治疗或预防嗜肝dna病毒科病毒感染的组合物和方法

专利名称：治疗或预防嗜肝dna病毒科病毒感染的组合物和方法
技术领域：
本公开总体涉及感染性疾病的治疗，并且更具体地，涉及某些粟精胺(castanospermine)酯类治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒引起的或与其相关的感染的用途，特别是乙型肝炎病毒(HBV)引起的或与其相关的感染。
背景技术：
嗜肝DNA病毒科病毒感染，特别是由人乙型肝炎病毒(HBV)引起的感染，是肝脏疾病的首要病因并且在流行病学上与更严重的并发症(如硬化和肝细胞癌(HCC))相关。已有多种免疫调节疫苗和核苷酸类似物用于治疗HBV感染，但是HBV感染依然是全球范围内的主要公共卫生问题。事实上，已有超过10亿人被感染，并且超过3亿5千万人是HBV慢性携带者(Lee，N.Eng.J.Med.3331733，1999)。
目前，已有五种治疗慢性HBV感染的单一治疗剂获得批准-干扰素-α-2b(IntronA)；聚二乙醇化干扰素(peginterferon-α-2a)(Pegasys)；(-)2’，3’-双脱氧，3’-硫代胞苷(3TC或拉米夫定(lamivudine)；Epivir-HBV)；阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)(Hepsera)；和恩替卡韦(entecavir)(BaracludeTM)。干扰素-α(IFN-α-类淋巴母细胞、重组的或聚二乙醇化的)是免疫调节剂，目的用于达到持续的HBV复制抑制，以及HBV相关的慢性肝病的好转。(参见例如Karayiannis，J.Antimicrobial.Chemother.51761，2003)。但是，IFN-α有许多不期望的副作用，包括流感类似症状、不适、抑郁、白血球减少、血小板减少和甲状腺功能障碍。拉米夫定、恩替卡韦和阿德福韦酯是抑制病毒复制的核苷酸类似物，但是长期使用这些化合物可能导致毒性和抗药性HBV。尽管至今联合治疗剂尚未被批准用于HBV的治疗，但已进行了一些联合治疗剂的研究(如IFN-α和核苷酸类似物，或两种不同的核苷酸类似物一起)，但是因为其结果不确定，关于联合治疗剂的效力还不可能有明确的结论(Papatheodoridis andHadziyannis，Ailment Pharmacol.Ther.1925，2004)。
因此，亟需鉴定和开发具有改进活性和减小的毒性的抗嗜肝DNA病毒科病毒的药剂，以及特别是治疗HBV的疗法。本发明满足了这些需要，并且还提供了其它相关优点。
概述本发明总体上提供粟精胺衍生物，特别是酯衍生物，以及这些化合物的组合物，其用于治疗或预防例如嗜肝DNA病毒科病毒感染(如乙型肝炎病毒(HBV)造成的那些感染)。特别地，本公开提供粟精胺衍生物，其单独或与其它抗嗜肝DNA病毒科病毒的化合物组合对嗜肝DNA病毒科分别具有意想不到地高的或协同的抑制活性。
一方面，本公开提供治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包含向个体给药葡糖苷酶抑制剂和其药学上可接受的盐，其中该葡糖苷酶抑制剂或其药学上可接受的盐或其衍生物具有下列结构式(I) 其中R、R1和R2独立地是氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烃氧基乙酰基、
被甲基或卤素任意取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)，其中该苯基被甲基或卤素任意取代；肉桂酰基；被甲基或卤素任意取代的吡啶羰基；被C1-10烃基任意取代的二氢吡啶羰基；被甲基或卤素任意取代的噻吩羰基；或被甲基或卤素任意取代的呋喃羰基；Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基或卤素；其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。另一实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有下列立体化学 某些实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂是(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(4-溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯；(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(3-己酸酯)；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-庚酸酯；
(l)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯；(m)一种O-新戊酰基酯；(n)一种2-乙基-丁酰基酯；(o)一种3，3-二甲基丁酰基酯；(p)一种环丙酰基酯；(q)一种4-甲氧基苯甲酸酯；(r)一种2-氨基苯甲酸酯；或(s)(a)-(q)中至少两个的混合物。
另一方面，本公开提供治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包含向个体给药改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的药剂和本发明所述的葡糖苷酶抑制剂及其药学上可接受的盐，其中该葡糖苷酶抑制剂具有依照本发明所述结构式(I)的结构。某些实施方案中，所述个体是非人类的动物或人。
在另一方面，本公开提供治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包含向个体给药包括改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫功能的药剂和葡糖苷酶抑制剂及其药学上可接受的盐的组合，其中该葡糖苷酶抑制剂具有本发明所述结构式(I)的结构。
在其它方面中，本公开提供治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，包括本发明所述的葡糖苷酶抑制剂与选自以下试剂的组合(a)抑制嗜肝DNA病毒科病毒感染细胞的化合物；(b)抑制从病毒衣壳中释放病毒RNA或嗜肝DNA病毒科病毒基因产物的功能的化合物；(c)改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的化合物；(d)改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫功能的化合物；和(e)改变嗜肝DNA病毒科病毒感染症状的化合物。
在其它方面中，本公开提供药物组合物，其包含本发明所述的任何化合物，该化合物单独存在或组合存在于组合物中，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，所述药物组合物用于本发明所述的任何方法。其它实施方案中，所述组合物还包含佐剂，如明矾。另一实施方案中，所述组合物还包含其它抗菌剂，如一种或多种抗生素、抗真菌的、抗炎的、免疫调节的和其它抗病毒的化合物。示例性抗病毒化合物包括阿德福韦酯、拉米夫定、克拉夫定(clevudine)和利巴韦林。示例性改变免疫功能的化合物包括干扰素，例如干扰素-α、聚乙二醇化干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ和细胞因子。某些实施方案中，口服、局部或全身给药所述化合物或组合物。另一实施方案中，向人给药所述组合物以治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染，其中该嗜肝DNA病毒科病毒是Avihepadnavirus或Orthohepadnavirns属的成员。相关实施方案中，被治疗的感染由乙型肝炎病毒(HBV)、一种嗜肝DNA病毒科病毒引起或与其相关。某些实施方案中，在葡糖苷酶抑制剂之前给药如改变病毒复制或免疫功能的药剂的辅助治疗剂，或者在所述辅助治疗剂之前给药葡糖苷酶抑制剂，或者所述药葡糖苷酶抑制剂和所述辅助治疗剂混合成单一组合物并同时给药。
附图简要说明

图1A-1C显示了相对于合用指数(Combination Index，CI)绘制的分数效果(Fractional Effect，受影响的病毒的分数，即抗病毒效果)的曲线图，以分析联合治疗剂(两种或更多种药)的协同性、叠加性或拮抗性。用CalcuSynTM程序(Biosoft，Inc.)分析数据。CI(以1.0处的直线表示)大于1.0表明拮抗性，CI为1.0表明叠加性，CI小于1.0表明协同性。包括了Monte Carlo分析，其提供统计显著性的分析，由三条线(中值(中间的线)和显示标准差(SD)的上线和下线，即中值±1.96 SD)来表示。
图2A-2C显示了等效应图，其包括组合药物(celgosivir和阿德福韦酯)的预测ED50、ED75和ED90值(μM)，如果它们有叠加性。实际上的celgosivir和阿德福韦酯联合治疗的ED50、ED75和ED90值(μM)用单点表示。落在理论叠加线右侧的单点表示拮抗性，并且落在理论叠加线左侧的单点表示协同性。
详细描述如上所述，本发明提供组合物和方法，其利用和促使葡糖苷酶抑制剂及其衍生物来治疗和预防感染性疾病(如嗜肝DNA病毒科病毒导致的那些)的组合物和方法。特别地，这些葡糖苷酶抑制剂及其衍生物用于治疗和预防诸如乙型肝炎病毒(HBV)的病毒感染。因此，本发明总体上涉及惊人的发现某些葡糖苷酶抑制剂及其衍生物对于抗诸如HBV的嗜肝DNA病毒科病毒具有意想不到的高活性。据此，本发明的化合物用作例如，研究工具，其用于体外和基于细胞的分析以研究HBV感染的生物学机理(如复制和传播)，本发明的化合物还用作预防或治疗HBV感染和HBV相关疾病的潜在治疗剂。以下更详细讨论了葡糖苷酶抑制剂及其衍生物适合于本发明的用途，以及代表性组合物和治疗用途。
作为背景说明，HBV是嗜肝DNA病毒科病毒家族的原形成员。该家族包含两个属，命名为Orthohepadnavirus和Avihepadnavirus，前者造成哺乳动物感染。根据≥8％的核苷酸差异，HBV可进一步分成8个主要的基因型(A-H)，每一个基因型有明显不同的全球地理分布(Locarnini，Seminars in Liver Disease 24(Supp.1)3，2004)。HBV基因组为3.2kb的部分双链的松驰环状DNA(rcDNA)，其被组织在四个开放阅读框中，并且通过逆转录RNA中间体产生。所述开放阅读框编码病毒聚合酶、病毒包膜、核心(core)和X蛋白。一旦进入宿主细胞核，所述部分双螺旋的病毒DNA被宿主细胞转化为共价闭合环状DNA(cccDNA)，从其转录四套mRNA。该RNA编码HBV核心抗原(HBcAg或核衣壳蛋白)、可溶的和分泌的HBeAg、Pol蛋白、包括HBsAg(表面抗原，如果其持续6个月可检测到，可诊断为慢性HBV感染)的病毒包膜蛋白和HBV X蛋白。焦点集中在鉴定特定细胞靶标的抑制物和涉及核苷酸的加工过程，例如逆转录引发的抑制、病毒负链DNA延长的抑制和HBV聚合酶的抑制。HBV含有三个不同大小的表面蛋白(HBs蛋白)，它们被单独地或双重地N-糖基化，并且对于感染性病毒的形成是必要的。
更详细阐述本发明之前，阐明某些用于下文的术语的定义有助于理解本发明。
本描述中，除非另行指明，任何浓度范围、百分比范围或整数范围应被理解为包括所述范围内的任何整数值，以及在适当的时候包括其分数值(如整数的十分之一和百分之一)。如发明所用，“约”或“基本包含”指任何指明的数值、范围或结构的±15％。选择性词汇(如“或”)的使用应被理解为指其中任何一个、两者或可供选择的事物的任何组合。此外，应该理解，衍生自本发明所述结构和取代基的各种组合的单独化合物或一组化合物被本申请公开的程度与单独阐述每个化合物或化合物组相同。因此，特定结构或特定取代基的选择在本发明的范围内。
如本发明所用，术语“烃基”指饱和或不饱和的、支链的、直链的或环状单价的烃基团，其通过从母体烷烃、烯烃或炔烃的单一碳原子去除一个氢原子衍生。代表性烃基基团包括甲基；乙基，例如乙烷基、乙烯基、乙炔基；丙基，例如丙烷-1-基、丙烷-2-基、环丙烷-1-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等等；丁基，例如丁烷-1-基、丁烷-2-基、2-甲基-丙烷-1-基、2-甲基-丙烷-2-基、环丁烷-1-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1，3-二烯-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等等；或其类似物。
术语“烃基”特别包括具有1至25个、或5至20个、或10至18个、或1至5个碳原子的直链或支链的烃基团。该烃基可以具有任意的饱和水平和程度，即只具有碳-碳单键的基团、具有一个或多个碳-碳双键的基团、具有一个或多个碳-碳三键的基团以及具有碳-碳单、双和三键的混合的基团。当指特定的饱和水平时，使用“烷基”、“烯基”和“炔基”的表述。“低级烃基”的表述指包含1至8个碳原子的烃基基团。该烃基可以是被取代的或未被取代的。
“烷基”指饱和的支链、直链或环状的烃基基团。代表性烷基基团包括甲烷基；乙烷基；丙烷基，例如丙烷-1-基、丙烷-2-基(异丙基)、环丙烷-1-基等等；丁烷基，例如丁-1-基、丁-2-基(仲丁基)、2-甲基-丙烷-1-基(异丁基)、2-甲基-丙烷-2-基(叔丁基)、环丁-1-基等等；或其类似物。
“烯基”指不饱和的支链、直链或环状的烃基基团，或其组合，它们具有至少一个碳-碳双键，其通过从母体烯烃的单一碳原子去除一个氢原子衍生。该基团关于该双键可以成顺式或反式构象。代表性烯基基团包括乙烯基；丙烯基，例如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-2-烯-2-基、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基；丁烯基，例如丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1，3-二烯-1-基等等；或其类似物。该烯基可以是被取代的或未被取代的。
“炔基”指具有至少一个碳-碳三键的不饱和的支链、直链或环状的烃基基团，其通过从母体炔烃的单一碳原子去除一个氢原子衍生。代表性炔基基团包括乙炔基；丙炔基，例如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁炔基，如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等等；或其类似物。
“烃基二基”指饱和的或不饱和的支链、直链或环状的二价的烃基团，其通过从母体烷烃、烯烃或炔烃的两个不同碳原子各去除一个氢原子，或从母体烷烃、烯烃或炔烃的单一碳原子去除两个氢原子衍生。该两个一价的基团中心或该二价的基团中心的每个化合价(valency)可与相同或不同的原子成键。代表性烃基二基基团包括甲烷二基；乙基二基，例如乙烷-1，1-二基、乙烷-1，2-二基、乙烯-1，1-二基、乙烯-1，2-二基；丙基二基，例如丙烷-1，1-二基、丙烷-1，2-二基、丙烷-2，2-二基、丙烷-1，3-二基、环丙烷-1，1-二基、环丙烷-1，2-二基、丙-1-烯-1，1-二基、丙-1-烯-1，2-二基、丙-2-烯-1，2-二基、丙-1-烯-1，3-二基、环丙-1-烯-1，2-二基、环丙-2-烯-1，2-二基、环丙-2-烯-1，1-二基、丙-1-炔-1，3-二基等等；丁基二基，例如丁烷-1，1-二基、丁烷-1，2-二基、丁烷-1，3-二基、丁烷-1，4-二基、丁烷-2，2-二基、2-甲基-丙烷-1，1-二基、2-甲基-丙烷-1，2-二基、环丁烷-1，1-二基；环丁烷-1，2-二基、环丁烷-1，3-二基、丁-1-烯-1，1-二基、丁-1-烯-1，2-二基、丁-1-烯-1，3-二基、丁-1-烯-1，4-二基、2-甲基-丙-1-烯-1，1-二基、2-亚甲基-丙烷-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，2-二基、丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1，3-二烯-1，4-二基、环丁-1-烯-1，2-二基、环丁-1-烯-1，3-二基、环丁-2-烯-1，2-二基、环丁-1，3-二烯-1，2-二基、环丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1-炔-1，3-二基、丁-1-炔-1，4-二基、丁-1，3-二炔-1，4-二基等等；或其类似物。当指特定的饱和水平时，使用术语“烷基二基”、“烯基二基”或“炔基二基”。某些实施方案中，所述烃基二基基团是(C1-C4)烃基二基。其它实施方案中，饱和的所述烃基二基基团是无环的烷基二基基团，其中基团中心位于末端碳，例如甲基二基(亚甲基)；乙烷-1，2-二基(亚乙烷基)；丙烷-1，3-二基(亚丙烷基)；丁烷-1，4-二基(亚丁烷基)等等；或其类似物(还称为亚烃基，定义如下)。
“亚烃基(alkyleno)”指有两个末端一价基团中心的直链烃二基基团，其通过从直链母体烷烃、烯烃或炔烃的两个末端碳原子各去除一个氢原子衍生。代表性亚烃基基团包括亚甲基(methano)；亚乙基(ethyleno)，例如亚乙烷基(ethano)、亚乙烯基(etheno)、亚乙炔基(ethyno)；亚丙基(propyleno)，例如亚丙烷基(propano)、亚丙[1]烯基(prop[1]eno)、亚丙[1，2]二烯基(propa[1，2]dieno)、亚丙[1]炔基(prop[1]yno)等等；亚丁基(butyleno)，例如亚丁烷基(butane)、亚丁[1]烯基(but[1]eno)、亚丁[2]烯基(but[2]eno)、亚丁[1，3]二烯基(buta[1，3]dieno)、亚丁[1]炔基(but[1]yno)、亚丁[2]炔基(but[2]yno)、亚丁[1，3]二炔基(but[1，3]diyno)等等；或其类似物。当指特定的饱和水平时，使用术语“亚烷基”、“亚烯基”或“亚炔基”。某些实施方案中，亚烃基基团是(C1-C6)或(C1-C4)亚烃基。其它实施方案中，亚烃基基团是直链饱和亚烷基基团，例如亚甲基、亚乙烷基、亚丙烷基、亚丁烷基或其类似物。
“杂烃基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂烃基二基和杂亚烃基”分别指烃基、烷基、烯基、炔基、烃基二基和亚烃基基团，其中一个或多个碳原子(以及任何相连的氢原子)各自独立地被相同或不同的杂原子或杂原子基团取代。可以被包括在这些基团中的代表性杂原子或杂原子基团包括-O-、-S-、-Se-、-O-O-、-S-S-、-O-S-、-O-S-O-、-O-NR’-、-NR’-、-NR’-NR’-、＝N-N＝、-N＝N-、-N＝N-NR’-、-PH-、-P(O)2-、-O-P(O)2-、-SH2-、-S(O)2-、-SnH2-和其类似物，以及它们的组合，包括-NR’-S(O)2-，其中每一个R’独立地选自如本文所定义的氢、烃基、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烃基、杂芳基和杂芳基烃基。
“芳基”指单价的芳香烃基团，其通过去掉母体芳香环系统的单一碳原子的一个氢原子衍生。代表性芳基基团包括衍生自醋蒽烯、苊、苯并(E)醋菲(acephenanthrylene)、蒽、薁、苯、蔗(chrysene)、蔻、荧蒽、芴、并六苯、己芬、hexalene、不对称引达省(as-indacene)、对称引达省(s-indacene)、1，2-二氢化茚、茚、萘、并八苯(octacene)、octaphene、艾氏剂(octalene)、卵苯(ovalene)、戊-2，4-二烯(penta-2，4-diene)、并五苯、并环戊二烯、戊芬、苝、非那烯(phenalene)、菲、苉、七曜烯(pleiadene)、芘、皮蒽、玉红省、苯并[9，10]菲、三萘或类似物的基团。某些实施方案中，所述芳基基团是(C5-C14)芳基，(C5-C10)是更优选的。其它实施方案中，芳基是环戊二烯基、苯基和萘基。所述芳基基团可以是被取代的或未被取代的。
“芳基烃基”指无环的烃基基团，其中与碳原子(通常是末端或sp3碳原子)成键的一个氢原子被芳基基团置换。代表性芳基烃基基团包括苄基、2-苯基乙烷基-1-基、2-苯基乙稀基-1-基、萘基甲基、2-萘基乙烷基-1-基、2-萘基乙稀基-1-基、萘并苄基、2-萘并苯基乙烷基-1-基或类似物。指特定烃基部分时，使用术语芳基烷基、芳基烯基或芳基炔基。某些实施方案中，所述芳基烃基基团是(C6-C20)芳基烃基，例如该芳基烃基基团的烷基、烯基或炔基部分是(C1-C6)，且芳基部分是(C5-C14)。其它实施方案中，所述芳基烃基基团是(C6-C13)，例如该芳基烃基基团的烷基、烯基或炔基部分是(C1-C3)，且芳基部分是(C5-C10)。
“杂芳基”指一价的杂芳基团，其通过去掉母体杂芳环系统的单一原子的一个氢原子衍生，该母体杂芳环系统可以是单环或稠环(即共享相邻的原子对的环)。代表性杂芳基基团包括衍生自吖啶、砷杂茚、咔唑、β-咔啉、色烷(chromane)、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氢吲哚、中氮茚、异苯并呋喃、异色烯、异吲哚、异二氢吲哚、异喹啉、异噻唑、异噁唑、1，5-二氮杂萘、噁二唑、噁唑、萘嵌间二氮杂苯、菲啶、菲咯啉、吩嗪、2，3-二氮杂萘、蝶啶、嘌呤，吡喃、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡咯里嗪(pyrrolizine)、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、四唑、噻重氮(thiadiazole)、噻唑、噻吩、三唑、呫吨或类似物。某些实施方案中，所述杂芳基基团是5元至14元杂芳基或5元至10元杂芳基。其它实施方案中，所述杂芳基基团源于噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、噁唑或吡嗪。所述杂芳基基团可以是被取代的或未被取代的。
“杂脂环基”指单环或稠环基团，其环中有一个或多个优选自氮、氧和硫的原子。该环还可以有一个或多个双键。然而，所述环不具有完全共轭的π-电子系统。所述杂脂环可以是被取代的或未被取代的。被取代时，被取代的基团独立地选自烃基、芳基、卤代烃基、卤素、羟基、烃氧基、巯基、氰基、磺酰胺基、氨基磺酰基、酰基、酰氧基、硝基或被取代的氨基。
“杂芳基烃基”指无环的烃基基团，其中与碳原子(通常是末端或sp3碳原子)成键的一个氢原子被杂芳基基团置换。当指特定的烃基部分时，使用术语“杂芳基烷基”、“杂芳基烯基”和“杂芳基炔基”。某些实施方案中，所述杂芳基烃基基团是6元至20元杂芳基烃基，例如该杂芳基烃基的烷基、烯基或炔基部分是1元至6元的，且杂芳基部分是5元至14元杂芳基。其它实施方案中，所述杂芳基烃基基团是6元至13元杂芳基烃基，如该烷基、烯基或炔基部分是1元至3元的，且杂芳基部分是5元至10元杂芳基。
本发明所指的各种萘羰基、吡啶羰基、噻吩羰基和呋喃羰基基团包括不同位置的异构体，其可以是萘-1-羰基、萘-2-羰基、烟酰基、异烟酰基、N-甲基-二氢-吡啶-3-羰基、噻吩-2-羰基、噻吩-3-羰基、呋喃-2-羰基和呋喃-3-羰基。所述萘、吡啶、噻吩和呋喃基团可如本发明所示的进一步被取代。
“卤素”或“卤代”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、碘(I)。如本发明所用，-X独立地指任何卤素。
“酰基”基团指C(O)-R″基团，其中R″选自氢、羟基、烃基、卤代烃基、环烃基、芳基，该芳基使用一个或多个烃基、卤代烃基、烃氧基、卤素和被取代的氨基基团、杂芳基(通过环碳成键)任意取代，该杂芳基使用一个或多个烃基、卤代烃基、烃氧基、卤素和被取代的氨基基团和杂脂环(通过环碳成键)任意取代，该杂脂环使用一个或多个烃基、卤代烃基、烃氧基、卤素和被取代的氨基基团任意取代。酰基基团包括醛类、酮类、酸类、酸性卤化物、酯类和氨基化合物。优选的酰基基团是羧基，如酸类和酯类。酯类包括氨基酸酯衍生物。该酰基基团可以以任一末端，即通过C或R″与化合物骨架连接，当所述酰基通过R″被连接，那么C会带有另一取代基，例如氢、烃基、杂芳基或类似物。
“被取代”指基团中一个或多个氢原子的每一个独立地被相同或不同的取代基置换。通常的取代基包括-X、-R13、-O-、＝O、-OR、-SR13、-S-、＝S、-NR13R13、＝NR13、CX3、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、NO2、＝N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R13、-OS(O2)O-、-OS(O)2OH、-OS(O)2R13、-P(O)(O-)2、-P(O)(OH)(O-)、-OP(O)2(O-)、-C(O)R13、-C(S)R13、-C(O)OR13、-C(O)O-、-C(S)OR13、和-C(NR13)NR13R13，其中每一个X独立地是卤素；每一个R13独立地是氢、卤素、烃基、芳基、芳基烃基、芳基芳基、芳基杂烃基、杂芳基、杂芳基烃基NR14R14、-C(O)R14和-S(O)2R14；并且每一个R14独立地是氢、烃基、烷基、炔基、芳基、芳基烃基、芳基异烃基、芳基芳基、杂芳基或杂芳基烃基。
文中的“前药”指体内转变为母体化合物的化合物。经常使用前药是因为在一些情况中，它们比母体化合物更容易给药。例如，前药可能比母体化合物有更好的口服给药的生物利用度或利于细胞吸收。前药还可能在药物组合物中有比母体化合物改进的稳定性。前药的例子可以是本发明的实施方案的被给药的化合物，例如，当溶解性决定其移动性时，作为酯(“前药”)促进跨细胞膜传送，之后一旦进入其中水溶性是有利的细胞中，其被代谢水解为活性实体。直到被转变为活性形式之前，所述化合物通常是无活性的(或较低活性的)。
“药学上可接受的盐”指本发明化合物的盐，其为药学上可接受的且具有需要的药理学(如抗病毒)活性。这种盐包括如下(1)酸加合盐，其为与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其类似物的无机酸形成的；或为与诸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、反丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙烷磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-八-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸及其类似物的有机酸形成的；或(2)当存在于母体化合物中的酸质子被诸如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子的金属离子置换；或与诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺及其类似物的有机碱反应形成的盐。
粟精胺及其衍生物如上所述，本公开提供粟精胺衍生物、其药学上可接受的盐及它们用途。特别地，所述粟精胺衍生物是酯类。作为背景说明，已有许多方案用于治疗慢性HBV感染的尝试，其中治疗可以包括大致完成以下三个目标(1)消除HBV向其他人的传染性和传播，(2)阻止肝病的病程发展和改善临床预后，或(3)防止硬化和HCC的发展。至今，依然缺乏充分治疗或预防HBV感染及任何相关疾病的治疗剂。本公开提供某些粟精胺酯衍生物，其具有意想不到地高的抗病毒活性，特别是抗HBV的高抗病毒活性。
粟精胺及某些亚氨基糖，如脱氧野尻霉素野尻霉素(DNJ)，是内质网α-葡糖苷酶抑制剂，它们都抑制糖蛋白加工的早期阶段。然而，根据使用它们的系统，它们的影响显著不同，并且它们表现出十分不同的特异性，粟精胺对α-葡糖苷酶I相对特异。
粟精胺是生物碱，最初从栗豆树(Castanospermum australe)的种子中分离，具有下式 系统地，该化合物可以以多种方法命名，如下[1S-(1α，6β，7α，8β，8αβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇(indolizinetetrol)或[1S，(1S，6S，7R，8R，8aR)-1，6，7，8-四羟基-吲哚里西啶(indolizidine)或1，2，4，8-四脱氧-1，4，8-次氮基-1-甘油基-D-半乳糖八醇。本发明使用术语“粟精胺”或第一个列出的系统命名。
本公开的酯类通过粟精胺与合适酸的氯化物或酸酐在惰性溶剂中反应制备。卤化物可以是氯化物或溴化物，并且该酸酐包括混合的酸酐。控制使用的所述酸的卤化物或酸酐的相对量、溶剂的相对量、温度和反应时间以最小化被酰化的羟基的数量。因此，只使用有限过量的酸衍生物，这意味着所说酰化剂最多三倍过量。
相对大量的溶剂的使用，其目的为稀释反应物和减少形成的较高的酰化产物的量。使用的溶剂优选地溶解所用反应物但不与它们反应。
某些实施方案中，在叔胺存在下进行反应是有利的，该叔胺与反应过程中形成的任何酸反应且除去它们。可向该混合物中加入该叔胺，或该叔胺本身可作为所述溶剂过量使用。例如，可使用吡啶。如本发明所指明的，同样控制时间和温度以限制酰化发生的量。优选地，所述反应在冰浴中冷却进行16小时以得到单酯，如果需要二酯，延长反应时间至更长，如7天。所述反应实际上可以在更高的温度进行，并且可以使用加热只要涉及的多个因素被适当控制。
当按本发明所述进行反应时，最终产物化合物可能还含有相当大量的未反应的粟精胺。可从反应混合物中回收未反应的材料并且在随后的反应中重复使用，并因此提高粟精胺转化为酯的整体数量。当反应在支持分离单酯的条件下进行时，所述循环尤其重要。本发明所述方法通常产生6-或7-单酯类，或6，7-或6，8-二酯类。通过保护基团的适当使用，可以获得其它异构体。例如，粟精胺可以与2-(二溴甲基)苯甲酰氯反应生成6，7-二酯。该二酯然后与合适酸的卤化物或酸酐反应生成相应的8-酯。然后，通过将所述两个二溴甲基基团转化为甲酰(使用高氯酸银和丙酮水溶液中的2，4，6-可力丁)，然后使用吗啉和氢氧根离子得到的甲酰基苯甲酸酯的水解容易地去掉所述两个保护基团。可以类似方式使用所述方法生成二酯异构体。
1，8-O-异亚丙基粟精胺或1，8-环亚己基粟精胺，与酸氯化物在标准酯化方法中的反应几乎专一地支持形成6-酯。然后通过诸如4-甲苯磺酸的酸处理除去所述异亚丙基或环亚己基基团。从粟精胺6，7-二苯甲酸酯得到起始缩酮。该二苯甲酸酯与2-甲氧基丙稀或1-甲氧基环己烯和酸反应以引入1，8-O-异亚丙基或1，8-环亚己基基团，并且通过用诸如氢氧化钠的碱水解或用醇钠或醇钾作为催化剂的酯交换除去所述两个苯甲酸酯基团。
某些实施方案中，本公开提供治疗和预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，包括向个体给药葡糖苷酶抑制剂和其药学上可接受的盐，其中所述葡糖苷酶抑制剂具有以下结构式(I)
其中R、R1和R2独立地是氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烃氧基乙酰基、 被甲基或卤素任意取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)，其中该苯基被甲基或卤素任意取代；肉桂酰基；被甲基或卤素任意取代的吡啶羰基；被C1-10烃基任意取代的二氢吡啶羰基；被甲基或卤素任意取代的噻吩羰基；或被甲基或卤素任意取代的呋喃羰基；Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基或卤素；选择R、R1和R2，使其中至少一个，但不多于两个是氢；或其药学上可接受的盐或衍生物。另一实施方案中，该葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有下列立体化学 某些实施方案中，所述粟精胺酯类具有表1所示的结构。
表1

*MDL 29270中，R1是

在其它所有结构中R1是H。在所有结构中，R2是H。
其它实施方案中，提供了结构(I)的粟精胺酯类，其中R1是C1-8烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基-乙酰基或被烃基或卤素基团任意取代的苯甲酰基。R1可以是C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基或被甲基、溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基。
某些实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂是(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(4-溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯；
(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(3-己酸酯)；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-庚酸酯；(l)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯；(m)一种O-新戊酰基酯；(n)一种2-乙基-丁酰基酯；(o)一种3，3-二甲基丁酰基酯；(p)一种环丙酰基酯；(q)一种4-甲氧基苯甲酸酯；(r)一种2-氨基苯甲酸酯；或(s)(a)-(q)中至少两个的混合物。在特定实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯(也称为celgosivir或BuCast)。
“结构纯”指化合物组合物，其中如95％至100％的绝大部分的个体分子中的每一个都含有相同数目和类型的原子，这些原子以相同顺序和相同键互相连接。某些实施方案中，结构纯范围从约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更多。如发明中所用，“结构纯”不意欲区分相互之间的不同的几何异构体或不同的光学异构体。例如，如发明中所用，顺-和反-丁-2，3-烯被认为是结构纯的，因为是外消旋混合物。当组合物的绝大部分包括单一几何异构体或光学异构体时，分别使用术语“几何纯”和“光学或对映纯”。
短语“结构纯”还不意欲区别不同的互变异构形式或分子的电离状态，或平衡现象或其它可逆互变导致的分子的其它形式。因此，例如有机酸的组合物是结构纯的，尽管一些羧基可能处在质子化态(COOH)，而另一些可能处在非质子化态(COO-)。同样，除非特别指明，包含酮式和烯醇式互变体的组合物被认为是结构纯的。
治疗制剂和使用方法如发明所述，本公开的化合物用于治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染，特别是HBV。某些实施方案中，本公开提供能够治疗或预防诸如HBV的嗜肝DNA病毒科病毒感染的在临床相关浓度或通过统计可测量标准的化合物。
本领域已知用于评价抗HBV的抗病毒活性的示例性基于细胞的分析(参见，例如Korba et al.，Antiviral Res.15217，1991；和Korba et al.，Antiviral Res.1955，1992)。而且，本公开的化合物可作为有用的研究工具用于体外和基于细胞的分析，以研究如HBV的病毒感染、生长和复制的机制。作为背景说明且不受限于理论，HBV的形态发生复杂，其中预先装配的病毒核心颗粒连接到病毒包膜(表面)蛋白的胞质一侧，该蛋白插入内质网(ER)膜。得到包膜后，病毒粒子出芽到ER的腔中，然后通过高尔基体转运到细胞外液中。从未成熟的病毒糖蛋白除去N-连接的葡萄糖残基(通过诸如α-葡糖苷酶的细胞酶剪切)可能在病毒糖蛋白从ER到高尔基体的转移和成熟中起作用。
在一实施方案中，本公开提供鉴定抗病毒化合物的方法，包括使经病毒(如嗜肝DNA病毒科病毒，如HBV)感染的宿主细胞与本公开的候选粟精胺酯或其衍生物接触足够的时间以改变病毒的形态发生或产生，并且鉴定改变病毒的形态发生或产生的候选衍生物。另一实施方案中，提供鉴定怀疑受到病毒感染的细胞的方法，包括使怀疑受到病毒感染的宿主细胞与本公开的候选粟精胺酯或其衍生物接触足够的时间以改变病毒的形态发生或产生，并且据此鉴定受病毒感染的细胞。优选地，所述病毒感染是由如HBV的嗜肝DNA病毒科病毒引起的或与之相关。
另外，本领域已知用于评价化合物的抗HBV的抗病毒活性的体内模型，例如美洲旱獭和北京鸭(参见，例如Tennant et al.，ILAR Journal 4289，2001；Zuckerman，J.Virology Methods，17119，1987；Aguesse-Germon etal.，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 42369，1998)。而且，本领域普通技术人员应理解，这些体外和体内分析可用于确定候选化合物的治疗价值，和用于确定哪些剂量参数对于治疗受病毒感染的个体最有用。某些实施方案中，接受治疗的个体是非人类动物或人。
本公开还涉及含有一个或多个用于治疗和预防病毒感染(如嗜肝DNA病毒科病毒，例如HBV)的化合物(如粟精胺酯类)的药物组合物。本发明还涉及治疗和预防病毒感染的方法，其通过向个体给药α-葡糖苷酶抑制剂或两个或更多所述化合物的鸡尾酒混合物来进行，给药剂量为足以治疗和预防病毒感染，如发明所述。当用于本公开的方法时，所述粟精胺酯衍生物或所述化合物的鸡尾酒混合物，是药物组合物的优选部分。
某些实施方案中，本发明所述的粟精胺酯及其衍生物用于治疗和预防个体的病毒感染，例如是非人类动物或人的个体。其它实施方案中，所述病毒感染归咎于嗜肝DNA病毒科病毒、HBV或其它单链DNA病毒。本公开的某些化合物，包括结构(I)的化合物衍生物，显示良好的整体生物药物特点，并且可用于口服。在一实施方案中，提供了包括本文所述的葡糖苷酶抑制剂(或其药物活性衍生物)和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，其用于本文所述的治疗方法。其它实施方案中，所述药物组合物包括抗病毒化合物(即葡糖苷酶抑制剂)，其为结构(I)的衍生物。术语“药物活性衍生物”指任何化合物，一旦对需要其的个体给药，其能够直接或非直接地(如前体药物)提供本发明的活性化合物。
如本发明所述，所述活性化合物以有效治疗和预防嗜肝DNA病毒科病毒感染(如HBV感染)的剂量，可以被包括在对需要其的个体给药的药学上可接受的载体或稀释剂中。用于本发明所述任何适应症的所述活性化合物的代表性剂量为约0.01mg/kg至约300mg/kg受者体重每天，约0.1mg/kg至约100mg/kg受者体重每天，或约0.5mg/kg至约25mg/kg受者体重每天。示例性局部用剂量为适合载体中的0.01％-3％wt/wt。根据欲输送的母体化合物的分子量可计算药学上可接受的衍生物的有效剂量范围。如果所述衍生物本身有活性，可通过该衍生物的质量或本领域普通技术人员已知的方法如上所述地估计有效剂量。
所给药的活性成分应达到该活性化合物的峰值血浆浓度为约0.001μM至约30μM，或0.01μM至约10μM。通过静脉内注射本公开的粟精胺酯或其衍生物的组合物或制剂可以完成此目标，所述精胺酯或其衍生物任选在生理盐水或其它水介质中。另一实施方案中，本发明的粟精胺酯或其衍生物或它们的组合物以大丸剂(bolus)给药。
本发明的药物组合物中活性化合物的浓度取决于该药的吸收、分布、失活和排泄的速度，以及本领域技术人员已知的其它因素。应理解剂量值还根据欲缓解的状态的严重程度而变化。还应理解，对于任何特定个体，应根据个体需要和给药或监督给药该组合物的人员的专业判断随时间调整具体剂量方案，并且本发明所述的浓度范围只是示例性的，不意谓限制所要求保护的组合物或方法的范围或使用。所述活性成分可以给药一次，或者可以分成许多更小剂量在不同时间间隔给药。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。其可被包裹在明胶胶囊中或压缩成片剂。出于口服治疗给药的目的，所述活性化合物可以与赋形剂结合，并且以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。药学上相容的结合剂或佐剂材料可作为所述组合物的部分包括在内。所述片剂、丸剂、胶囊、糖锭及其类似物可以含有以下任何成分或相似性质的化合物结合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；分散剂，例如褐藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterores；促滑剂(glidant)，例如胶状二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；增味剂，例如薄荷油、水杨酸甲酯、或柑桔调味料。当单位剂型是胶囊时，除上述类型的原料外，其可以含有诸如脂肪油的液体载体。而且，单位剂型可以含有各种其它修饰该单位剂的物理型的材料，如糖、虫胶或肠溶剂的包衣。通常参见，“Remington’s Pharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA(A.R.Gennaro，ed.，18thEdition，1990)。
所述活性化合物或其药学上可接受的盐或其衍生物可以作为酏剂、悬浮液、糖浆、饼干、口香糖及其类似物的成分给药。除所述活性化合物外，糖浆可含有作为甜味剂的蔗糖，以及某些防腐剂、染料和颜色和香料。
本发明的药物组合物除一种或多种粟精胺酯或其衍生物以及可选的诸如其它抗HBV药物的其它组分或活性成分之外，可以包括至少一种药学上可接受的媒介物、载体、稀释剂或赋形剂，所述其它组分或活性成分包括改变病毒复制的试剂(如核苷类似物)或改变免疫应答的试剂(如干扰素)。本公开的示例性组合物包括粟精胺酯或其衍生物，或两种或更多粟精胺酯或其衍生物的鸡尾酒混合物，或一种或更多粟精胺酯或其衍生物与一种或多种其它化合物组成的鸡尾酒混合物，所述其它化合物为抗生素、抗真菌、抗炎、免疫调节或其它本发明所述的抗病毒(包括干扰素、细胞因子、核苷类似物或它们的类似物)的化合物。
用于治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的本公开的药物组合物还可以包括与辅治疗剂组合(如混合或共装载)的具有式(I)结构的葡糖苷酶抑制剂。例如，提供包括本文所述的粟精胺酯或粟精胺酯组合物(包括，例如[1S-(1α，6β，7α，8β，8β)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯)的组合物，其与改变嗜肝DNA病毒科病毒对细胞的结合或感染的化合物组合，该化合物包括抗体(如抗HBcAg、HBeAg、HBsAg的单克隆抗体，及其片断或衍生物；参见，例如，Valenzuela et al.，Nature 298347，1982；Bitter et al.，J.Med.Virol.25123，1988；EP 0226846；EP 0299208；EP 0278940；美国专利号5,196,194；5,369,637；5,770,584；6,100,065；6,146,629；6,410,009；6,419,931；6,488,934；6,589,530；6,589,534；6,627,202；6,680,053；6,787,142；6,924,368)和葡糖胺聚糖(如类肝素和苏拉明)。
用于治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的本公开的药物组合物还可以包括与辅治疗剂组合(如混合或共装载)的具有式(I)结构的葡糖苷酶抑制剂。例如，提供包括本发明所述的粟精胺酯或粟精胺酯组合物(包括，例如[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯)的组合物，其与改变病毒RNA从病毒衣壳中的释放或嗜肝DNA病毒科病毒基因产物的功能的化合物组合，该化合物包括病毒聚合酶/复制酶的抑制物。
用于治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的本公开的药物组合物还可以包括与辅治疗剂组合(如混合或共装载)的具有式(I)结构的葡糖苷酶抑制剂。例如，提供包括本文所述的粟精胺酯或粟精胺酯组合物(包括，例如[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯)的组合物，其与改变嗜肝DNA病毒科病毒的复制或者改变参与或影响嗜肝DNA病毒科病毒复制的细胞功能的化合物组合，该特定化合物例如包括3’-硫代胞苷(3TC或拉米夫定)、阿德福韦酯(Hepsera)、齐多夫定(zidovudine)、amdoxovir(DAPD)、司他夫定(stavudine)、去羟肌苷(didanosine)、2’-脱氧鸟苷的羧基类似物(如entecavir(Baraclude))、1-[2-氟-5-甲基-β，L-阿糖基]尿嘧啶(克拉夫定)、泛昔洛韦(famciclovir)、喷昔洛韦(penciclovir)、杂芳基二氢嘧啶类(HAPs)、β-L-核苷类、1，3-oxaselenolane核苷类(参见，例如第6,590,107号美国专利)、2’，3’-二脱氧-2’，3’-二脱氢-β-L-氟胞啶、肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂(例如三(氮)唑核苷(ribavirin)、霉酚酸(mycophenolic acid)、VX-497(merimepodib))、替诺福韦DF(tenofovirdisoproxil fumarate)、恩曲他滨(emtricitabine，FTC)、替比夫定telbivudine、elvucitabine、valtorcitabine、racivir、pradefovir和阿巴卡韦(abacavir))，还参见，例如第6,525,033号美国专利中的化合物；非核苷酸的RT抑制剂(例如依发韦仑(efavirenz)、奈韦拉平nevirapine)；蛋白酶抑制剂(例如沙奎那维(saquinavir)、indinavir和利托那韦(rtonavir))；以及其它糖蛋白加工抑制剂，例如DNJ及其衍生物。
用于治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的本公开的药物组合物还可以包括与辅治疗剂组合(如混合或共装载)的具有式(I)结构的葡糖苷酶抑制剂。例如，提供包括本文所述的粟精胺酯或粟精胺酯组合物(包括，例如[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯)的组合物，其与改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫功能(临床上显著或生物学上显著的提高或降低)的化合物组合，从而例如，刺激T细胞反应或增强特异免疫反应(如胸腺素-α；细胞因子；干扰素，如干扰素-α、干扰素-α2a(Roferon-A)、干扰素-α2b(IntronA)、干扰素-αcon-1(Infergen)、干扰素-β、干扰素-β1a、干扰素-β1b、干扰素-γ、聚乙二醇化干扰素(Pegasys，Peg-Intron；还参见，例如美国专利6,607,727；6,689,363；6,919,203))。
用于治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的本公开的药物组合物还可以包括与辅治疗剂组合(如混合或共包裹)的具有式(I)结构的葡糖苷酶抑制剂。例如，提供包括本文所述的粟精胺酯或粟精胺酯组合物(包括，例如[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯)的组合物，其与调节(优选地降低或减少严重性或强度、减少数量或消除)嗜肝DNA病毒科病毒感染的症状和作用化合物(如抗氧化剂，如类黄素)组合。
本发明所述的任何药物组合物或联合治疗剂的某些实施方案中，欲治疗的嗜肝DNA病毒科病毒感染是HBV。其它实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯。其它实施方案中，与粟精胺酯联合的辅治疗剂是干扰素，如干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α。某些实施方案中，与粟精胺酯联合的辅治疗剂是核苷酸类似物，例如拉米夫定、阿德福韦酯或克拉夫定。在其它实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯，并且所述辅治疗剂是干扰素，例如干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α。其它实施方案中，所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯，并且所述辅治疗剂是核苷酸类似物，如拉米夫定、阿德福韦酯或克拉夫定。
以上讨论的辅治疗剂可以与本公开的粟精胺酯类一起给药，或者该粟精胺酯类和该辅治疗剂可以顺序给药，或二者任意组合。确定粟精胺酯类或每一种辅治疗剂的作用(例如改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫反应，调节嗜肝DNA病毒科病毒感染的症状或作用，或者通过例如逆向影响、防止、减少或抑制病毒复制改变嗜肝DNA病毒科病毒的复制)的方法，可以通过本领域技术人员通常使用的方法确定(参见，例如上述的Korba et al.，1991；上述的Korba et al，1992；上述的Locarnini)。
在一实施方案中，包含葡糖苷酶抑制剂的组合物、改变免疫功能的试剂和改变病毒复制的试剂将会协同作用来治疗个体中如HBV的嗜肝DNA病毒科病毒导致的感染。协同作用的两种或更多种化合物相互作用，使得该化合物的联合效果好于每种化合物单独给药时的各自效果之和(参见，例如Berenbaum，Pharmacol.Rev.4193，1989)。例如，通过多种机理的和实验的模型可以分析粟精胺酯或其衍生物和另一试剂或化合物的相互作用(参见，例如Ouzounov et al.，Antivir.Res.55425，2002)。分析试剂组合中的相互作用的通常方法使用等效应图(isobole)的构建(等同作用曲线，也称为等效应图，参见图2)，其中试剂的组合(da，db)以图中的点代表，该图的轴为单个试剂的剂量轴(参见，例如Ouzounov et al.，supra；还参见Tallarida，J.Pharmacol.Exp.Therap.298865，2001)。
本领域公知的分析药-药间相互作用(拮抗、叠加、协同)的另一方法包括根据中间效应原理确定合用指数(CI)，以提供单独或组合给药的化合物的IC50值的估计(参见，例如Chou.In Synergism and AntagonismChemotherapy.Eds.Chou and Rideout.Academic Press，San Diego CA，pages 61-102，1991；Okuse et al.，Antiviral Res.6523，2005；CalcuSynTMsoftware)。CI值小于1代表协同活性，等于1代表叠加活性，大于1代表拮抗性(参见图1)。
适合与组合物一起使用的药学上可接受的载体可以包括，例如，增稠剂、缓冲剂、溶剂、湿润剂、防腐剂、螯合剂、佐剂、其类似物及其组合。治疗用途的药学上可接受的载体为制药领域公知，如本发明以及例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿制药学)，MackPublishing Co.(A.R.Gennaro，ed.，18thEdition，1990)和CRC Handbook ofFood，Drug，and Cosmetic Excipients(食品、药品和化妆品赋形剂CRC手册)，CRC Press LLC(S.C.Smolinski，ed.，1992)中所述。
用于肠胃外的、皮内的、皮下的或局部应用的溶液或悬浮液可以包括以下成分无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、非挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如卞醇或甲基对羟基苯甲酸酯类；抗氧化剂，例如抗坏血酸或硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的试剂，例如氯化钠或右旋糖。母制剂可被封装在玻璃或塑料制的安瓿、一次性注射器或多次剂量瓶中。如果静脉内给药，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲液(PBS)或佐剂。示例性佐剂是明矾(氢氧化铝，REHYDRAGEL)、磷酸铝、病毒颗粒、有或无脂质A的脂质体、Detox(Ribi/Corixa)、MF59或其它油和水乳剂类型的佐剂，如纳米级微乳剂(参见，例如第5,716,637号美国专利)和亚微乳剂(参见，例如第5,961,970号美国专利)，以及Freund′s完全佐剂和不完全佐剂。一优选实施方案中，本发明的药物组合物是无菌的。
某些实施方案中，所述活性化合物与载体一起制备，该载体保护该化合物以防止其被从体内快速清除，例如控释制剂，包括植入物和微囊化的输送系统。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐类、聚羟基乙酸、胶原、聚原酸酯类和聚乳酸。制备这种制剂的方法为本领域技术人员熟知。例如，如本领域公知，所述材料中的一些可从Alza Corporation(CA)和Gilford Pharmaceuticals(Baltimore，Md.)购得。
脂质体悬浮液也可以是药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员公知的方法制备，如第4,522,811号美国专利中所述。例如，可以通过以下方法制备脂质体制剂在无机溶剂中溶解合适的脂(例如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、arachadoyl卵磷脂和胆固醇)，然后蒸发溶剂，在容器表面留下干燥的脂的薄膜。然后向容器中引入所述活性化合物或其一氢磷酸盐、二氢磷酸盐、三氢磷酸盐衍生物的水溶液。手动搅拌该容器以使脂原料从该容器壁脱离并分散脂聚集体，从而形成所述的脂质体悬浮液。
本说明书提到的和/或申请数据页列出的所有美国专利、美国专利公开、美国专利中请、外国专利、外国专利申请和非专利出版物被整体引入本发明以作为参考。已描述了本发明，以下实施例用于说明而非限制本发明。
实施例实施例1体外细胞培养模型中有和没有佐剂下粟精胺酯类的抗HBV活性使用培养在96孔细胞培养板中含有2％小牛血清的RPMI1640培养液中的慢性HBV产生的细胞株HepG 2.2.15的融合培养物进行粟精胺酯类的抗病毒分析(参见Korba and Gerin，Antivir.Res.1955-70，1992)。用9个连续的日剂量的celgosivir处理6个培养孔/每个测试浓度，设一个重复，期间每日更换培养液并加入新的celgosivir。分别冰冻celgosivir或对照化合物的每日的小份，然后室温下在培养液中解冻，立即使用。每一分析都包括抗病毒阳性对照(拉米夫定(3TC)或阿德福韦酯(ADV))。
最后一次处理后24小时通过Southern印迹杂交(使用本领域已知的设备和方法，通过密度测定法定量)检测细胞外HBV核酸水平，作为产生的HBV病毒体数量的检测值。表2列出所得数据。未处理细胞的细胞外病毒体DNA水平为121pg/mL培养液。该分析的灵敏度为0.1pg/mL。
表2HBV病毒体DNA水平(pg/mL培养液)

*celgosivir+ADV(摩尔比)的联合处理弘M剂量值指celgosivir的量(如Celgosivir(50∶1)＝150μm celgosivir3μM ADV)。“-”指没有可检测到水平的HBV DNA。

nd＝未确定。
根据杂交分析，约1.0pg细胞外HBV DNA/ml培养基大致相当于约3×105病毒颗粒/ml。使用从所有处理培养物合并的数据，通过线形回归分析计算值±标准差(sD)。使用从线形回归分析产生的回归标准误计算SD。通过如表2所示的实验结果可以确定celgosivir的抗病毒活性(参见表3)。
表3Celgosivir的抗病毒活性

Ec50和Ec90是抗病毒活性的检测值，其表明药物浓度，在该浓度观察到HBV DNA与未处理培养物中的平均水平相比，分别减少了2倍和10倍。如表2和表3所示，celgosivir以临床显著浓度减少了2.2.15细胞产生的HBV病毒体。而且，celgosivir与ADV的联合显示了比单独任一化合物更好的活性(并且事实上，如实施例3所讨论的，该联合有出人意料的协同性)。
实施例2体外细胞培养模型中有或没有佐剂下粟精胺酯类的细胞毒性为了评估任何观察到的抗病毒活性是否是由于对细胞存活性的普遍影响，还进行了细胞毒性分析。该分析在96孔板上进行，用实施例1所述抗病毒分析中使用的储存细胞的相同量同时接种该板。在四个不同浓度下测试每种化合物(celgosivir和ADV)或化合物的组合，设三个重复。最终处理24小时后，中性红染料的细胞吸收被用于确定毒性的相对水平。存活细胞吸收中性红染料，而死亡的细胞不吸收。已吸收染料在510nm处的吸光度(A510)被用于定量分析。数值以相对于同一板上未处理细胞的9个单独培养物的平均A510值(±标准差，SD)的百分比表示。
表4细胞毒性—中性红染料的吸收(％对照)

*celgosivir+ADV(摩尔比)的联合处理最上一行的μM剂量值指celgosivir(如Celgosivir(50∶1)＝1 000μM celgosivir20μM ADV)。还表明最高测试浓度以及没有观察到细胞毒性的影响。
本实验中，对照(未处理的)细胞培养物中染料吸收的百分比为100％±3(即低于100的值表明细胞毒性)。表4显示了无论是celgosivir还是celgosivir与ADV的任何组合在测试的浓度下都不影响细胞存活性(即celgosivir在测试浓度下是非毒性的)。Celgosivir+ADV组合的毒性模式与单独药物处理的结果相似且一致。
从细胞毒性数据可以计算CC50，其为细胞毒性的检测值并且表明药物浓度，在该浓度下中性红染料的吸收与未处理培养物中的平均水平相比，减少了2倍。EC90和CC50值被用于计算选择性指数(SelectiVity Index，(SI，CC50/EC90))，因为本分析中HBV水平减少至少3倍才被认为具有统计显著性(参见Korba & Gerin，Antivira，Res.1955-70，1992)。
表5Celgosivir的选择性指数


指如表4所述的celgosivir和ADV的联合治疗。CC50、EC50和EC90值是示名药物的值。
◆如表4所示，在本分析测试的水平下(50∶1，20μM；17∶1，60μM；5∶1，200μM)没有观察到ADV的毒性。基于此，假定联合治疗中的ADV CC50与单一治疗中的ADV CC50基本上相同。根据此假定，该计算的SI只是预测。
*表明测试的最高浓度以及没有观察到细胞毒性的影响。
随着SI值增加，预测该药会更有效及毒性更小。表5显示celgosivir有有利的SI值，尽管其能够导致毒性的浓度尚未确定。而且，看起来celgosivir还可能减小ADV的毒性，因为celgosivir存在时ADV EC90减小了。
实施例3Celgosivir与阿德福韦酯组合的协同作用本公开的示例性实施方案，与改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的试剂(阿德福韦酯)组合的葡糖苷酶抑制剂(celgosivir)在如实施例1所述的抗病毒分析中用于抗HBV，以确定协同性相互作用的可能性。通过使用CalcuSynTM程序(Biosoft，Inc.)分析所得数据确定协同性、叠加性或拮抗性分析。在一分析中，以合用指数(Combination Index，CI)绘制分数效果(受影响病毒的分数，Fa，即抗病毒效果—即，如果Fa的值为0.2或0.99，则病毒量分别减少20％或99％)。如上所述，CI大于1表明拮抗性，CI为1表明叠加性，CI小于1表明协同性。图1提供了在病毒抑制的不同水平下，协同作用、叠加性(总和)或拮抗性的评估。Fa-CI图在确定药物的相互作用中通常非常有用，特别因为包括了Monte Carlo分析，该分析提供了统计显著性的衡量(图中三条线代表中值(中间的线)和显示标准差的上线和下线，即中值±1.96SDs，其相对于CI＝l的线显示)。
在另一分析中，等效应图提供了药物相互作用的优良的后续衡量方法。对于这些图，画线表示组合的药物显示的相加的相互作用的理论的ED50、ED75和ED90值(即基于单一治疗的结果的相加的相互作用的值)。Celgosivir+ADV联合治疗的实际ED50、ED75和ED90值(μM)用单点表示。落在理论叠加线右侧的单点表明拮抗性，并且落在理论叠加线左侧的单点表明协同性(参见图2)。
整体上，与ADV组合时celgosivir抗HBV的能力有令人惊讶的提高，并且，出人意料地，celgosivir提高了ADV的显著效力(参见表2、图1A、1B、2A和2B)。在包含相对于ADV的最低浓度的celgosivir的组合中观察到微弱的拮抗性(参见图lC和2C；celgosivir相对ADV的摩尔比为5∶1)。然而，在包含相对于ADV的较高浓度的celgosivir的组合中观察到协同性(参见图1A、1B、2A和2B；celgosivir相对ADV的摩尔比为50∶1和17∶1)。图1B中(17∶1摩尔比)，无论HBV受celgosivir和ADV组合影响的分数有多大(Fa＝0.1-0.99或病毒量有10-99％的减少)，该特定摩尔比组合显示强协同相互作用。类似地，图2B等效应图显示ED50、ED75和ED90的celgosivir和ADV之间的协同相互作用(即数据点在叠加线的左侧)。
实施例4美洲旱獭动物模型中粟精胺酯类的抗HBV活性在乙型肝炎病毒感染的美洲旱獭动物模型中研究粟精胺酯衍生物(如celgosivir)的活性(参见，例如Korba et al.，Hepatology 23958，1996；Menne& Tennant，Nature Med.701125，1999；Menne et al.，J.Virol. 751769，2002；U.S.Patent No.6,878,364)，其单独或与改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的试剂或与改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫功能的试剂(例如IFN-α、聚乙二醇化IFN-α、IFN-β、IFN-γ)组合，所述改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的试剂例如核苷酸类似物(例如3TC、ADV、恩替卡韦、克拉夫定、β-L-核苷酸类、2′，3′-二脱氧-2′，3′-二脱氢-β-L-氟胞苷、泰诺福韦DF等等；关于其它示例性核苷酸类似物，参见Karayiannis，J.Antimicrob.Chemother.5176l，2003)。
简而言之，受到持续性美洲旱獭肝炎病毒(WHv)感染(即在出生第一周接受WHV的实验感染)的每组4只的8组美洲旱獭接受口服处理(1)单独的粟精胺，(2)单独的粟精胺酯，例如celgosivir，(3)单独的核苷酸类似物，例如ADV或克拉夫定，(4)单独的改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫功能的试剂，例如聚乙二醇化IFN-α或IFN-α；或(5)它们的任意组合。在研究开始时，所述美洲旱獭为WHsAg阳性。可以根据性别、体重和年龄把每组中的美洲旱獭分级。用药物或药物组合处理后，向美洲旱獭给药4至5ml半合成液体美洲旱獭饲料以保证该药物的完全摄取。通过测量处理过程中的血清WHV DNA，以及将试验组的结果与安慰剂处理的对照的结果比较，可以评估单独药物和联合药物的抗病毒活性。
在开始处理之前、6周处理期内的每周、以及处理后1、2和4周，麻醉美洲旱獭(50mg/kg克他命、5mg/kg zylazine)、称重、并且获取血液样品。收集美洲旱獭血清并分装成几个小份。一份用于通过点印迹杂交检测WHV DNA和通过ELISA检测WHsAg。在药物处理之前和药物处理完成之后获得完全血液计数(CBCs)和临床生化谱。第二份被作为档案样品保存，其它血清样品小份用于药物分析和特定WHV DNA分析，如文中所述。
根据前述应当理解，尽管出于说明目的描述了本发明的特定实施方案，在不偏离本发明的精神和范围下可进行各种修改。因此，除所附权利要求之外本发明不受任何限制。
权利要求
1.治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包括对个体给药葡糖苷酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述葡糖苷酶抑制剂具有下列结构式(I) 其中R、R1和R2独立地是氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烃氧基乙酰基、 被甲基或卤素任意取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)其中所述苯基被甲基或卤素任意取代；肉桂酰基；被甲基或卤素任意取代的吡啶羰基；被C1-10烃基任意取代的二氢吡啶羰基；被甲基或卤素任意取代的噻吩羰基；或被甲基或卤素任意取代的呋喃羰基；Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基或卤素；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有下列立体化学
3.如权利要求1所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-10烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基；或 其中Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃氧基或卤素；且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
4.如权利要求1所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被烃基或卤素任意取代的苯甲酰基；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
5.如权利要求1所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被甲基或溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
6.如权利要求1所述的方法，其中R1是C1-8烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被烃基或卤素任意取代的苯甲酰基。
7.如权利要求1所述的方法，其中R1是C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被甲基或溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(4-溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯；(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(i)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(3-己酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-庚酸酯；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯；(l)一种O-新戊酰基酯；(m)一种2-乙基-丁酰基酯；(n)一种3，3-二甲基丁酰基酯；(o)一种环丙酰基酯；(p)一种4-甲氧基苯甲酸酯；(q)一种2-氨基苯甲酸酯；或(r)(a)-(q)中至少两种的混合物。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述个体是人。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是Avihepadnavirus属的成员。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是Orthohepadnavirns属的成员。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是乙型肝炎病毒(HBV)。
17.治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包括对个体给药药物组合，所述药物组合包括改变免疫功能的试剂和葡糖苷酶抑制剂及其药学上可接受的盐，其中所述葡糖苷酶抑制剂具有下列结构式(I) 其中R、R1和R2独立地选自氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烃氧基乙酰基、 被甲基或卤素任意取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)，其中所述苯基被甲基或卤素任意取代；肉桂酰基；被甲基或卤素任意取代的吡啶羰基；被C1-10烃基任意取代的二氢吡啶羰基；被甲基或卤素任意取代的噻吩羰基；或被甲基或卤素任意取代的呋喃羰基；Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基或卤素；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有下列立体化学
19.如权利要求17所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-10烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基；或 其中Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃氧基或卤素；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
20.如权利要求17所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被烃基或卤素任意取代的苯甲酰基；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
21.如权利要求17所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-8烷酰基、C1-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被甲基或溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
22.如权利要求17所述的方法，其中R1是C1-8烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被烃基或卤素任意取代的苯甲酰基。
23.如权利要求17所述的方法，其中R1是C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被甲基或溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基。
24.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aα)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(4-溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯；(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(i)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(3-己酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-庚酸酯；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯；(1)一种O-新戊酰基酯；(m)一种2-乙基-丁酰基酯；(n)一种3，3-二甲基丁酰基酯；(o)一种环丙酰基酯；(p)一种4-甲氧基苯甲酸酯；(q)一种2-氨基苯甲酸酯；或(r)(a)-(q)中至少两种的混合物。
25.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯。
26.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯。
27.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯。
28.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)。
29.如权利要求17所述的方法，其中所述个体是人。
30.如权利要求17所述的方法，其中所述改变免疫功能的试剂是干扰素。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述干扰素是干扰素-α。
32.如权利要求30所述的方法，其中所述干扰素-α被聚乙二醇化。
33.如权利要求17所述的方法，其中所述改变免疫功能的试剂在所述葡糖苷酶抑制剂之前给药。
34.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂在所述改变免疫功能的试剂之前给药。
35.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂和所述改变免疫功能的试剂混合成单一组合物并同时给药。
36.如权利要求17所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是Avihepadnavirus属的成员。
37.如权利要求17所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是Orthohepadnavirns属的成员。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是乙型肝炎病毒(HBV)。
39.如权利要求17所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂和所述改变免疫功能的试剂还包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
40.治疗嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包含向个体给药改变病毒复制的试剂和葡糖苷酶抑制剂及其药学上可接受的盐，其中所述葡糖苷酶抑制剂具有下列结构式(I) 其中R、R1和R2独立地选自氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烃氧基乙酰基、 被甲基或卤素任意取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)，其中所述苯基被甲基或卤素任意取代；肉桂酰基；被甲基或卤素任意取代的吡啶羰基；被C1-10烃基任意取代的二氢吡啶羰基；被甲基或卤素任意取代的噻吩羰基；或被甲基或卤素任意取代的呋喃羰基；Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y组合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基或卤素；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有下列立体化学
42.如权利要求40所述的方法，其中R、R1和R2独立地是氢、C1-10烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基；或 其中Y是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烃基磺酰基、C1-4烃基巯基、氰基或二甲基氨基；Y′是氢、C1-4烃基、C1-4烃氧基、卤素或其与Y结合得到的3，4-亚甲基二氧基；Y″是氢、C1-4烃氧基或卤素；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
43.如权利要求40所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被烃基或卤素任意取代的苯甲酰基；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
44.如权利要求40所述的方法，其中每一R、R1和R2独立地是氢、C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被甲基或溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基；并且其中R、R1和R2中至少一个，但不多于两个是氢。
45.如权利要求40所述的方法，其中R1是C1-8烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被烃基或卤素任意取代的苯甲酰基。
46.如权利要求40所述的方法，其中R1是C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烃氧基乙酰基，或被甲基或溴、氯或氟基团任意取代的苯甲酰基。
47.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(4-溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯；(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(i)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(3-己酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-庚酸酯；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯；(l)一种O-新戊酰基酯；(m)一种2-乙基-丁酰基酯；(n)一种3，3-二甲基丁酰基酯；(o)一种环丙酰基酯；(p)一种4-甲氧基苯甲酸酯；(q)一种2-氨基苯甲酸酯；或(r)(a)-(q)中至少两种的混合物。
48.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-苯甲酸酯。
49.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-丁酸酯。
50.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-戊酸酯。
51.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂是[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ]-八氢-1，6，7，8-中氮茚四醇-6-(2-呋喃羧酸酯)。
52.如权利要求40所述的方法，其中所述个体是人。
53.如权利要求40所述的方法，其中所述改变病毒复制的试剂是阿德福韦酯。
54.如权利要求40所述的方法，其中所述病毒复制的试剂是拉米夫定。
55.如权利要求40所述的方法，其中所述改变病毒复制的试剂是克拉夫定。
56.如权利要求40所述的方法，其中所述改变病毒复制的试剂是拉米夫定、克拉夫定和利巴韦林中至少一个。
57.如权利要求40所述的方法，其中所述改变病毒复制的试剂在所述葡糖苷酶抑制剂之前给药。
58.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂在所述改变病毒复制的试剂之前给药。
59.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂和所述改变病毒复制的试剂混合成单一组合物并同时给药。
60.如权利要求40所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是Avihepadnavirus属的成员。
61.如权利要求40所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是Orthohepadnavirns属的成员。
62.如权利要求40所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒科病毒是乙型肝炎病毒(HBV)。
63.如权利要求40所述的方法，其中所述葡糖苷酶抑制剂和所述改变免疫功能的试剂还包含药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
64.治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒感染的方法，其包括权利要求1定义的葡糖苷酶抑制剂与选自下列试剂的组合(a)抑制嗜肝DNA病毒科病毒导致的感染的化合物；(b)抑制病毒RNA从病毒衣壳中释放或嗜肝DNA病毒科病毒基因产物的功能的化合物；(c)改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的化合物；(d)改变抗嗜肝DNA病毒科病毒的免疫功能的化合物；及(e)改变嗜肝DNA病毒科病毒感染的症状的化合物。
65.如权利要求64所述的方法，其中所述改变免疫功能的试剂是干扰素。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述干扰素是干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α。
67.如权利要求64所述的方法，其中所述改变嗜肝DNA病毒科病毒复制的化合物是阿德福韦酯、克拉夫定、拉米夫定或利巴韦林。
68.如权利要求64所述的方法，其中所述改变嗜肝DNA病毒科病毒是Orthohepadnavirns属的成员。
69.如权利要求64所述的方法，其中所述改变嗜肝DNA病毒科病毒是HBV。
70.如权利要求64所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
全文摘要
本公开总体上涉及某些粟精胺酯类治疗或预防嗜肝DNA病毒科病毒引起的感染的用途，特别是乙型肝炎病毒(HBV)引起的感染，以及所述化合物研究HBV感染的生物学机理的用途。
文档编号A61P31/00GK101014341SQ200580027555
公开日2007年8月8日 申请日期2005年8月12日 优先权日2004年8月13日
发明者多米尼克·迪古尔 申请人:麦根克斯有限公司