专利名称：具有抗病毒活性的取代的氮杂喹唑啉的制作方法
技术领域：
本发明涉及取代的氮杂喹唑啉(azaquinazolines)和制备它们的方法，以及将它们用于制备治疗和/或预防疾病的药物、特别是用作抗病毒剂的应用，所述抗病毒剂特别地针对巨细胞病毒。
二氢喹唑啉的合成描述于Saito T.，等Tetrahedron Lett.，1996，37，209-212和Wang F.，等Tetrahedron Lett.，1997，38，8651-8654中。
尽管具有抗病毒活性的和不同结构的药剂可以在市场上获得，但是目前可以用更昔洛韦、缬更昔洛韦、膦甲酸和西多福韦进行的治疗与严重的副作用，例如肾中毒性、中性白细胞减少症或血小板减少症相关。而且，一般可能发展抗性。因此，期望用于有效治疗的新的药剂。
因此本发明的一个目标是提供用于治疗人和动物中的病毒性感染疾病的新的化合物，其具有相同或改善的抗病毒活性。
已经令人惊奇地发现本发明中所述的取代的氮杂喹唑啉具有抗病毒活性。
本发明涉及下式的化合物 其中Ar表示芳基，其中芳基可以被1-3个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组烷基、烷氧基、甲酰基、羟基羰基、烷基羰基、烷氧羰基、三氟甲基、卤素、氰基、羟基、氨基、
烷基氨基、氨基羰基和硝基，其中烷基可以被1-3个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组卤素、氨基、烷基氨基、羟基和芳基，或在芳基上的取代基中的两个与它们所结合的碳原子一起形成1，3-二氧戊环，环戊烷环或环己烷环，并且任选地存在的第三个取代基其独立地选自上述组，Q1，Q2，Q3和Q4表示CH或N，其中Q1，Q2，Q3和Q4中的一个或两个表示N并且其它的同时表示CH，R1表示氢、氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，R2表示氢、烷基、烷氧基、烷硫基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，R3表示氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、氰基、卤素、硝基、三氟甲基、烷基磺酰基或烷基氨基磺酰基，或原子团R1，R2和R3之一表示氢、烷基、烷氧基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，并且其它两个与它们结合的碳原子一起形成1，3-二氧戊环，环戊烷环或环己烷环，R4表示氢或烷基，R5表示氢或烷基，或在哌嗪环上的原子团R4和R5与正对的碳原子结合并且形成亚甲桥，所述亚甲桥任选地被1-2个甲基取代，R6表示氢、烷基、烷氧基、烷硫基、甲酰基、羟基羰基、氨基羰基、烷基羰基、烷氧羰基、三氟甲基、卤素、氰基、羟基或硝基，和R7表示氢、烷基、烷氧基、烷硫基、甲酰基、羟基羰基、烷基羰基、烷氧羰基、三氟甲基、卤素、氰基、羟基或硝基，及其盐、其溶剂合物及其盐的溶剂合物。
本发明的化合物是式(I)的化合物及其盐、其溶剂合物及其盐的溶剂合物，作为例示性实施方案的在下文提及的化合物及其盐、溶剂合物及其盐的溶剂合物，如果由式(I)所涵盖并且在下文提及的化合物还不是盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。
根据它们的结构，本发明的化合物可以以立体异构型(对映异构体，非对映异构体)存在。因此，本发明涉及对映异构体或非对映异构体及其各自的混合物。立体异构纯的组分可以以已知方式从对映异构体和/或非对映异构体的这样的混合物中分离出来。
如果本发明的化合物可以以互变异构形式存在，本发明包括所有的互变异构形式。
优选用于本发明的目的盐是本发明的化合物的生理可接受的盐。然而，本身不适合于药用但是可以用于例如分离或纯化本发明的化合物的盐也被包括在内。
本发明的化合物的生理可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。
本发明的化合物的生理可接受的盐还包括常用的碱的盐，诸如，作为实例，并且优选地碱金属盐(例如，钠和钾盐)，碱土金属盐(例如钙和镁盐)和衍生自氨或具有1-16个碳原子的有机胺的铵盐，所述有机胺诸如作为实例，并且优选地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄基胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。
对于本发明的目的而言，溶剂合物指通过与溶剂分子的配位作用形成固体或液体状态的复合物的本发明的化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的特殊形式，其中配位作用与水发生。
对于本发明的目的而言，除非另外指出，取代基具有下列含义烷基本身和烷氧基、烷硫基、烷基氨基、烷基羰基、烷基磺酰基、烷基氨基磺酰基和烷氧羰基中的“烷基(alk)”和“烷基(alkyl)”表示直链或支链烷基原子团，其通常具有1-6，优选地1-4，特别优选地1-3个碳原子，作为实例并且优选地是甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正戊基和正己基。
烷氧基表示，作为实例并且优选地，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正戊氧基和正己氧基。
烷硫基表示，作为实例并且优选地甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、叔丁硫基、正戊硫基和正己硫基。
烷基氨基表示具有一个或两个烷基取代基(彼此独立地选择)的烷基氨基原子团，作为实例并且优选地，甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、叔丁基氨基、正戊基氨基、正己基氨基、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基、N-乙基-N-甲基氨基、N-甲基-N-正丙基氨基、N-异丙基-N-正丙基氨基、N-叔-丁基-N-甲基氨基、N-乙基-N-正戊基氨基和N-正己基-N-甲基氨基。C1-C3-烷基氨基表示例如具有1-3个碳原子的单烷基氨基原子团或二烷基氨基原子团，其在每种情形中具有1-3个碳原子/烷基取代基。
烷基磺酰基表示，作为实例并且优选地甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、叔丁基磺酰基、正戊基磺酰基和正己基磺酰基。
烷基氨基磺酰基表示具有一个或两个烷基取代基(彼此独立地选择)的烷基氨基磺酰基原子团，作为实例并且优选地，甲基氨基磺酰基、乙基氨基磺酰基、正丙基氨基磺酰基、异丙基氨基磺酰基、叔丁基氨基磺酰基、正戊基氨基磺酰基、正己基-氨基磺酰基、N，N-二甲基氨基磺酰基、N，N-二乙基氨基磺酰基、N-乙基-甲基氨基磺酰基、N-甲基-N-正丙基氨基磺酰基、N-异丙基-N-正丙基氨基磺酰基、N-叔丁基-N-甲基氨基磺酰基、N-乙基-N-正戊基氨基磺酰基和N-正己基-N-甲基氨基磺酰基。C1-C3-烷基氨基磺酰基表示例如具有1-3个碳原子的单烷基氨基磺酰基原子团或二烷基氨基磺酰基原子团，其在每种情形中具有1-3个碳原子/烷基取代基。
烷基羰基表示，作为实例和优选地，乙酰基和丙酰基。
烷氢羰基表示，作为实例，并且优选地，甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊氧基羰基和正己氧基羰基。
芳基表示通常具有6-14个碳原子的单到三环芳香碳环原子团，作为实例和优选地苯基、萘基和菲基。
卤素表示氟、氯、溴和碘，优选地是氟和氯。
与在该碳原子的构型相关，在碳原子上的符号*意为，所述化合物以对映异构体纯(enantiopure)形式存在，即出于本发明的目的，对映异构体过量超过90％(＞90％ee)。
在这些中，优选那些式(I)的化合物，其中Ar表示苯基，其中苯基可以被1-3个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、羟基羰基、C1-C6-烷基羰基、C1-C6-烷氧羰基、三氟甲基、氟、氯、溴、氰基、羟基、氨基、C1-C6-烷基氨基和硝基，或所述苯基上的取代基中的两个与它们结合的碳原子一起形成1，3-二氧戊环，并且任选地存在的第三个取代基其独立地选自上述组，其中一直精确地(always exactly)，Q1，Q2和Q3其中之一表示N并且其它的同时表示CH，Q4表示CH，R1表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、C1-C3-烷硫基、氟或氯，R2表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、C1-C3-烷硫基、氟或氯，R3表示C1-C4-烷基、氰基、氟、氯、硝基、三氟甲基或C1-C3-烷基磺酰基，或原子团R1，R2和R3其中之一表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，并且其它两个与它们结合的碳原子一起形成环戊烷环或环己烷环。
R4表示氢或甲基，R5表示氢，R6表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、羟基羰基、氨基羰基、三氟甲基、氟、氯、氰基、羟基或硝基，和R7表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、氟、氯、氰基或羟基。
在这些中，特别地优选式(I)的那些化合物，其中Ar表示苯基，其中苯基可以被1-2个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组甲基、甲氧基、氟和氯，Q1，Q2和Q3表示CH或N，
其中一直精确地，Q1，Q2和Q3其中之一表示N，并且其它的同时表示CH，Q4表示CH，R1表示氢、甲基、甲氧基、甲硫基、氟或氯，R2表示氢，R3表示甲基、异丙基、叔丁基、氰基、氟、氯、硝基或三氟甲基，R4表示氢，R5表示氢，R6表示氢、氨基羰基、氟、氯、氰基或羟基，和R7表示氢。
在这些中，尤其特别优选式(I)的那些化合物，其中Ar表示苯基，其中苯基可以被1-2个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组甲基、甲氧基、氟和氯，Q1，Q2和Q3表示CH或N，其中一直精确地，Q1，Q2和Q3其中之一表示N，并且其它的同时表示CH，Q4表示CH，R1表示氢、甲基或甲氧基，R2表示氢，R3表示甲基、叔丁基、氯或三氟甲基，R4表示氢，R5表示氢，R6表示氢，和R7表示氢。
还优选式(I)的那些化合物，其中R1表示氢、甲基、甲氧基或氟。
在这些中，特别优选式(I)的那些化合物，其中R1表示甲氧基。
还优选式(I)的那些化合物，其中R1通过与苯环的连接点邻位的点与苯环键合。在本发明的上下文中，用原子团R1，R2和R3取代的苯环的连接点意为苯环的碳原子，其连接于按照式(I)的两个二氢喹唑啉氮原子之一。
特别优选式(I)的那些化合物，其中R1表示甲氧基，并且R1通过邻位于苯环的连接点的位点与苯环键合。
还优选式(I)的那些化合物，其中R2表示氢。
还优选式(I)的那些化合物，其中R3表示三氟甲基、氯、甲基、异丙基或叔丁基。
在这些之中，特别优选式(I)的那些化合物，其中R3表示三氟甲基、氯或甲基。
在这些之中，尤其特别地优选式(I)的那些化合物，其中R3表示三氟甲基。
还优选式(I)的那些化合物，其中R1通过邻位于苯环的连接点的位点连接于苯环，并且R3通过与R1对位并与苯环的连接点邻位的位点连接于苯环。
特别优选式(I)的那些化合物，其中R1通过邻位于苯环的连接点的位点连接于苯环，R3表示三氟甲基，氯或甲基，并且R3通过对位于R1并且间位于苯环的连接点的位点连接于苯环。
在这些之中特别优选式(I)的那些化合物，其中R1通过邻位于苯环的连接点的位点连接于苯环，R3表示三氟甲基，并且R3通过对位于R1并且间位于苯环的连接点的位点连接于苯环。
还优选式(I)的那些化合物，其中R4和R5表示氢。
还优选式(I)的那些化合物，其中R6表示氢。
还优选式(I)的那些化合物，其中R7表示氢。
还优选式(I)的那些化合物，其中Ar表示苯基，其中苯基可以由1-2个取代基取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组甲基、甲氧基和氟和氯。
原子团的各个组合或优选组合中的具体指出的原子团的定义，不管对于所述原子团所指出的特定组合如何，根据需要也被另一组合的原子团的定义所替代。
特别优选两个或更多上述优选范围的组合。
本发明还涉及制备式(I)的化合物的方法，其中下式的化合物与碱或酸反应，
其中Ar，Q1，Q2，Q3，Q4，R1，R2，R3，R4，R5，R6和R7具有上面所显示的含义，并且R8表示烷基、优选地甲基或乙基，或叔丁基。
在甲基和乙基的情形中，反应通常在惰性溶剂中与碱发生，其优选地在从室温到溶剂回流的温度范围内在大气压下进行。
当在水溶液中合适时，碱的实例是碱金属氢氧化物诸如氢氧化钠、氢氧化锂或氢氧化钾，或碱金属碳酸盐诸如碳酸锂、碳酸钠或碳酸钾，其中优选氢氧化钠水溶液。
惰性溶剂的实例是醚诸如1，2-二甲氧基乙烷、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚，醇诸如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，或溶剂的混合物，其中优选二噁烷或四氢呋喃。
在叔丁基的情形中，反应通常在惰性溶剂中，优选地在从0℃到40℃的温度范围内在大气压下与酸发生。
适合于该情形的酸是在二噁烷中的氯化氢，在乙酸中的溴化氢或在二氯甲烷中的三氟乙酸。
已知式(II)的化合物或可以通过使其中Q1，Q2，Q3，Q4，R6，R7和R9具有上面所指示含义的下式的化合物
在两步反应中首先与其中R1，R2和R3具有上面所指示含义的下式的化合物反应， 随后与其中Ar，R4和R5具有上面所显示的含义的下式的化合物 反应来进行制备。
在两步中所述反应通常在惰性溶剂中，优选地在从室温到100℃的温度范围内，在大气压下进行。当适当时，在第二步将硅胶加入反应混合物中。所述反应优选地发生，在第一和第二步之间进行后处理。
惰性溶剂的实例有卤代烃诸如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、三氯乙烷、四氯乙烷、1，2-二氯乙烷或三氯乙烯，醚诸如二乙醚、甲基叔丁醚、1，2-二甲氧基乙烷、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚、烃诸如苯、二甲苯、甲苯、己烷、环己烷或石油级分，或其它溶剂诸如二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，乙腈或乙酸乙酯，或溶剂的混合物，其中优选二氯甲烷。
已知式(IV)的化合物或可以从适合的前体开始通过已知方法进行合成。
已知式(V)的化合物或可以从适合的前体开始通过已知方法进行合成，例如按照下述合成路线通过Buchwald-Hartwig反应进行(综述于C.G.Frost，P.Mendonca，J.Chem.Soc.，Perkin Trans l，1998，2615-2623)
Buchwald-Hartwig反应 已知对于此需要的前体或所述前体可以从适合的前体通过已知方法进行合成。
已知式(III)的化合物或其可以通过使下式的化合物 与三苯膦和四氯甲烷的反应进行合成，在所述式中Q1，Q2，Q3，Q4，R6，R7和R8具有上面显示的含义。
所述反应在惰性溶剂中，在碱存在的情况下，优选地在从室温到50℃的温度范围内，在大气压下进行。
惰性溶剂的实例是醚诸如二乙醚、甲基叔丁醚、1，2-二甲氧基乙烷、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇二甲醚或二甘醇二甲醚，烃诸如苯、二甲苯、甲苯、己烷、环己烷或石油级分，或其它溶剂诸如二甲基甲酰胺，二甲基乙酰胺，乙腈或吡啶，其中优选乙腈。
碱的实例是碱金属和碱土金属碳酸盐诸如碳酸铯、碳酸钠或碳酸钾或胺诸如三乙胺，二异丙基乙胺、N-甲基吗啉或吡啶，其中优选三乙胺。
已知式(VI)的化合物，或其可以从适合的前体通过已知方法进行合成，例如按照下述合成路线通过Heck反应或Wittig-Homer反应进行。
Heck反应
Wittig-Horner反应 已知对于此的前体，或其可以从适合的前体开始通过已知方法进行合成。
本发明的化合物的制备可以通过下述合成路线进行举例说明。
合成路线
本发明的式(I)的化合物显示未能预料的令人惊奇的活性范围。它们显示对疱疹病毒科类的代表(疱疹病毒)，特别是对巨细胞病毒(CMV)，尤其是对人巨细胞病毒(HCMV)具有抗病毒活性。
可以提及的作为实例的适应证的范围是1)在AIDS患者中治疗和预防HCMV感染(视网膜炎、肺炎、肠胃传染)。
2)在骨髓和器官移植患者中治疗和预防巨细胞病毒感染，所述患者经常发展威胁生命的HCMV肺炎或脑炎，和胃肠道和全身性HCMV感染。
3)在新生儿和婴幼儿中治疗和预防HCMV感染。
4)在怀孕妇女中治疗急性HCMV感染。
5)在与癌症和癌症治疗相关的免疫抑制患者中治疗HCMV感染。
6)治疗HCMV-阳性的癌症患者，目的是减少HCMV介导的肿瘤进展(参见，J.Cinatl，等，FEMS Microbiology Reviews 2004，28，59-77)。
本发明还涉及将本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是病毒尤其是上述病毒的感染，以及由其导致的感染性疾病中的应用。病毒感染在下文意味着病毒的感染和由病毒感染所导致的疾病。
本发明还涉及将本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，尤其是前述疾病的应用。
本发明还涉及将本发明的化合物用于制备药物的应用，所述药物用于治疗和/或预防疾病，尤其是前述疾病。
本发明的化合物优选地用于制备药物，所述药物适合于预防和/或治疗疱疹病毒科类的代表的感染，特别是巨细胞病毒感染，尤其是人巨细胞病毒的感染。
本发明还涉及通过使用抗病毒有效量的本发明的化合物，治疗和/或预防疾病，尤其是前述疾病的方法。
本发明还涉及特别是用于治疗和/或预防前述疾病的药物，所述药物包括本发明的至少一种化合物和至少一种或多种另外的活性成分。可以作为实例提及并且优选的在所述组合中的适合的活性成分是抗病毒活性成分诸如更昔洛韦(Gancyclovir)或阿昔洛韦。
本发明的化合物可以具有全身性和/或局部效果。出于该目的，它们可以以适合的方式进行施用，所述方式诸如，例如通过口服的、肠胃外的、肺的、鼻的、舌下的、舌的、颊的、直肠的、皮肤的、透皮的、结膜的、耳的或局部的途径，或作为植入物或斯滕特固定模(stent)。
对于这些给药途径而言，本发明的化合物可以以适合的给药形式进行施用。
适合于口服给药的是这样的给药形式，其按照现有技术发挥功能并且快速地和/或以改进的方式递送本发明的化合物，并且其包括晶体形式和/或非晶形形式和/或溶解形式的本发明的化合物，诸如，例如片剂(未包被或包被的片剂，例如具有这样的包衣，所述包衣对胃液具有抗性或延缓溶解或是不溶的并且控制本发明的化合物的释放)，快速在口腔中崩解的片剂或薄膜/糯米纸囊剂，薄膜/冻干物(lyophilisates)，胶囊(例如硬或软明胶胶囊)，糖包被的片剂，颗粒剂，微型药片，粉末，乳剂，混悬液，气溶胶或溶液。
肠胃外给药的发生可以避免吸收步骤(例如，静脉内、动脉内、心脏内、脊髓内或腰椎内)，或包含吸收(例如，肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)。适合于肠胃外给药的给药形式特别是，用于注射和输注的，以溶液、混悬液、乳剂、冻干物或无菌粉末存在的制剂。
适合于其它给药途径的实例是用于吸入的药物形式(特别是粉末吸气器，喷雾器)，滴鼻剂，溶液，喷雾剂；将通过舌、舌下或颊施用的片剂，薄膜/糯米纸囊剂或胶囊，栓剂，用于眼和耳的制剂，阴道胶囊，水性混悬液(洗剂，振摇混合物)，亲脂性混悬液，软膏剂，乳膏剂，透皮治疗系统，乳，糊剂，泡沫，爽身粉，植入物或斯滕特固定模。
可以将本发明的化合物转化成为列出的给药形式。其可以以本身已知的方式通过混合以惰性、非毒性的药物适合的赋形剂来进行。这些包括，特别是，载体(例如微晶纤维素，乳糖，甘露醇)，溶剂(例如液体聚乙二醇)，乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠，聚氧基失水山梨糖醇油酸酯)，粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，稳定剂(例如抗氧化剂诸如抗坏血酸)，着色剂(例如无机颜料诸如氧化铁)或增香剂和/或气味矫正剂。
本发明还涉及这样的药物和将其用于前述目的应用，所述药物包括至少一种本发明的化合物，以及通常地一种或多种惰性、非毒性药物适合的赋形剂。
以约0.001到10mg/kg，优选地约0.01到5mg/kg体重的静脉内给药量施用从而获得有效效果通常被证明有利的，并且口服给药所用的剂量是约0.01到25mg/kg，优选地0.1到10mg/kg体重。
然而，可能需要的是，当需要时偏离提及的量，其具体地作为体重、给药途径、对活性成分的个体反应、制备的方式和在施用发生过程中的时间或间隔的函数。因此，在某些情形中以少于前述最少量进行的施用可以是充分的，而在其它情形中，必须超过提及的上限。在更大量的施用的情形中，可以推荐将这些分成一天内的多个单独剂量。
在下述测试和实施例中的百分比数据是重量百分比，除非另外指出；份是重量份。液体/液体溶液的溶剂比率、稀释比率和浓缩比率在每种情形中基于体积。
A.实施例缩写BINAP2，2’-双(二苯膦)-1，1’-联萘基ca. 大约CDCl3次氯仿conc.浓缩的DCI 直接化学电离(在MS中)DCM 二氯甲烷DIEA N，N-二异丙基乙胺DMSO 二甲亚砜DMF N，N-二甲基甲酰胺EE 乙酸乙酯(乙酸乙酯)EI 电子碰撞电离(在MS中)ESI 电雾化电离(在MS中)h小时HPLC 高压，高效液相色谱法
LC-MS 偶联液相色谱法-质谱法LDA 二异丙基氨基化锂Min 分钟m.p.熔点MS 质谱法MTBE甲基叔丁醚NMR 核磁共振波谱法Pd-C披钯碳RP-HPLC 反相HPLCRT 室温Rt保留时间(在HPLC中)sat.饱和的THF 四氢呋喃TLC 薄层色谱法一般的LC-MS和HPLC法方法1(分析HPLC)仪器具有DAD检测的HP 1100；柱Kromasil RP-18，60mm×2mm，3.5μm；洗脱剂A5ml高氯酸/l水，洗脱剂B乙腈；梯度0min 2％B，0.5min 2％B，4.5min 90％B，6.5min 90％B；流速0.75ml/min；烘箱30℃；UV检测210nm.
方法2(制备HPLC，实验HPLC)柱CromSil C18，250mm×30mm；流速50ml/min；运行时间38min；洗脱剂A水，洗脱剂B乙腈梯度10％ B(3min)→90％B(31min)→90％B(34min)→10％B(34.01min)UV检测210nm.
方法3(LCMS)仪器Micromass Quattro LCZ，具有HPLC Agilent系列1100；柱Grom-SIL120 ODS-4 HE，50mm×2.0mm，3μm；洗脱剂A1升的水+1ml的50％甲酸，洗脱剂B1升的乙腈+1ml的50％的甲酸；梯度0.0min 100％A→0.2min 100％A→2.9min 30％A→3.1min 10％A→4.5min10％A；烘箱55℃；流速0.8ml/min；UV检测208-400nm.
起始化合物实施例1A吡啶-4-基氨基甲酸叔丁酯 将2.0g(21.3mmol)的4-氨基吡啶分份加入5.1g(23.4mmol)的二碳酸二叔丁酯在20ml的THF中的溶液。在添加完成后，将所述混合物在室温搅拌达1小时，接着在真空中去除溶剂，并将以这种方式获得的残余物悬浮在二乙醚中。将固体滤去并在真空中干燥。产率3.43g(理论值的83％)HPLC(方法1)Rt＝3.42minMS(ESI-pos)m/z＝195[M+H]+实施例2A吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯 将18.2g(40.9mmol)的乙酸铅(IV)加入5.0g(40.9mmol)的烟酰胺在100ml叔丁醇中的溶液，并且将反应混合物在回流下搅拌4小时。接着，通过硅藻土过滤混合物，将溶剂在真空中去除，并在二乙醚中吸收残余物。用饱和的碳酸氢钠溶液和饱和的氯化钠溶液洗涤有机相，将其通过硫酸钠进行干燥并进行过滤。所述溶液与戊烷进行混合，滤去得到的沉淀物并将其进行干燥。产率2.79g(理论值的35％)。
HPLC(方法1)Rt＝3.36minMS(ESI-pos)m/z＝195[M+H]+实施例3A(3-甲酰基吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 将来自实施例1A的4.12g(21.3mmol)的Boc-保护的氨基吡啶溶解在75ml的四氢呋喃中，在氩气下将溶液冷却到-78℃，并逐滴加入34ml的叔丁基锂在戊烷中的1.5M溶液(51.1mmol)。添加发生从而使内部温度保持在低于-65℃。添加结束后，将混合物在-20℃搅拌1小时。接着，将10.6ml(138.3mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺加入混合物中从而使反应温度在添加过程中保持在低于-15℃。将所述反应物在室温搅拌达16小时，并且接着，当在冰上冷却时，加入1N盐酸。用固体碳酸钠将pH调整到pH7，将乙酸乙酯加入所述混合物中，用水和饱和的氯化钠溶液洗涤有机相。分离有机相，通过硫酸钠进行干燥，并在真空中去除溶剂。用环己烷/乙酸乙酯(3∶2v/v)通过硅胶色谱法对产物进行纯化。获得3.15g(理论值的63％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝3.65minMS(ESI-pos)m/z＝223[M+H]+实施例4A(4-甲酰基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将来自实施例2A的2.7g(13.9mmol)的Boc-保护的氨基吡啶溶解在50ml的四氢呋喃中，将所述溶液在氩气下冷却到-78℃，并逐滴加入22.4ml的叔丁基锂在戊烷中的1.5M溶液(33.4mmol)。发生添加从而使内部温度保持在低于-65℃。添加结束后，将所述混合物在-20℃搅拌1小时。接着将4.6ml(41.7mmol)的N-甲酰基哌啶加入混合物中从而使反应温度在添加过程中保持在低于-15℃。将所述反应物在室温搅拌16小时，并且接着，当在冰上冷却时，加入1N盐酸。用固体碳酸钠将pH调节到pH7，并将乙酸乙酯加入混合物中，用水和饱和的氯化钠溶液洗涤有机相。分离有机相，通过硫酸钠进行干燥，并将溶剂在真空中去除。用环己烷/乙酸乙酯(7∶3v/v)通过硅胶色谱法对所述产物进行纯化。获得1.54g(理论值的49％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝3.40minMS(ESI-pos)m/z＝223[M+H]+实施例5A3-氨基-2-溴吡啶 将4.00g(42.5mmol)的3-氨基吡啶溶解在200ml的乙腈中，在加入8.32g(46.8mmol)的N-溴丁二酰亚胺后，避光在室温搅拌20小时。接着，浓缩反应混合物，在乙酸乙酯中悬浮并且将其用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和的氯化钠水溶液洗涤。通过硫酸钠干燥有机相，将其进行过滤和浓缩。用环己烷/乙酸乙酯(1∶1)通过硅胶柱色谱法来进行纯化。获得969mg(理论值的12％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝1.08min.
MS(ESI-pos)m/z＝173[M+H]实施例6A叔丁基(2E)-3-(3-氨基吡啶-2-基)丙烯酸酯 将来自实施例5A的950mg(4.94mmol)的溴化物，1900mg(14.83mmol)的丙烯酸叔丁酯，330mg(1.50mmol)的乙酸钯(II)，450mg(1.50mmol)的三-邻位-甲苯基膦(phospine)溶解在15ml的乙腈中，并加入1000mg(9.88mmol)的三乙胺。在回流下，将混合物搅拌16小时。浓缩反应混合物，将其混合以乙酸乙酯并用饱和的氯化钠水溶液进行洗涤。通过硫酸钠来干燥有机相，将其进行过滤，浓缩并在硅胶上用环己烷/乙酸乙酯(7∶3)通过柱色谱法进行纯化。获得95mg(理论值的6％)的产物。
实施例7A甲基(2E)-3-{4-[(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-3-基}丙烯酸酯
将在30ml四氢呋喃中的来自实施例3A的3.0g(13.5mmol)的醛，3.12g(14.8mmol)的甲基二乙基膦酰基乙酸酯和623mg(14.8mmol)的一水合氢氧化锂的混悬液在室温搅拌16小时。随后添加30ml的水，并用乙酸乙酯进行提取。分离有机相，用饱和的氯化钠溶液进行洗涤，将其通过硫酸钠进行干燥并且进行过滤，在真空中去除溶剂。在100℃/l mbar来干燥残余物。获得3.5g(理论值的89％)的标题化合物。
HPLC(方法1)Rt＝3.71minMS(ESI-pos)m/z＝279[M+H]+实施例8A甲基(2E)-3-{3-[(叔丁氧基羰基)氨基]吡啶-4-基}丙烯酸酯 将在15ml的四氢呋喃中的来自实施例4A的1.48g(6.66mmol)的醛，1.54g(7.33mmol)的甲基二乙基膦酰基乙酸酯和307mg(7.33mmol)的一水合氢氧化锂的混悬液在室温搅拌16小时。随后添加15ml的水，并用乙酸乙酯进行提取。分离有机相，用饱和的氯化钠溶液进行洗涤，通过硫酸钠进行干燥和过滤，在真空中去除溶剂。在75℃/l mbar干燥残余物。获得1.82g(理论值的98％)的标题化合物。
HPLC(方法1)Rt＝3.73minMS(ESI-pos)m/z＝279[M+H]+实施例9A
甲基(2E)-3-(4-氨基吡啶-3-基)丙烯酸酯 在0℃，将来自实施例7A的900mg(3.23mmol)的Boc-保护的氨基吡啶溶解在3ml的三氟乙酸中。接着，在室温下将反应混合物搅拌1小时，将所述混合物引入冰冷却的碳酸氢钠溶液，搅拌30分钟，并将得到的沉淀物滤去，用水洗涤并干燥。获得242mg(理论值的42％)的标题化合物。
通过将pH调节到pH10可以从母液中分离作为油形式的另外的105mg(里论值的18％)的产物，并用乙酸乙酯将其进行提取。所述两个级分可能在质子化的程度上不同。
HPLC(方法1)Rt＝2.67minMS(CI-pos)m/z＝179[M+H]+实施例10A甲基(2E)-3-(3-氨基吡啶-4-基)丙烯酸酯 将来自实施例8A的1.8g(6.47mmol)的Boc-保护的氨基吡啶在室温溶解在18ml的甲醇中，并将1ml浓缩的盐酸添加到溶液中。接着，将反应混合物在70℃搅拌4小时，将混合物引入50ml的碳酸氢钠溶液，通过加入20％浓度(strength)的氢氧化钠溶液，将pH调整到pH14，并用乙酸乙酯来提取混合物。用浓缩的氯化钠溶液来洗涤有机相，并通过硫酸钠进行干燥，在真空中去除溶剂。产率935mg(理论值的79％)。
HPLC(方法1)Rt＝2.88minMS(ESI-pos)m/z＝179[M+H]+一般方法[A]从氨基吡啶制备亚氨基正膦将1.0当量的氨基吡啶，2.0当量的三苯膦，10.0当量的四氯甲烷和10.0当量的三乙胺悬浮在乙腈中(基于氨基吡啶约0.33M)。将反应混合物在室温搅拌16小时，并在真空中去除溶剂。将粗制产物进行反应，而不经进一步纯化或通过柱色谱法在硅胶上进行纯化。
实施例11A叔丁基(2E)-3-{3-[(三苯基亚正膦基)氨基]吡啶-2-基}丙烯酸酯 从来自实施例6A的95mg(0.28mmol)的氨基吡啶起始，用一般方法[A]得到粗制产物，将所述粗制产物通过柱色谱法在硅胶上用环己烷/乙酸乙酯(7∶3)进行纯化。获得70mg(理论值的51％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.83min.
MS(ESI-pos)m/z＝481[M+H]+实施例12A(2E)-3-{4-[(三苯基亚正膦基)氨基]吡啶-3-基}丙烯酸甲酯
从来自实施例9A的320mg(1.8mmo1)的氨基吡啶开始，用一般方法[A]得到1650mg的粗制产物，将所述粗制产物进行反应，而不经过进一步纯化。
实施例13A(2E)-3-{3-[(三苯基亚正膦基)氨基]吡啶-4-基}丙烯酸甲酯 从来自实施例10A的900mg(4.89mmol)的氨基吡啶开始，一般方法[A]得到1910mg的粗制产物，所述粗制产物进行反应，而不经过进一步纯化。
MS(ESI-pos)m/z=439[M+H]+一般方法[B]通过与异氰酸酯反应从亚氨基正膦制备碳二亚胺将1.0当量的亚氨基正膦(当适合时作为粗制产物)溶解在二氯甲烷中，加入1.1当量的异氰酸酯，并将反应混合物在室温搅拌16小时。将以这种方式获得的粗制产物直接进行进一步反应。
实施例14A叔丁基(2E)-3-{3-[({[3-(三氟甲基)苯基]亚氨基)亚甲基)氨基]吡啶-2-基)丙烯酸酯 按照一般方法[B]，将来自实施例11A的65mg(0.14mmol)的亚氨基正膦与27mg(0.14mmol)的3-三氟甲基苯基异氰酸酯反应，并且将粗制产物进一步反应而不经纯化。
实施例15A(2E)-3-{4-[({[3-(三氟甲基)苯基]亚氨基}亚甲基)氨基]吡啶-3-基}丙烯酸甲酯 按照一般方法[B]使来自实施例12A的300mg(0.34mmol)的亚氨基正膦与70mg(0.38mmol)的3-三氟甲基苯基异氰酸酯反应，并且将粗制产物进一步反应，不经过纯化。
实施例16A(2E)-3-[4-({[(2-甲氧基-5-甲基苯基)亚氨基]亚甲基}氨基)吡啶-3-基]丙烯酸甲酯
按照一般方法[B]将来自实施例12A的150mg(0.28mmol)的亚氨基正膦与67mg(0.42mmol)的1-甲氧基-4-甲基苯基异氰酸酯反应，并将所述粗制产物进一步反应，而不经过纯化。
实施例17A(2E)-3-(3-[({[3-(三氟甲基)苯基]亚氨基}亚甲基)氨基]吡啶-4-基}丙烯酸基酯 按照一般方法[B]，使来自实施例13A的1000mg(1.37mmol)的氨基吡啶与282mg(1.51mmol)的3-三氟甲基苯基异氰酸酯反应，并使所述粗制产物进一步反应，而不经过纯化。
实施例18A(2E)-3-(4-[({[2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基]亚氨基}亚甲基)氨基]吡啶-3-基)丙烯酸甲酯 按照一般方法[B]，使来自实施例12A的1017mg(1.90mmol)的亚氨基正膦与413mg(1.90mmol)的1-甲氧基-4-三氟甲基-苯基异氰酸酯反应，并且将粗制产物在不经过纯化的情况下进一步反应。
实施例19A2-异氰酸根合-1-甲氧基-4-(三氟甲基)苯 将3g(15.69mmol)的2-甲氧基-5-三氟甲基苯胺溶解在100ml的二氯甲烷中，并加入6.73g(31.39mmol)的1，8-双(二甲基氨基)萘。在0-5℃，逐滴加入溶解在50ml的二氯甲烷中的2.24g(11.3mmol)的氯甲酸三氯甲酯，并将所述混合物在0℃搅拌30分钟，在室温搅拌60分钟。将所述混合物在0℃用1N的盐酸、冰水和碳酸氢钠溶液进行洗涤。在通过硫酸镁干燥和通过蒸馏去除溶剂后获得产物。接着，在不经过进一步纯化的情况下，将异氰酸酯在下述反应中进行反应。产率3g(理论值的88％)。
一般方法[C]使碳二亚胺与苯基哌嗪反应以得到二氢吡啶并嘧啶基乙酸酯将1.0当量的碳二亚胺(当适合时作为粗制产物)溶解在二氯甲烷中，加入1.05当量的苯基哌嗪和一平勺口的硅胶，将所述反应混合物在回流下搅拌16小时。接着，将溶剂在真空中去除，并通过色谱法在硅胶上或通过制备HPLC(方法2)将产物进行纯化。
实施例20A{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基}乙酸甲酯
从得自17A的250mg(0.34mmol)的碳二亚胺和65mg(0.36mmol)的4-氟苯基哌嗪开始，一般方法[C]和通过制备HPLC纯化两次得到64mg的产物(理论值的33％)。
HPLC(方法1)Rt＝4.42minMS(ESI-pos)m/z＝528[M+H]+实施例21A{2-[4-(3-甲基苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)-苯基]-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基}乙酸甲酯 从得自实施例17A的250mg(0.34mmol)的碳二亚胺和63mg(0.36mmol)的3-甲基苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到88mg(理论值的48％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.42minMS(ESI-pos)m/z＝524[M+H]+
实施例22A{2-[4-(3-氯苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基}乙酸甲酯 从得自实施例17A的250mg(0.34mmol)的碳二亚胺和71mg(0.36mmol)的3-氯苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到102mg(理论值的53％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.65minMS(ESI-pos)m/z＝544[M+H]+实施例23A{2-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)乙酸甲酯 从得自实施例17A的250mg(0.34mmol)的碳二亚胺和69mg(0.36mmol)的3-甲氧基苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到90mg(理论值的46％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.40mimMS(ESI-pos)m/z＝540[M+H]+实施例24A{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基}乙酸甲酯 从得自实施例15A的107mg(0.31mmol)的碳二亚胺和56mg(0.31mmol)的4-氟苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到50mg(理论值的28％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.60minMS(ESI-pos)m/z＝528[M+H]+实施例25A{(2-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基)乙酸甲酯
从得自实施例15A的107mg(0.31mmol)的碳二亚胺和59mg(0.31mmol)的3-甲氧基苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到40mg(理论值的23％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.60minMS(ESI-pos)m/z＝540[M+H]+实施例26A叔丁基{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基}乙酸酯 从得自实施例14A的53mg(0.14mmol)的碳二亚胺和24mg(0.14mmol)的4-氟苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到38mg(理论值的48％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.87minMS(ESI-pos)m/z＝570[M+H]+实施例27A甲基[2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-(2-甲氧基-5-甲基苯基)-3，4-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基]乙酸酯
从得自实施例16A的91mg(0.28mmol)的碳二亚胺和76mg(0.42mmol)的4-氟苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到14mg(理论值的9％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.23minMS(ESI-pos)m/z＝504[M+H]+实施例28A{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-苯基-3，4-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基]乙酸甲酯 从得自实施例18A的565mg(1.50mmol)的碳二亚胺和297mg(1.65mmol)的4-氟苯基哌嗪开始，用一般方法[C]和通过制备HPLC进行的纯化得到90mg(理论值的10％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.44minMS(ESI-pos)m/z＝558[M+H]+
示范性实施方案一般方法[D]酯水解将1.0当量的酯溶解在二噁烷(约0.5M溶液)中，接着加入3.0当量的1N的氢氧化钠溶液，将所述反应混合物在50℃搅拌16小时。接着，用1N盐酸将混合物调节到pH5，将溶剂在真空中去除，在硅胶上通过色谱法或通过制备HPLC将产物进行纯化。
实施例1{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基}乙酸盐酸盐 从来自实施例20A的44mg(0.08mmol)的酯开始，按照一般方法[D]反应和通过制备HPLC进行的纯化得到24mg(理论值的52％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.19minMS(ESI-pos)m/z＝514[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN+DMSO-d6)δ[ppm]＝8.34(s，1H)；8.11(d，1H)；7.62(s，1H)；7.47(t，1H)；7.39-7.37(m，2H)；7.07(t，1H)；6.99(t，1H)；6.91-6.87(m，1H)；5.27-5.23(m，1H)；3.58-3.53(m，2H)，在溶剂或水信号下的另外的质子。
实施例2
{2-[4-(3-甲基苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基}乙酸盐酸盐 从来自实施例21A的70mg(0.13mmol)的酯开始，按照一般方法[D]反应并且通过制备HPLC进行纯化得到51mg(理论值的71％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.21minMS(ESI-pos)m/z＝510[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN+DMSO-d6)δ[ppm]＝8.34(s，1H)； 8.12(d，1H)； 7.62(s，1H)；7.44(t，1H)；7.38-7.36(m，2H)；7.10(t，1H)；7.05(d，1H)； 6.89-6.88(m，1H)；6.72-6.64(m，3H)；5.26-5.22(m，1H)；3.59-3.53(m，2H)；3.08-2.95(m，3H)；2.72-2.65(m，1H)；2.48-2.46(m，1H)；2.25(s，3H).
实施例3{2-[4-(3-氯苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基}乙酸盐酸盐
从来自实施例22A的84mg(0.15mmol)的酯开始，按照一般方法[D]的反应和通过制备HPLC进行纯化得到44mg(理论值的52％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.43min.
MS(ESI-pos)m/z＝530[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN+DMSO-d6)δ[ppm]＝8.34(s，1H)；8.12(d，1H)；7.62(s，1H)；7.46(t，1H)；7.39-7.35(m，2H)；7.19(t，1H)；7.05(d，1H)；6.89-6.88(m，1H)；6.83-6.79(m，2H)；5.26-5.22(m，-1H)；3.59-3.53(m，2H)；3.13-3.02(m，3H)；2.72-2.65(m，1H)；2.48-2.41(m，1H).
实施例4{2-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]乙酸盐酸盐 从来自实施例23A的72mg(0.13mmol)的酯开始，按照一般方法[D]进行反应和通过制备HPLC进行的纯化得到48mg(理论值的67％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.18min.
MS(ESI-pos)m/z＝526[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN+DMSO-d6)δ[ppm]＝8.35(s，1H)；8.12(d，1H)；7.56(s，1H)；7.46(t，1H)；7.39-7.36(m，2H)；7.12(t，1H)；7.05(d，1H)；6.50-6.47(m，1H)；6.43-6.39(m，2H)；5.26-5.22(m，1H)；3.73(s，3H)；3.59-3.52(m，2H)；3.09-2.98(m，3H)；2.72-2.65(m，1H)；2.48-2.46(m，1H).
实施例5{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基]乙酸盐酸盐 从来自实施例24A的38mg(0.07mmol)酯开始，按照一般方法[D]进行反应和通过制备HPLC进行的纯化得到24mg(理论值的67％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.24min.
MS(ESI-pos)m/z＝514[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN)δ[ppm]＝8.22(d，1H)；8.18(s，1H)；7.45(s，1H)；7.40-7.36(m，3H)；7.03-6.83(m，5H)；5.28(t，1H)；3.603-3.50(m，4H)；2.99-2.90(m，4H)；2.78(dd，1H)；2.57(dd，1H).
实施例6{2-[4-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基}乙酸
从来自实施例25A的27mg(0.05mmol)的酯开始，按照一般方法[D]进行反应和通过制备HPLC进行纯化得到19mg的(理论值的72％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.24min.
MS(ESI-pos)m/z＝526[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN)δ[ppm]＝8.24(d，1H)；8.18(s，1H)；7.45(s，1H)；7.40-7.35(m，3H)；7.12(t，1H)；7.01(d，1H)；6.45(d，1H)；6.41-6.38(m，2H)；5.28(1，H)；3.72(s，3H)；3.60-3.54(m，4H)；3.07-2.78(m，4H)；2.55(dd，2H)；实施例7{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢-吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基]乙酸盐酸盐 从来自实施例26A的25mg(0.04mmol)的酯开始，按照一般方法[D]进行反应和通过制备HPLC进行纯化得到16mg(理论值的66％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.30min.
MS(ESI-pos)m/z＝514[M+H-HCl]+1H-NMR(400MHz，CD3CN)δ[ppm]＝8.12(d，1H)；7.60(s，1H)；7.45-7.39(m，4H)；7.22(dd，1H)；6.96(t，2H)；6.89-6.86(m，2H)；5.18(dd，1H)；3.68-3.59(m，4H)；3.06-2.99(m，4H)；2.76(dd，1H)；2.63(dd，1H).
实施例8[2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-(2-甲氧基-5-甲基苯基)-3，4-二氢-吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基]乙酸 从来自实施例27A的12mg(0.02mmol)的酯开始，按照一般方法[D]进行的反应和通过制备HPLC进行的纯化得到11mg(理论值的97％)的产物。
HPLC(方法1)Rt＝4.05min.
MS(ESI-pos)m/z＝490[M+H]+1H-NMR(400MHz，CD3CN)δ[ppm]＝8.14-8.10(m，2H)；7.15-6.81(m，8H)；4.36-4.84(m，1H)；3.7 7-3.73(m，4H)；3.50(s，3H)；2.96.-2.92(m，2H)；2/8-2.74(m，2H)，2.49(dd，1H)；2.48(m，1H，部分在CH3信号下)；2.44(s，3H)，实施例9{2-[4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基]-3-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基)乙酸
从来自实施例28A的80mg(0.14mmol)的酯开始，按照一般方法[D]进行的反应和通过制备HPLC进行的纯化得到27mg(理论值的35％)的产物。HPLC(方法3)Rt＝2.31min.
MS(ESI-pos)m/z＝543[M+H]+1H-NMR(400MHz，CD3CN)δ[ppm]＝8.26-8.20(m，2H)；7.55(d，1H)；7.16(d，1H)；7.10-6.78(m，6H)；5.00(dd，1H)；3.88-3.80(m，4H)；3.54(s，3H)；3.03(dd，1H)；2.96-2.91(m，2H)；2.79-2.77(m，2H)；2.55(dd，1H).
B.生理活性的评估本发明的化合物的体外活性可以在下列测定中显示抗-HCMV(抗人巨细胞病毒)致细胞病性测试将测试化合物作为在二甲亚砜(DMSO)中的50毫摩(mM)溶液使用。将更昔洛韦、膦甲酸和西多福韦用作参比化合物。在将2μl的50，5，0.5和0.05mM DMSO的每种贮存溶液加入在第2行A-H中的98μl的细胞培养基小份中以进行一式两份测定后，用50μl的培养基小份进行1∶2稀释，直到96孔板的第11行。在第1行和第12行中的每个孔包含50μl的培养基。接着将150μl的1×104细胞(人包皮成纤维细胞[NHDF])的混悬液吸移入每只孔中(第1行＝细胞对照)，在第2-12行中，加入HCMV感染和未感染的NHDF细胞的混合物(M.O.I.＝0.001-0.002)，即每1000个未感染细胞中1-2个感染细胞。第12行(不含物质)充当病毒对照。最终的测试浓度是250-0.0005μM。在37℃/5％CO2中对所述板温育6天，即直到在病毒对照中所有的细胞被感染(100％致细胞病性作用[CPE])。接着，通过加入福尔马林和吉姆萨染液的混合物将孔进行固定和染色(30分钟)，用双蒸水进行洗涤并于50℃在干燥烘箱中进行干燥。使用高架显微镜视觉评估所述板(来自Technomara的噬斑倍增器)。
可以从测试板中获得下列数据CC50(NHDF)＝以μM表示的物质浓度，在该浓度上与未处理的细胞对照相比，没有观察到对细胞具有细胞抑制作用；
EC50(HCMV)＝以μM表示的物质浓度，与未处理的病毒对照相比，其抑制CPE(细胞致病性作用)达50％；SI(选择性指数)＝CC50(NHDF)/EC50(HCMV)。
本发明化合物作用的代表性体外数据显示在表A中表A
本发明的化合物用于治疗HCMV感染的适合性可以在下列动物模型中显示HCMV异种移植物Gelfoam模型动物3-4周龄的雌性免疫缺陷小鼠(16-18g)，Fox Chase SCID或Fox ChaseSCID-NOD或SCID米色鼠购自商业饲种者(Taconic M+B，Jackson，USA)。
在无菌条件(包括垫料和食物)下将动物隔离饲养。
病毒生长将人巨细胞病毒(HCMV)，Davis或AD169毒株体外培养在人胚包皮成纤维细胞(NHDF细胞)上。在用0.01-0.03的感染复数感染NHDF细胞后，5-10天后，收获病毒感染的细胞并且将其于-40℃在存在基本必需培养基(MEM)、具有10％DMSO的10％胎牛血清(FCS)的情况下进行贮存。在将病毒感染的细胞系列稀释10倍后，在用中性红进行活体染色后，在汇合NHDF细胞的24孔板上测定滴度。
海绵的制备，移植，处理和评估将1×1×1cm大小的胶原海绵(Gelfoam；来自Peasel & Lorey，订单号407534；K.T.Chong等，Abstracts of 39thInterscience Conference onAntimicrobial Agents and Chemotherapy，1999，第439页)最初用磷酸缓冲盐溶液(PBS)湿润，通过排气来将捕获的气泡去除，接着贮存在MEM+10％FCS中。在感染后3小时，将1×106病毒感染的NHDF细胞(用HCMV Davis或HCMV AD169感染，M.O.I＝0.03)进行脱附，并在20μl的MEM，10％FCS中逐滴加入潮湿海绵中。约16小时后，将负载有被感染细胞的海绵用具有5ng/μl的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的25μl的PBS/0.1％BSA/1mMDTT温育。对于移植而言，用阿佛丁或氯胺酮/塞拉嗪/azepromazine混合物对所述免疫缺陷小鼠进行麻醉，使用剃须刀将背部的毛皮去除，将表皮打开1-2cm，将未加载的和湿润的海绵移植在脊背部皮肤下。用组织胶粘剂闭合外科伤口。在移植后6小时，可以对小鼠进行第一次处理(在手术当天进行一次处理)。在随后的日子，在8天时期内进行一天3次(7.00h和14.00h和19.00h)、一天2次(8h和18h)或一天一次(14h)的物质的口服处理。每日剂量是例如3或10或30或60或100mg/kg体重，施用体积是10ml/kg体重。将物质配制成具有2％DMSO的0.5％浓度的Tylose混悬液或0.5％浓度的Tylose混悬液的形式。移植后9天和最后一次施用物质后16小时，将动物无痛处死并且去除海绵。通过胶原酶(330U/1.5ml)消化，从海绵中释放病毒感染的细胞并且将其于-140℃在存在MEM，10％胎牛血清，10％DMSO的情况下贮存。在将病毒感染的细胞系列稀释10倍后，用中性红进行活体染色后，通过在汇合的NHDF细胞的24孔板上测定滴度进行评价。测定与安慰剂处理的对照组相比，在物质处理后，感染细胞或感染病毒颗粒(感染中心测定)的数量。
CYP抑制测定为了研究基于CYP3A4的抑制的机制(不可逆)，于37℃，将测试物质以各种浓度与人肝微粒体(2mg/ml的微粒体蛋白)在添加了产生NADPH的系统(NADP+，葡糖-6-磷酸和葡糖-6-磷酸脱氢酶)的磷酸钾缓冲液中进行温育。在不同时间点，从温育物中取2个等分试样。
将第一个等分试样在新的温育溶液(磷酸缓冲液，产生NADPH的系统和10μM咪达唑仑)中于37℃以1∶50再温育10分钟。接着在冰上，用乙腈终止温育，将蛋白质以15000g离心进行沉淀，并且按照形成1′-羟基咪达唑仑的标准方法，通过HPLC/MS来分析上清液。
在冰上用乙腈终止第二个等分试样，并且通过HPLC/UV/MS分析余下的测试物质。
通过两组分析数据测定不可逆抑制的典型参数(kinact，Ki和分配比率r)，并且以其评估测试物质(参见A.Madan，等，A.D.Rodrigues(ed.)“Drug-Drug Interaction”in“Drugs and the Pharmaceutical Science”，卷116，ISBN 0-8247-0283.2，Marcel Dekker Inc.，纽约，2002)。
C.药物组合物的示范性实施方案可以将本发明的化合物以下列方式转化为药物制剂片剂组成100mg的实施例1的化合物，50mg的乳糖(一水合物)，50mg的玉米淀粉(天然的)，10mg的聚乙烯吡咯烷酮(PVP 25)(来自BASF，Ludwigshafen，德国)和2mg的硬脂酸镁。
片剂重量212mg。直径8mm，曲率半径12mm。
制备将活性成分、乳糖和淀粉的混合物用PVP在水中的5％浓度的溶液(m/m)成粒。接着，干燥所述颗粒，并将其混合以硬脂酸镁达5分钟。使用常规的压片机(见上述关于片剂的形成)压缩该混合物。用于所述压缩的压缩力的指导是15kN。
可以口服施用的混悬剂组成1000mg的实施例1的化合物，1000mg的乙醇(96％)，400mg的Rhodigel(来自FMC，宾夕法尼亚州，USA的黄原胶)和99g的水。
10ml的口服混悬剂等价于100mg的本发明化合物的单一剂量。
制备将Rhodigel悬浮在乙醇中，并将活性成分加入混悬液中。在搅拌过程中，加入水。将所述混合物搅拌约6小时直到Rhodigel溶胀完全。
可以静脉内施用的溶液剂组成10-500mg的实施例1的化合物，15g的聚乙二醇400和250g的注射用水。
制备将实施例1的化合物与聚乙二醇400一起溶解于水中，伴随搅拌。通过过滤(孔径0.22μm)来对溶液进行灭菌，并将其在无菌条件下分配到热灭菌的输液瓶中。用输注塞和卷曲帽来封闭后者。
权利要求
1.下式的化合物 其中Ar表示芳基，其中芳基可以被1-3个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组烷基、烷氧基、甲酰基、羟基羰基、烷基羰基、烷氧羰基、三氟甲基、卤素、氰基、羟基、氨基、烷基氨基、氨基羰基和硝基，其中烷基可以被1-3个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组卤素、氨基、烷基氨基、羟基和芳基，或在所述芳基上的取代基中的两个与它们所结合的碳原子一起形成1，3-二氧戊环，环戊烷环或环己烷环，并且任选地存在的第三个取代基其独立地选自上述组，Q1，Q2，Q3和Q4表示CH或N，其中Q1，Q2，Q3和Q4中的一个或两个表示N并且其它的同时表示CH，R1表示氢、氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，R2表示氢、烷基、烷氧基、烷硫基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，R3表示氨基、烷基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、氰基、卤素、硝基、三氟甲基、烷基磺酰基或烷基氨基磺酰基，或原子团R1，R2和R3之一表示氢、烷基、烷氧基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，并且其它两个与它们结合的碳原子一起形成1，3-二氧戊环，环戊烷环或环己烷环，R4表示氢或烷基，R5表示氢或烷基，或在哌嗪环上的原子团R4和R5与正对的碳原子结合并且形成亚甲桥，所述亚甲桥任选地被1-2个甲基取代，R6表示氢、烷基、烷氧基、烷硫基、甲酰基、羟基羰基、氨基羰基、烷基羰基、烷氧羰基、三氟甲基、卤素、氰基、羟基或硝基，和R7表示氢、烷基、烷氧基、烷硫基、甲酰基、羟基羰基、烷基羰基、烷氧羰基、三氟甲基、卤素、氰基、羟基或硝基，或其盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物之一。
2.按照权利要求1的化合物，其特征在于Ar表示苯基，其中苯基可以被1-3个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、羟基羰基、C1-C6-烷基羰基、C1-C6-烷氧羰基、三氟甲基、氟、氯、溴、氰基、羟基、氨基、C1-C6-烷基氨基和硝基，或所述苯基上的取代基中的两个与它们结合的碳原子一起形成1，3-二氧戊环，并且任选地存在的第三个取代基其独立地选自上述组，Q1，Q2和Q3表示CH或N，其中一直精确地，Q1，Q2和Q3其中之一表示N并且其它的同时表示CH，Q4表示CH，R1表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、C1-C3-烷硫基、氟或氯，R2表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、C1-C3-烷硫基、氟或氯，R3表示C1-C4-烷基、氰基、氟、氯、硝基、三氟甲基或C1-C3-烷基磺酰基，或原子团R1，R2和R3其中之一表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、氰基、卤素、硝基或三氟甲基，并且其它两个与它们结合的碳原子一起形成环戊烷环或环己烷环，R4表示氢或甲基，R5表示氢，R6表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、羟基羰基、氨基羰基、三氟甲基、氟、氯、氰基、羟基或硝基，和R7表示氢、C1-C3-烷基、C1-C3-烷氧基、氟、氯、氰基或羟基。
3.按照权利要求1或2的化合物，其特征在于Ar表示苯基，其中苯基可以被1-2个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组甲基、甲氧基、氟和氯，Q1，Q2和Q3表示CH或N，其中一直精确地，Q1，Q2和Q3其中之一表示N，并且其它的同时表示CH，Q4表示CH，R1表示氢、甲基、甲氧基、甲硫基、氟或氯，R2表示氢，R3表示甲基、异丙基、叔丁基、氰基、氟、氯、硝基或三氟甲基，R4表示氢，R5表示氢，R6表示氢、氨基羰基、氟、氯、氰基或羟基，和R7表示氢。
4.按照权利要求1-3中任一项的化合物，其特征在于Ar表示苯基，其中苯基可以被1-2个取代基所取代，其中所述取代基彼此独立地选自由下列各项组成的组甲基、甲氧基、氟和氯，Q1，Q2和Q3表示CH或N，其中一直精确地，Q1，Q2和Q3其中之一表示N，并且其它的同时表示CH，Q4表示CH，R1表示氢、甲基或甲氧基，R2表示氢，R3表示甲基、叔丁基、氯或三氟甲基，R4表示氢，R5表示氢，R6表示氢，和R7表示氢。
5.制备按照权利要求1的式(I)化合物的方法，其特征在于下式的化合物与碱或酸反应， 其中Ar，Q1，Q2，Q3，Q4，R1，R2，R3，R4，R5，R6和R7具有权利要求1中所显示的含义，并且R8表示烷基，优选甲基或乙基、或叔丁基。
6.按照权利要求1-4中任一项的化合物，其用于治疗和/或预防疾病。
7.药物，其包含按照权利要求1-4任一项的化合物和惰性的、非毒性的药物适合的赋形剂。
8.按照权利要求1-4中任一项的化合物在制备治疗和/或预防病毒感染的药物中的应用。
9.按照权利要求8的应用，其特征在于所述病毒感染是人巨细胞病毒(HCMV)或疱疹病毒科类的另一个代表的感染。
10.按照权利要求7的药物，其用于治疗和/或预防病毒感染。
11.在人或动物中控制病毒感染的方法，其通过施用抗病毒有效量的按照权利要求1-4中任一项的至少一种化合物、按照权利要求7的药物或按照权利要求8或9获得的药物来进行。
全文摘要
本发明涉及取代的氮杂喹唑啉及其制备方法。本发明还涉及将所述氮杂喹唑啉用于制备药物的应用，所述药物用于治疗和/或预防疾病，尤其用作特别是针对巨细胞病毒的抗病毒药。
文档编号A61P31/22GK1980925SQ200580014627
公开日2007年6月13日 申请日期2005年4月23日 优先权日2004年5月7日
发明者T·文伯格, J·鲍迈斯特, M·耶斯克, F·聚斯梅尔, H·齐默尔曼, K·亨宁格, D·朗 申请人:艾库里斯有限及两合公司