专利名称：从罗汉果植株提取生物活性组分的方法
技术领域：
本发明涉及天然物质的生物活性成分，具体而言涉及以罗汉果植林i物 活性组分的提取方法。
技术背景罗汉果植林为葫,科多年生宿根攀援藤本植物罗汉果U/咖OiYZ/cagr^^/7or/),罗汉果主要栽培在中国的广西北部，在华南、责州、江西以 及其它许多地区都有分布，已有300多年的种植、应用历史，其果有"东方 神果，，之称。中医药学认为，罗汉果甘、酸，性凉，有清热凉血、生津止咳、 滑肠排毒、嫩肤益颜、润肺化痰等功效，可用于益寿延年、驻颜悦色及治疗 痰热咳嗽、咽喉肿痛、大便秘结、消渴烦躁诸症。从上世纪的50年代开始， 对罗汉果的果实进行了很多活性成分的研究，通过这些研究，分离并鉴定了 罗汉果的果实中的^f艮强的甜^K成分，即罗汉果苷(I到VI )。罗汉果苷为三 萜类化合物，其葡萄糖环与mogrol基相连。对罗汉果果实的生物活性研究 报道中有关罗汉果苷的一篇专利指出罗汉果苷，特别是罗汉果苷V具有抗口 腔微生物的活性(美国专利US Patent 6 319 523 )。然而，对于此罗汉果苷 的抗微生物活性却没有相关科学文献的报道证实。罗汉果的果实通常是在秋末进行采摘，与此同时，罗汉果植林的藤就被 砍掉，叶和藤被丢弃。其根仍埋在土里，土壤保护其过冬。目前人们对罗汉 果植林的非果实部分几乎没有多少研究，其叶和藤也从未加以利用，对于其 植林非果实部分的生物活性及利用人们知之甚少，也没有从其中得到的任何
有活性的提取物。 发明内容本发明的目的在于提供一种从罗汉果植抹提取生物活性组分的方法。有效成分不是人们已知的只存在于罗汉果果实中的罗汉果苷；所发现的抗微 生物活性成分存在于罗汉果叶、藤、根、茎和果实中，最强的抗^f敖生物活性 部位为罗汉果叶、藤、根、茎和果实提取物的非极性部分。这些抗微生物活 性主要表现在抗口腔微生物的活性，比如说导致龋齿的链球菌，牙龈卟啉单 胞菌和假丝酵母等。发明人预测到罗汉果植抹的抗微生物活性可利用来制备 抗微生物的提取物和药物(比如说止咳糖浆，治疗咽喉肿痛的药物，牙膏 和漱口液等)，这将会有很大的实用价值和经济价值。为了将这一发现造福于人类，发明人对从罗汉果植林提取抗微生物活性 有效成分的工艺进行了探索。经过反复研究、试验，发明了从罗汉果叶、藤、 根、茎和果实中提取、分离、纯化抗微生物生物活性物质的方法。所发明的 方法是从罗汉果植林中的实验室和工业化规模的通过柱层析的步骤提取具 有抗微生物生物活性物质。其具体方法包括① 将事先晒干的罗汉果植株的各个部分即叶、藤、根、茎和果实进行机 械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果植株的叶、藤、根4茎和果实压碎得到湿 的碎块，用清水、或50%的乙醇水溶液、或50。/。的甲醇水溶液浸泡所述^L 粉和碎块，并加热到至少5(TC，进行30min以上的提取，得到提取物液；② 将提取混合物过滤，滤液在室温下通过大孔吸附树脂以层析方法进 行分离，大孔吸附树脂柱在经水洗去未吸附的物质后用清水、再用10%%到100 %的乙醇进行梯度洗脱或甲醇水溶液梯度洗脱；分别收集30 %和60%到 100%的洗脱液，即得到所需的活性部分；或将提取混合物过滤，滤液通过 硅胶柱层析分离，通过氯仿/乙醇/水梯度洗脱或氯仿/甲醇/水进行梯度洗脱 收集得到活性部分；③将滤液干燥得到活性罗汉果植抹的粗提物，此粗提物含有抗微生物 活性的有效组分。上述用来进行分离的大孔吸附树脂和硅胶包括市售的各种孔径和型号 的树脂和硅胶，如Amberlite XAD系列及山东鲁抗医药股份有限公司的DM 系列的大孔吸附树脂等。本发明首次发现并提供了从罗汉果叶，藤，根，茎和果实中提取、分离、 纯化具有抗微生物的活性物质的方法，由于罗汉果的叶、茎、藤、根过去是 废弃的，因此利用罗汉果的植林来开发制备抗微生物的提取物，并使之应用 于药物及功能性食品、日用品及食品添加剂等将会有很大的实用价值和经济 价值。
具体实施方式
实施例1 100g罗汉果叶研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进行提取， 提取重复3次。将提取液过滤得到滤液约1200ml。滤液干燥得到7g的活性 罗汉果叶粗提物，此粗提物含有一定的抗微生物的活性的有效组分。实施例2 100g罗汉果叶研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进行提取， 提取重复3次；将提取液过滤得到滤液约1200ml。滤液通过100ml已进行过 水平衡的非极性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸附的物质。 再用10%到100。/。的乙醇各100ml进行梯度洗脱；30%以及60%到100%的洗 脱液中含有我们所需要的活性物质，分别收集30%和60%到100%的洗脱 液，将60%至100%的洗脱液干燥得到2. 5g的具有抗-徵生物的活性提取物。实施例3 100g罗汉果果实研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min进行提 取，提取重复3次；将提取液过滤得到滤液约1200ml;滤液通过100ml已进 行过水平衡的非极性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸附的 物质；再用10%到100。/。的乙醇各100ml进行梯度洗脱，30%以及60°/。到100% 的洗脱液中含有我们所需要的活性物质，分别收集30%和60%到100%的洗 脱液，将60°/。至100%的洗脱液干燥得到2. lg的具有抗微生物的活性提取 物。实施例4 50g罗汉果茎研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提取， 提取重复3次；将提取液过滤得到滤液约600ml;滤液通过50ml已进行过水 平衡的非极性的Amberlite XAD柱。用500ml水洗以移去未吸附的物质；再 用10 %到100%的乙醇各50ml进行梯度洗脱；30%以及60%到100%的洗脱液 中含有我们所需要的活性物质，收集30%和60%到100%的洗脱液，将60 %至100%的洗脱液干燥得到1. 25g的具有抗微生物的活性提取物。实施例5 50g罗汉果根研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提取， 提取重复3次。将提取液过滤得到滤液约600ml;滤液通过50ml已进行过水 平衡的非极性的Amberlite XAD离子交换柱；用500ml水洗以移去未吸附的 物质；再用10 %到100%的乙醇各50ml进行梯度洗脱，30%以及60°/。到100% 的洗脱液中含有我们所需要的活性物质，收集30%和60%到100%的洗脱 液,将60 %至100%的洗脱液干燥得到1. 25g的具有抗微生物的活性提取物。
实施例6 50g罗汉果叶研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min进行提取， 提取重复3次；将提取液过滤得到滤液约600ml;浓缩滤液，干法或湿法上 样。进行50ml硅胶柱层析柱，提取用氯仿/乙醇/水进行梯度洗脱，其中水 的比例从l逐渐增加，具体洗脱剂比例为40: 5: 1 (50ml) ， 35: 5: 1 (50ml)， 30: 8: 1 (50ml) ， 25: 10: 5 (50ml), 20: 10: 5 (50ml), 10: 10: 20 (50ml)，收集300ml洗脱液；将得到洗脱液干燥得到1. 25g的具有抗孩先生物 的活性提取物。
权利要求
1一种从罗汉果植株提取生物活性组分的方法，其特征包括①将事先晒干的罗汉果植株的各个部分即叶、藤、根、茎和果实进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果植株的叶、藤、根、茎和果实压碎得到湿的碎块，用清水、或50％的乙醇水溶液、或50％的甲醇水溶液浸泡所述粗粉和碎块，并加热到至少50℃，进行30分钟以上的提取，得到粗提取物；②将提取混合物过滤，滤液在室温下通过大孔吸附树脂以层析方法进行分离，大孔吸附树脂柱在经水洗去未吸附的物质后；再用10％到100％的乙醇/或甲醇进行洗脱，分别收集30％和70％到100％的洗脱液，即得到所需的活性部分；或将提取混合物过滤，滤液通过硅胶柱层析分离，通过氯仿/乙醇/水梯度洗脱收集得到活性部分；③将滤液干燥得到活性罗汉果植株的粗提物，此粗提物含有抗微生物活性的有效组分。
全文摘要
本发明公开了一种从罗汉果植株提取生物活性组分的方法，该方法是将干的罗汉果植株的叶、藤、根、茎和果实进行机械粉碎得到粗粉，或将新鲜的罗汉果植株压碎得到湿的碎块，用清水、或乙醇水溶液、或甲醇水溶液浸泡上述粗粉和碎块，并加热进行提取，得到提取物；接着将提取混合物过滤，滤液在室温下通过大孔吸附树脂以层析方法进行分离，大孔吸附树脂柱经过洗脱，分别收集洗脱液，得到所需的活性部分；或将滤液通过硅胶柱层析分离，通过氯仿/乙醇/水梯度洗脱收集得到活性组分；最后分离活性组分，干燥得到活性物质。本发明的从罗汉果植株提取具有抗微生物的活性物质的方法，利用来制备抗微生物的提取物，有很大的药用价值和经济价值。
文档编号A61K36/42GK101147751SQ200610051218
公开日2008年3月26日 申请日期2006年9月19日 优先权日2006年9月19日
发明者英 周, 黄赤夫 申请人:英 周