具抗肿瘤活性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂mpgf和mpgh及其制备方法和应用
【技术领域】
[00011本发明涉及喹唑啉类化合物，尤其涉及具有抗肿瘤活性的EGFR TKI - MPGF和MPGH 及其制备方法，本发明还涉及该药作为抗肿瘤剂的应用，属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 目前发现的EGFR酪氨酸激酶(EGFR TK)可以催化ATP的高能磷酸键转移到EGFR的 数个酪氨酸位点，使其磷酸化，从而激活下游的PI3K/Akt、Ras/MAPK等信号通路，促进细胞 进生长增殖、代谢，抑制细胞凋亡。细胞中EGFR过度表达和突变时，会阻碍细胞程序死亡，使 细胞的生长调节失控，而获得无限增殖和侵袭能力，即发展成为恶性肿瘤细胞。EGFR TKI通 过与ATP竞争胞内酪氨酸激酶的结合位点，阻止受体内酪氨酸的自身磷酸化，抑制EGFR酪氨 酸激酶激活，从而抑制肿瘤细胞生长、加速肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成和肿瘤细胞浸润、 转移。小分子EGFR TKI的基本结构为喹唑啉胺。EGFR TKI可分为：1)可逆性TKI主要有:吉非 替尼（gefitinib)，厄洛替尼（erlotinib)，拉帕替尼（Lapatinib)，2)不可逆性TKI主要有： 阿法替尼(Afatinib)，达可替尼(Dacomitinib)。目前，可逆性和不可逆性EGFR TKI对突变 EGFR非小细胞肺癌短时间内具有显著的疗效，但最终均因产生获得性耐药而导致治疗失 败，并没有明显延长患者的生存期。因此，开发和研制具有更强、更持久抗肿瘤活性的新型 EGFR TKI将可能为突变EGFR非小细胞肺癌患者带来生机。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的之一是研发全新的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKI) 一 MPGF和MPGH，其机制是通过抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶磷酸化从而促进肿瘤 细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成和侵袭、转移；
[0004] 本发明的目的之二是发现MPGF和MPGH对突变EGFR肺癌细胞系具有较强的抑制活 性。
[0005] 本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
[0006] 本发明通过对HH53035化学结构进行优化和改进，得到了全新EGFR TKI - MPGF和 MPGH，其具有更好的水溶性和更小的毒副作用，同时对突变EGFR非小细胞肺癌具有较强抑 制活性，并阐明其机制是通过抑制肿瘤细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶磷酸化，阻碍下 游信号通路活化，从而抑制肿瘤细胞生长、增殖，促进肿瘤细胞凋亡。
[0007] 本发明的一种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂或其可药用的盐，命名为MPGF 或MPGH，其中，所述的MPGF的分子结构式如式I所示，所述的MPGH的分子结构式如式II所示：
[0008]
[0009] 当然，可以制备本发明化合物酸加成的盐，这些盐包括在本发明之中。
[0010] 本发明化合物的酸加成盐优选为药学上可接受的，与适当的酸（例如盐酸、醋酸、 硫酸)形成无毒的盐，除了药物上可接受的盐以外，其它的盐也包括在本发明之中。
[0011] 进一步的，本发明还提出了所述的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂或其可药 用的盐在制备促进肿瘤细胞凋亡的药物中的用途。
[0012] 其中，所述的促进肿瘤细胞凋亡是通过抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶磷酸化 而实现的。
[0013] 其中，优选的，所述的肿瘤细胞为EGFR突变的非小细胞肺癌细胞。
[0014] 更进一步的，本发明还提出了一种制备以上所述的表皮生长因子受体酪氨酸激酶 抑制剂或其可药用的盐的方法，包括：
[0015] 1)氮气保护下在反应瓶中加入10.Og 3-甲氧基-4-羟基苯甲酸，19.Og碳酸钾， 7.Og氯化苄和80毫升乙腈，该混合物于90°C回流反应2小时，使用正己烷：乙酸乙酯体积比 =4:1的混合物作为展开剂进行TLC分析;原料完全反应后，冷却抽滤，用150mL乙酸乙酯洗 涤滤饼，滤液旋干，进行柱层析分离，使用正己烷：乙酸乙酯体积比=5:1的混合溶液进行洗 脱，得到纯白色固体，即化合物一；
[0016] 2)将53毫升浓硝酸和105毫升醋酸混合后冰浴降温至-5°C，将14.Og化合物一溶于 15ml醋酸中，然后将含有化合物一的醋酸溶液缓慢滴加进浓硝酸和醋酸的混合液中，滴完 后反应液升至20-25°C，反应16小时，进行TLC分析，原料完全反应后，反应液倒入冰水中，用 乙酸乙酯萃取，用饱和氯化钠溶液洗涤，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤至碱性，再用饱 和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤滤液旋干得到白色固体，即化合物二，此产物可 以直接用于下步反应；
[0017] 3)氮气保护下将8 · Og化合物二，12 · Og铁粉，12 · Og氯化铵，60ml 7K，120毫升甲醇混 合于75-85°C回流搅拌30分钟，TLC分析显示无原料，抽滤，用50毫升甲醇和50毫升乙酸乙酯 的混合溶液洗涤滤饼，滤液旋去溶剂，加入300毫升水中，用150毫升乙酸乙酯萃取三次，有 机相用饱和氯化钠溶液洗涤后用无水硫酸镁干燥，抽滤旋干得到棕色固体，即化合物三；
[0018] 4)氮气保护下将5.8g化合物三，720mg甲酸铵，60ml甲酰胺混合于160°C回流反应3 小时后，冷却析出固体，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥得灰白色固体，即化合物四；
[0019] 5)将2. Ig化合物四，9. Ig三氯氧磷和60ml二氯乙烷混合于85°C回流反应1小时，旋 去三氯氧磷，加入冰水，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥， 抽滤旋干，进行柱层析分离，依次使用正己烷：乙酸乙酯体积比=5:1、3:1以及1:1的混合溶 液进行梯度洗脱，于正己烷：乙酸乙酯体积比= 1:1的洗脱液于得到类白色固体，即化合物 五；
[0020] 6)氮气保护下将2. IOg化合物五，3-氯-4-氟苯胺I. IOg，异丙醇80ml混合于80-90 °C回流搅拌4-5小时，冷却抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，干燥后得淡黄色固体3g，向该固体中 加入氨水调节PH至碱性，用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠洗涤后，无水硫酸镁干燥，旋干得到 淡黄色固体，即化合物六；
[0021] 7)氮气保护下将2.4g化合物六溶于100mL甲醇和50mlTHF混合液中，加入Ig 5%钯 碳，通入氢气20-25°C搅拌反应2.5h，使用二氯甲烷：甲醇体积比= 10:1的混合溶液作为展 开剂进行TLC分析，原料反应完全后，抽滤，滤饼用二氯甲烷和甲醇混合液浸泡洗涤，滤液旋 干得到黄色粉末，即化合物七；
[0022] 8)20.Og三缩四乙二醇和10.2g三乙胺加入反应瓶中，加入300ml乙腈，冰浴降温至 0-5°C，将19.OgTsCl溶入100mL乙腈缓慢滴入含有三缩四乙二醇和三乙胺的乙腈溶液中，Ih 滴完，滴完后升至20_25°C下反应12-14h，旋去溶剂，进行柱层析分离，依次使用正己烷：乙 酸乙酯体积比= 4:1以及1.5:1的混合溶液进行梯度洗脱，于正己烷：乙酸乙酯体积比=4:1 的洗脱液中得到油状产品，即化合物十三，于正己烷：乙酸乙酯体积比= 1.5:1的洗脱液中 得到油状物，即化合物十四；
[0023] 9)MPGH制备：氮气保护下，将1.50g化合物七，8. OOg碳酸钾，120ml乙腈混合，升温 至90-98°C搅拌，将含有1.60g化合物十三的20ml乙腈溶液滴加进入该含有化合物七的混合 物中，30-60min加完，加毕于95°C继续反应