专利名称：：用于抗肿瘤药物的7＇-氮杂靛玉红类化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一类用于抗肿瘤药物的7'-氮杂靛玉红类化合物，本发明所涉及的化合物及其在药学上可接受的盐可以在治疗肿瘤的药物中应用，属于医药化工
技术领域：
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背景技术：
：靛玉红是中药处方"当归龙荟丸"的有效成分，与其类似物甲异靛共同在临床上治疗慢性粒细胞白血病。公开号为CN101074229A的中国发明专利公布了7-氮杂靛玉红衍生物，国际专利W02003051900Al公布了靛玉红衍生物，这些衍生物可以抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)，进而可以治疗因细胞生长紊乱而导致的各种疾病，其中包括恶性肿瘤；国际专利W02007099402-A2中公布1位和7位具有取代基的靛玉红衍生物可以用来治疗结肠癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等恶性肿瘤；公开号为CN1763005A中国发明专利中公布了yV(l)-烃基-3'-肟基靛玉红衍生物具有抗肿瘤活性，该化合物在体外对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞和激素非依赖性前列腺癌PC-3和DU-145细胞的增殖有明显的抑制作用，在体内亦能明显抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖；BradburyJ.(BradburyJ.，FromChinesemedicinetoanticancerdrugs,7V愿細CG騰AT，2005，10(17)，1131-1132)介绍，靛玉红及其衍生物参与抑制肿瘤细胞生成的多种作用途径，所以具有广泛的抗肿瘤特性。但是靛玉红的抗肿瘤活性较弱，水溶性和脂溶性较差，对胃肠道的刺激强烈，这些因素影响了其在临床中的应用。为了进一歩提高与靛玉红结构类似的化合物的抗肿瘤活性，降低其毒副作用，有必要对此类化合物进行结构改造。
发明内容本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一类用于抗肿瘤药物的7'-以及由此类化合物合成的在药学上可接受的盐，可利用其抑制或杀灭肿瘤细胞，具有抗肿瘤活性的特性，制备治疗肿瘤的药物，以扩充抗肿瘤药物库。为实现上述目的，本发明在具有抗肿瘤作用的化合物靛玉红母核结构基础上，7'位引入氮原子，合成了一系列全新的化合物，得到具有抗肿瘤活性的全新的7'-氮杂靛玉红类化合物及其在药学上可接受的盐。本发明所涉及的一类用于抗肿瘤药物的7'-氮杂靛玉红类化合物，结构通式如下在上述通式中，所述的R可以是下述取代基中的一个H、CH3、CH2CH3、CH2Ph、C恥H2Ph、乙酰基或丙酰基；所述的R2可以是下述取代基中的一个H、F、Cl、Br、CH:i、C眼"CH2Ph、CH2CH2Ph、N02、CF:1、NH2、0H、0CH3、0CH2CH:i、0CH2Ph或0CH2CH2Ph;所述的R3可以是下述取代基中的一个H、F、Cl、Br、CH:i、CH2CH3、CH2Ph、CH线Ph、N02、CF3、NH2、0H、0CH3、0CH2CH3、0CH2Ph或0CH线Ph;所述的R4可以是下述取代基中的一个H、F、Cl、Br、CH3、CH2CH3、CH2Ph、CH2CH2Ph、N02、CF3、NH」、0H、OCH.i、0C:!、0CH:,Ph或0CH2CH2Ph;所述的R可以是下述取代基中的一个O或NOH。本发明所涉及的化合物具有抗肿瘤作用，可以抑制或杀灭肿瘤细胞。本发明所涉及的化合物可以用作制备抗肿瘤的药物。本发明所涉及的化合物可以用作但不限于制备治疗宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌的抗肿瘤药物。同时，本发明也包括由所述的化合物合成的在药学上可接受的盐，所述的化合物在药学上可接受的盐由所述的化合物与无机酸、有机酸或氨基酸合成。4所述的无机酸为盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸或硫酸；所述的有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、乳酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、苯甲酸、二乙基乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、桂皮酸、水杨酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、苯丙酸、烟酸、异烟酸或柠檬酸。本发明所涉及的化合物在药学上可接受的盐具有抗肿瘤作用，可以抑制或杀灭肿瘤细胞。本发明所涉及的化合物在药学上可接受的盐可以用作制备抗肿瘤的药物。本发明所涉及的化合物在药学上可接受的盐可以用作但不限于制备治疗宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌的抗肿瘤药物。本发明的7'_氮杂靛玉红类化合物的合成路线如下:OR本发明所涉及的化合物的制备方法是将7-氮杂-3-吲哚乙酸酯与吲哚醌衍生物縮合得到目标化合物I^0的7'-氮杂靛玉红类化合物，将R^O的7'-氮杂靛玉红类化合物与盐酸羟胺反应，得到目标化合物I^N0H的7'-氮杂靛玉红类化合物本发明所涉及的化合物在药学上可接受的盐的制备方法是将所涉及的化合物与所涉及的酸反应合成。实验验证，本发明所涉及的化合物及其在药学上可接受的盐具有抑制或杀灭肿瘤细胞的作用，本发明所涉及的化合物及其在药学上可接受的盐可以在治疗肿瘤的药物中应用，应用于治疗各种肿瘤。本发明所涉及的化合物及其在药学上可接受的盐在治疗肿瘤药物中的应用包括但不限于在治疗宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌的药物中应用。具体实施例方式以下通过具体的实施例对本发明的技术方案作详细说明。本实施例在本发明技术方案的前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。本发明实施例中表示的化合物及实施利中表示的部分化合物在药学上可接受的盐均为本发明合成的新化合物。所有实施例中表示的化合物及实施利中表示的部分化合物在药学上可接受的盐的结构经多种方法鉴定，其中主要包括'H-NMR、13C_NMR、MS禾口IR。一.化合物的制备实施例化合物包括(1)R==0，R丄=H,R2=H，R:!=H，R4=H;(2)R==0，=H，R2=C1，R3=H，R4=H;(3)R::0，Rt=H,R2=Br，R3=H，R4=H;(4)R==0，=H，R2=CH3，R:尸H，R4=H;(5)R::0，=H，R2=N02，R:产H，R4=H;(6)R==0，R,=H，R2=H，R3=F，R4=H;(7)R==0，R丄=H，R产H，R3=C1，R4=H;(8)R::0，R丄=H，RfH'R3=Br，R4=H;(9)R=0，R产H，R2=H，R3=CF3，R4=H;(10)R=0，R尸H，R2=H，R3=CH3，R4=H;(11)R=0，R尸H，R2=H，R3=H，R4=CH3;(12)RO，R产H，R2=H，R3=H，R4=C1;(13)R=0，R产CH3，R2=H，R3=H，R4=H;(14)R=0，R^CHzCH"R2=H，R3=H,R4=H;(15)R=N0H，Rr=H，R2二H，尺3二H，I4二H;(16)R=N0H，=H，R2=C1，R3=H，R4=H;(17)R=N0H，Rr=H，R2=Br，R3=H，R4=H;(18)R=N0H，=H，R2《H3，R3二H，RfH;(19)R=N0H，R尸H，R2=N02，R3=H，R4=H;(20)R二亂Rr=H，R2=H，R3=F，R4=H;(21)R=N0H，=H，Rz=H，R:产C1，R々二H;(22)R=N0H，R,=H，R2=H，R3=Br，R4=H;(23)R=N0H，=H，R2=H，R3=CH:i，R4=H;(24)R=N0H，=H，R2=H，R3=H，R4=CH3;(25)R二翻，=H，R2=H，R:产H，R4=C1;(26)R=N0H，R'=CH，;，R2二H，R'3=H，R4二H;(27)R=N0H，R,=CH2CH3，R2=H，R3=H，R4:(28)化合物(3)的对甲苯磺酸盐;(29)化合物(1)的盐酸盐；(30)化合物(13)的醋酸盐。实施例1.7'-氮杂靛玉红(1)在50mL单颈瓶中依次加入20mL甲醇、吲哚醌(44mg，0.3國l)、7-氮杂-3-卩引哚乙酸酯(53呢，0.3腿o1)，搅拌溶解后加入无水Na2C03(80mg，0.75腿ol)。室温下搅拌l小时，过滤。分别用甲醇和水洗涤滤饼，得紫红色固体31mg，反应收率39.44%，熔点>300。C。'H-丽R(300MHz，DMS0，^卯ra):10.87(1H，s，1'-N-H)，8.67-8.69(1H，d，,6.9Hz，4-H),8.48-8.49(1H，d，^4.5Hz，6'-H)，8.09-8.11(1H，d,力7.2Hz，4'-H)，7.27-7.31(1H，t，,8.4Hz，6-H)，7.01-7.12(2H，m，5-H，5'-H)，6.91-6.94(1H，d，力7.5Hz，7-H)。MS(MM-ES+APCI)/zz/z:264.0[M]+。IR(cm—'，KBr):3118，3063，1680，1615，1584,1431，1299，1209，1006，771。实施例2.5-氯-7'-氮杂靛玉红(2)由5-氯吲哚醌和7_氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。紫红色固体；熔点〉300。C;反应收率39.44%。NMR(300MHz，DMSO，5ppm):10.87(1H，s，1'-N-H)，8.67-8.69(1H，d，,6.9Hz，4-H)，8.48-8.49(1H，d，,4.5Hz'6'-H)，8.09-8.11(1H，d，力7.2Hz，4'-H),7.27-7.31(1H，t，,8.4Hz,6-H)，7.01-7.12(2H，m，5-H，5'-H)，6.91-6.94(1H，d，力7.5Hz，7-H)。MS(MM-ES+APCI)a/z:264.0[M]+。IR(era—'，KBr):3443，3209，2925，2852，1696，1594，1479，1415，1403，764。实施例3.5-溴-7'-氮杂靛玉红(3)由5-溴吲哚醌和7-氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。紫红色固体；熔点〉300°C;反应收率48.98%。力-丽R(300MHz，DMSO，^卯m):11.17(1H，s，1-N-H)，10.83(1H's，1'-N-H)，8.85-8.86(1H，d，力1.8Hz，4-H)，8.50-8.52(1H，dd，>5.1Hz，6'-H)，8.12--8.14(1H，d，力6.6Hz，4'-H)，7.45-7.48(1H，dd，,8.1Hz，6-H)，7.13-7.17(1H，m，5'-H)，6.89—6.92(1H，d，'f8.4Hz，7—H)。IR(cm—'，KBr):3337，3143，2921，2850，1671，1613，1587，1478，1423，1305，1206，1007，807，779，592。实施例4.5-甲基-7'-氮杂靛玉红(4)由5-甲基n引哚醌和7-氮杂-3-刚哚乙酸酯制得。8方法同实施例1。黑褐色固体；熔点〉300°C;反应收率77.98%。'H-腿(300MHz，DMS0，5ppm):10.93(1H，s，1-N-H)，10.78(1H,s，r-N-H)，8.54-8.48(2H，m，4-H，6'-H)，8.08-8.11(1H，d，,7,5Hz,4'-H)，7.09-7.13(2H，m，6-H，5'-H)，6.80-6.83(1H，d，,7.8Hz，7-H)，2.31(3H，s，1-CH3)。MS(MM—ES+APCI)历A:278.l[M]+。IR(cnf1，KBr):3313，3229，2920，2853，1669，1615，1580，1567，1482，1309，1180，1010，814，773。实施例5.5-硝基-7'-氮杂靛玉红(5)由5-硝基B引哚醌和7-氮杂-3-B引哚乙酸酯制得。方法同实施例1。橙红色固体；熔点>300°C;反应收率36.74%。'H-騰(300MHz，DMSO，5ppm):11.66(1H，s，l-N-H)，10.87(1H，s，1'-N-H)，9.60-9.61(1H，d，,2.4Hz，4—H)，8.51—8.53(1H，dd，方4.8Hz，6'-H)，8.22—8.25(1H，dd，,8.7Hz，4'-H)，8,15-8.17(1H，d，,6.0Hz，6-H)，7.16-7.20(1H，m，5'—H)，7.10—7.13(1H，d，/=8.7Hz，7_H)。IR(cm'，KBr):3278，3204,3116，2921，2851，1690，]617，1590，1523，1423，1339,1296，1192，1081,1007，775，591。实施例6.6-氟-7'-氮杂靛玉红(6)由6-氟n引哚醌和7-氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。红色固体；熔点>300°C;反应收率32.92%。'H-函R(300MHz,DMS0，^ppm):11.17(1H，s，1-N-H)，10.68(1H，s，1'-N-H)，8.69-8.74(1H，m，4一H)，8.47—8.49(1H，dd，,5.lHz，6'—H)，8,09—8.11(1H，dd，>7.5Hz，4'一H)，7.08—7.丄3(1H'm，5—H)，6.84—6.91(1H，m，5'—H)，6.72—6.74(1H，dcl，,9.0Hz，7—H)。IR(cm—1，KBr):3283，2923，2851，1682，1619，1587，1478，1431，1301,1215，1144，1007，％6，775。实施例7.6-氯-7'-氮杂靛玉红(7)9由6-氯吲哚醌和7_氮杂-3-卩引哚乙酸酯制得。方法同实施例1。紫红色固体；熔点>300°C;反应收率32.55%。力-NMR(300MHz，DMS0，^ppm):11.15(1H，s，1-N-H)，10.75(1H，s，1'-N-H)，8.65-8.68(1H，d，,8.4Hz，4-H)，8.48-8.50(1H，dd，户4.8Hz，H-6')，8.10-8.13(1H，d，,7.2Hz，4'-H)，7.09-7.13(2H，m，5-H，5'-H)，6.94-6.95(1H，d，户2.lHz，7—H)。IR(cnf1，KBr):3434，3305，2361，1685,1610，1586，1479，1428，1302，1210，1008，773。实施例8.6-溴-7'-氮杂靛玉红(8)由6-溴吲哚醌和7-氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。紫红色固体；熔点>300°C;反应收率33.72%。'H-麵R(300MHz，DMSO，5卯m):11.13(1H，s，1-N-H)，10.76(1H，s，T-N-H)，8.57-8.60(1H，d，J=8.4Hz，4-H)，8.47-8.50(1H，dd，月.1Hz，6'-H)，8.09-8.11(1H，d，/=6.3Hz，4'—H)，7.23—7.26(1H，dd，,8.4Hz，5—H)，7.10—7.14(1H，m，5'-H)，7.06(1H，s，7-H)。IR(cnf1，KBr):3423，3310，3103，2361，1684，1606，1480，1427，1302，1206，1008，912，821，771，589。实施例9.6-三氟甲基-7'-氮杂靛玉红(9)由6-三氟甲基吲哚醌和7-氮杂-3-B引哚乙酸酯制得。方法同实施例1。紫红色固体；熔点>300°C;反应收率35.88%。4-NMR(300MHz，DMS0，^ppm):11.26(1H，s，1-N—H)，10.91(1H,s，1'—N-H)，8.80—8.82(1H，d，,8.lHz，4-H)，8.49-8.51(1H，dd，,5.1Hz，6'-H)，8.11-8.14(1H，d，,7.8Hz，4'-H)，7.40-7.43(1H，d，,7.8Hz，5-H)，7.12-7.16(2H，m，5'-H，7-H)。IR(cm—'，KBr):3097，3057，2996，2892，1680，1590，1483，1431，1302，1244，1207,1162，1115，1057，1008，931，780。实施例IO.6-甲基-7'-氮杂靛玉红(10)由6-甲基吲哚醌和7-氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。暗红色固体；熔点>300°C;反应收率49.64%。'H-NMR(300MHz，C巢《ppm):12.60(1H，s，1-N-H)，11.87(1H，s，1'-N-H)，9.48-9.50(1H,d，,7.8Hz，4一H)，8.79—8.81(1H，dd，,4.8Hz，6'-H)，8.31—8.33(1H，d，,7.5Hz，4'-H)，7.28(1H，s，5-H),7.25(1H，s，7—H)，7.17—7.21(1H，m，5'—H)，2.58(3H，s，1—CH3)。MS(MM—ES+APCI)历/z:278.l[M]+。IR(cm_1，KBr):3360，3311,2923，2852，2766，1680，1622，1581，1479，1428，1301，1215，1006，957，822，776。实施例ll.7-甲基-7'-氮杂靛玉红(11)由7-甲基吲哚醌和7-氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。红色固体；熔点〉300°C;反应收率14.80%。'H-丽R(300MHz,C5D5N，厶卯m):12.48(IH，s，1-N-H)，11.93(1H，s，1'-N-H)，9.45-9.47(IH，d，,6.0Hz，4-H)，8.79-8.81(1H，dd，力3.6Hz，6'-H)，8.29-8.32(1H，dd，,5.7Hz，4'-H)，7.46-7.48(1H，m，6-H),7.38-7.42(1H，m，5-H)，7.17-7.20(1H，m，5'-H)，2.47(3H，s，1-CH3)。1JC-醒R(300MHz,C5D5N，^卯m):187.1，173.0，164.3，156.2，141.7，138.4，133.6，132.3，123.1，122.5，122.4，119,7，114.1，117.9，110.6，17.3。MS(MM—ES+APCI)/h/z:278.l[M]+。IR(cm—'，KBr):3260，3173，2921，2852，1682，1619，1590，1485，1426，1301，1230，1202，1144，1005，775。实施例12.7-氯-7'-氮杂靛玉红(12)由7-氯吲哚醌和7-氮杂-3-吲哚乙酸酯制得。方法同实施例1。红色固体；熔点>300°C;反应收率28.57%。'H-NMR(300MHz，DMSO，《ppm):11.43(1H，s，1—N-H)，10.88(1H，s，1'—N-H)，8.65-8.67(1H，d，力7.5Hz，4-H)，8.49-8.51(1H，dd，/=4.8Hz，6'-H)，8.12-8.14(1H，d，,7.2Hz,4'-H)，7.35-7.38(1H，d，,8.4Hz，6_H)，7.06-7.16(2H，m，5—H，5'—H)。IR(cm—、KBr):3127，3001，2790，1682，1633，1599，1572，1476，1436，1327，1318，1282，1178，1100，1023，855，728。实施例13.l-甲基-7'-氮杂靛玉红(13)由l-甲基B引哚醌和7_氮杂-3-B引哚乙酸酯制得。方法同实施例1。红色固体;熔点226-228°C;反应收率39.71%。'H-NMR(300MHz，DMSO，^ppm):10.78(1H，s，l'_N-H)，8.67-8.70(1H，d，,7.8Hz，4_H)，8.46-8.48(1H，dd，户4.8Hz，6'-H)，8.07-8.09(1H，d，".8Hz，4'-H)，7.32-7.36(1H，m，6-H)，7.08-7.13(3H，m，5-H，7_H，5'-H)，3.26(3H，s,1-CH3)。3C-NMR(300MHz，DMSO，5ppm):186,7，169.8，163.6，156,4，143.1，138.5,134.3，130.7，125.2，122.8，120.8，118.6，113,5，109,5，108.0，26.6。MS(MM-ES+APCI)历/z:278.0[M]+。IR(cm—1,KBr):3331，2926，2359，2341，1671，1608，1581，1468，1418，1302，1251，1098，1076，776，748。实施例14.1-乙基-7'-氮杂靛玉红(14)由1-乙基卩引哚醌和7-氮杂-3-d引哚乙酸酯制得。方法同实施例1。红色固体；熔点214-216°C;反应收率38.36%。'H-NMR(300MHz，DMSO，5ppm):10.76(1H，s，1'-N-H)，8.67-8.70(1H，d，,7.5Hz，4-H)，8.46-8.48(1H，dd，/=4.8Hz，6'-H)，8.06-8.09(1H，d，，卢7.8Hz，4'-H)，7.31-7.36(1H，t，,7.8Hz，6-H)，7.05—7.14(3H，m，5—H，7-H，5'—H)，3.78—3.86(2H，q，/=7.2Hz，1-CH2)，1.16-1.21(3H，t，户6.9Hz，1-CH3)。NMR(300MHz，固SO，^ppm):186.7，169.4，163.6，156.3，142.0，138.4，134.3，130.7，125.4，122.7，120.9，118.6，113.5，109.5，108.0，34.8，13.4。MS(MM—ES+APCI)历A:292.0[M]+。IR(cm_1，KBr):3422，3308，2973，2933，1669，1596，1470，1425，1322，1318，1225，1133，778，748，588。实施例15.7'-氮杂靛玉红-3'-肟(15)在10mL单颈瓶中依次加入2mL吡啶、7'-氮杂靛玉红(47mg，0.18,1)、盐酸羟胺(125mg,2mmo1)，回流2小时，冷却至室温，减压蒸除溶剂。用水洗涤滤饼至滤液无色，得红色固体23mg，反应收率46.29%，熔点>300°C。'H-丽R(300MHz，函S0，《ppm):11.80(1H，s，1'-N-H)，10.83(1H，s,1-N-H)，8.58—8.61(1H，d，力8.1Hz，4—H)，8.45-8.47(1H，dd，,7.5Hz，6'—H)，8.25-8.28(1H，dd，,5.1Hz，4'-H)，7.13—7.19(1H，t，,7.5Hz，6—H)，7.04-7.08(1H，m，5-H)，6.90-6.99(2H，m，5'-H，7-H)。MS(MM—ES+APCI)历A:279.0[M]+。IR(cm—、KBr):3432，3169，2920，2850，1667，1639，1599，1578，1464，1313，1218，1179，1102，967，470。实施例16.5普7'-氮杂靛玉红-3'-月亏(16)由5-氯-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300°C;反应收率88.93%。'H-丽R(300MHz，CAN，^ppm):1L26(1H，s，1'-N-H)，10.50(1H，s，L-N-H)，8.10(1H，s，4-H)，7.30-7.32(1H，d，,5.1Hz，4'-H)，6.79-6.81(1H，d，户7.2Hz，6'-H)，6.17-6.20(m，d，力8.4Hz，6—H)，5.80-5.83(1H，d，月.3Hz，7—H)，5.69-5.74(1H，m，5'-H)。MS(MM-ES+APCI)历A:313.0[M]+。IR(cnT1，KBr):3261，2768，1668，1597，1575，1477，1449，1316'1222，1180，1018，990，617。实施例17.5-溴-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(17)由5-溴-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点>300°C;反应收率72.83%。'H-腿(300MHz，C-肌^ppm):11.10(1H，s，1'-N-H)，8.04-8.05(1H,d，力1.8Hz，4一H)，7.52(1H，4'-H，与CsD5N溶剂峰重合)，7.17-7.19(1H，dd，,5.1Hz，6'-H)，6.22-6.26(1H，dd，t^9.0Hz，6-H)，5.77-5.84(2H,m，5'-H，7—H)。IR(cm—'，KBr):3255，2849，1668，1596，1573，1477，1445，1317，1220，1179，1016，985，615。13实施例18.5-甲基-7'-氮杂靛玉红_3'-肟(18)由5-甲基-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300°C;反应收率.-89.35%。'H-NMR(300MHz，C5D5N，5ppm):11.38(1H，s，1'-N-H)，10.84(1H，s，l-N-H)，7.69(1H，s，4-H)，7.52(1H，4'-H，与CJ)5N溶剂峰重合)，7.16-7.18(1H，dd，户5.1Hz，6'-H)，5.88(2H，s，6-H，7—H)，5.73-5.77(1H，m，5'—H),5.63—5.66(1H，m，5—H)，1.10(3H，s，5-CH3)。MS(MM—ES+APCI)历/z:293.0[M]+。IR(cm—1,KBr):3258，2773，1667，1593，1572，1475，1316，1209，1014，618。实施例19.5-硝基-7'-氮杂靛玉红-3'-月亏(19)由5-硝基-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300°C;反应收率92.88%。'H-醒R(300MHz，DMS0，^ppm):14.17(1H，s，3'-N-0H)，11.75(1H，s，1'-N-H)，11.54(1H，s，1—N-H)，9.39—9.40(1H,d，,2.4Hz，4一H)，8.47-8.50(1H，dd，，戶7.5Hz，6'-H)，8.31—8.33(1H，dd，力5.1Hz，4'-H)，8.10-8.14(1H，dd，,8.4Hz，6-H)，7.12-7.16(1H，m，5'-H)，7.06-7.10(1H，d，户9.0Hz，7-H)。IR(cm—、KBr):3314，3109，2823，1696，1599，1341，1306，1206，1175，1085，1026，775。实施例20.6-氟-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(20)由6-氟-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。橙红色固体；熔点〉300。C;反应收率77.97%。'H-NMR(300MHz，DMS0，Jppm):13.78(m，s，3'—N—0H)，11.58(1H，s，1'—N-H)，11.01(1H，s,1-N-H)，8.56-8.61(1H，m，4-H)，8.43-8.46(1H，dd，/=7.5Hz，6'-H)，8.28-8.29(1H，d，,3.9Hz，4'-H)，7.06-7.09(1H，m，5'-H)，6.71-6.82(2H，ra，5—H，7-H)。MS(MM—ES+APCI)297.l[M]+。IR(cm—1,KBr):3152，142851，1685，1633，1600，1579，1475，1436，1318，1231，1142，1021，968，832。实施例21.6-氯-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(21)由6-氯-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300°C;反应收率77.73%。W-NMR(300MHz，DMS0，^ppm):14.20(1H，s，3'-N-0H)，12.00(1H，s，1'-N-H)，11.33(1H，s，1-N-H)，8.86-8.89(1H，d，力8.4Hz，4-H)，8.76-8.78(1H，d，,6.9Hz，6'-H)，8.61—8.63(1H，dd，,4.8Hz，4'—H)，7.39—7.43(1H，m，5'—H)，7.3卜7.34(1H，dd，,8.7Hz,5-H)，7.25-7.26(1H，d，,2.lHz，7-H)。MS(MM-ES+APCI)ff/z:312.9[M]+。IR(cm—、KBr):3124，3098，2993，2833，2771，1682，1628，1599，1573，1468，1434，1315，1231，1179，1071，1014，934，834。实施例22.6-溴-7'-氮杂靛玉红-3'-月亏(22)由6-溴-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300。C;反应收率85.67%。醒R(300MHz，C巢5卯m):11.17(1H，s，1-N-H)，7.63-7.66(1H，d，,8.4Hz，4-H)，7.49(1H，4'-H，与CsD5N溶剂峰重合)，7.17-7.20(1H，dd，/二4.8Hz，6'-H)，6.17-6.18(m，d，,1.8Hz，7—H)，5.91—5.95(1H，m，5—H)，5.77—5.81(1H，m，5'—H)。MS(MM-ES+APCI)历A:356.9[Ivir。IR(cm—'，KBr):3423，3148，2992，2852，1682，1599，1572,1467，1433，1316，1230，1180，1012，969，925，833。实施例23.6-甲基-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(23)由6-甲基-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300。C;反应收率54.79%。'H-NMR(300MHz，C巢5卯m):11.22(1H，s，1'-N-H),10.88(1H，s，1-N-H)，7.75-7.77(1H，d，,7.8Hz，4-H)，7.51(1H，4'-H，与C5D5N溶剂峰重合)，7.16-7.18(1H，15dd，^4.8Hz，6'-H)，5.82(1H，s，7—H)，5.73-5.78(1H，m，5'-H)，5.63—5.66(1H，m，5-H),0.87(3H，s，6-CH3)。MS(画-ES+APCI)293.0[M]+。IR(cm—、KBr):3112，2922，2851，1667，1629，1594，1570，1473，1435，1318，1227，1179，1149，1006，966，834，778，620。实施例24.7-甲基-7'_氮杂靛玉红-3'-肟(24)'由7-甲基-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉30(TC;反应收率79.04%。W-醒R(300MHz，C5D5N，^ppm):11.36(1H，s，1'-N-H)，10.80(1H，s,1-N-H)，7.74-7.77(1H，d，月.8Hz，4-H)，7.51(1H，4'-H，与C5D5N溶剂峰重合)，7.16-7.19(1H，dd，,6.3Hz，6'—H)，5.92—5.94(1H，d，力7.5Hz，6—H)，5.73—5.79(2H，m，5'-H，5—H),1.25(3H，s，7-CH》。MS(MM—ES+APCI)历/力293.l[M]+。IR(cm—'，KBr):3288，3136，3070'1686，1617，1588，1484，1425，1303，1206，1136，1014，776。实施例25.7-氯-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(25)由7-氯-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。红色固体；熔点〉300°C;反应收率94.28%。'H-NMR(300MHz，DMSO，一m):14.26(1H，s，3'-N-0H)，12.14(1H，s，1'普H)，11.59(1H，s，1-N-H)，8.88-8.90(1H，d，/=7.8Hz，4-H)，8.78-8.80(1H,d，户6.6Hz，6'-H)，8.62—8.65(1H，dd，/=5.lHz，4'-H)，7.56—7.58(1H，d，力5.1Hz，6-H)，7.42-7.46(1H，m，5-H)，7.31-7.37(1H，m，5'-H)。MS(MM-ES+APCI)历/z:313.0[M]+。IR(cm—'，KBr):3128，2790，1682，1633，1599，1572，1476，1436，1327，1317，1281，1178，1137，1023，855，728。实施例26.1-甲基-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(26)由l-甲基-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。暗红色固体；熔点〉300°C;反应收率80.18%。'H-NMR(300MHz，DMS0，Jppm):14.13(1H，s，3'-N-0H)，12.00(1H，s，1'-N-H)，8.94-8.97(1H，d，,7.2Hz,4-H)，8.77-8.79(1H,d，力7.2Hz，6'_H)，8.60-8.63(IH，dd，^5.4Hz，4'-H)，7.57-7.62(1H，t，户7.5Hz,6-H)，7.34-7.43(3H，m，5-H，5'-H，7-H)，3.64(3H，s,1-CH3)。MS(丽-ES+APCI)///z:293.0[M]+。IR(cm—、KBr):3222，3047，2925，2560，1663，1633，1597，1468，1435，1334，1253，1133，1028，774，545。实施例27.l-乙基-7'-氮杂靛玉红-3'-肟(27)由1-乙基-7'-氮杂靛玉红和盐酸羟胺制得。方法同实施例15。橙红色固体；熔点265-268。C;反应收率88.52%。'H-隨R(300MHz，DMSO，5ppm):14.14(1H，s，3'-N-OH)，12.04(1H，s，1'H)，8.96-8.99(1H，d，,8.lHz，H-4)，8.77-8.79(1H，d，,6.9Hz，6'-H)，8.61-8.63(1H，dd，,5.4Hz，4'-H)，7.56-7.61(1H，t，,7.5Hz，6-H)，7.34-7.48(3H，m，5-H，5'-H，7-H)，4.18—4.25(2H，q，,7.5Hz，卜CH》，1.5卜1.57(3H，t，户7.2Hz，1-CH3)。MS(MM-ES+APCI)306.9[M]+。IR(cm—1，KBr):2969，2927，2578，1669，1596，1467，1336，1232，1137，1016，975，746。实施例28.5-溴-7'-氮杂靛玉红对甲苯磺酸盐(28)在50mL二颈瓶中依次加入20mLDMF、5-溴-7'-氮杂靛玉红(68mg，0.2mmo1)、对甲苯磺酸(172mg，l醒ol)，7(TC下反应8小时，减压蒸除DMF，乙醇洗去未反应的对甲苯磺酸，得暗红色固体。'H-丽R(300MHz，DMSO，《ppm):11.14(1H，s，1-N-H)，10.81(1H，s，1'-N-H)，8.84-8.85(1H，d，5Hz，4-H)，8.50-8.51(1H，d，月.3Hz，6'-H)，8.10-8,13(1H，d，/=7.2Hz，4'-H)，7.44-7.48(m，6-H，对甲苯磺酸苯基氢)，7.08-7.16(m，5'-H，对甲苯磺酸苯基氢)，6.88-6.91(1H，d，/二8.7Hz，7-H)，2.28(s，对甲苯磺酸甲基氢)。实施例29.7'-氮杂靛玉红盐酸盐的制备(29)将7'-氮杂靛玉红(3mg)加入5mL甲醇-丙酮(1:1)的混合溶液中，振荡均匀，加入6N的HC1(3mL)，振荡至溶液澄清。减压蒸除溶剂，得黑紫色固体。力-NMR(300MHz，DMSO，《ppm):11.07(1H，s，1-N-H),10.80(1H，s，1'-N-H)，8.67-8.70(1H，d，力8.1Hz，4-H)，8.48-8.49(1H，d,,4.8Hz，6'—H)，8.10—8.13(1H，d，,8.4Hz，4'—H)，7.27—7.32(1H,t，>7.2Hz，6-H)，7.02-7.13(2H，m，5-H，5'-H)，6.92-6.94(1H，t，,7.2Hz，7-H)，4.37(s，盐酸氢)。实施例30.1-甲基-7'-氮杂靛玉红醋酸盐的制备(30)将l-甲基-7'-氮杂靛玉红(3mg)加入5mL甲醇-丙酮(1:1)的混合溶液中，振荡均匀，加入冰醋酸(3mL)，振荡至溶液澄清。减压蒸除溶剂，得橙红色固体。力-N服(300MHz，DMSO，5卯m):10.80(1H，s，1'-N-H)，8.70-8.73(1H，dd，,8.lHz，4一H)，8.48—8.50(1H，dd，,4.8Hz,6'-H)，8.10—8.13(1H，d，,7.5Hz，4'-H)，7.37-7.41(1H，m，6-H)'7.09-7.15(3H，m，5-H，5'-H，7-H)，3.27(3H，s，1-CH3)，1.89(s，醋酸甲基氢)。二.抗肿瘤活性测试1.材料与仪器(1)细胞株人肺癌细胞(A549)、人胃癌细胞(SGC-7901)、人肝癌细胞(QGY)、人宫颈癌细胞(HELA)。(2)试剂RPMI1640培养液(吉诺生物医药技术有限公司)、DMEM(高糖)培养液(吉诺生物医药技术有限公司)、优等胎牛血清(杭州四季青工程公司)、磺酰罗丹明B(SRB，Sigma公司)、Tris碱(Sigma公司)、二甲基亚砜(DMSO，上海钰森生物技术有限公司)、青-链霉素溶液(100X)(biowest公司)、无钙、镁磷酸缓冲液(PBS，吉诺生物医药技术有限公司)、0.25X胰酶溶液+0.02y。EDTA(吉诺生物医药技术有限公司)、三氯乙酸(TCA，国药集团化学试剂有限公司)。(3)对照品靛玉红，自制，经结构鉴定。18(4)试剂的配制SRB溶液以SRB、1%冰醋酸配制成0.4%SRB溶液，避光，4'C保存；TCA溶液以TCA、双重蒸馏水配制成5(WTCA溶液；Tris碱溶液以Tris碱、双重蒸馏水配制成10mmol/LTris碱溶液，以NaOH溶液调节pH二lO.0;被测样品(实施例1一30所述化合物)、对照品用DMS0配制成2mg/mL的原始溶液保存，实验时用培养基配制成所需浓度。(5)主要仪器C02培养箱(ThermoFormaSeriesII)、净化工作台(上海新苗医疗器械制造有限公司)、酶联免疫监测仪(ThermoMK3)、倒置生物显微镜(Olympus1X71)、电子天平(MettlerToledoAL204)、离心机(飞鸽TDL80-23)。2.方法(1)细胞培养细胞接种于含有10%胎牛血清、1%青_链霉素溶液的培养基中，置于37匸、5%〔02培养箱中，每2-3天传代一次，实验时取对数生长期细胞。(2)SRB法测定IC，。值以配制好的新鲜培养基将对数生长期细胞调整为5X104个/1^细胞悬液，接种到96孔板中，每孔190nL，设药物处理组、平行对照组、空白对照组。在37°C、5。^C02培养箱中培养12小时后，加入不同浓度的10uL化合物，实验设置双复孔。平行对照组培养30分钟、药物处理组培养48小时后，加入50%TCA溶液50iiL固定，静置5分钟后，将96孔板移置4。C放置30分钟。弃去固定液，水洗5次，空气中干燥。每孔加入0.4%SRB溶液100uL,室温放置1小时。弃去SRB溶液，1%冰醋酸洗5次，空气中干燥。每孔加入200yL10mmol/L非缓冲tris碱溶液(pH=10.0)，在570nm波长下用酶联免疫监测仪测定光密度(0D)值，运用非线性回归分析计算IG。值。19表-17'-氮杂靛玉红化合物的抗肿瘤活性化合物序号ICsoOM)QGYA549HELASGC-7901靛玉红50.0136.22011.1224.9126.852.3321.228.8249.99.359.935.533.154.5344.231.3441.5122.7876.766.453.318.637.824.2622.575.5592.445.7752.795.2307.1178.489.281.8247.2202.2929.589.8356.7238.51023.9166.5380.3213.3118.466.0261.661.212163.474.3451.776.8131.667.7450.8107.41434.385.539.738.71518.6124.7348.33.61611.664.5767.3539.71762.141.5476.6551.8189.998.2848.8149.21957.83.9216.532.820247.371.81723.374.421495.597.1525.290.022359.5100.5297.946.320<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>本发明所涉及的新型结构7'-氮杂靛玉红类化合物及其在药学上可接受的盐可以抑制或杀灭肿瘤细胞，具有抗肿瘤活性，可以在治疗肿瘤的药物中应用。本发明开拓了一类新型抗肿瘤药物的研究方向。权利要求1、一类7′-氮杂靛玉红类化合物，其特征在于具备如下通式中的结构其中，R1为H、CH3、CH2CH3、CH2Ph、CH2CH2Ph、乙酰基或丙酰基；R2为H、F、Cl、Br、CH3、CH2CH3、CH2Ph、CH2CH2Ph、NO2、CF3、NH2、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH2Ph或OCH2CH2Ph；R3为H、F、Cl、Br、CH3、CH2CH3、CH2Ph、CH2CH2Ph、NO2、CF3、NH2、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH2Ph或OCH2CH2Ph；R4为H、F、Cl、Br、CH3、CH2CH3、CH2Ph、CH2CH2Ph、NO2、CF3、NH2、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH2Ph或OCH2CH2Ph；R为O或NOH。2、权利要求l所述的化合物的应用，其特征在于所述的化合物用作制备抗肿瘤的药物。3、根据权利要求2所述的化合物的应用，其特征在于所述的化合物用作制备治疗宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌的抗肿瘤药物。4、采用权利要求1所述的化合物合成的在药学上可接受的盐，其特征在于由所述的化合物与无机酸、有机酸或氨基酸合成；所述的无机酸为盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸或硫酸；所述的有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、乳酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、苯甲酸、二乙基乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、桂皮酸、水杨酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、苯丙酸、烟酸、异烟酸或柠檬酸。5、根据权利要求4所述的盐的应用，其特征在于用作制备抗肿瘤的药物。6、根据权利要求5所述的盐的应用，其特征在于用作制备治疗宫颈癌、胃癌、肝癌或肺癌的抗肿瘤药物。全文摘要本发明涉及一类用于抗肿瘤药物的7′-氮杂靛玉红类化合物，属于医药化工
技术领域：
。本发明在具有抗肿瘤作用的化合物靛玉红母核结构基础上，7′位引入氮原子，合成一系列具有抗肿瘤活性的全新的7′-氮杂靛玉红类化合物及其在药学上可接受的盐，可以在治疗肿瘤的药物中应用。其结构通式如上。文档编号C07D471/04GK101492448SQ20091004705公开日2009年7月29日申请日期2009年3月5日优先权日2009年3月5日发明者刘增路,张爱英,毛振民申请人:上海交通大学