化合物Hu-17单独或联合酪氨酸激酶抑制剂在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于医药生物领域，更具体地讲，本发明设及化合物化-17单独或联合酪氨 酸激酶抑制剂药物在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 慢性粒细胞白血病(Chronic Myeloid leukemia,CML)是一种由髓系细胞异常增 生引起的血液疾病，年发病率1.0-1.5/10万人，儿童发病率极低，发病中位年龄在50-60岁 之间。发病时临床表现症状为昏睡、出汗、贫血、体重下降，异常出血W及脾脏增大 (Perrotti)D.,Jamieson,C.,Goldman,J.&Skorski,T.J Clin Invest 120,2254-2264)。由 9号和22号染色体易位t(9;22)(q34;qll)形成的异常染色体是第一个被发现的费城染色 体，也是慢性粒细胞白血病致病的主要原因。染色体易位形成的融合基因被命名为BCR-ABL 基因，持续激活的BCR-A化非受体酪氨酸激酶是慢性粒细胞白血病发病并恶化的主要原因 (]\161〇，1.￥.&8曰^63,0.1丄6证1?63 26,713-720.)。格列卫（51巧71)是第一个特异祀向 BCR-A化酪氨酸激酶的小分子抑制剂，因其能特异抑制BCR-A化激酶活性而诱导白血病细胞 调亡成为慢性粒细胞白血病一线治疗药物，80 % W上慢性粒细胞白血病初发患者经格列卫 治疗能达到完全细胞遗传学缓释，疗效十分显著（Deininger ,MBuchdunger, E. ADruker, B.J.Blood 105,2640-2653.)O
[0003] 尽管用于治疗慢性粒细胞白血病慢性期患者疗效显著，但是该药治疗加速期和急 变期的患者疗效欠佳，缓释率不足40%。耐药复发在药物治疗过程中是常遇见的问题，因 BCR-A化激酶活性区的突变削弱了Sti571与BCR-A化激酶结合是目前发现的对格列卫耐药 的主要原因。此外，BCR-A化基因扩增导致融合基因过表达也可产生格列卫耐药。因为BCR-A化激酶发生突变致使患者发生耐药复发促使科研人员研发第二代BCR-A化酪氨酸激酶抑 制剂，即后来出现的达沙替尼(Dasatin化)和尼罗替尼(Nilonit化）。新一代酪氨酸激酶抑 制剂(TKI)治疗后能使35%-63%的格列卫耐药患者达到主要细胞遗传学缓释，但运两种药 物均对酪氨酸激酶活性区T315I突变的治疗无显著效果（Soverini，S.et al. Clin Cancer Res 12,7374-7379.)。约20%的TKI耐药病人中存在激酶活性区T315氨基酸位点突变，该位 点突变直接阻断了TKI药物进入BCR-A化激酶的ATP结合位点，含T3151的BCR-A化激酶赋予 了对第一代和第二代酪氨酸激酶抑制剂药物极高的耐药作用(N Engl J Med 367,2075-2088.)。其后，科研人员又研发出新的酪氨酸激酶抑制剂Ponatinib(Zhou,T.et al .^em Biol Drug Des 77,1-11.)，Ponatinib是W计算技术和结构基础为策略设计出的小分子酪 氨酸激酶抑制剂，能避免T315位点突变造成的空间位阻效应，有效的抑制含T3151突变的 BCR-A化激酶活性，临床数据表明该药对含有T3151突变患者具有良好的治疗效果。
[0004] 由于慢性粒细胞白血病具有的遗传学不稳定性的特点，新的突变还将会被进一步 发现，比T315I更强的突变很可能会被新的TKI (Dasatinib、Ni Iotinib、Ponatinib)筛选出 来。CML的耐药复发的原因可W分为两类:一是BCR-A化激酶依赖的机制，其通过突变产生空 间位阻效应，削弱BCR-A化激酶与酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的结合而产生耐药，攻克运类耐 药可W通过改造 TKI的结构来逆转突变产生的耐药;二是不依赖BCR-A化激酶活性的耐药， 即细胞可能通过其他途径存活，运类耐药很可能在CML急变期中出现（Sawyers, C丄.化t Med 15，1158-1161.)。近年人们发现CML白血病干细胞(又叫白血病起始细胞）中的BCR-ABL 激酶活性虽然能被STi571等酪氨酸激酶抑制剂抑制，但是TKI药物并未能成功诱导白血病 干细胞调亡，因此治疗过程中仅祀向BCR-A化酪氨酸激酶并不能清除慢性粒细胞白血病白 血病干细胞(Corbin,A.S.et al.J Clin Invest 121,396-409.)，运为TKr治疗后复发留下 了隐患，运类耐药属于典型的不依赖于BCR-A化激酶的耐药机制。研发新的治疗慢性粒细胞 白血病的药物，特别是能用于治疗耐药和预防复发的药物，依然有非常大的研究价值和市 场潜力。
[000引酪氨酸激酶抑制剂(伊马替尼/St巧71、尼洛替尼、达沙替尼)对慢性粒细胞白血病 中白血病干细胞的作用不明显;慢性粒细胞白血病耐药复发患者对酪氨酸激酶抑制剂的重 复治疗效果不佳;利用第一代第二代激酶抑制剂进行治疗虽然能有较好的无疾病进展期， 但是对急变期患者的治疗效果仍未取得满意的疗效。目前可用的酪氨酸激酶抑制剂的作用 机制是祀向BCR-ABL融合蛋白，抑制该酪氨酸激酶的活化，从而实现特异祀向抑制致病蛋白 BCR-A化的作用，但是并不影响总体BCR-A化的含量，在白血病干细胞中BCR-A化酪氨酸激酶 活性的抑制并不能诱导白血病干细胞的调亡，故该类抑制剂的缺陷是不能完全清除外周血 及骨髓中异常的白细胞。
【发明内容】
[0006] 本发明的第一个目的在于提供化合物化-17在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中 的应用。
[0007] 本发明的第二个目的在于提供化合物化-17与酪氨酸激酶抑制剂联合用药在制备 治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
[0008] 为实现W上第一个目的，本发明公开W下技术方案:化合物化-17在制备治疗慢性 粒细胞白血病药物中的应用。
[0009] 为实现W上第二个目的，本发明公开W下技术方案:化合物化-17与酪氨酸激酶抑 制剂联合用药在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。
[0010] 作为一个优选方案，所述酪氨酸激酶抑制剂是指伊马替尼（Imatinib)、尼洛替尼 (Dasatinib)和达沙替尼（化 Iotinib)。
[00川所述化合物Hu-17分子式:〔63曲6抓011，化学结构式如下：
[0013]本发明的优点在于:本发明公开了慢性粒细胞白血病治疗的新药和联合酪氨酸激 酶抑制剂(伊马替尼等)治疗慢性粒细胞白血病的新治疗方案。为伊马替尼耐药的患者提供 了新的选择，与W往酪氨酸激酶抑制剂药效作用机制不同，它与一线治疗药物伊马替尼联 合使用能抑制致病融合基因 BCR-AMJ勺转录和翻译，从而可能从根本上治愈该疾病。
【附图说明】
[0014] 图1化合物化-17能显著抑制K562及耐药的K562-R细胞活力并诱导其发生调亡。A) 不同浓度(0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1山〇的化合物Hu-17分别处理K562及K562-R细胞48小时， MTT比色法检测细胞活力。B化562和K562-R细胞经化-17处理48小时后，MTT法检测化合物处 理后细胞活力的柱状图。C化562及K562-R细胞在不同浓度化-17 (1，1.5，处理24小时后 流式细胞仪检测调亡细胞的比例。E0K562细胞在化合物化-17不同浓度（1,1.5,2山〇处理24 小时或48小时，流式细胞仪检测调亡细胞的比例。E化562细胞经IiiM化-17处理后，细胞计 数板法统计处理不同时间点的细胞总数，计算不同时间点的细胞数量相对于初始种植细胞 数的百分比。F化562和K562-R细胞经不同浓度化-17处理24小时，W罗丹明123染料标记细 胞，流式细胞仪检测线粒体跨膜电势变化。各组实验均独立重复=次，直方图数据W平均数 ±标准差（mean + SD)展示，组间比较采用双侧t检验法，其中*表示P<0.05，**表示P< 0.01，***表示P<0.001 ,ns表示无统计学差异。
[0015] 图2低剂量的化合物化-17能显著抑制K562和K562-R细胞的增殖，引起细胞发生Gl 和G2/M期阻滞。A化562及K562-R细胞经IiiM Hu-17处理24或48小时，利用皂素打孔并经PI染 料标记细胞，流式细胞仪检测细胞周期。B化562-R细胞经化-17处理48小时后的细胞周期分 布图。各组实验均独立重复=次，直方图数据W平均数±标准差(mean±SD)展示，组间比较 采用双侧t检验法，其中，*表示P<0.05，**表示P<0.0 l，***表示P<0.0 Ol。
[0016] 图3化-17诱导K562和K562-R细胞发生调亡与降低的致病融合蛋白BCR-A化的含 量有关。1.5咖Hu-17分别处理K562细胞12、24和48小时，蛋白免疫印迹(Western Blot)方 法检测调亡marker PARP和促调亡蛋白Bak的蛋白含量。B)蛋白免疫印迹检测BCR-ABL，憐酸 化的BCR-A化和BCR-A化下游祀分子StatSW及周期相关蛋白P27的含量。
[0017]图4化合物Hu-17与伊马替尼（Imatinib)联合使用显著诱导K562细胞调亡，并在转 录水平抑制致病融合蛋白BCR-A化的表达。A化562细胞分别经不同浓度的化-17(1，1.5咖） 和St巧71(0.5iiM)处理24小时后，流式细胞仪检测调亡细胞的比例。B)Real-time PCR方法 检测Hu-17单独使用（IyM)或与伊马替尼（0.化M)联合使用BCR-A