专利名称：：使甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌对苯唑西林敏感的组合物和方法
技术领域：
：本发明的领域是抗菌治疗组合物和方法，尤其是含有所选儿茶素的协同组合(combination)对曱氧西林抗性金黄色葡萄球菌(methicillinresistantStaphylococcusaureus)(MRSA)的治疗。
背景技术：
：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和其他茶儿茶素以前已被用作抗菌剂，并且该活性的例子在现有技术中是熟知的(如参见，Jpn.J.Bacteriol.(1991);46:839-845)。然而，要显示出显著的抗菌作用，剂量通常要非常高因此在生理情况或体内一般达不到。Shimamura在美国专利5，358，713号中报道了以相似的高浓度使用选择的儿茶素防止MRSA对另一个人转移。为了降低某些抗生素药物的最小抑制浓度，将抗生素药物与某些儿茶素相组合，并且有报道选择的儿茶素是阿米卡星、氯霉素和各种的(3-内酰胺抗生素的敏化剂，如Shimamura在U.S.5，807,564中所述。同样，有报道玫瑰多酚能降低各种的P-内酰胺抗生素的最小抑制浓度(如参见，MicrobiolImmunol.2004;48(1):67-73.)。然而，至少对于某些儿茶素，有效浓度的要求仍然相对高。在治疗MRSA传染的其他尝试中，选择的儿茶素也与特异性的茶黄素化合物组合，如EP0761226中所述生产抗菌组合物。但是，关于某些儿茶素依然有同样的困难。对更多已知的选择的儿茶素的组合，Morree等在美国专利6,652,890号中公开了EGC和EC的混合物，它能有效抑制表达NOX的赘生性细胞的NADH氧化酶从而治疗癌症。然而，在那个参考文献中未报道该组合对细菌的作用。在更多已知使用儿茶素作为抗生素药物的尝试中，各种的儿茶素进行化学修饰如Stapleton等在WO2005/034976中所述。当该修饰过的儿茶素与它们未被修饰的相应成分相比提供了显著的抗菌效果时，合成和纯化增加了费用，并且对人类给药还未被证明是安全和有效的。因此，虽然消灭MRSA和/或使MRSA对各种的抗生素敏感的许多组合物和方法在现有技术中是已知的，但是它们的全部或几乎全部有一个或多个缺点。所以，仍需要对治疗和/或化学预防MRSA传染的改进药剂。发明概述本发明涉及发现当选择的抗生素已经与没食子酰化儿茶素(galloylatedcatechin)组合时，一些非没食子酰化的儿茶素(non-galloylatedcatechin)将增强MRSA对选择的抗生素的敏感性。在本发明主题的一方面，降低抗生素药物对金黄色葡萄球菌曱氧西林抗性菌林的MIC(最小抑制浓度)的方法，包括使金黄色葡萄球菌与使抗生素药物的MIC降低到第一个水平的有效浓度的没食子酰化儿茶素接触的步骤。下一个步骤，确认非没食子酰化的儿茶素的应用进一步协同地将抗生素药物的MIC从第一水平降低到第二水平，再下一个步骤中，在没食子酰化儿茶素存在下，使金黄色葡萄球菌与使抗生素药物的MIC降低到第二水平的有效浓度的非没食子酰化的儿茶素接触。最优选，抗生素药物可以是特征为(3-内酰胺抗生素(如，苯唑西林、曱氧西林、青霉素)，四环素类抗生素，(如，四环素、四一霉素、差向四环素，等)，和/或氯霉素型抗生素药物(如，氯霉素、dextramycin、l-脱氧氯霉素，等)，没食子酰化儿茶素是ECG或EGCG，和/或非没食子酰化的儿茶素是EC或EGC。根据特定组合，预期当金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时第一水平等于或少于抗生素药物MIC的50%，和/或当金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时第二水平等于或少于抗生素药物MIC的5%。在其它预期方面，当金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时第一水平等于或少于抗生素药物MIC的5%,并且当金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时第二水平等于或少于抗生素药物MIC的0.5%。所以，至少有些例子中，金黄色葡萄球菌与浓度少于10微克/毫升的没食子酰化儿茶素接触，和与浓度等于或少于50微克/毫升的非没食子酰化的儿茶素接触。从不同观点来看，本发明者也预期了抑制金黄色葡萄球菌(如，BB568、EMRSA-16或EMRSA-15)的甲氧西林抗性菌林生长的方法，其中在一个步骤中，使金黄色葡萄球菌与没食子酰化儿茶素和抗生素药物的组合接触，其中没食子酰化儿茶素和抗生素药物以抑制生长的无效浓度存在。在另一个步骤中，在上述组合的存在下，使金黄色葡萄球菌与以抑制金黄色葡萄球菌生长的有效浓度的非没食子酰化的儿茶素接触。与上述方法相似，该方法中优选抗生素药物是浓度为60微克/毫升的卩-内酰胺抗生素，并且，其中没食子酰化儿茶素是浓度为5微克/毫升的ECG，和/或非没食子酰化的儿茶素(如，EC或EGC)是以至少25微克/毫升和更加典型至少50微克/毫升的浓度存在的。所以，在本发明主题的另一方面，抗生素药物(如，p-内酰胺抗生素)组合物包括没食子酰化儿茶素和非没食子酰化的儿茶素，其中，相对于没食子酰化的儿茶素，非没食子酰化的儿茶素是以协同地降低抗生素药物MIC的浓度存在。预期的组合物进一步包括与以下组合物相关的信息，其中相对于没食子酰化的儿茶素，该组合物中没食子酰化儿茶素和非没食子酰化的儿茶素以协同组合存在，有效地降低抗生素药物的MIC。最优选，没食子酰化儿茶素是ECG或EGCG，而非没食子酰化的儿茶素是EC或EGC。通常，非没食子酰化的儿茶素和没食子酰化儿茶素是以至少3:1重量比存在，更典型以至少6:1重量比存在。还应当意识到该组合物可以许多方式配制，特别优选局部制剂(如，喷雾剂、乳膏、软膏，等)。本发明的多种目的、特征、方面和优点地通过发明的下面优选实施方式详细描述将更清楚。附图的简要说明图1是描述对于EMRSA-16，EC和ECG的组合对苯唑西林MIC的协同作用的图。图2A是总结EC、EGC和EGCG对ECG使选择的金黄色葡萄球菌菌林对苯唑西林敏感能力的作用的表。图2B是总结EC和EGC对EGCG使金黄色葡萄球菌菌林对苯唑西林敏感能力的作用的表。详细描述本发明者意想不到地发现使用没食子酰化儿茶素的儿茶素介导的MRSA对各种抗生素药物的敏化作用能通过将没食子酰化儿茶素与非没食子酰化的儿茶素组合而进一步提高，且最优选与相应的非没食子酰化的儿茶素组合。明显地，当独自使用时，促进抗生素药物敏感性的非没食子酰化的儿茶素看上去对药物的最小抑制浓度的作用很少或没有。如这里所用的术语"MRSA"，"金黄色葡萄球菌甲氧西林抗性菌抹"和"曱氧西林抗性金黄色葡萄球菌"在这里互换使用，并且是指对许多，更典型是对所有(3-内酰胺类抗生素药物具有抗性的金黄色葡萄球菌。也可能存在涉及头孢菌素和/或碳青霉烯类的其他耐药性。分离出的医院相关的MRSA经常是对其他常用的抗菌剂，包括红霉素、克林霉素和四环素有多重耐药性的，而分离出的群落相关的(community-associated)MRSA经常是只对|3-内酰胺类抗生素药物和红霉素具有抗性。抗性按照NCLS(临床实验室标准的全国委员会)协议确认，并且通常分别由苯唑西林MIC测试中MIC等于或大于4微或少于10mm或19mm而反映。如这里所用的术语"最小抑制浓度"和"MIC"可互换使用，且指在细菌生长没有被抑制的特定培养基中抗生素药物的最小浓度。这里所用的术语"没食子酰化儿茶素"是指其中的C环用一个被取代或未被取代的苯曱酸基，且最常见是没食子酸酯基修饰的化合物(名称，参见下面的式1)。最典型地，被取代或未被取代的苯曱酸酯基在C环的3位共价连接。在该被取代的苯曱酸上预期的取代基包括一个或多个羟基和它们相应的酯基，各种的烷基醚基、氨基、硝基、硫酸根和/或磷酸根基团，其中每一个可能进一步被取代。比较起来，这里所用的术语"非没食子酰化的儿茶素"是指C环可以或不可以用取代基修饰的化合物，但是，存在于C环的3位上的那个取代基，不是没食子酸酯基。因此，在许多其他适当的取代基中，非没食子酰化的儿茶素的C环的3位上是氢或羟基。在本发明主题物的一个优选方面，本发明者在没食子酰化儿茶素表儿茶素没食子酸酯(ECG)浓度在O微克/毫升和12.5微克/毫升之间变化下培养金黄色葡萄球菌EMRSA-16菌抹，以增加该菌抹对苯唑西林的敏感性。然后记录这些MIC,并且在存在非没食子酰化的儿茶素表儿茶素浓度在0微克/毫升和50微克/毫升之间变化下重复实验。显著地，非没食子酰化的儿茶素的增加以显著和协同方式降低了MIC。当表儿茶素用非没食子酰化表没食子儿茶素替换时，得到了近似的结果。相比较，当使用没食子酰化表没食子儿茶素没食子酸酯时，实质上没有获得显著的和协同的效果。不希望局限于任何特殊理论或^^说，本发明者预期，纳摩尔浓度的儿茶素可能通过它们分成磷脂栅栏的能力调整生物膜的结构和功能。没食子酰化儿茶素被认为比它们的非没食子酰化类似物能更深地渗入磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺双层。因此，期望ECg和EGCg占据膜中的更深的位置，并且EC和EGC位于更浅的位置(更接近磷脂-水界面)。膜渗透的这些区别与这些分子修饰葡萄球菌(3-内酰胺抗性的能力相当。有意思地，被加到脂质双层中的ECg和EGCg的量在EC存在下明显增加，提高儿茶素没食子酸酯降低葡萄球菌的J3-内酰胺抗性水平的能力的可能性可以通过非没食子酰化的儿茶素增强。在本发明主题物的另一个预期方面，应该理解除表儿茶素没食子酸酯(ECG)外的许多没食子酰化儿茶素在这里也被认为是适用的。在其他没食子酰化儿茶素中，预期适当的化合物包括儿茶素没食子酸酯(CG)，没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，茶黄素单没食子酸酯A,茶黄素单没食子酸酯B和茶黄素双没食子酸酯。应该进一步注意，这里预期的儿茶素(没食子酰化和非没食子酰化的)包括光学异构体、手性中心，和/或立体异构体，并且所有这些形式(和混合物)都在这里考虑。同样，非没食子酰化的儿茶素可以包括许多可供选择的化合物，包括儿茶素(C)，没食子儿茶素(GC)和表没食子儿茶素(EGC)。因此，这里考虑的优选的没食子酰化和非没食子酰化的儿茶素具有式1的结构式l其中R,、R2、R3、R4、R3'、R4'、和Rs'独立地是H、OH或M;其中M是OC(O)R、OC(S)R、OC(NH)R、OR或R,其中R是任选被取代的烷基、烯基、炔基、烷芳基或芳基(和最优选一个，二或三羟基的苯曱酸基)；其中结构中的A、B和C表示各自的环；并且在儿茶素是没食子酰化儿茶素时，R3"是没食子酸酯基；并且在儿茶素是非没食子酰化的儿茶素时，R3"是M且条件是在OC(O)R中R不是没食子酸基。关于没食子酰化儿茶素的适当浓度，通常预期所有浓度被认为是适当的，只要该浓度达到敏感化的至少某一水平(即，与生长在同样情况下无没食子酰化儿茶素的相比降低了抗生素药物的MIC)。而且，应看出不同的没食子酰化儿茶素在相当的条件下将显示出对MIC明显的降低。更进一步，tw二的儿茶素的浓度确定。所以，没食子酰化儿茶素(包括ECG)的各种的浓度被考虑且通常在0微克/毫升和50毫克/毫升(甚至更高)之间，但更典型在l微克/毫升和1毫克/毫升之间且最典型在5微克/毫升和100微克/毫升之间。同样，考虑的非没食子酰化的儿茶素的浓度会变化并取决于许多因素，包括非没食子酰化的儿茶素的具体化学结构、没食子酰化儿茶素的浓度和类型，细菌菌抹，和/或抗生素药物。然而，通常预期非没食子酰化的儿茶素的浓度在0微克/毫升和50毫克/毫升(甚至更高)之间，更典型在1微克/毫升和1毫克/毫升之间和最典型在5微克/毫升和100微克/毫升之间。此外，非没食子酰化的儿茶素存在量相对于没食子酰化儿茶素优选(但不是必需)至少等摩尔量，更优选1.1-2.0比1的过摩尔量，甚至更优选2.0-4.0比1的过摩尔量，且最优选2.0-10.0比1的过摩尔量。更进一步，非没食子酰化的儿茶素优选是与没食子酰化儿茶素相对应的儿茶素。例如，在第一水平的敏感化由ECG作用时，优选非没食子酰化的儿茶素是EC。在另一个例子中，在第一水平的敏感化由EGCG作用时，优选非没食子酰化的儿茶素是EGC。然而，还应认识到超过一种儿茶素(没食子酰化和/或非没食子酰化)可以被用于预期的组合中。例如，第一水平的敏感化可以由包括至少一种没食子酰化儿茶素的儿茶素的混合物作用，然后，第二个更低水平的敏感化，可以由单一的非没食子酰化的儿茶素作用。在另一方面，在需要时，第一水平的敏感化可以由单一的儿茶素作用，然后，第二个更低水平的敏感化，可以由包括至少一种非没食子酰化的儿茶素的混合物作用。使用儿茶素混合物时，特别优选分离自植物(如，茶树、葡萄、蓝莓等)的混合物。分离出的该儿茶素能标准化为没食子酰化与非没食子酰化的儿茶素的比例预先确定的一种特定制剂。例如，在一种没食子酰化儿茶素比例占优势的绿茶萃取物中，各个儿茶素通常百分比的可能是10-15%EGCg,2-3%ECG，2%EC和2-3%EGC(如，Suganuma等1999年，CanRes.59:44画47)。在另一方面，也可以制备或改进萃取物使其以得到非没食子酰化的儿茶素为主的萃取物(如，10-20%EGC和EC,2-3%ECG和5%EGCG)。此外，咖啡因、可可碱、茶碱和酚酸，如没食子酸，可能也存在于绿茶萃取物的组分中，并且典型地以比多酚少的量存在。在其他预期的萃取物中，特别适合的多酚萃取物包括polyphenonE和polyphenol!B,两者都可购自MitsuiNorinJapan(1-2-9Nishishinbashi、Minato-ku，东京，105-8427,日本)，并可以进一步被用作特定制剂的基本材料。关于抗生素药物，通常预期非没食子酰化的儿茶素可以进一步增强预先敏感化的MRSA对多种抗生素药物的敏感性(即，降低MIC),该抗生素药物包括全部或几乎全部的(3-内酰胺抗生素、四环素，和/或氯霉素型药物。因此，在其他抗生素药物中，预期的抗生素包括各种的青霉素(如，千星青霉素，苄青霉素(青霉素G)，苯氧基曱基青霉素(青霉素V),双氯西林、氟氯西林、阿莫西林、氨节西林等)，各种的头孢菌素(如，头孢氨苄、头孢噻吩、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢孟多、头孢曲松、头孢噻肟等)，各种的碳青霉烯类(如，亚胺培南、美罗培南、艾他培南等)，单环内酰胺类(如，氨曲南)，各种的四环素类(如，四环素、四一霉素、差向四环素等)和各种的氯霉素型抗生素药物(如，氯霉素、dextramycin、1-脱氧氯霉素，等)。根据抗生素药物的种类和没食子酰化儿茶素的浓度，应理解用非没食子酰化的儿茶素使敏感性的增加可能变化很大。然而，通常预期敏感性的增加(即，MIC的降低)是至少2倍(如，从20微克/毫升到10微克/毫升)，更典型至少3倍，还更典型的是至少4-6倍和最典型至少5-10倍(如，从50微克/毫升到10微克/毫升)。仍进一步预期，MRSA与没食子酰化和/或非没食子酰化的儿茶素的接触优选(但不是必需)在抗生素药物存在下进行。最典型(但不是必需)，没食子酰化和非没食子酰化的儿茶素一起给药于存在MRSA的环境中。例如，尤其给药是体外或局部给药(如，杀菌喷雾剂、体外培养、局部软膏，等)，儿茶素的组合可以与抗生素溶液混合。在另一个例子中，尤其是所述组合对哺乳动物给药时，儿茶素的组合也可以口服和与抗菌制剂分开给药(可以经或可以不经口服或肠外给药的)。所以，应承认没食子酰化和/或非没食子酰化的儿茶素可以许多制剂给药，并且特别优选的制剂包括固体(如，分离的儿茶素或从茶萃取物得到的多酚粉末)或液体形式(如，液体儿茶素制剂或茶萃取物)的口服制剂。特别优选的制剂包括局部制剂(如，乳膏、软膏、凝胶、洗液，等)。有许多这样的现有技术已知的可购得的制剂，并且所有些在这里是被视为适用的。这种制位使用而使局部浓度小于l毫克/毫升。根据这些和进一步的考虑，本发明者因此预期到一种降低抗生素药物对MRSA的MIC的方法，其中金黄色葡萄球菌与使抗生素药物MIC降低到第一水平的有效浓度的没食子酰化儿茶素接触。在另一步骤中，确认(如，通过书面或显示信息)非没食子酰化的儿茶素的应用进一步协同地将抗生素药物的MIC从第一水平降低到第二水平，再另一步骤中，金黄色葡萄球菌，在没食子酰化儿茶素存在下与非没食子酰化的儿茶素接触，其中非没食子酰化的儿茶素浓度为使抗生素药物的MIC降低到第二水平的有效浓度。例如，在一种典型应用中，适当的第一水平等于或少于在金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时抗生素药物MIC的50%,并且适当的第二水平等于或少于在金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时抗生素药物MIC的5%。在这样例子中，本发明者发现MRSA与浓度少于10微克/毫升的没食子酰化儿茶素和浓度等于或少于50微克/毫升的非没食子酰化的儿茶素接触。在其他例子中，本发明者发现第一水平等于或少于MIC的5%,并且第二水平等于或少于MIC的0.5%。因此，适当的方法也包括将MRSA与没食子酰化儿茶素和抗生素药物的组合接触以抑制MRSA生长的方法，其中没食子酰化儿茶素和抗生素药物是以抑制生长的无效浓度(如，ECG的浓度为5微克/毫升且P-内酰胺抗生素的浓度为60微克/毫升)存在。在另一步骤，然后在上述组合的存在下，将MRSA与以抑制MRSA生长的有效浓度的非没食子酰化的儿茶素(如，EC或EGC浓度为至少25微克/毫升且更加典型为至少50微克/毫升)接触。该方法特别理想用于将MRSA(如，BB568、EMRSA-16和EMRSA-15)从耐药性或过渡特征(关于特殊抗生素药物)转换成敏感特征。在更进一步预期的方面，预期的药物组合物包括没食子酰化儿茶素(如，ECG或EGCG),非没食子酰化的儿茶素(EC或EGC)和任选的抗生素药物(如，P-内酰胺抗生素)，其中，相对于没食子酰化的儿茶素，非没食子酰化的儿茶素是以协同地降低抗生素药物的最小抑制浓度的浓度存在的。该组合物典型地进一步与以下信息相联系，其中相对于没食子酰化的儿茶素，没食子酰化儿茶素和非没食子酰化的儿茶素是以降低抗生素药物MIC的协同组合而存在的。在其他适当的比率中，非没食子酰化的儿茶素和没食子酰化儿茶素是以重量比为至少1:1，更典型为至少3:1和再典型为至少6:1存在的。已经如上讨论，应该认可所述组合物可以用许多方法配制，包括口月良和局部制剂。然而，特别优选制剂是局部制剂。实验通过EC介导的ECG与膜的加强结合因为金黄色葡萄球菌膜由磷脂酰甘油(63-74%),赖氨酰磷脂酰甘油(17-22%)和心磷脂(5-15%)独特地组成，本发明者用Kajiya等所述的HPLC分析(Kajiya、K.、S.Kurnazawa和T.Nakayama.2001年，Stericeffectsontheinteractionofteacatechinswithlipidbilayers.Biosci.Biotechnol.Biochem.65:2638-2643)确定了非没食子酰化的儿茶素增强ECG与金黄色葡萄球菌结合的能力。EC、EGC、ECG和EGCG由东京食品技术有限公司(TokyoFoodTechnoCo.Ltd.)提供(东京，日本)。金黄色葡萄球菌BB568是构成PBP2a的生产者(constitutivePBP2aproducer)(由B.Berger-Bachi,UniversityofZiirich提供)，并且EMRSA-15和EMRSA-16临床上分离自RoyalFreeHospital,伦敦。ECG与对数中期的EMRSA-16细胞的结合通过浓度为25微克/毫升的EC提高。13。/。EC群(pool)在35i:培养20分钟后结合(bound),并且22%的ECG与细胞连接。在EC存在下，ECG结合上升到41。/。。EC结合也由于ECG的存在而提高(35.5。/。)。因此，EC看上去促进了ECG与葡萄球菌细胞以及PC和PE脂质体的结合。金黄色葡萄球菌敏化作用测试为检测是否该协同结合得到了增强的生物活性，将EC和EGC增强金黄色葡萄球菌对苯唑西林敏化程度的能力进行了测定。检测板MIC分析用200ld含有约104CFU接种物的补充了2%NaCl的Mueller-Hinton肉汤培养基(Oxoid，Basingstoke,英国)在96孔微滴定测定盘上进行。在35。C培养24小时后得到MIC值。使用金黄色葡萄球菌ATCC29213作为标准易感菌抹。三重组合的分级抑制浓度(FIC)指数计算如下SFIC=FIC0XA+FICB+FICC=[CcombOXA/MICOXA]十[C画VMICb〗+[Ccombc/MICc]，其中OC,bc是被测试的儿茶素的浓度。Ce。mb0XA是在抑制生长的组合中苯唑西林最低浓度，并且MICoxa，MICB和MICc是化合物单独使用时的MIC。对二种化合物的组合，省略了术语(Ce。^c/MICc)。FIC指数^).5说明有协同作用。我们测定了EC、EGC和EGCG对ECG使EMRSA-16、EMRSA-15和BB568对苯唑西林敏感的能力的作用，并且这些实验的结果在图2A中被列出。苯唑西林对BB568，EMRSA-16和EMRSA-15的MIC分别为256,512和16毫克/毫升。儿茶素化合物固有的抗葡萄球菌的活性^f艮小或没有，其MIC范围为64-512毫克/毫升。浓度为12.5毫克/毫升的ECG使苯唑西林对金黄色葡萄球菌BB568和EMRSA-16的MIC降低到苯唑西林转折点(breakpoint)之下；在3.12毫克/毫升较低的浓度下对EMRSA-15达到相似的作用。显著地，非没食子酰化的儿茶素EC和EGC不能使苯唑西林对这些分离菌的MIC降低。然而，这些化合物明显提高了ECG降低苯唑西林抗性的能力。浓度为3.12毫克/毫升的ECG使对BB568和EMRSA-16的MIC分别降低到64和128毫克/毫升。与6.25毫克/毫升EC组合，苯唑西林对这些分离菌的易感性增加到8毫克/毫升；在3.12毫克/毫升ECG存在下增加EC浓度到25毫克/毫升得到了2毫克/毫升的值。当EGC与ECG组合使用时，观察到了相似的降低。FIC指数表明了在苯唑西林、ECG和EC或EGC之间对所有三种金黄色葡萄球菌分离菌都有强的协同作用。在高浓度时，ECG(^12.5毫克/毫升)与EC和EGC(^50毫克/毫升)两种组合在没有苯唑西林时都抑制了EMRSA-16生长。EC和EGC对由ECG介导的苯唑西林敏感化的增强具有明显地浓度依赖性，如图1所示(描述了ECG和EC对苯唑西林对EMRSA-16的MIC的作用)。在ECG存在下，没食子酰化儿茶素EGCG降低苯唑西林MIC的有效性显著降低。例如，与3.12毫克/毫升ECG,25毫克/毫升EGCG只将MIC降低到二分之一(reducedtheMIConlytwofold)。以12.5毫克/毫升的更高的ECG浓度，EGCG损害了ECG降低BB568和EMRSA-16菌抹的MIC的能力。EGCG也能使BB568、EMRSA-16和EMRSA-15对苯唑西林敏感(参见图2B)，但是与ECG作用相比作用非常不明显。EC和EGC都能提高敏感化(如图2B所示)，但作用与[EC/EGC-ECG-苯唑西林]组合比较相对较小，如图2A所示。因此本发明人预期非没食子酰化的儿茶素如EC和EGC增强MRSA菌抹对苯唑西林的易感性的能力是通过没食子酰儿茶素ECG和EGCG经对葡萄球菌的细胞质膜靶向的作用实现的。该假说将由在EC或EGC存在下的ECG膜结合增加而证实，如果膜结合和敏感性之间有因果相关。进一步支持该假说的事实是儿茶素通常不进入细胞，这使它们更像能通过膜的生物物理学特性的改变而调整金黄色葡萄球菌的P-内酰胺类抗性(如，通过损坏与双层相关的蛋白质的功能从而影响物质的跨膜运输)。上述数据清楚地表明，在抗生素存在下，没食子酰化儿茶素和非没食子酰化的儿茶素之间关于它们的抗菌作用的相互作用的显著性和协同特性。该发现特别令人惊奇，因为早先研究认为没食子酸基团对表儿茶素没食子酸酯活性是必要的(Stapleton,RD.,S.Shah，J.C.Anderson,YHara，J.M.T.Hamilton-Miller和P.W.Taylor.2004.Modilationofbeta-lactamresostanceinStaphylococcusaureusbycatechinsandgallates.InternationalJ.Antimicrol。Agents23:462-467》it匕夕卜，由于这些化合物缺少酯基，所以非没食子酰化的儿茶素作为酯酶抑制剂是不太可能的。此外，ECG的酯酶稳定的衍生物当与苯唑西林组合^f吏用对抗金黄色葡萄球菌时，有相似的活性，所以认为酯酶活性不是一个体外关键因素(Anderson，J.C，C.Headley，P.D.Stapleton，andRW.Taylor.2005.Synthesisandantibacterialactivityofahydrolyticallystable(-)-epicatechingallateanalogueforthemodulationofbeta-lactamresistanceinStaphylococcusaureus.Bioorg.Med.Chem.Lett.15:2633-2635)。然而，注意到，其他形式的失活，特别是对儿茶素部分的修饰，其中EC和EGC可作为潜在的抑制剂，不能被排除。因此，使MRSA对苯唑西林敏感化的组合物和方法的具体实施方案和申请已经浮皮公开。然而，很明显，不违背这里本发明的概念，对本领域普通技术人员而言，除已描述的那些之外的许多改进是可能的。因此，本发明的主题不受限制，除了所附属权利要求的精神之外。而且，在解幹说明书和权利要求书时，所有术语应该以与上下文一致的在最大可能有关的方式解释。特别是，术语"包括，，，和"包含"应该被解释为提到元素、组分或以非排除性方式的步骤，表明所参考的要素、组分或步骤可以存在或使用，或与没有明确地被提及的其他元素、组分或步骤组合。此外，当这里引用作为参考的参考文献中的术语的定义或使用，与本文提供的术语的定义不一致或相反时，使用那个术语在这里提供的定义，而不使用那个术语在参考文献中的定义。权利要求1.降低抗生素药物对金黄色葡萄球菌甲氧西林抗性菌株的最小抑制浓度的方法，包括使所述金黄色葡萄球菌与没食子酰化儿茶素接触，所述没食子酰化儿茶素的浓度为对于降低抗生素药物最小抑制浓度到第一水平有效的浓度；确认非没食子酰化的儿茶素的施用进一步协同地使抗生素药物的最小抑制浓度从第一水平降低到第二水平；和在没食子酰化儿茶素存在下，使所述金黄色葡萄球菌与非没食子酰化的儿茶素接触，所述非没食子酰化儿茶素的浓度为有效降低抗生素药物的最小抑制浓度至第二水平的浓度。2.权利要求1的方法，其中抗生素药物选自(3-内酰胺抗生素、四环素和氯霉素。3.权利要求l的方法，其中没食子酰化儿茶素是ECG或EGCG，并且其中非没食子酰化的儿茶素分别是EC或EGC。4.权利要求1的方法，其中第一水平等于或少于在所述金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时抗生素药物最小抑制浓度的50%。5.权利要求1的方法，其中第二水平等于或少于在所述金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时抗生素药物最小抑制浓度的5%。6.权利要求1的方法，其中第一水平等于或少于在所述金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时抗生素药物最小抑制浓度的5%，并且，第二水平等于或少于在所述金黄色葡萄球菌没有与没食子酰化儿茶素接触时抗生素药物最小抑制浓度的0.5%。7.权利要求1的方法，其中所述金黄色葡萄球菌与浓度少于10微克/毫升的没食子酰化儿茶素，和与浓度等于或少于50微克/毫升的非没食子酰化的儿茶素接触。8.抑制金黄色葡萄球菌曱氧西林抗性菌林生长的方法，包括使所述金黄色葡萄球菌与没食子酰化儿茶素和抗生素药物的组合接触，其中所述没食子酰化儿茶素和抗生素药物的浓度对抑制生长无效；并且在上述组合的存在下，使所述金黄色葡萄球菌与有效抑制所述金黄色葡萄球菌生长的浓度的非没食子酰化的儿茶素接触。9.10.权利要求8的方法，其中抗生素药物是浓度为60微克/毫升的卩-内酰胺抗生素，并且，其中没食子酰化儿茶素是浓度为5微克/毫升的ECG。11.权利要求10的方法，其中非没食子酰化的儿茶素是浓度为至少25微克/毫升的EC或EGC。12.权利要求8的方法，其中非没食子酰化的儿茶素是浓度为至少50微克/毫升的EC或EGC。13.权利要求8的方法，其中所述金黄色葡萄球菌选自BB568、EMRSA-16和EMRSA-15。14.抗生素药物组合物，包括没食子酰化儿茶素、非没食子酰化的儿茶素和任选的抗生素药物；其中，相对于所述没食子酰化儿茶素，非没食子酰化的儿茶素以协同降低抗生素药物的最小抑制浓度的浓度存在；和与以下组合物相关的信息，该组合物中没食子酰化儿茶素和非没食子酰化的儿茶素以协同组合存在，相对于没食子酰化儿茶素，该协同组合降低抗生素药物的最小抑制浓度。15.权利要求14的抗生素药物组合物，其中没食子酰化儿茶素是ECG或EGCG。16.权利要求14的抗生素药物组合物，其中非没食子酰化的儿茶素是EC或EGC。17.权利要求14的抗生素药物组合物，其中非没食子酰化的儿茶素和没食子酰化儿茶素的重量比至少为3:1。18.权利要求M的抗生素药物组合物，其中非没食子酰化的儿茶素和没食子酰化儿茶素的重量比至少为6:1。19.权利要求14的抗生素药物组合物，其中抗生素药物是P-内酰胺抗生素。20.权利要求14的抗生素药物组合物，其中该组合物被配制成局部用组合物。全文摘要进一步增强敏化MRSA对各种抗生素药物易感性的预期方法和组合物。最优选，MRSA是已被没食子酰化儿茶素(如，ECG)敏化的，并通过与非没食子酰化的儿茶素(如，EC)接触达到进一步敏感化，并且最优选与相应的非没食子酰化的儿茶素接触。文档编号A61K31/05GK101351198SQ200580052461公开日2009年1月21日申请日期2005年12月29日优先权日2005年12月29日发明者保罗·斯特普尔顿,原征彦,彼得·泰勒申请人:三井农林株式会社;伦敦大学药学院