系的造 血肿瘤，包括白血病、急性淋己细胞性白血病、急性成淋己细胞性白血病、B细胞淋己瘤、T细 胞淋己瘤、霍奇金氏淋己瘤、非霍奇金氏淋己瘤、毛细胞淋己瘤、套细胞淋己瘤、骨髓瘤和伯 克特氏淋己瘤;骨髓系造血肿瘤，包括急性和慢性髓细胞性白血病，骨髓增生异常综合征和 前髓细胞白血病；间叶细胞源的肿瘤，包括脂肪肉瘤、GIST、纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和 周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、胶质瘤和神经銷瘤；W及其他肿瘤， 包括黑色素瘤、精原细胞瘤、崎胎瘤、成骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡癌 和卡波济氏肉瘤。
[0036] 优选地，待被治疗的癌症选自卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌或间皮瘤，并且最优选地， 待被治疗的癌症为卵巢癌。
[0037] 在本发明的第二方面，提供了通式（I)的化合物或其代谢物、药学上可接受的盐、 溶剂化物或前药在制备用于治疗一种或多种与激酶有关的癌症的药物中的用途：
[0039] 其中
[0040] Ri、R2、R哺R5各自独立地选自H、烷基、面素、-肌或-CN;
[0041 ] R4和R6各自独立地选自H、烷基、面素、烷氧基、-CF3、-0CF3、-S02-C的、-SO-C的或-S-肌；
[00创 X为杂原子、N(烷基)或NH; W及
[0043] n 为 1-20。
[0044] 在本发明的第=方面，提供了用于治疗一种或多种与激酶有关的癌症的通式（I) 的化合物或其代谢物，药学上可接受的盐、溶剂化物或前药：
[0046] 其中
[0047] Ri、R2、R哺R5各自独立地选自H、烷基、面素、-肌或-CN;
[004引 R4和R6各自独立地选自H、烷基、面素、烷氧基、-CF3、-0CF3、-S02-C的、-SO-C的或-S-肌；
[00例 X为杂原子、N(烷基)或NH; W及 [0050] n 为 1-20。
【附图说明】
[0化1] 图1显示了通过MI^L抑制细胞增殖。在1?1^0、1、5、10、25、50和100^11〇1/1)存在的情 况下，培养卵巢癌细胞系〇VCAR-3、A2780和SK0V-3W及正常的HUVEC(对照)72小时。使用SRB 测定评估MI^L对细胞增殖的影响。对照(媒介处理的）细胞呈现100%增殖而MI^L处理组表示 成对照的百分比。每一药物浓度都W-式四份地测试并且每一试验重复至少两次。数据(均 数±561)表示为对照的百分比。为了统计学比较，使用学生的t检验将每一药物处理组与对 照组进行比较。
[0化2] 图2显示了 MPL对0VCAR-3细胞的集落形成活性的影响。用MPL(0、5、10和25曲lol/L) 解育细胞72小时之后，洗涂细胞，转移到琼脂平板，与它们的常规生长介质一起培养并且在 标准的条件下解育2周。然后用100%甲醇固定细胞并且用1%结晶紫染色。显微镜下(放大 率5倍)计数集落(大于50个的细胞簇）。不同试验组计数的集落数表示为对照的百分比。 [0化 3]图3显示了 MPL如何干扰卵巢癌细胞系的细胞周期分布。用MPL(0、5、10和25皿Ol/ L)处理0VCAR-3(图3a)或A2780(图3b)细胞48小时。使用流式细胞术分析舰化丙晚染色的细 胞的DNA含量。结果（见表)显示为G1、S和G2/M期细胞的百分比。每一数值代表2个独立的试 验的均数±561。
[0054]图4显示了 MPL如何干扰细胞周期调节蛋白C化2、(xlk4W及细胞周期蛋白E和A的表 达。用MPL(0、5、10和25WH01/L)处理细胞48小时。获取全蛋白提取物并且通过电泳分离和用 指示的抗体探测免疫印迹。使用相关的抗体分析显示了在每一提取物中运些蛋白的水平的 蛋白质印迹。图像代表扫描的暴露的放射线照片。管家基因(GAPDH)用于确认相似的蛋白上 样和印迹转移。
[0055] 图5显示了 M化处理的细胞中PARP和裂解的PARP的免疫印迹分析。用不同浓度的 MPL[0、5、10、25咖]解育在细胞培养状态下生长的0VCAR-3与A2780细胞24、48或72小时。然 后制备细胞裂解物并且通过蛋白质印迹分析用于测定PARP和裂解的PARP。
[0化6] 图6显示了用M化处理A2780卵巢癌细胞或用MPkS02处理U87胶质瘤导致空泡的形 成，运提示M化和MPkS02在运些细胞中诱导自体吞隧。
[0化7] 图7，与图6中所示的一致，显示了 M化处理降低了 ADP/ATP的细胞比率，运是细胞自 体吞隧的另一指示。
[0化引图8显示了 MPL干扰细胞活力。A)暴露于MPL(0、5、10、25iiM)72小时的0VCAR-3细胞 的显微镜图像。在MPL (0、5、10、2贴HO 1 /L)存在的情况下培养人卵巢癌细胞系0VCAR-3、 A2780、SK0V-3、IGR0V-172小时。使用标准的台吩蓝测定评估M化对细胞活力的影响。对照 (媒介处理的）细胞呈现100%活力而M化处理组表示成对照的百分比。W-式四份地测试每 一药物浓度并且每一试验重复至少两次。数据(均数±SEM)表示为对照的％。为了统计学比 较，使用学生的t检验将每一药物处理组与对照组进行比较并且0.5或更小的P值被认为是 呈现了显著的变化(P<0.5)，* = <0.05，**<0.Ol，*** = !)<0.001。
[0059] 图9显示了 MPL对正常细胞活力的影响并且显示了 MPL的抗增殖效应为癌细胞指向 的。在]\0^1^0、5、10、25皿〇1/1)存在的情况下培养正常细胞册沈、(：册、肥1(和册￥60 72小时。 使用标准的台吩蓝测定评估MI^L对细胞活力的影响。结果显示为与对照（100%)比较的均数 ±沈]?。
[0060] 图10显示了M化如何抑制细胞增殖。在MP L(0、5、10、25、50和100皿ol/L)存在的情 况下培养人卵巢癌细胞系〇VCAR-3、A2780和SK0V-3和IGR0V-172小时。使用SRB测定评估MPL 对细胞增殖的影响。对照(媒介处理的）细胞呈现100%增殖而MI^L处理组表示成对照的百分 比。W-式四份地测试每一药物浓度并且每一试验重复至少两次。数据(均数±SEM)表示为 对照的％。为了统计学比较，使用学生的