用于癌症疾病治疗的二氢蝶啶酮的制作方法

专利名称：用于癌症疾病治疗的二氢蝶啶酮的制作方法
技术领域：
本发明涉及通式(I)的二氢蝶啶酮， 其中基团L、R1、R2、R3、R4和R5具有本权利要求和专利说明书中赋予的意义，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或其前药的形式，以及它们在癌症治疗中的用途。
背景技术：
Polo样激酶(PLKs)为丝氨酸/苏氨酸激酶，在细胞周期的调节过程中起重要作用。在本领域的情况中公开了四种PLK，还即PLK-1、PLK-2、PLK-3和PLK-4。PLK在真核细胞周期的调节(例如哺乳动物细胞中有丝分裂过程的调节)中起重要作用。特别是研究显示PLK-1对于有丝分裂的调节起中心作用(Glover等人1998，Genes Dev.123777-87；Qian等人2001，Mol BiolCell.121791-9)。PLK-1的过度表达似乎和肿瘤细胞，包括癌症细胞，具有强烈相关(WO 2004/014899)。PLK1对于各种肿瘤类型例如非小细胞肺癌、鳞状上皮细胞癌、乳癌、卵巢癌或甲状腺乳突癌以及直肠癌的过度表达已经证实(Wolf等人1997，Oncogene14，第543-549页；Knecht等人1999，Cancer Res.59，第2794-2797页；Wolf等人2000，Pathol Res Pract.196，第753-759页；Weichert等人2004，Br. Cancer 90，第815-821页；Ito等人2004，Br.J.Cancer 90，第414-418页；Takahashi等人2003，Cancer Sci.94，第148-152页)。
本发明的目的为提供可用于治疗各种癌症的化合物。

发明内容
式(I)化合物在制备通过抑制作为有丝分裂调节物的polo样激酶用于治疗人类或非人类哺乳动物体内特征为异常细胞增殖的疾病的药物组合物中的用途，所述化合物任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或前药的形式， 其中R1、R2可为相同或是不同，表示氢或任选取代的C1-C6-烷基，或R1和R2是共同表示2-至5-员烷基桥，其可包含1至2个杂原子，R3表示氢或选自任选取代的C1-C12-烷基、C2-C12-链烯基、C2-C12-炔基和C6-C14-芳基，或选自下列的基团任选取代和/或桥连的C3-C12-环烷基、C3-C12-环烯基、C7-C12-多环烷基、C7-C12-多环烯基、C5-C12-螺环烷基、C3-C12-杂环烷基，所述杂环烷基含有1至2个杂原子，以及C3-C12-杂环烯基，所述杂环烯基含有1至2个杂原子，或R1和R3或R2和R3共同代表饱和或不饱和C3-C4-烷基桥，所述烷基桥包含1个杂原子，R4表示选自氢、-CN、羟基、-NR6R7和卤素，或表示选自任选取代的C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C2-C6-炔基、C1-C5-烷氧基、C2-C5-烯氧基、C2-C5-炔氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基亚磺酰基(sulphoxo)和C1-C6-烷基磺酰基的基团，L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基，任选桥连的C3-C12-环烷基和杂芳基，所述杂芳基含有1或2个氮原子，n表示0或1m表示1或2R5表示选自任选取代的吗啉基、哌啶基、哌嗪基、哌嗪基羰基、吡咯烷基、莨菪烷基(tropenyl)、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基(sulphoxomorpholinyl)、4，4-二氧代硫吗啉基(sulphonylmorpholinyl)、硫吗啉基、-NR8R9和氮杂环庚基，R6、R7可为相同或不同，表示氢或C1-C4-烷基，以及R8、R9表示在R5上未被取代的氮取代基，其可为相同或不同，可为氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基和C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团。
优选的是根据本发明的式(I)化合物的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选为其可药用酸加成盐，其中R1至R4、R6和R7如前述所定义，且L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基和含有1或2个氮原子的杂芳基，n表示1m表示1或2R5表示经氮原子结合于L的基团，所述基团选自任选取代的吗啉基、哌啶基、R8-哌嗪基、吡咯烷基、莨菪烷基、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基、4，4-二氧代硫吗啉基、硫吗啉基、-NR8R9和氮杂环庚基，R8、R9表示在R5上未经取代的氮取代基，其可为相同或不同的基团，可为氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基和C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团。
还优选的是根据本发明式(I)化合物的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐，其中R1至R4、R6和R7如前述所定义，L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基和杂芳基，其含有1或2个氮原子，n表示0或1m表示1或2R5表示经由碳原子与L结合的基团，其选自R8-哌啶基、R8R9-哌嗪基、R8-吡咯烷基、R8-哌嗪基羰基、R8-茛菪烷基、R8-吗啉基和R8-氮杂环庚基，且R8、R9表示在R5上未被取代的氮取代基，其可为相同或不同，氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基和C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团。
尤其优选的是式(I)化合物的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐，其中L、m、n和R3至R9如前述所定义，且R1、R2可为相同或不同，其表示选自氢、Me、Et、Pr的基团，或R1和R2共同形成C2-C4-烷基桥。
尤其优选的是根据本发明式(I)化合物的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐，其中R1、R2、m、n和R5至R8如前述所定义，且R3表示选自任选取代的C1-C10-烷基、C3-C7-环烷基、C3-C6-杂环烷基和C6-C14-芳基的基团，或R1和R3或R2和R3是共同表示饱和或不饱和的C3-C4-烷基桥，其可包含1至2个杂原子，R4表示选自氢、OMe、OH、Me、Et、Pr、OEt、NHMe、NH2、F、Cl、Br、O-炔丙基、O-丁炔基、CN、SMe、NMe2、CONH2、乙炔基、丙炔基、丁炔基和烯丙基的基团，且L表示连接基团，其是选自任选取代的苯基、苯基甲基、环己基和支链C1-C6-烷基。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明式(I)化合物的用途，其中该化合物是选自下列表中所示的式(I)化合物。



其中表中所用的缩写X1、X2、X3、X4和X5在各种情况下表示与表中所示的通式中的位置的连接，以代替对应的基团R1、R2、R3、R4和L-R5。
在优选实施方案中，本发明涉及根据本发明式(I)化合物的用途，其中Polo样激酶为PLK-1。
在另一优选实施方案中，本发明涉及根据本发明式(I)化合物的用途，其中该疾病的特征为不适当的细胞增殖、迁移、凋亡或血管发生，优选为不适当的细胞增殖。造成不适当的细胞增殖来自于不适当的细胞生长、细胞过度分裂、细胞加速分裂和/或不适当细胞的存活。
在另一优选实施方案中，本发明涉及根据本发明式(I)化合物的用途，其中该疾病为癌症，选自癌(carcinomas)、肉瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、血液肿瘤形成(hematological neoplasias)、淋巴瘤和幼年癌症。
在本发明范围内的癌实例包括但不限于腺癌(AC)、鳞状细胞癌(SCC)以及混合或未分化癌。在本发明范围内的癌包括但不限于下列组织学●头颈肿瘤SCC、AC、转移细胞癌、粘液表皮样癌、未分化癌；●中枢神经系统肿瘤星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、脑膜瘤、神经细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、垂体瘤、少突胶质细胞瘤、髓母细胞瘤；●支气管肿瘤和纵隔肿瘤○支气管肿瘤■小细胞肺癌(SCLC)燕麦形细胞肺癌、间质细胞癌、组合燕麦形细胞肺癌；■非-小细胞肺癌(NSCLC)SCC、梭状细胞癌、AC、支气管肺泡癌、大细胞NSCLC、明细胞NSCLC；○间皮瘤；
○胸腺瘤；○甲状腺瘤乳头状甲状腺瘤、甲状腺滤泡瘤、间变甲状腺癌、髓样甲状腺癌；●胃肠道肿瘤○食道癌SCC、AC、间变食道癌、类癌、肉瘤；○胃癌AC、adenosquamous、间变胃癌；○直肠癌AC，包括AC、类癌、肉瘤的遗传形式；○肛门癌SCC、移形上皮细胞癌(transitional epithelial cancer)、AC、基底细胞癌；○胰腺癌AC，包括导管和腺泡癌、乳头状癌、adenosquamous、未分化胰腺癌、内分泌胰腺肿瘤；○肝细胞癌、胆管癌、血管肉瘤、肝母细胞瘤；○胆癌AC、SCC、小细胞胆癌、未分化胆癌；○胃肠道间质肿瘤(GIST)；●妇科癌○乳癌AC，包括侵入性导管癌、小叶性癌和髓样癌、管状乳癌、粘蛋白乳癌、Paget-癌、炎性乳癌、导管性乳癌和小叶性原位乳癌；○卵巢癌上皮细胞肿瘤、间质肿瘤、胚细胞肿瘤(germ cell tumours)、未分化肿瘤；○子宫颈癌SCC、AC、混合和未分化肿瘤；○子宫内膜癌AC、SCC、混合性肿瘤、未分化肿瘤；○外阴癌SCC、AC；○阴道癌SCC、AC；●尿道和睾丸癌○睾丸癌精原细胞瘤；○非-精原细胞瘤性胚细胞肿瘤(Non-seminomatous germ celltumours)畸胎瘤、胚胎细胞癌、绒毛膜癌、卵黄囊肿瘤、混合性肿瘤、史托利和莱迪格细胞(Sertoli and Leydig-cell)肿瘤；○性腺外胚细胞肿瘤；○摄护腺癌AC、小细胞、SCC；
○肾细胞癌AC，包括明细胞癌、乳头状癌和嫌色性细胞腺瘤(chromophobous carcinomas)、遗传性形式(例如von-Hippel-Lindau综合征)、肾胚细胞瘤；○泌尿膀胱癌转移性细胞(泌尿道上皮)癌、SCC、AC；○尿道癌SCC、转移性细胞癌、AC；○阴茎癌SCC；●内分泌组织的肿瘤○甲状腺癌乳头状甲状腺瘤、甲状腺滤泡瘤、间变甲状腺癌、髓样甲状腺癌，包括MEN综合征；○胰腺内分泌肿瘤；○类癌；○嗜铬细胞瘤。
本发明范围内的肉瘤实例包括但不限于尤文氏肉瘤(Ewing-sarcoma)、骨肉瘤或成骨性肉瘤、软骨肉瘤、滑液肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、间皮肉瘤或间皮瘤、纤维肉瘤、血管肉瘤或血管内皮瘤、脂肉瘤、经胶质瘤或星形细胞瘤、粘液肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、间叶瘤(mesenchymous)或混合中胚层瘤、神经母细胞瘤和明细胞肉瘤(clear cell sarcoma)。
本发明范围内的黑色素瘤实例包括但不限于浅表扩散性黑色素瘤、结节性黑素瘤和恶性雀斑样痣黑色素瘤。
本发明范围内的骨髓瘤实例包括但不限于免疫细胞瘤、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤。
在另一优选实施方案中，本发明涉及根据本发明的用途，其中血液瘤形成为白血病。
在本发明范围内的血液内赘瘤另一实例包括但不限于急性或慢性骨髓性、红细胞或淋巴器官性白血病、骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndromes)(MDS)和骨髓增生性综合征(MPS，例如慢性骨髓瘤、骨髓纤维瘤、真性红细胞增多症或原发性血小板增多症)。
在本发明范围内的淋巴瘤实例包括但不限于●霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin-lymphoma)；●非-霍奇金氏-淋巴瘤T-和B-细胞淋巴瘤○B-细胞淋巴瘤
■初级和中级慢性淋巴性白血病(CLL)、前淋巴细胞白血病(PLL)、小淋巴细胞淋巴瘤、毛细胞型白血病、类浆细胞淋巴瘤、被套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、滤泡瘤淋巴瘤(follicular lymphoma)、边缘区细胞淋巴瘤，包括MALT-淋巴瘤；■高级弥漫性大型B-细胞淋巴瘤(DLBCL包括成免疫细胞性和中央母细胞(centroblastic)变体)、成淋巴细胞性淋巴瘤、巴克氏(Burkitt’s)淋巴癌；○T-细胞淋巴瘤■初级T-CLL、T-PLL、蕈样肉芽肿(Mycosis fungoides)、Sezary-综合征；■高级间变大细胞(Anaplastic large cell)、T-成免疫细胞和成淋巴细胞。
在另外的实施方案中，本发明涉及本发明的用途，其中该疾病为癌症，其选自混合肿瘤、未分化肿瘤和转移性肿瘤。
在本发明范围中混合肿瘤的实例包括但不限于腺鳞状(adenosquamous)癌、混合中胚层肿瘤、癌肉瘤及畸胎癌(teratocarcinomas)。
在本发明范围中未分化的其他肿瘤或其转移性癌症包括但不限于未分化肿瘤、原发部位不明癌(CUP)、原发部位不明转移癌(MUP)以及嗜铬细胞瘤、类癌。
在另一实施方案中本发明涉及根据本发明式(I)化合物在制备用于治疗自体免疫疾病的药物组合物中的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或其前药的形式，所述自体免疫疾病选自淀粉样变性、全身红斑性狼疮、类风湿性关节炎、克罗恩氏症、多发性硬化症、全身性硬化症(硬皮症)、混合型结缔组织疾病、舍格伦(Sj_gren’s)综合征、强直性脊柱炎、自体免疫血管炎、贝塞氏(Behcet’s)综合征、牛皮癣、自体免疫关节炎、结节病和糖尿病。
在另一实施方案中，本发明涉及根据本发明式(I)化合物在制备用于治疗真菌疾病的药物组合物中的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或其前药的形式，所述真菌疾病包括但不限于念珠菌病、隐球菌病、曲霉病、毛霉病、癣、皮肤癣菌病、组织胞浆菌病、芽生菌病、球虫症、肺囊虫。
同源基因编码的Polo样激酶经鉴别来自多种真核细胞，范围从真菌(酿酒酵母(S.cerevisiae)、裂变酵母(S.pombe)、白色念珠菌(C.albicans))、果蝇(黄果蝇(D.melanogaster))、蠕虫(线虫(C.elegans))和脊椎动物，且代表可调节有丝分裂进程的中心机制(Glover等人1996，J Cell Biol，135，第1681-1684页，Bachewich等人2003，Mol Biol Cell 14，第2163-2180页)。因此，优选的局部或全身性给药治疗性有效量的式(I)化合物，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或其前药的形式，代表用于治疗真菌疾病的新颖途径。
在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗人类或非人类哺乳动物体内异常细胞增殖的疾病的方法，所述方法包括给药予该哺乳动物治疗有效量的式(I)化合物，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物的形式。
在另一实施方案中本发明涉及治疗患有一或多种上述疾病病人的方法，包括给药该病人治疗有效量的式(I)化合物，其是任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物形式。
利用抑制在哺乳动物体内做为有丝分裂调节物的polo样激酶来治疗人类或非人类哺乳动物体内的异常细胞增殖疾病的方法，包含调节、调整、结合或抑制PLK活性和/或PLK或其中一种其他PLK异构体优选为PLK-1的过度表达。
在另一实施方案中本发明涉及本发明式(I)化合物的用途，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物形式，其中以口服、肠道、经皮、静脉内、腹膜或通过注射，优选为静脉内给药该活性成分。
在本发明的含义中，式(I)化合物，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式，并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或其前药的形式，抑制多种人类肿瘤细胞系的增生，包括但不限于Saos-2、H4、MDA-MB-435S、MDA-MB453、MCF7、HeLa S3、HCT116、Colo 205、HT29、FaDu、HL-60、K-562、THP-1、HepG2、A549、NCI-H460、NCI-H520、GRANTA-519、Raji、Ramos、BRO、SKOV-3、BxPC-3、Mia CaPa-2、DU145、PC-3、NCI-N87、MES-SA、SK-UT-1B和A431。
下列实施例可用于说明本发明但不限制其涵盖范围。
本发明的式(I)化合物(以表2中的Nr.46化合物为例)，4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯甲酰胺的活性，可在细胞毒性试验中在培养人类肿瘤细胞中测定，和/或利用FACS分析其在细胞周期进程中的抑制效果来进行监测。在两种试验方法中，该化合物表现出很好的活性(见表1)。
阿拉莫蓝(Alamar BlueTM)细胞毒性分析试验阿拉莫蓝(Alamar BlueTM)分析试验是利用掺入基于检测代谢活性的荧光/色度生长指示剂，而设计用于定量测定细胞的增殖。
细胞培养各种人类肿瘤细胞株可购自“American Type CultureCollection(ATCC)”或“German Collection of Microorganisms and CellCultures(DSMZ)”并在由供应商标示的75至175cm2组织培养瓶的培养基中培养。将该细胞保持在37℃和5％CO2的湿润环境中，具有合适的分裂率。将对数成长细胞用于分析试验。
分析试验条件在实验第一天，将1000-4000细胞(在100μl培养基中)种入无菌96-孔板的每个孔中。使用的细胞数量视细胞的生长速率和大小而定。每个板中留下八个空孔以作为对照(4个孔用于加上还原阿拉莫蓝TM的培养基，另外4个孔用于加上氧化阿拉莫蓝TM的培养基)。将孔板放置在培养箱中过夜。在试验第二天，在含有0.1％DMSO的培养基中制备连续稀释抑制剂。使用的典型浓度为10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003和0.001μM。将100μl的稀释液(2x浓缩)加到每个孔中，以便在每个孔中产生200μl的终体积。将作为对照组的培养基和含有0.1％DMSO的培养基加到指定的孔中。所有数据皆进行一式四份。然后将细胞培养72小时。在该培养期间完成后，将20μl阿拉莫蓝(AlamarBlueTM)加到每个孔中。将作为对照组的20μl还原阿拉莫蓝(将AlamarBlueTM高压灭菌30分钟)加到没有细胞的四个孔中，并将20μl的AlamarBlueTM加到剩下的四个没有细胞的孔中。经4-5小时的培养后，以荧光光谱仪测定该培养板(激发530nm，发射590nm，狭缝15，整合时间(integrate time)0.1)。
数据分析取四份数据的平均值并减去本底(background)进行计算。0.1％DMSO值(由含有细胞并在含有0.1％DMSO但不含化合物的培养基的孔中取得平均值)可作为100％对照组。利用S形曲线分析程序(sigmoidalcurve analysis program)重复计算数据(Graph Pad Prism 3.03版)，其具有可变的希尔(Hill)斜率。
对PI染色肿瘤细胞进行FACS分析将碘化丙啶(PI)化学计算地结合到双链DNA并因此作为适当试剂，可用于测定细胞DNA含量以确定处于各种细胞周期的细胞百分比(G0/1-、S-和G2/M-期)，因此在G0或G1期的细胞确实具有二倍体DNA含量(2N)，而在G2和M-期(有丝分裂)中的细胞确实具有双倍(4N)DNA含量。
细胞培养各种人类肿瘤细胞株可购自“American Type CultureCollection(ATCC)”或“German Collection of Microorganisms and CellCultures(DSMZ)”并在由供应商标示的75至175cm2组织培养瓶的培养基中培养。将该细胞保持在37℃和5％CO2的湿润环境中，具有适当的分裂率。将对数成长细胞用于分析试验。
分析试验条件在实验第一天，将1×106肿瘤细胞放入各75cm2组织培养瓶中的15ml的培养基中，并将培养物放回培养箱中。第二天在含有10％DMSO的组织培养基中制备的抑制剂连续两倍稀释液(100x浓缩)。将150μl浓缩100x的稀释液加到含有15ml培养基的瓶中。将作为对照DMSO放入另一瓶中，以获得0.1％的终浓度。在含有0.1％DMSO的培养基中所使用的典型终浓度为1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μM。培养24小时后，利用PBS冲洗2次，收获细胞，接着加入胰蛋白酶/EDTA。将胰蛋白消化的细胞用含有1％BSA的PBS冲洗以去除塑胶(plastic)。在培养基中的非贴壁细胞以及PBS冲洗液中的细胞与胰蛋白消化的细胞，以1000rpm于4℃下离心5分钟一起沉淀。将上清液除去并用PBS冲洗沉淀两次。吸出上清液后，将沉淀在剩余的PBS(～100μl)中重悬。为了将细胞固定，准备装有5ml的80％冷乙醇的15ml试管(Falcon)并缓慢加入细胞悬浮液，并保持在-20℃下放置至少2小时或过夜。固定的细胞为沉淀物，用PBS冲洗一次后，将细胞沉淀物再悬浮于含有2ml的0.25％Triton X-100的PBS中。在冰上培养5分钟后，将5ml PBS加到每个样品中，并将该样品以1000rpm于4℃再度离心5分钟。将上清液去除并将沉淀物再悬浮于0.5ml碘化丙啶(PI)染色溶液中(0.1％RNase及10μg/ml碘化丙啶的PBS溶液)。将该细胞在黑暗中培养20分钟，接着转移至5ml聚苯乙烯圆底管中。
数据分析细胞的DNA含量可利用装有氩激光的FACS分析仪(500mW，发射488nm)并利用DNA Cell Quest分析软件(Beckton Dickinson)进行分析。用通带滤波器中测定对数PI荧光率(Beckton Dickinson 585/43)。处于各个细胞周期中的细胞的量化(例如GO/G1-、S-和G2/M-期)可用Beckton Dickinson的软体包完成。在细胞周期G2/M-期中得到的细胞的EC50值可利用S形曲线分析程序(sigmoidal curve analysis program)(Graph PadPrism 3.03版)重复计算得到。
表14-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯甲酰胺的体外效应数据


式(I)化合物、其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体或其混合物，及任选可药用的酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶形物、生理上功能衍生物或其前药，可单独使用或与其他本发明的活性物质组合，还任选与其他药理学的活性物质组合使用。
用于本发明中适合的药物制剂包括例如片剂、胶囊、栓剂、溶液及用于注射(s.c.，i.v.，i.m.)的具体溶液及输液、糖浆、乳剂或可分散的散剂。在各种情况下药物活性化合物的量应当在组合物总量的0.1至90重量％的范围内，优选的为0.5至50重量％，即足够达到下列特定剂量范围的量。若需要，该特定剂量可一天给予多次。
适合的片剂，例如可通过将一种或多种活性物质与已知的赋型剂，例如惰性稀释剂(如碳酸钙、磷酸钙或乳糖)、崩解剂(例如玉米淀粉或海藻酸)、粘合剂(例如淀粉或明胶)、润滑剂(例如硬脂酸镁或滑石)及/或延迟释放剂(例如羧甲基纤维素、醋酞纤维素或聚乙烯醋酸酯)混合来获得。片剂还可包含多层。
包衣片可通过用一般常用于片剂包衣的物质来包衣与片剂类似所产生的片芯来制备，所述包衣的物质例如柯林酮(collidone)或虫胶、阿拉伯胶、滑石、二氧化钛或糖。为了达到延迟释放或预防不相容性，片芯还可由多层组成。同样的，片剂包衣可由多层组成以达到延迟释放，可能使用上述所提及的用于片剂的赋型剂。
含有本发明的活性物质或其组合的糖浆或酏剂可含有另外的甜味剂，例如糖精、甜精(cyclamate)、甘油或糖，及增味剂例如调味剂如香草精或柳橙精(orange extract)。其还可含有悬浮佐剂或增稠剂例如羧甲基纤维素钠、湿润剂例如脂肪醇与环氧乙烷的缩合产物或保存剂例如对羟基苯甲酸盐。
注射溶液和输液可以以常用的方法来制备，例如加入保存剂例如对羟基苯甲酸盐或稳定剂例如乙二胺四乙酸的碱金属盐类，任选可使用乳化剂及/或分散剂，当使用水作为稀释剂时，任选可使用有机溶剂作为增溶剂或辅助溶剂，并转置于小瓶或安瓿或输液瓶中。
含有一种或多种活性物质或活性物质组合的胶囊，可例如通过将活性物质与惰性载体例如乳糖或山梨糖醇混合，并将其包入明胶胶囊内来制备。
适合的栓剂可例如通过与适合本目的的载体例如中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物混合来制备。
适合的赋型剂可为，例如水、可药用的有机溶剂例如石蜡(如石油分馏物)、植物油(例如花生或芝麻油)、单或多功能醇类(例如乙醇或甘油)，载体例如天然矿物粉末(例如高岭土、粘土、滑石、白垩土)、合成的矿物粉末(例如高分散性二氧化硅(silica)及硅酸盐)、糖(例如葡萄糖、乳糖及右旋糖)、乳化剂(例如木质素、亚硫酸盐废液、甲基纤维素、淀粉及聚乙烯吡咯烷酮)及润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、硬脂酸及月桂基硫酸钠)。
制剂可用常用的方法来给药，优选的为口服或透皮途径，尤其优选的为口服途径。当口服给予片剂时，除了上述载体外，片剂当然可含有添加剂，例如柠檬酸钠、碳酸钙及磷酸氢钙与各种添加剂例如淀粉，优选的为马铃薯淀粉、明胶等等。润滑剂例如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠及滑石还可用于制成片剂。以水性悬浮液而言，除了上述的赋型剂外，活性物质可与各种增味剂或调色剂组合。就非经肠用途而言，活性物质的溶液可使用适合的液体载体来制备。
静脉内使用的剂量是为每小时1-2000mg，优选的为每小时5至1000mg间。
然而根据体重或给药方法、个体对药物的反应、制剂的性质及给药的时间或时间间隔，其可任选必要与特定的量不同。因此，在某些案例中可使用低于上述给予的最小剂量可能就足够，而在其他案例中可能必须超过至高的上限。当给药量大时，将其以多个单一剂量分散于一天当中可能较为适当。
下列制剂实施例说明本发明并非限制其范围药物制剂的实施例A)片剂每片活性物质 100mg乳糖 140mg玉米淀粉 240mg聚乙烯吡咯烷酮15mg硬脂酸镁5mg500mg将磨成细粉的活性物质、乳糖及一些玉米淀粉共同混合。将混合物过筛，然后以聚乙烯吡咯烷酮的水溶液湿润，捏合，湿法造粒并干燥。将颗粒、剩余的玉米淀粉及硬脂酸镁过筛并共同混合。将混合物压制以制备适当形状及大小的片剂。
B)片剂 每片活性物质 80mg乳糖 55mg玉米淀粉 190mg微晶纤维素 35mg聚乙烯吡咯烷酮 15mg羧甲基淀粉钠 23mg硬脂酸镁2mg400mg将磨成细粉的活性物质、一些玉米淀粉、乳糖、微晶纤维素及聚乙烯吡咯烷酮共同混合，将混合物过筛，然后与剩余的玉米淀粉及水共同加工形成颗粒，将其干燥并过筛。加入羧甲基淀粉钠及硬脂酸镁并混合并将混合物压成适当大小的片剂。
C)安瓶溶液活性物质50mg氯化钠 50mg注射用水5ml将活性物质溶解于其本身的pH或任选在pH5.5至6.5的水中，加入氯化钠使成等渗溶液。将生成的溶液过滤去除热源质，并将滤液于无菌的条件下转置于安瓶中，然后灭菌并融合密封。该安瓶含有5mg、25mg及50mg的活性物质。
D)其他注射溶液实施例1实施例2

实施例3实施例4

实施例5实施例6


实施例7实施例8

制备化合物4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯甲酰胺的方法描述于WO03/20722以及WO 04/76454中，其以引用的方式并入本文中。
然后，为了完整的因素，制备化合物4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯甲酰胺的方法是描述于下。应了解，该方法是本发明的一种说明，并非限制其主题。
4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯甲酰胺的合成对于该合成，首先如下制备中间化合物Z3。

将54.0g(0.52mol)的D-2-氨基丁酸悬浮于540mL甲醇中，并与132g(1.1mol)的亚硫酰氯缓慢合并，同时以冰冷却。将混合物回流1.5小时然后蒸发。将油状残余物与540mL叔丁基甲基醚混合并将所形成的无色结晶抽滤。
产量78.8g的化合物Z3a(无色结晶)。
将74.2g的化合物Z3a及43.5mL(0.49mol)环戊酮溶解于800mL的二氯甲烷中。在0℃加入40.0g(0.49mol)醋酸钠及150.0g(0.71mol)三乙酰氧基硼氢化钠后，将混合物于环境温度下搅拌12小时，然后加入500mL的20％碳酸氢钠溶液。以二氯甲烷萃取水相。将合并的有机相以水洗涤，以MgSO4干燥并蒸发。
产量85.8g的化合物Z3b(淡黄油状物)。
将40.0g的化合物Z3b及30.0g(0.22mol)碳酸钾悬浮于600mL丙酮中，并与45.0g(0.23mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶的200mL丙酮溶液混合，同时以冰冷却。12小时后再加入5.0g的2，4-二氯-5-硝基嘧啶并将混合物搅拌3小时。蒸发反应混合物，用800mL乙酸乙酯及600mL水处理并以乙酸乙酯萃取水相。将合并的有机相以水洗涤，以MgSO4干燥并蒸发。
产量75.0g的化合物Z3c(褐色油状物)。
将100g的化合物Z3c溶于650mL冰醋酸中及在70℃下分批加入20g的铁粉。于70℃下将混合物搅拌1小时然后在100℃下搅拌1.5小时，然后趁热以硅藻土(kieselguhr)过滤。将反应混合物蒸发，用甲醇/二氯甲烷中处理，加样于硅胶柱并以乙酸乙酯通过Soxhlet提取而纯化。除去溶剂并将残余物与甲醇一起搅拌。
产量30.0g的化合物Z3d(淡褐色结晶)。
将25.0g的化合物Z3d及6.5mL(0.1mol)碘甲烷置于250mL二甲基乙酰胺中并于-10℃下在加入3.8g(0.95mol)氢化钠的60％矿物油分散液。将混合物于0℃下搅拌20分钟然后于环境温度下搅拌30分钟，最后加入冰。蒸发反应混合物并与300mL水混合。将形成的沉淀抽滤并以石油醚洗涤。
产量23.0g的化合物Z3e(无色固体)。
将6.0g的化合物Z3e及5.1g(31mmol)4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于90mL乙醇及350mL水中，与3.5mL浓盐酸混合并回流48小时。蒸发反应混合物，将残余物与甲醇/乙醚一起搅拌并将形成的沉淀抽滤。
产量6.3g的化合物Z3(淡褐色结晶)。
如下述得到4-[[(7R)-8-环戊基-7-乙基-5，6，7，8-四氢-5-甲基-6-氧代-2-蝶啶基]氨基]-3-甲氧基-N-(1-甲基-4-哌啶基)-苯甲酰胺。
将0.15g的化合物Z3、0.12g的TBTU及0.12mL的DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并在25℃下搅拌30分钟。然后加入50mg 1-甲基-4-氨基哌啶并将混合物于25℃下再搅拌2.5小时。然后以水萃取溶液并蒸发。将残余物溶于温的乙酸乙酯中并用乙醚及石油醚结晶。
产量0.025g的白色结晶。溶点203℃，为碱形式。
所有本发明的式(I)化合物可通过前述的合成A的方法制备，因此通式(A1)至(A9)的取代基具有上述所赋予的涵义。应当理解此方法作为说明之用而不受限于其内容。
方法A步骤1A将式(A1)的化合物与式(A2)的化合物反应得到式(A3)的化合物(图示1A)。此反应可根据WO 00/43369或WO 00/43372加以实施。化合物(A1)是可市售取得，例如购自City Chemical LLC，139 Allings Crossing Road，West Haven，CT，06516，USA。化合物(A2)的制备可通过文献中得知的方法，例如得自(a)F.Effenberger，U.Burkhart，J.Willfahrt Liebigs Ann.Chem.1986，314-333，(b)T.Fukuyama，C.-K.Jow、M.Cheung，Tetrahedron Lett.1995，36，6373-6374，(c)R.K.Olsen，J.Org.Chem.1970，35，1912-1915，(d)F.E.Dutton，B.H.Byung Tetrahedron Lett.1998，30，53 13-53 16；(e)J.M.Ranajuhi，M.M.Joullie Synth.Commun.1996，26，1379-1384。
图示1A
于步骤1A中，将1当量的化合物(A1)和1至1.5当量，优选为1.1当量的碱，优选为碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠或碳酸氢钠、碳酸钙，最优选为碳酸钾在任选与水混合的稀释剂中搅拌，所述稀释剂例如丙酮、四氢呋喃、乙醚、环己烷、石油醚或二噁烷，优选为环己烷或乙醚。
于0至15℃，优选为5至10℃的温度下，逐滴加入溶于有机溶剂中的1当量的式(A2)的氨基酸，所述有机溶剂例如丙酮、四氢呋喃、乙醚、环己烷或二噁烷。将该反应混合物于搅拌之下加热至18℃至30℃，优选约22℃，并再搅拌10至24小时，优选约12小时。然而将稀释剂蒸馏除去，将残留物与水合并并用有机溶剂萃取该混合物二至三次，所述有机溶剂例如乙醚或乙酸乙酯，优选为乙酸乙酯。将合并的有机萃取物干燥并将溶剂蒸馏除去。该残留物(化合物A3)可不经任何事先纯化直接使用于步骤2中。
步骤2A将步骤1A所得的化合物(A3)于硝基处还原并环化成式(A4)的化合物(图示2A)。
图示2A 于步骤2A中，将1当量的硝基化合物(A3)溶于酸中，优选冰醋酸、甲酸或盐酸，优选冰醋酸，并加热至50至70℃，优选约60℃。然后加入还原剂，例如锌、锡或铁，优选为铁屑，直至该放热反应完成为止，并将该混合物于100至125℃之下，优选约117℃之下搅拌0.2至2小时。冷却至环境温度以后，将铁盐滤除并将溶剂蒸馏除去。使残留物溶于溶剂或溶剂混合物中，例如乙酸乙酯或二氯甲烷/甲醇9/1和半饱和的NaCl溶液中并经例如硅藻土过滤。将有机相干燥并蒸发。残留物(化合物(A4))可通过层析或通过结晶法加以纯化，或作为合成步骤3A的粗产物。
步骤3A如示3A所示，步骤2A中获得的化合物(A4)可通过如图示3A的亲电子性取代反应而形成式(A5)的化合物。
图示3A 在步骤3A中，将1当量的式(A4)的酰胺溶于有机溶剂中，并冷却至约-5至5℃，优选0℃，所述有机溶剂如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选二甲基乙酰胺。
然后加入0.9至1.3当量的氢化钠和0.9至1.3当量的甲基化试剂，例如碘甲烷。将该反应于约0至10℃，优选为约5℃之下搅拌0.1-3小时，优选为约1小时，并可任选于此温度范围之下再静置12小时。将该反应混合物倒至冰水中并分离沉淀物。残留物(化合物(A5))可通过色谱法，优选在硅胶上或通过结晶法纯化，或在合成步骤4A中作为粗产物。
步骤4A可根据得知于文献例如(a)M.P.V.Boarland，J.F.W.McOmie J.Chem.Soc.1951，1218-1221或(b)F.H.S.Curd，F.C.Rose J.Chem.Soc.1946，343-348的版本4.1A，或得知于例如(a)Banks J.Am.Chem.Soc.1944，66，1131，(b)Ghosh和Dolly J.Indian Chem.Soc.1981，58，512-513或(c)N.P.Reddy和M.Tanaka Tetrahedron Lett.1997，38，4807-4810的版本4.2A的方法，将步骤3A中得到的化合物(A5)胺化以生成式(A9)的化合物(图示4A)。
图示4A 例如在版本4.1A中，1当量的化合物(A5)和1至3当量，优选约2当量的化合物(A6)不加溶剂或与有机溶剂，例如环丁砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、甲苯、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜或二噁烷，优选为环丁砜，在100至220℃，优选约160℃下加热0.1至4小时，优选为1小时。冷却之后，通过加入有机溶剂或溶剂混合物，例如乙醚/甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或乙醚，优选为乙醚/甲醇9/1，将产物(A9)结晶或通过色谱法纯化。
例如在版本4.2A中，将1当量的化合物(A5)和1至3当量的化合物(A6)于搅拌之下与酸，例如1-10当量的10-38％盐酸及/或醇，例如乙醇、丙醇、丁醇，优选为乙醇，回流1至48小时，优选约5小时。将沉淀的产物(A9)滤出并任选用水洗涤，干燥并从适当的有机溶剂中结晶出来。
例如于版本4.3 A中，将1当量的化合物(A5)和1至3当量的化合物(A7)溶于溶剂中，所述溶剂例如甲苯或二噁烷，并与膦配体，例如2，2’-双-(二苯基膦)-1，1’-联萘和钯催化剂，例如三(二亚苄基-丙酮)-二钯(O)和碱，例如碳酸铯合并，并回流1-24小时，优选17小时。将反应混合物于例如硅胶上纯化并将产物(A8)自溶液中分离或通过适当的结晶获得。将产物(A8)溶于适当的溶剂中，例如二噁烷中并与酸例如半浓(semiconcentrated)盐酸以例如溶剂与酸的比例3∶1混合。再将该混合物回流1-48小时，例如12小时并将生成的沉淀物分离。如需要用结晶法将该产物(A9)纯化。
步骤5A图示5A 例如将1当量的化合物(A9)用1当量的活化剂，例如O-苯并三唑基-N，N，N’，N’-四甲基脲_(tetramethyluronium)四氟硼酸酯(TBTU)和碱，例如约1.5当量二异丙基乙胺(DIPEA)溶解，所述二异丙基乙胺溶于有机稀释剂，例如二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基乙酰胺，优选为二氯甲烷或二甲基甲酰胺。加入1当量的胺(A10)之后，将该反应混合物于20℃至100℃之下搅拌0.1至24小时，优选约2小时。通过例如结晶或层析纯化得到式(A11)的产物。
通式(I)的化合物可类似下列合成实施例合成。实施例的号码相当于表2中所用的号码。然而这些实施例仅作为进一步说明本发明方法的实例，而非将本发明限定于其主题内。
一些用以合成该化合物的中间体化合物的制备也在下文中加以说明。
酸的制备为了合成表2的实施例94和实施例95的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z1。
将50.0g(0.48mol)的D-丙氨酸甲酯xHCl和49.1g(0.50mol)环己酮置于300mL二氯甲烷中并再与41.0g(0.50mol)醋酸钠和159.0g(0.75mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该混合物搅拌过夜并再加入300mL的10％碳酸氢钠溶液。以二氯甲烷萃取水相。合并的有机相以10％碳酸氢钠溶液洗涤，经Na2SO4干燥并蒸发。
产量72.5g的化合物Z1a(澄清液体)将72.5g的化合物Z1a置于500mL水中并加入溶于500mL乙醚的76.6g(0.39mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶。于-5℃之下，逐滴加入100mL的10％碳酸氢钾溶液。将该混合物于-5℃之下搅拌3小时并于环境温度之下再搅拌12小时。将有机相分离，经Na2SO4干燥。于蒸发时结晶出产物。
产量48.0g的化合物Z1b(黄色结晶)将48.0g的化合物Z1b溶于350mL冰醋酸并加热至60℃。将温度升至105℃的同时，加入47.5g铁粉。将该反应混合物于80℃之下搅拌3小时，再趁热经纤维素过滤，然后蒸发。将残留物于水和乙酸乙酯中搅拌，抽滤并以乙酸乙酯洗涤浅灰色的沉淀物。以稀氨水和水洗涤滤液，将有机相经Na2SO4干燥、经活性碳过滤，然后蒸发。得到一些更浅灰色的固体。
产量29.5g的化合物Z1c(浅灰色结晶)将32.1g的化合物Z1c置于300mL二甲基乙酰胺中并与13mL(0.2mol)碘甲烷混合。于-5℃之下，将6.4g(0.16mol)氢化钠以60％于矿物油中的分散体形式分批加入。2小时之后，将反应混合物倒至800mL冰水中。将所生成的沉淀物抽滤并以石油醚洗涤。
产量33.0g的化合物Z1d(米色结晶)将4.0g的化合物Z1d和2.3g(15mmol)的4-氨基-3-甲基苯甲酸悬浮于50mL乙醇和120mL水中，与2mL浓盐酸混合并回流48小时。将冷却所形成的沉淀物抽滤并以水、乙醇和乙醚洗涤。
产量2.9g的化合物Z1(无色结晶)为了合成表2的实施例188和实施例203的化合物，首先如下述说明制备中间化合物Z2。
将128.2g(0.83mol)D-丙氨酸乙酯xHCl和71.5g(0.85mol)环戊酮的1500mL二氯甲烷溶液与70.1g(0.85mol)醋酸钠和265.6g(1.25mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该反应混合物搅拌12小时然后倒至1.5L的10％碳酸氢钠溶液内。以二氯甲烷萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量143.4g的化合物Z2a(无色油)将66.0g的化合物Z2a置于500mL水中并与溶于500mL乙醚的85.0g(0.44mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶混合。于-5℃下，逐滴加入100mL的10％碳酸氢钾溶液并将该反应混合物于环境温度之下搅拌48小时。以乙醚萃取水相，使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。暗红色固体与石油醚一起搅拌并抽滤。
产量88.0g的化合物Z2b(黄色结晶)将88.0g的化合物Z2b溶于1000mL冰醋酸中并于60℃下分批加入85g铁粉，同时温度升至110℃。将该混合物于60℃下搅拌1小时，再趁热经纤维素抽滤，然后蒸发。将该褐色固体与700mL水一起搅拌并抽滤。
产量53.5g的化合物Z2c(浅棕色结晶)将53.3g的化合物Z2c溶于300mL二甲基乙酰胺中并与13mL(0.21mol)碘甲烷混合。于-5℃下，将5.0g(0.21mol)氢化钠以60％于矿物油中的分散体形式分批加入。12小时之后，将反应混合物倒至1000mL冰水中并将所生成的沉淀物抽滤。
产量40.0g的化合物Z2d(无色结晶)将4.0g的化合物Z2d和2.8g(16mmol)的4-氨基-3-氯苯甲酸悬浮于25mL乙醇和60mL水中，与3mL浓盐酸混合并回流43小时。将冷却时所生成的沉淀物抽滤并用水、乙醇和乙醚洗涤。
产量0.9g的化合物Z2(无色结晶)为了合成表2的实施例19、21、22、23、45、46、55、58、116、128、131、133、134、136、138、177、217、231、239、46、184、166和187的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z3。
将54.0g(0.52mol)D-2-氨基丁酸悬浮于540mL甲醇中并与132g(1.1mol)亚硫酰氮慢慢混合，同时以冰冷却。将该混合物回流1.5小时，然后蒸发。将剩余的油与540mL的叔丁基甲基乙醚合并，并将所得的无色结晶抽滤。
产量78.8g的化合物Z3a(无色结晶)将74.2g的化合物Z3a和43.5mL(0.49mol)环戊酮溶于800mL二氯甲烷中。于0℃下加入40.0g(0.49mol)醋酸钠和150.0g(0.71mol)三乙酰氧基硼氢化钠之后，将该混合物于环境温度之下搅拌12小时并然后加入500mL的20％碳酸氢钠溶液。以二氯甲烷萃取水相。以水洗涤合并的有机相，经MgSO4干燥并加以蒸发。
产量85.8g的化合物Z3b(淡黄色油)将40.0g的化合物Z3b和30.0g(0.22mol)碳酸钾悬浮于600mL丙酮中并与溶于200mL丙酮的45.0g(0.23mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶混合，同时以冰冷却。12小时之后，加入另外5.0g的2，4-二氯-5-硝基嘧啶并将该混合物搅拌3小时。将该反应混合物蒸发，用800mL乙酸乙酯和600mL水处理并以乙酸乙酯萃取水相。以水洗涤合并的有机相，经MgSO4干燥并蒸发。
产量75.0g的化合物Z3c(褐色油)将100g的化合物Z3c溶于650mL冰醋酸中并于70℃下分批加入20g铁粉。将该混合物于70℃下搅拌1小时，然后在100℃下搅拌1.5小时，再趁热经硅藻土过滤。将该反应混合物蒸发，用甲醇/二氯甲烷处理，加于硅胶上并以乙酸乙酯进行Soxhlet提取来纯化。去除溶剂并将残留物与甲醇一起搅拌。
产量30.0g的化合物Z3d(浅棕色结晶)将25.0g的化合物Z3d和6.5mL(0.1mol)碘甲烷置于250mL二甲基乙酰胺中并于-10℃下加入以60％于矿物油中的分散体形式的3.8g(0.95mol)氢化钠。将该混合物于0℃搅拌20分钟，再于环境温度之下搅拌30分钟并最后加入冰。将该反应混合物蒸发并与300mL水混合。将所生成的沉淀物抽滤并以石油醚洗涤。
产量23.0g的化合物Z3e(无色固体)将6.0g的化合物Z3e和5.1g(31mmol)的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于90mL乙醇和350mL水中，与3.5mL浓盐酸混合并回流48小时。将该反应混合物蒸发，将残留物与甲醇/乙醚一起搅拌并将所生成的沉淀物抽滤。
产量6.3g的化合物Z3(浅米色结晶)为了合成表2实施例81、82、93及137的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z4。
将25.0g(0.19mol)1-氨基环丙烷-1-羧酸乙酯xHCl和 6.8g(0.20mol)环戊酮溶于300mL二氯甲烷中并与16.4g(0.20mol)醋酸钠和61.7g(0.29mol)三乙酰氧基硼氢化钠混合。将该混合物搅拌过夜并再将该反应混合物倒至400mL的10％碳酸氢钠溶液中。以二氯甲烷萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量34.5g的化合物Z4a(无色油)将溶于3 50mL乙醚的42.5g(0.22mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶加至于350mL水中的34.5g的化合物Z4a的混合物中。在-5℃下，将混合物与80mL的10％碳酸氢钾溶液混合并将该混合物于环境温度下搅拌过夜。以乙醚萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量53.8g的化合物Z4b(褐色油状物)将20.1g的化合物Z4b溶于200mL冰醋酸中并于60℃下分批加入19.1g铁粉，同时温度升至100℃。将该混合物于60℃下搅拌3小时，再通过纤维素抽滤并蒸发。在水和乙酸乙酯中搅拌残留物并将该黄色沉淀抽滤。以稀氨水和水洗涤滤液，将有机相经Na2SO4干燥并蒸发。加入乙醚之后，结晶出另外的产物。
产量4.0g的化合物Z4c(黄色结晶)将7.8g的化合物Z4c和2.6mL(0.04mol)碘甲烷溶于100mL二甲基乙酰胺中并于-5℃下分批加入以60％于矿物油中的分散体形式的1.5g(0.04mol)氢化钠。经2小时之后，将反应混合物倒至冰水中并将所生成的沉淀物抽滤。
产量7.5g的化合物Z4d(浅棕色结晶)将3.0g的化合物Z4d和1.9g(11mmol)的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于40mL乙醇和80mL水中，与2mL浓盐酸合并并回流20小时。然后加入另外0.5g的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸并将该混合物回流48小时。将冷却时产生的沉淀物抽滤并用水、乙醇和乙醚洗涤。
产量2.1g的化合物Z4(无色结晶)m.p.222-223℃为了合成表2的实施例162、43、53、161、202、211、215和212的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z5。
将73.4mL(0.5mol)的2-溴异丁酸乙酯、87.1mL(0.75mol)3-甲基-1-丁胺、82.5g(0.6mol)碘化钠和76.0g(0.6mol)碳酸钾于1000mL乙酸乙酯中的混合物回流3天。滤除存在的任何盐并将滤液蒸发。
产量97.0g的化合物Z5a(红色油状物)将49.0g(0.25mol)的2，4-二氯-5-硝基嘧啶和38.3g(0.28mol)碳酸钾悬浮于500mL丙酮中并于0℃下与溶于375mL丙酮的93.0g的化合物Z5a合并。将该反应物于环境温度下搅拌过夜，过滤并蒸发。用水洗涤溶于乙酸乙酯的残留物并将有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量102.7g的化合物Z5b(褐色油状物)将22.7g的化合物Z5b溶于350mL冰醋酸中并于60℃下分批加入17.4g铁粉。加完之后，将该混合物回流0.5小时，趁热过滤并蒸发。将残留物用200mL二氯甲烷/甲醇(9∶1)处理并用氯化钠溶液洗涤。将有机相通过硅藻土抽滤，经MgSO4干燥，蒸发并以柱色谱法纯化(洗脱液乙酸乙酯/环己烷1∶1)。
产量1.9g的化合物Z5c(无色结晶)将1.9g的化合物Z5c溶于32mL二甲基乙酰胺中并在用冰冷却的同时与呈60％分散于矿物油的0.3g(7mmol)氢化钠合并。10分钟后加入0.5mL(7mmol)的碘甲烷并将该混合物于环境温度下搅拌3小时。将该反应混合物蒸发并与水合并。将所生成的沉淀物抽滤并以石油醚洗涤。
产量1.6g的化合物Z5d(无色结晶)将14.0g的化合物Z5d和10.0g(0.06mol)4-氨基-3-甲氧基苯甲酸悬浮于200mL二噁烷和80mL水中，与10mL浓盐酸合并并回流40小时。将冷却时生成的沉淀物抽滤并以水、二噁烷和乙醚洗涤。
产量13.9g的化合物Z5(无色结晶)为了合成表2的实施例88、194、229和89的化合物，首先如下文的说明制备中间化合物Z6。
将6.0g(0.06mol)L-2-氨基丁酸置于80mL的0.5M硫酸中并于0℃下与溶于15mL水中的5.5g(0.08mol)亚硝酸钠混合。将反应混合物于0℃下搅拌22小时，与硫酸铵合并并过滤。将滤液以乙醚萃取并将合并的有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量6.0g的化合物Z6a(黄色油状物)用冰冷却的同时，将200mL甲醇相继与65.0mL(0.89mol)亚硫酰氯和76.0g的化合物Z6a于50mL甲醇中混合。将所得混合物于0℃下搅拌1小时并于环境温度下搅拌2小时并再于0℃下，以真空去除甲醇和剩下的亚硫酰氯。
产量40.0g的化合物Z6b(黄色油状物)将30.0mL(0.17mol)三氟甲磺酸酐置于150mL二氯甲烷中并于以冰冷却的同时，于一小时内加入20.0g的化合物Z6b和14.0mL(0.17mol)吡啶于50mL二氯甲烷的溶液。将该混合物于环境温度下搅拌2小时，将所生成的所有盐抽滤并再用以100mL水洗涤。将有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量42.0g的化合物Z6c(淡黄色油状物)将于200mL二氯甲烷中的42.0g的化合物Z6c于一小时内，在用冰冷却的同时逐滴加至15.5mL(0.17mol)苯胺和24.0mL(0.17mol)三乙胺的400mL二氯甲烷的溶液中。将该混合物于环境温度下搅拌1小时并于35℃下再搅拌2小时。以水洗涤该反应混合物，经MgSO4干燥并蒸发。将所剩的残留物经蒸馏纯化(95-100℃、1*10-3毫巴)。
产量14.0g的化合物Z6d(无色油状物)将14.0g的化合物Z6d和16.0g(0.1mol)碳酸钾悬浮于100mL丙酮中并于10℃下与16.0g(0.08mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶合并。将该混合物于40℃下搅拌4小时，将生成的所有盐类抽滤并将滤液蒸发。残留物用300mL乙酸乙酯处理并以水洗涤之。有机相经MgSO4干燥并蒸发。
产量31.0g的化合物Z6e(褐色油状物)将31.0g的化合物Z6e溶于200mL冰醋酸中并于60℃分批加入10g铁粉，同时温度升至85℃。将该混合物于60℃下再搅拌1小时，经硅藻土过滤并蒸发。残留物与甲醇一起搅拌。
产量4.5g的化合物Z6f(褐色结晶)将于矿物油中的60％分散体形式的0.6g(16mmol)的氢化钠于-20℃下分批加至4.5g的化合物Z6f和1.0mL(16mmol)碘甲烷于100mL二甲基乙酰胺的混合物中。1小时之后，将该反应混合物与50mL水合并并蒸发。将残留物与200mL水一起搅拌，并将沉淀物抽滤并用石油醚洗涤。
产量4.5g的化合物Z6g(无色结晶)1.5g的化合物Z6g和1.4g(8mmol)4-氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯的30mL甲苯的悬浮液与0.4g(0.6mmol)的2，2’-双-(二苯基膦基)-1，1’-联萘(binaphthyl)、0.23g(0.3mmol)三(二亚苄基丙酮)-二钯(O)和7.0g(21mmol)碳酸铯合并并回流17小时。将该反应混合物加于硅胶上并以柱色谱法纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇9∶1)。
产量1.7g的化合物Z6h(黄色结晶)将1.7g的化合物Z6h溶于50mL二噁烷中，与15mL半浓盐酸合并并回流12小时。冷却之后将所生成的沉淀物抽滤。
产量1.1g的化合物Z6(无色固体)为了合成表2的实施例26、20、32、56、101、112及209的化合物，首先如下文说明制备中间化合物Z7。
将50.0g(0.36mol)的D-丙氨酸甲酯xHCl悬浮于500mL二氯甲烷和35mL丙酮中并与30.0g(0.37mol)醋酸钠和80.0g(0.38mol)三乙酰氧基硼氢化钠合并。将该混合物搅拌12小时并再倒至400mL 10％碳酸氢钠溶液中。使有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量51.0g的化合物Z7a(黄色油状物)
将51.0g的化合物Z7a的450mL水悬浮液与450mL乙醚中的80.0g(0.41mol)2，4-二氯-5-硝基嘧啶合并。于-5℃下，逐滴加入100mL的10％碳酸氢钾溶液。将反应混合物搅拌3小时，使有机相经Na2SO4干燥并蒸发。
产量74g的化合物Z7b(黄色油状物)将18.6g的化合物Z7b溶于200mL冰醋酸中并于60℃下，分批加入20.0g的铁粉。将该混合物于60℃下搅拌2小时，然后经纤维素抽滤。将残留物溶于乙酸乙酯中并用水和浓氨水洗涤。将有机相经Na2SO4干燥并蒸发。使残留物自乙醚中结晶。
产量9.8g的化合物Z7c(无色结晶)将17.0g的化合物Z7c和7mL(0.1mol)碘甲烷溶于200mL二甲基乙酰胺中并于-5℃下与于矿物油中的60％分散体形式的4.0g(0.1mol)氢化钠合并。将该反应混合物搅拌30分钟并再倒至300mL冰水中。将所生成的沉淀物抽滤并用石油醚萃取。
产量14.8g的化合物Z7d(米色结晶)将0.9g的化合物Z7d和1.5g(9mmol)4-氨基-3-甲基苯甲酸在210℃加热30分钟。冷却之后，残留物与乙酸乙酯一起搅拌并将所得的沉淀物抽滤。
产量1.2g的化合物Z7(灰色结晶)下列酸类能通过例如类似于所述的合成方法制备。

氨基组分L-R5的合成下列胺，1，1-二甲基-2-二甲基氨基-1-基-乙胺和1，1-二甲基-2-哌啶-1-基-乙胺可如下获得 根据下列参考文献可制备所述化合物(a)S.Schuetz等人，Arzneimittel-Forschung 1971，21，739-763，(b)V.M.Belikov等人，Tetrahedron1970，26，1199-1216和(c)E.B.Butler和McMillan J.Amer.Chem.Soc.1950，72，2978。
其他胺能用改进的上述文献中的方法制备如下。
1，1-二甲基-2-吗啉-1-基-乙胺 取8.7mL吗啉和9.3mL 2-硝基丙烷，并以冰冷却，慢慢逐滴加入7.5mL甲醛(37％)和4mL的0.5mol/L NaOH溶液(＜10℃)。再将该混合物于25℃下搅拌1小时并于50℃搅拌1小时。用水和乙醚处理该溶液并用乙醚萃取水相3次。使合并的有机相经NaSO4干燥并与二噁烷中的HCl(4mol/l)合并，将所生成的沉淀物抽滤。产量21.7g白色粉末。
将5g的白色粉末溶于80mL甲醇中并加入2g RaNi，于35℃和50psi下以氢处理40分钟。得到3.6g的1，1-二甲基-2-吗啉-1-基-乙胺。
下列的胺能类似制备。
1，1-二甲基-N-甲基哌嗪-1-基-乙胺 1，1-二甲基-2-吡咯烷-1-基-乙胺 1，3-二吗啉-2-氨基-丙烷 将5g由Messrs.Aldrich得到的1，3-二吗啉-2-硝基丙烷溶于80mL甲醇中并加入2g RaNi，于30℃和50psi下以氢处理5.5小时。这获得4.2g的1，3-二吗啉-2-氨基-丙烷。
4-氨基苄基吗啉
此胺的制备如下列参考文献所述S.Mitsuru等人，J.Med.Chem.2000，43，2049-2063。
4-氨基-1-四氢-4H-吡喃-4-基-哌啶 将20g(100mmol)的4-叔丁氧羰基-氨基哌啶溶于250mL CH2Cl2中并于室温下与10g(100mmol)四氢-4H-吡喃-4-酮和42g(200mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。加入水和碳酸钾，将有机相分离出来并干燥于真空中将溶剂蒸出。将残留物溶于200mL CH2Cl2中并于室温下与100mL三氟醋酸一起搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物用CHCl3处理并再次蒸发，然后用丙酮处理并用HCl乙醚溶液将盐酸盐沉淀。产量14.3g(56％)。
顺式-和反式-4-吗啉代-环己胺 联苄基(dibenzyl)-4-吗啉代-环己胺将3.9g(30mmol)4-联苄基环己酮溶于100mL CH2Cl2中并于室温下与3.9g(45mmol)吗啉和9.5g(45mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。然后加入水和碳酸钾，分离有机相，将其干燥并于真空中将溶剂去除。此残留物经硅胶柱纯化(约20mL硅胶；约500mL乙酸乙酯90/甲醇10+1％浓氨水)。将合适的级分于真空中蒸发。产量6.6g(60％)顺式-异构体和2g(18％)反式-异构体。
或者可通过如下方法制备反式-联苄基-4-吗啉代-环己胺
将33g(112mmol)4-联苄基环己酮溶于300mL MeOH中，与17.4g(250mmol)盐酸羟胺合并并于60℃下搅拌4小时。将溶剂真空蒸发，与500mL水和50g碳酸钾混合并以300mL二氯甲烷萃取两次。将有机相干燥，于真空中蒸发，将残留物自石油醚中结晶，溶于1.5L EtOH中并加热至70℃。分批加入166g钠并将该混合物回流至钠溶解为止。于真空中将溶剂去除，将残留物与100mL水合并并以400mL乙醚萃取两次。用水洗涤有机相，干燥并于真空中蒸发并使用柱(大约1.5L硅胶；大约2L乙酸乙酯80/甲醇20+2％浓氨水)分离该反式-异构体。产量12.6g(41.2％)。
将6.8g(23mmol)反式-1-氨基-4-联苄基氨基环己烷溶于90mL DMF中并于100℃下与5mL(42mmol)的2，2’-二氯乙基乙醚和5g碳酸钾一起搅拌8小时。冷却之后，加入30mL水，将沉淀的结晶抽滤并通过短柱纯化(大约20mL硅胶、大约100mL乙酸乙酯)。使残留物自甲醇和浓HCl中以二盐酸盐的形式结晶。产量7.3g(72.4％)。
反式-4-吗啉代-环己胺将7.2g(16.4mmol)的反式-联苄基-4-吗啉代-环己胺溶于100mL的MeOH中并于30-50℃下，于1.4g Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量3.9g(93％)。
顺式-异构体可以通过类似的方法制备。
顺式-和反式-4-哌啶子基(piperidino)-环己胺 反式-联苄基-4-哌啶子基-环己胺将2.0g(6.8mmol)反式-1-氨基-4-联苄基氨基环己烷(参见实施例2)溶于50mL DMF中并于室温下与1.6g(7mmol)1，5-二溴丙烷和2g碳酸钾搅拌48小时。将该混合物冷却，与水合并，用100mL二氯甲烷萃取两次，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经柱(大约100mL硅胶、大约500mL乙酸乙酯80/甲醇20+1％浓氨水)纯化。将需要的部分于真空中蒸发并自石油醚中结晶。产量1.2g(49％)。
反式-4-哌啶子基-环己胺将1.7g(4.8mmol)的反式-联苄基-4-哌啶子基-环己胺溶于35mL的MeOH并于20℃下，在350mg的Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量1.1g(78％)。
顺式-异构体可以通过类似的方法制备。
顺式-和反式-4-(4-苯基-哌嗪-1-基)-环己胺 将4.1g(25.3mmol)4-联苄基环己酮溶于50mL二氯甲烷中并于室温下与7.4g(25.3mmol)N-苯基哌嗪和7.4g(35mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。然后加入水和碳酸钾，分离有机相，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经硅胶柱(乙酸乙酯80/甲醇20+0.5％浓氨水)纯化。产量1.7g(15.8％)顺式-异构体和0.27g(2.5％)反式-异构体。
反式-4-(4-苯基-哌嗪-1-基)-环己胺将270g(0.61mmol)反式-联苄基-[4-(4-苯基-哌嗪-1-基)-环己基]-胺溶于5mL MeOH中并于20-30℃下在40mg Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量110mg(69％)。
顺式-异构体可以通过类似的方法制备。
顺式-和反式-4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己胺 将9.8g(33.4mmol)4-联苄基环己酮溶于100mL二氯甲烷中并于室温下与5.6g(40mmol)N-环丙基甲基哌嗪和8.5g(40mmol)NaBH(OAc)3一起搅拌12小时。然后加入水和碳酸钾，分离有机相并干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经硅胶柱(大约50mL硅胶、大约3L乙酸乙酯95/甲醇5+0.25％浓氨水)纯化。将合适的级分于真空中蒸发。将较快洗脱的顺式化合物自乙酸乙酯中结晶。使反式化合物自乙醇+浓HCl中结晶。产量8.5g(61％)顺式-异构体和2.2g(13％)反式-异构体。
顺式-4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己胺将8.5g(20mmol)顺式-联苄基-[4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己基]-胺溶于170mL MeOH并于30-50℃下在1.7g Pd/C(10％)上氢化。于真空中将溶剂去除并将残留物自乙醇和浓HCl中结晶。产量4.4g(91％)。
反式-异构体可以类似的方法制备。
合成实施例实施例152将0.15g的化合物Z10、0.14g TBTU、0.13mL DIPEA溶于二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入90μL的1-(3-氨基丙基)-4-甲基哌嗪并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。然后用二氯甲烷稀释该溶液并用水萃取。通过添加石油醚、乙醚和乙酸乙酯至有机相中将产物沉淀。产量0.16g的米色固体。
实施例164将0.10g的化合物Z10、0.1g TBTU、0.08mL DIPEA溶于4mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入44μL二甲基氨基丙胺并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。再以二氯甲烷稀释该溶液并以水萃取。通过加石油醚、乙醚和丙酮至有机相以使产物沉淀出来。产量0.08g黄色固体。
实施例242将0.15g的化合物Z10、0.14g TBTU、0.13mL DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入75μL的1-(2-氨基乙基)哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。再以二氯甲烷稀释该溶液并用水萃取。通过加石油醚、乙醚和乙酸乙酯至有机相以沉淀出产物。产量0.14g黄色固体。
实施例188将0.1g的化合物Z2、0.09g TBTU、0.05mL DIPEA溶于15mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入33mg 1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下再搅拌3小时。以20mL水萃取该溶液，然后于真空中蒸发。用乙醚使产物结晶。产量0.047g白色结晶。
实施例203将0.1g的化合物Z2、0.09g TBTU、0.5mL DIPEA溶于15mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入50mg 4-氨基-1-苄基哌啶并将该混合物于25℃下搅拌3小时。以20mL水萃取该溶液，然后于真空中蒸发。再将残留物于硅胶上进行色谱法分离并使分离的产物自乙醚中结晶。产量0.015g白色结晶。
实施例94将0.17g的化合物Z1、0.19g TBTU、0.11mL DIPEA溶于50mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入63mg的1-甲基-4-氨基哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌17小时。将50mL水和1g碳酸钾加至该溶液中并使用相分离柱(phase separation cartridge)将有机相分离，然后于真空中蒸发。再通过硅胶色谱将产物纯化并使用乙醚使纯化的产物结晶。产量0.1g白色结晶。
实施例95将0.17g的化合物Z1、0.19g TBTU、0.11mL DIPEA溶于50mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入77mg外-3-β-氨基-莨菪烷并于25℃下将该混合物再搅拌17小时。将50mL水和1g碳酸钾加至该溶液中并使用相分离柱将有机相分离，然后于真空中蒸发。再通过硅胶色谱将产物纯化并使用乙醚使经纯化的产物结晶。产量0.03g白色结晶。
实施例46将0.15g的化合物Z3、0.12g TBTU、0.12mL DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入50mg的1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下将该混合物再搅拌2.5小时。然后用水萃取该溶液，然后蒸发。将残留物溶于温乙酸乙酯中并使用乙醚和石油醚使之结晶。产量0.025g白色结晶。
实施例80将0.2g的化合物Z8、0.2g TBTU、0.1mL DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入100mg的1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下将该混合物再搅拌17小时。以稀碳酸钾溶液萃取该溶液并蒸发。用乙醚使残留物结晶。产量0.12g白色结晶。
实施例190将0.2g的化合物Z8、0.2g TBTU、0.3mL DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并将该混合物于25℃下搅拌1小时。然后加入0.13g 4-氨基-1-苄基哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌1小时(a further hour)。以10mL二氯甲烷稀释该溶液并以20mL水萃取。然后将该产物于硅胶上纯化并用乙酸乙酯和乙醚使之结晶。产量0.23g的化合物Z8。
将0.23g苄基胺Z8溶于10mL甲醇中，与50mg Pd/C合并并于25℃和3巴下氢化3小时。加入石油醚和乙酸乙酯得到白色结晶。将其进行硅胶色谱并用乙酸乙酯和乙醚使之结晶。产量0.075g白色结晶。
实施例196将0.1g的化合物Z10、0.09g的TBTU、0.3mL的DIPEA溶于4mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入67mg xx胺并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。以二氯甲烷稀释该溶液并用水萃取。然后将其进行硅胶色谱并将残留物溶于丙酮中，与醚化HCl合并并分离所生成的沉淀物。产量0.09g淡黄色固体。
实施例166将0.1g的化合物Z10、0.11g的TBTU、0.14mL的DIPEA溶于2mL二甲基甲酰胺中并于50℃下搅拌3小时。然后加入55mg的4-吗啉代甲基苯胺。再于17小时内将该反应冷却至环境温度。真空中去除二甲基甲酰胺，将残留物用二氯甲烷处理并用水萃取。然后将其进行硅胶色谱并使产物自乙酸乙酯和乙醚中结晶。产量0.06g淡黄色结晶。
实施例81将0.2g的化合物Z4、0.2g的TBTU、0.1mL的DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入0.1g的1-甲基-4-氨基哌啶并于25℃下将该混合物再搅拌17小时。用碳酸钾水溶液萃取该溶液并蒸发。用乙醚使产物结晶。产量0.16g白色结晶。
实施例162将0.1g的化合物Z5、0.07g的TBTU、0.15mL的DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌20分钟。然后加入0.04g 1-甲基-4-氨基哌啶并将混合物于25℃下再搅拌2小时。再用15mL二氯甲烷稀释该溶液并用20mL水萃取。将残留物溶于MeOH和丙酮中并与1mL HCl乙醚溶液合并并蒸发。使用乙醚、乙酸乙酯和少量MeOH结晶得到产物。产量0.1g白色结晶。
实施例88将0.1g的化合物Z6、0.12g的TBTU、0.12mL的DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入0.04g 1-甲基-4-氨基哌啶并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。然后用10mL二氯甲烷稀释该溶液并用10mL水萃取。使用乙醚、乙酸乙酯和石油醚结晶获得产物。产量0.6g白色结晶。
实施例89将0.1g的化合物Z6、0.08g的TBTU、0.08mL的DIPEA溶于10mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入37μL的N，N-二甲基新戊二胺并将该混合物于25℃下再搅拌2小时。然后用10mL二氯甲烷稀释该溶液并用10mL水萃取。然后将该产物进行硅胶色谱并使用乙酸乙酯、乙醚和石油醚结晶。产量0.005g白色结晶。
实施例26
将0.15g的化合物Z7、0.16g的TBTU、1mL的DIPEA溶于5mL二氯甲烷中并于25℃下搅拌30分钟。然后加入0.1g的4-吗啉代环己胺并将该混合物于25℃下再搅拌17小时。然后将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液合并，分离沉淀物并用水洗涤。将沉淀物溶于二氯甲烷并再次蒸发。使用乙酸乙酯使产物结晶。产量0.1g白色结晶。
实施例9将150mg的化合物Z9及93mg胺溶于5mL二氯甲烷中并于室温下与160mg的TBTU和1mL的DIPEA搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液合并。将沉淀物抽滤，用水洗涤，用二氯甲烷处理，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物从乙酸乙酯中结晶出来。产量82.0mg。
实施例16将150mg的化合物Z8及73mg反式-4-哌啶子基-环己胺溶于5mL二氯甲烷中并于室温下与160mg(0.50mmol)的TBTU和1mL的DIPEA搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液合并。将沉淀物抽滤，用水洗涤，用二氯甲烷处理，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物从乙酸乙酯中结晶出来。产量87.0mg。
实施例37将100mg的化合物Z9和42mg的3-氨基-1-乙基-吡咯烷溶于10mL二氯甲烷中并于室温下与90mg的的TBTU和0.51mL的的DIPEA搅拌12小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液合并。将沉淀物抽滤，用水洗涤，用二氯甲烷处理，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物从乙酸乙酯/石油醚中结晶出来。产量24.0mg。
实施例120将100mg的化合物Z11和73mg的4-氨基-1-四氢-4H-吡喃-4-基-哌啶溶于1 0mL二氯甲烷中并将其于室温下与90mg的TBTU和0.5mL的DIPEA一起搅拌1小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液合并。将沉淀物抽滤，用水洗涤，用二氯甲烷处理，干燥并于真空中将溶剂去除。使残留物自乙酸乙酯/石油醚中结晶。产量89mg。
实施例212将150mg的化合物Z5和150mg反式-4-(4-环丙基甲基-哌嗪-1-基)-环己胺(盐酸盐)溶于5mL二氯甲烷中并于室温下与160mg的TBTU和2mL的DIPEA搅拌2小时。于真空中将溶剂去除，将残留物与10mL的10％碳酸钾溶液合并。将沉淀物抽滤，用水洗涤，用二氯甲烷处理，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物经柱(20mL硅胶、300mL乙酸乙酯90/甲醇10+2％浓氨水)纯化。将合适的级分于真空中蒸发并自乙酸乙酯中结晶。产量140mg。
实施例232将390mg的化合物Z11和240mg反式-4-(4-叔丁氧羰基-哌嗪-1-基)-环己胺溶于2.5mL NMP中并于室温下与482mg的TBTU和1mL三乙胺搅拌2小时。然后加入100mL水和200mg碳酸钾并将沉淀物抽滤，用水洗涤并经硅胶柱纯化。将适当的级分于真空中蒸发，溶于2mL二氯甲烷中，与2mL三氟醋酸混合并于室温下搅拌2小时，再与另外的100mL水和200mg碳酸钾混合并将沉淀物抽滤并用水洗涤。然后经硅胶柱纯化该沉淀物。将合适的级分于真空中蒸发并使残留物自乙醇和浓盐酸中结晶。产量95mg。
实施例213将60mg的实施例232的化合物溶于10mL乙酸乙酯中并于室温下与1mL醋酸酐和1mL三乙胺搅拌30分钟。于真空中将溶剂去除，将残留物与水和氨水混合，将沉淀的结晶抽滤并以水和少量冷丙酮洗涤。产量40mg。
实施例218将1.2g的化合物Z9和0.5g的1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基胺溶于20mL二氯甲烷中并于室温下与1.28g的TBTU和4mL三乙胺一起搅拌12小时。然后加入50mL水和0.5g碳酸钾，分离有机相，干燥并于真空中蒸发。使残留物自乙酸乙酯中结晶，与25mL的1N盐酸和20mL甲醇混合并于50℃下搅拌30分钟。于真空中去除甲醇，将沉淀物抽滤，用水洗涤并干燥。将残留物用20mL二氯甲烷处理并于室温下与0.5g硫代吗啉和0.5gNaBH(OAc)3搅拌12小时。然后加入与水和碳酸钾，分离有机相，干燥并于真空中将溶剂去除。将残留物于硅胶柱上纯化。将合适的级分于真空中蒸发并用HCl乙醚溶液将氯化氢进行沉淀。产量86mg反式-异构体；无定形粉末。
实施例187将溶于5mL二氯甲烷的200mg的化合物Z3与0.1mL二异丙基乙胺和180mg的TBTU合并并搅拌30分钟。然后加入191mg的4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基胺并将该混合物搅拌过夜。将该反应混合物与水合并并以二氯甲烷萃取水相。使合并的有机相经Na2SO4干燥并蒸发。残留物以柱色谱法纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇100∶7)。
产量128mg(淡黄色结晶)。
表2中所列的式(I)的化合物尤其用类似于前述的方法得到。表2中在各种情况下的缩写X1、X2、X3、X4和X5代替对应的基团R1、R2、R3、R4和L-R5，代表连接至表1所示通式的位置。
表2










































权利要求
1.式(I)化合物在制备通过抑制作为有丝分裂调节物的polo样激酶用于治疗人类或非人类哺乳动物体内特征为异常细胞增殖的疾病的药物组合物中的用途，所述化合物任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体及其混合物的形式并任选以其可药用酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上的功能性衍生物或前药的形式， 其中R1、R2可为相同或是不同，表示氢或任选取代的C1-C6-烷基，或R1和R2一起表示2-至5-员烷基桥，其可包含1至2个杂原子，R3表示氢或选自任选取代的C1-C12-烷基、C2-C12-链烯基、C2-C12-炔基和C6-C14-芳基的基团，或选自任选取代和/或桥连的C3-C12-环烷基、C3-C12-环烯基、C7-C12-多环烷基、C7-C12-多环烯基、C5-C12-螺环烷基、含有1至2个杂原子的C3-C12-杂环烷基，以及含有1至2个杂原子的C3-C12-杂环烯基的基团，或R1和R3或R2和R3共同代表饱和或不饱和C3-C4-烷基桥，其可包含1个杂原子，R4表示选自氢、-CN、羟基、-NR6R7和卤素，或表示选自任选取代的C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C2-C6-炔基、C1-C5-烷氧基、C2-C5-烯氧基、C2-C5-炔氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基亚磺酰基和C1-C6-烷基磺酰基的基团，L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基，任选桥连的C3-C12-环烷基和含有1或2个氮原子的杂芳基，n表示0或1m表示1或2R5表示选自任选取代的吗啉基、哌啶基、哌嗪基、哌嗪基羰基、吡咯烷基、莨菪烷基、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基、4，4-二氧代硫吗啉基、硫吗啉基、-NR8R9和氮杂环庚基，R6、R7可为相同或不同，表示氢或C1-C4-烷基，以及R8、R9表示在R5上未经取代的氮取代基，其可为相同或不同，其表示氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基和C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团。
2.根据权利要求1所述的通式(I)化合物的用途，其中R1至R4、R6和R7如前述所定义，且L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基和含有1或2个氮原子的杂芳基，n表示1m表示1或2R5表示经氮原子结合于L的基团，所述基团选自任选取代的吗啉基、哌啶基、R8-哌嗪基、吡咯烷基、莨菪烷基、R8-二酮甲基哌嗪基、4-氧代硫吗啉基、4，4-二氧代硫吗啉基、硫吗啉基、-NR8R9和氮杂环庚基，R8、R9表示在R5上未经取代的氮取代基，其可为相同或不同的基团，可为氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基和C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基的基团。
3.如权利要求1或2所述的通式(I)化合物的用途，其中R1至R4、R6和R7是如前述所定义，且L表示连接基团，其选自任选取代的C2-C10-烷基、C2-C10-链烯基、C6-C14-芳基、-C2-C4-烷基-C6-C14-芳基、-C6-C14-芳基-C1-C4-烷基、任选桥连的C3-C12-环烷基和含有1或2个氮原子的杂芳基，n表示0或1m表示1或2R5表示经由碳原子结合于L的基团，所述基团选自R8-哌啶基、R8R9-哌嗪基、R8-吡咯烷基、R8-哌嗪基羰基、R8-莨菪烷基、R8-吗啉基和R8-氮杂环庚基，且R8、R9表示在R5上未经取代的氮取代基，其可为相同或不同，可为氢或选自C1-C6-烷基、-C1-C4-烷基-C3-C10-环烷基、C3-C10-环烷基，C6-C14-芳基、-C1-C4-烷基-C6-C14-芳基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、C1-C4-烷氧基羰基、C6-C14-芳基羰基、C1-C4-烷基羰基、C6-C14-芳基甲基氧基羰基、C6-C14-芳基磺酰基、C1-C4-烷基磺酰基和C6-C14-芳基-C1-C4-烷基磺酰基。
4.如权利要求1所述的通式(I)化合物的用途，其中该化合物选自下表中所示的式(I)化合物
其中表中所用的缩写X1、X2、X3、X4和X5在各种情况下表示与表中所示的通式中的位置的连接，以代替对应的基团R1、R2、R3、R4和L-R5。
5.如权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于该polo-样激酶为PLK-1。
6.如权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于该疾病的特征为不适当细胞增殖、迁移、凋亡或血管生成。
7.如前述任一项权利要求的用途，其特征在于该疾病为癌症，选自癌、肉瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、血液肿瘤形成、淋巴瘤和幼年癌症。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于该癌症为白血病。
9.如权利要求1至8中任一项所述的用途，其特征在于该疾病是癌症，选自混合肿瘤、未分化肿瘤及其转移性肿瘤。
10.如权利要求1至4中任一项所述的化合物在制备用于治疗自体免疫疾病的药物组合物中的用途，所述的化合物任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体或其混合物的形式，及任选以可药用的酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶形物、生理上功能衍生物或其前药的形式，其中该自体免疫疾病选自淀粉样变性、全身红斑性狼疮、类风湿性关节炎、克罗恩氏症、多发性硬化症、全身性硬化症(硬皮症)、混合型结缔组织疾病、舍格伦综合征、强直性脊柱炎、自体免疫血管炎、贝塞氏综合征、牛皮癣、自体免疫关节炎、肉样瘤病和糖尿病。
11.如权利要求1至4中任一项所述的化合物在制备用于治疗局部或全身性真菌疾病的药物组合物中的用途，所述的化合物任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体和其混合物的形式，及任选以可药用的酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物、生理上功能衍生物或其前药的形式。
12.如权利要求11所述的用途，其特征在于该疾病选自下列念珠菌病、隐球菌病、曲霉病、毛霉病、癣、皮肤癣菌病、组织胞浆菌病、芽生菌病、球虫症、肺囊虫。
13.如前述任一项权利要求所述的用途，其中该活性成份以口服、肠道、经皮、静脉内、腹膜或通过注射来给药。
14.通过抑制作为有丝分裂调节剂的polo样激酶来治疗人类或人类以外的哺乳动物的特征为异常细胞增殖疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物给药治疗上有效量的如权利要求1至4中任一项所述的化合物，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体或其混合物的形式，及任选以可药用的酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物或其生理上功能衍生物的形式。
15.用于治疗患有一种或多种如权利要求6至12任一项中所述的疾病的患者的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗上有效量的如权利要求1至4中任一项所述的化合物，任选以其互变异构体、外消旋物、对映异构体、非对映异构体或其混合物的形式，及任选以可药用的酸加成盐、溶剂合物、水合物、多晶型物或其生理上功能衍生物的形式。
全文摘要
本发明涉及通式(1)化合物的用途，用于通过抑制作为有丝分裂调节物的polo样激酶，来治疗人类或非人类哺乳动物体内的异常细胞增殖特性的疾病，例如癌症，选自癌、肉瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、血液肿瘤形成、淋巴瘤和幼年癌症，及白血病，自体免疫疾病选自淀粉样变性、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、克罗恩氏症、多发性硬化症、全身性硬化症(硬皮症)、混合型结缔组织疾病、舍格伦综合征、强直性脊柱炎、自体免疫血管炎、贝塞氏综合征、牛皮癣、自体免疫关节炎、结节病、糖尿病和真菌疾病。
文档编号A61P3/00GK101022809SQ200580027712
公开日2007年8月22日 申请日期2005年8月9日 优先权日2004年8月14日
发明者格尔德·芒泽特, 马丁·斯蒂格梅尔 申请人:贝林格尔·英格海姆国际有限公司